一种新型艽龙胶囊优化药物组合物及其在镇痛、抗炎、利胆方面的应用

摘要

本发明属于涉及一种新型艽龙胶囊优化药物组合物及其在镇痛、抗炎、利胆方面的应用，本发明提供了一种艽龙胶囊优化药物组合物，包括如下有效成分：马钱苷酸120‑150份、山栀苷甲酯5‑10份、6′‑O‑β‑D‑葡萄糖基龙胆苦苷40‑45份、獐芽菜苦苷10‑15份、龙胆苦苷500‑520份、獐芽菜苷8‑10份、异荭草苷1‑2份、异牡荆黄素1‑2份。该药物组合物在镇痛、抗炎、利胆等方面的活性，明显优于龙胆苦苷、艽龙胶囊及秦艽地上部分龙胆总苷提取物。

说明书

技术领域

本发明属于药物组合物领域，具体涉及一种新型艽龙胶囊优化药物组合物及其在镇痛、抗炎、利胆方面的应用。

背景技术

艽龙胶囊的主要成分系天然植物药材秦艽提取物，主治清肝泄热，用于功能性消化不良属肝胃郁热证者，症见胃脘饱胀、脘部烧灼、口干口苦。秦艽(Gentianamacrophylla)为龙胆科(Gentianaceae)植物，其根是我国重要的传统中药材之一，始载于《神农本草经》，主寒热邪气，寒湿风痹，肢节痛、下水、利小便。前人对陕西秦艽的化学成分做了很多研究，秦艽主要成分为裂环环烯醚萜苷类，其中龙胆苦苷含量最高。然而，目前尚未有关于艽龙胶囊有效成分含量及相关HPLC 指纹图谱研究报道。申请人在先前专利(中国发明专利申请号：201711336226.9) 中公开一种艽龙胶囊的HPLC指纹图谱及质量控制与成分检测的方法。本发明将上述中国发明专利：CN201711336226.9的全部内容引入本发明。采用HPLC法建立指纹图谱，同时对艽龙胶囊中马钱苷酸、山栀苷甲酯、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷、异牡荆黄素等8种成分进行定量；并对艽龙胶囊有效成分及其含量进行进一步优化得到本发明艽龙胶囊优化药物组合物。

发明内容

本发明在中国发明专利申请号：201711336226.9的基础上，对艽龙胶囊的药理活性及其中8种有效成分、含量、药理活性做进一步研究及优化。

本发明提供一种艽龙胶囊，其特征在于所述艽龙胶囊中马钱苷酸、山栀苷甲酯、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷、异牡荆黄素的含量依次为104.337±2.200、7.170±0.200、49.291±0.800、8.304±0.200、 483.760±8.200、5.124±0.120、0.885±0.020、0.608±0.020mg·g^-1。

本发明的另一实施方案提供上述艽龙胶囊在制备抗炎药物中的应用。

本发明的另一实施方案提供上述艽龙胶囊在制备利胆药物中的应用。

本发明的另一实施方案提供上述艽龙胶囊在制备镇痛药物中的应用。

本发明的另一实施方案提供一种艽龙胶囊优化药物组合物，其特征在于按重量份计，所述药物组合物包括如下有效成分：

马钱苷酸120-150份、山栀苷甲酯5-10份、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷40-45 份、獐芽菜苦苷10-15份、龙胆苦苷500-520份、獐芽菜苷8-10份、异荭草苷 1-2份、异牡荆黄素1-2份。

本发明的另一实施方案提供一种艽龙胶囊优化药物组合物，其特征在于按重量份计，所述药物组合物由如下有效成分组成：

马钱苷酸120-150份、山栀苷甲酯5-10份、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷40-45 份、獐芽菜苦苷10-15份、龙胆苦苷500-520份、獐芽菜苷8-10份、异荭草苷 1-2份、异牡荆黄素1-2份。

本发明的另一实施方案提供上述艽龙胶囊优化药物组合物，其特征在于该药物组合物还可包括适量的药学上可接受的药用辅料(例如药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，包括增溶剂、表面活性剂、成膜剂、抗氧剂、稳定剂、粘合剂、润滑剂等)。该药物组合物的剂型可以是固体制剂、液体制剂或半固体制剂，优选片剂、胶囊、注射剂、滴丸剂、乳膏或喷雾剂，包括缓释片剂、缓释胶囊、缓释注射剂。

