一种蜂蜜中甲基乙二醛的检测方法

摘要

本发明公开了一种蜂蜜中甲基乙二醛的检测方法，提取、衍生和分析三个步骤，本发明与现有技术相比，使用安全稳定的衍生化试剂，采用2，3‑二氨基萘衍生化技术，并且对2，3‑二氨基萘衍生化技术进行了改进将提取的样品溶液置于液相色谱串联质谱仪中进行定性和定量分析测定，前处理操作步骤简便，反应温和，低浓度的蜂蜜溶液可以减少糖基质对色谱柱的损害；其方法完善，检出限低，回收率和精密度高，可以对进口的麦卢卡蜂蜜进行准确的检测和阳性确证。

说明书

技术领域：

本发明属于测量技术领域，具体涉及一种蜂蜜中甲基乙二醛含量检测方法，具有前处理操作步骤简便、回收率和精密度高，能够快速、准确和有效的进行测定。

背景技术：

麦卢卡是一种天然茶树，麦卢卡树叶及树皮是新西兰原住民毛利人数百年来的天然草药，可制成镇痛解热剂、感冒药及消毒水。从90年代科学家开始对麦卢卡蜂蜜的特殊功效进行研究，逐渐发现麦卢卡蜂蜜具有抗细菌、真菌、抗病毒、抗氧化的功效，能够促进伤口愈合。这种非过氧化氢抗菌活性被认为主要来自于蜂蜜中的甲基乙二醛（methylglyoxal，MGO），而甲基乙二醛也被视为麦卢卡蜂蜜质量的关键指标并根据甲基乙二醛的含量对麦卢卡蜂蜜进行了分级。

由于麦卢卡蜂蜜的优异抗菌特性，近年来，麦卢卡蜂蜜越来越受消费者所喜爱，进口量大增，同时其价格也比其他蜂蜜更高，但是市场上的麦卢卡蜂蜜的质量良莠不齐。有媒体披露，澳洲和新西兰每年大约出产1700 t至2000 t麦卢卡蜂蜜，但在全球范围内，每年以麦卢卡名义出售的蜂蜜高达1万吨以上，约80%的麦卢卡蜂蜜存在质量问题。因此，麦卢卡蜂蜜的鉴别具有重要的意义，而甲基乙二醛作为麦卢卡蜂蜜的关键指标，对其测定方法的研究至关重要。

甲基乙二醛属于二羰基化合物，目前有测定大气中的二羰基化合物、测定糖尿病患者血液中的甲基乙二醛和乙二醛等报道，蜂蜜中相关物质的测定有琼脂扩散法鉴定麦卢卡蜂蜜以及高效液相色谱、超高效液相色谱测定蜂蜜中的甲基乙二醛等。

液相色谱-串联质谱法以液相色谱做分离系统，质谱作为检测系统，具有高选择性、高灵敏度等优点。蜂蜜中主要成分为各种糖类，高浓度的糖基质对色谱柱有很大的损害，本方法采用高效液相色谱-串联质谱的方法检测蜂蜜中甲基乙二醛，减少称样量，增加稀释倍数，在保证检出限的前提下，减少糖基质对色谱柱的影响，同时质谱系统的高选择性能够排除干扰物质，可以对甲基乙二醛进行确证。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术的不足，设计一种快速、有效和准确的蜂蜜中甲基乙二醛含量的检测方法，将提取的样品溶液置于液相色谱-串联质谱仪中进行定性和定量分析测定。

为了实现上述目的，本发明涉及的蜂蜜中甲基乙二醛检测方法分为：提取、衍生和分析三个步骤：

（1）、提取：称取样品1g（精确至0.001 g）于100 mL容量瓶中，加水约80 mL溶解，用水定容至刻度，摇匀。

吸取上述溶液10.0 mL于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，备用。

（2）、衍生：吸取1.0 mL样品溶液于15 mL离心管中，加入1.0 mL 2，3-二氨基萘溶液，摇匀。

吸取甲基乙二醛标准系列工作溶液0.05、0.10、0.20、0.50、0.80、1.00 μg/mL各1.0 mL，加入1.0 mL2，3-二氨基萘溶液，与样品同时衍生，同时做空白实验。

（3）、分析：将步骤（2）制备的样品溶液和标准溶液注入液相色谱串联质谱仪测定样品溶液中甲基乙二醛的含量。

本发明涉及的步骤（3）中液相色谱串联质谱仪的测定条件为：色谱柱采用规格为Poroshell 120 SB-Aq (2.7 μm，4.6 mm *50 mm)的分析柱，色谱柱的温度为30℃，流动相为乙腈:0.1%甲酸水=50:50（V:V），进样量为5μL；电喷雾正离子模式离子源(ESI⁺)；检测方式：多反应监测（MRM）；喷雾电压：3500>