本发明的另一实施方案提供上述艽龙胶囊优化药物组合物在制备抗炎药物中的应用。

本发明的另一实施方案提供上述艽龙胶囊优化药物组合物在制备利胆药物中的应用。

本发明的另一实施方案提供上述艽龙胶囊优化药物组合物在制备镇痛药物中的应用。

与现有技术相比，本发明的优点在于：(1)本发明提供了一种艽龙胶囊优化药物组合物，该药物组合物明确了8种有效成分，并对8种有效成分的比例做了明确的限定；(2)本发明提供的艽龙胶囊优化药物组合物，在镇痛、抗炎、利胆等方面的活性，明显优于龙胆苦苷、艽龙胶囊及秦艽地上部分龙胆总苷提取物(按照中国专利申请号：200710017315.7实施例1记载的方法制备得到的)。

附图说明

图1艽龙胶囊HPLC指纹图谱1～23：特征指纹峰；4马钱苷酸；6山栀苷甲酯；8 6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷；9獐芽菜苦苷；13龙胆苦苷(作为参照物的色谱峰)；14獐芽菜苷；17异荭草苷；18异牡荆黄素

图2 10批艽龙胶囊的HPLC指纹图谱

图3对照品混合溶液的HPLC图谱1马钱苷酸；2山栀苷甲酯；3 6′-O-β-D- 葡萄糖基龙胆苦苷；4獐芽菜苦苷；5龙胆苦苷；6獐芽菜苷；7异荭草苷；8异牡荆黄素

图4艽龙胶囊供试品溶液的HPLC图谱

具体实施方式

为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。

实施例1指纹图谱的建立

1仪器与试药

岛津高效液相色谱仪(LC-2010C_HT，LC/Labsoluion色谱工作站)，日本岛津公司；德国sartorius电子天平，型号CPA225D，德国塞多利斯公司；超声波发生器，型号KQ-5200DE数控，昆山超声仪器有限公司。乙腈、甲醇，色谱级，美国>

2.1色谱条件色谱柱为Intersil C₁₈(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈(A)>-1；柱温：25℃；检测波长：254nm；进样量10μL。

2.2参比物及供试品溶液的制备

2.2.1参比物溶液的制备称取龙胆苦苷对照品5.00mg，置于50ml量瓶中加甲醇至刻度，摇匀，即得浓度为0.1mg·mL^-1的参比物溶液。

2.2.2供试品溶液的制备取5粒本品内容物，混匀，称取0.17g，精密称定，置于50mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率250KW，频率40kHz)30min，放凉，加甲醇至刻度，摇匀，静置，滤过，取续滤液，即得。

2.3方法学考察

2.3.1精密度试验取供试品溶液(批号20170906)，连续进样6次，分别对共有峰的相对保留时间和相对峰面积进行分析考察。结果各共有峰的相对保留时间与相对峰面积RSD值分别小于2.0％和3.0％，表明该方法精密度良好。

2.3.2稳定性试验取供试品溶液(批号20170906)，分别于各时间点即0，2，4， 8，12，24h进样，考察共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果各共有峰相对保留时间与相对峰面积RSD值分别小于2.0％、3.0％，表明供试品溶液在24h 内具有良好的稳定性。

2.3.3重复性试验取6份供试品(批号20170906)，按供试品溶液的制备与色谱条件进行分析，分别对共有峰的相对保留时间和相对峰面积进行分析考察。结果各共有峰相对保留时间与相对峰面积RSD值分别小于2.0％和3.0％，表明该方法重复性良好。

2.3.4指纹图谱建立及相似度分析取10批艽龙胶囊样品，分别按供试品溶液的制备与色谱条件进行分析，进样量10μL，记录指纹图谱(图1)，峰11为龙胆苦苷即参比物，建立指纹图谱。10批样品共有色谱峰的相对保留时间与相对峰面积的RSD值均分别小于2.0％、3.0％，与指纹图谱研究技术的要求相符(图1、 2)。运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)对10批艽龙胶囊的指纹图谱进行相似度分析，结果，对选定23个共有色谱峰进行谱峰匹配，得出了样品指纹图谱的共有模式；整体相似度大于0.96，为0.966～0.982；表明这10批艽龙胶囊的化学成分一致性较好。

实施例2艽龙胶囊各成分含量测定

3.1色谱条件记录时间为60min，其余同实施例1的2.1。

3.2对照品溶液的配制分别精密称取一定量的山栀苷甲酯、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷和异牡荆黄素、马钱苷酸、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、龙胆苦苷，配置成对照品混合溶液，所得对照品混合溶液中马钱苷酸、山栀苷甲酯、 6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷、异牡荆黄素对照品浓度分别为2100.00、320.00、1500.00、510.00、3900.00、420.00、 220.00、110μg·mL^-1。

3.3供试品溶液的制备同实施例1中2.2.2。

3.4线性关系分别精密量取3.2中制备的对照品混合液0.01，0.05，0.10，0.25，0.50和1.00mL置于各个1mL量瓶中并加甲醇稀释至刻度，用0.22μm微孔滤膜滤过，进样。以各对照品的质量浓度(x，μg·mL^-1)为横坐标，峰面积值(y)为纵坐标，通过计算，得线性方程，结果见表1和图3，表明各对照品在相应浓度范围内线性关系良好。

表1对照品的线性方程及其浓度范围

3.5精密度试验精密吸取供试品溶液(批号20170906)，重复进样5次，测得马钱苷酸、山栀苷甲酯、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷、异牡荆黄素的相对标准差(RSD)分别为0.95％，1.08％， 1.04％，0.96％，1.02％，0.88％，0.98％，1.03％，表明该方法精密度良好。

3.6稳定性试验精密吸取供试品溶液(批号20170906)，分别在第0，2，4，8， 12和24h进样。结果，马钱苷酸、山栀苷甲酯、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷、异牡荆黄素的峰面积的RSD值分别为0.82％，0.75％，0.77％，0.89％，0.92％，0.98％，0.84％，0.83％，表明该溶液在24h内稳定性。

3.7重复性试验精密称取6份样品(批号20170906)，分别按2.2.2项下方法制备供试品溶液，按3.3项下色谱条件进样测定。结果，马钱苷酸、山栀苷甲酯、 6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷、异牡荆黄素平均含量分别为104.280、7.118、49.399、8.346、483.801、5.131、0.892、 0.603mg·g^-1，RSD值分别为1.22％，1.14％，1.00％，1.32％，1.21％，0.97％，>

表2加样回收率测定结果

3.8加样回收率试验精密量取艽龙胶囊(批号20170906，其中马钱苷酸、山栀苷甲酯、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷、异牡荆黄素分别为104.280、7.118、49.399、8.346、483.801、5.131、0.892、 0.603mg·g^-1)0.17g，分别按表2添加各对照品，按照3.3项下方法制备供试品溶液，共制备6份样品，按照3.1项下色谱条件进样测定。结果见表2，表明该方法回收率良好。

3.9含量测定精密量取10批样品，分别按照3.3项下方法制备供试品，按照3.1 项下色谱条件测定。各批样品中马钱苷酸、山栀苷甲酯、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷、异牡荆黄素的平均含量 (mg·g^-1)、RSD见表3、图4。

表3艽龙胶囊8个成分含量测定结果(n＝3)

本发明以下实施例中各剂型的制备是按照中国专利申请号：201710594462.4 中记载的方法制备得到的。

实施例3

原料药：马钱苷酸120份、山栀苷甲酯10份、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷40 份、獐芽菜苦苷10份、龙胆苦苷500份、獐芽菜苷8份、异荭草苷1份、异牡荆黄素1份。

按上述重量份，马钱苷酸120mg、山栀苷甲酯10mg、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷40mg、獐芽菜苦苷10mg、龙胆苦苷500mg、獐芽菜苷8mg、异荭草苷1mg、异牡荆黄素1mg，可制备得片剂。

实施例4

原料药：马钱苷酸120份、山栀苷甲酯5份、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷45份、獐芽菜苦苷15份、龙胆苦苷500份、獐芽菜苷10份、异荭草苷2份、异牡荆黄素1份。

按上述重量份，马钱苷酸120mg、山栀苷甲酯5mg、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷45mg、獐芽菜苦苷15mg、龙胆苦苷500mg、獐芽菜苷10mg、异荭草苷2mg、异牡荆黄素1mg，可制备得胶囊剂。

实施例5

原料药：马钱苷酸150份、山栀苷甲酯5份、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷45份、獐芽菜苦苷10份、龙胆苦苷520份、獐芽菜苷10份、异荭草苷2份、异牡荆黄素2份。