本发明涉及的步骤（3）测定样品中甲基乙二醛的含量按照公式X=c×V/m计算得出，其中，X表示样品中甲基乙二醛的含量，单位为mg/kg；c表示从标准曲线计算得到待测组分的浓度，单位为μg/mL；V表示样品溶液的定容体积，单位为mL；m表示样品溶液的质量，单位为g；结果保留两位有效数字。

优选的，步骤（2）衍生的具体方法是加入2，3-二氨基萘溶液后，加入硼酸盐和生物素，然后超声震荡，摇匀后，常温避光反应1-3 h。

进一步的，硼酸盐用量为1-2 mL，质量分数为1%，硼酸盐选自四硼酸钠（硼砂）。生物素的用量为0.1-0.5g。

本发明对常规的衍生方法进行了改进，一般的衍生方法耗时，而且衍生的不彻底，造成检测结果的不准确。本发明通过改进的衍生方法，提高了衍生效率，缩短了整体的检测时间。

本发明涉及的蜂蜜中甲基乙二醛含量检测方法为了提高测定结果的准确性做6次平行实验测定，采用相对标准偏差进行统计，并且按照上述步骤采用不含有甲基乙二醛的样品溶液进行空白试验作为对照。

本发明与现有技术相比，使用安全稳定的衍生化试剂，采用2，3-二氨基萘衍生化技术，并且对2，3-二氨基萘衍生化技术进行了改进将提取的样品溶液置于液相色谱串联质谱仪中进行定性和定量分析测定，前处理操作步骤简便，反应温和，低浓度的蜂蜜溶液可以减少糖基质对色谱柱的损害；其方法完善，检出限低，回收率和精密度高，可以对进口的麦卢卡蜂蜜进行准确的检测和阳性确证。

具体实施方式：

下面通过实施例对本发明做进一步描述。

实施例1：

本发明涉及的蜂蜜中甲基乙二醛检测方法分为：提取、衍生和分析三个步骤：

（1）、提取：称取新西兰某品牌麦卢卡蜂蜜1g（精确至0.001 g）于100 mL容量瓶中，加水约80 mL溶解，用水定容至刻度，摇匀。

吸取上述溶液10.0 mL于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，备用。

（2）、衍生：吸取1.0 mL样品溶液于15 mL离心管中，加入1.0 mL2，3-二氨基萘溶液，摇匀。

吸取标准系列工作溶液0.05、0.10、0.20、0.50、0.80、1.00 μg/mL各1.0 mL，加入1.0 mL 2，3-二氨基萘溶液（1mg /mL），与样品同时衍生，同时做空白实验。

（3）、分析：将步骤（2）制备的样品溶液和标准溶液注入液相色谱串联质谱仪测定样品溶液中甲基乙二醛的含量。

步骤（2）衍生的具体方法是加入2，3-二氨基萘溶液后，加入硼酸盐和生物素，然后超声震荡，摇匀后，常温避光反应2 h。

硼酸盐用量为1 mL，质量分数为1%，硼酸盐选自四硼酸钠（硼砂）。生物素的用量为0.5g。

本发明涉及的步骤（3）中液相色谱串联质谱仪的测定条件为：色谱柱采用规格为Poroshell 120 SB-Aq (2.7 μm，4.6 mm *50 mm)的分析柱，色谱柱的温度为30℃，流动相为乙腈:0.1%甲酸水=50:50（V:V），进样量为5μL；电喷雾正离子模式离子源(ESI⁺)；检测方式：多反应监测（MRM）；喷雾电压：3500>

本发明涉及的步骤（3）测定样品中甲基乙二醛的含量按照公式X=c×V/m计算得出，其中，X表示样品中甲基乙二醛的含量，单位为mg/kg；c表示从标准曲线计算得到待测组分的浓度，单位为μg/mL；V表示样品溶液的定容体积，单位为mL；m表示样品溶液的质量，单位为g；结果保留两位有效数字。

本发明涉及的蜂蜜中甲基乙二醛含量检测方法为了提高测定结果的准确性做6次平行实验测定，采用相对标准偏差进行统计，结果如下表：

实施例2：

本实施例涉及的蜂蜜中甲基乙二醛含量检测方法同实施例1，不同之处在于采用澳洲某品牌多种花混合蜂蜜作为样品制备样品溶液，结果如下表：

实施例3：

本实施例用经过测定不含有甲基乙二醛的蜂蜜进行回收率测定，测定了不同添加水平的甲基乙二醛回收率、精密度具体结果如下：

表3 回收率、精密度结果(n=6)