按上述重量份，马钱苷酸150mg、山栀苷甲酯5mg、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷45mg、獐芽菜苦苷10mg、龙胆苦苷520mg、獐芽菜苷10mg、异荭草苷2mg、异牡荆黄素2mg，可制备得片剂。

实施例6

依次称取原料药：马钱苷酸、山栀苷甲酯、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷、异牡荆黄素：104.3mg、7.2mg、49.3mg、 8.3mg、483.8mg、5.1mg、0.9mg、0.6mg，可制备得胶囊剂。

实施例7

原料药：马钱苷酸120份、山栀苷甲酯10份、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷40 份、獐芽菜苦苷10份、龙胆苦苷550份、獐芽菜苷8份、异荭草苷1份、异牡荆黄素1份。

按上述重量份，马钱苷酸120mg、山栀苷甲酯10mg、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷40mg、獐芽菜苦苷10mg、龙胆苦苷550mg、獐芽菜苷8mg、异荭草苷1mg、异牡荆黄素1mg，可制备得片剂。

实施例8

原料药：马钱苷酸120份、山栀苷甲酯10份、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷40 份、獐芽菜苦苷10份、龙胆苦苷500份、獐芽菜苷8份、异荭草苷1份。

按上述重量份，马钱苷酸120mg、山栀苷甲酯10mg、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷40mg、獐芽菜苦苷10mg、龙胆苦苷500mg、獐芽菜苷8mg、异荭草苷1mg，可制备得片剂。

实施例9

原料药：马钱苷酸120份、山栀苷甲酯10份、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷40 份、獐芽菜苦苷10份、龙胆苦苷500份、獐芽菜苷8份、异牡荆黄素1份。

按上述重量份，马钱苷酸120mg、山栀苷甲酯10mg、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷40mg、獐芽菜苦苷10mg、龙胆苦苷500mg、獐芽菜苷8mg、异牡荆黄素1 mg，可制备得片剂。

实施例10

原料药：山栀苷甲酯10份、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷40份、獐芽菜苦苷10 份、龙胆苦苷500份、獐芽菜苷8份、异荭草苷1份、异牡荆黄素1份。

按上述重量份，山栀苷甲酯10mg、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷40mg、獐芽菜苦苷10mg、龙胆苦苷500mg、獐芽菜苷8mg、异荭草苷1mg、异牡荆黄素1mg，可制备得片剂。

实施例11

原料药：6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷40份、獐芽菜苦苷10份、龙胆苦苷500 份、獐芽菜苷8份、异荭草苷1份、异牡荆黄素1份。

按上述重量份，6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷40mg、獐芽菜苦苷10mg、龙胆苦苷500mg、獐芽菜苷8mg、异荭草苷1mg、异牡荆黄素1mg，可制备得片剂。实施例12药效学实验

大鼠：Wistar种，雄性，220～280克，利胆试验；小鼠：昆明种，雄性，体重22～30克，镇痛、抗炎试验；艽龙胶囊、西沙比利、清开灵、复方阿斯匹林、强的松等均为市售产品。

(1)抗炎作用

采用小鼠二甲苯耳肿胀法。取小鼠140只，昆明种，雄性，体重22～30g，分为14组，生理盐水对照组10ml/kg，艽龙胶囊25mg/kg组，实施例3-11原料药10mg/kg组，龙胆苦苷10mg/kg组，秦艽地上部分龙胆总苷提取物25mg/kg 组，阳性药强的松组40mg/kg。小鼠每日灌胃给药一次，连续4日，末次给药后 30分钟，将二甲苯均匀涂在小鼠左耳，右耳不涂做为对照。涂耳后1小时，用直径为8.0mm角膜钻孔器在二耳相同部位切下耳片，用电子天平称重，以二耳重量差为肿胀度，表示炎症程度。进行组间比较，经t检验，P＜0.01者为作用有显著性意义。

结果显示实施例3-5原料药10mg/kg组均有抑制小鼠耳肿胀作用，抑制肿胀作用明显优于实施例6-11原料药组、艽龙胶囊组、龙胆苦苷组以及秦艽地上部分龙胆总苷提取物组。抗炎作用与生理盐水对照组比有显著性意义。(表4) 表4抗二甲苯致小鼠耳肿胀度作用(X±SD)

注：与生理盐水对照组比^**P＜0.01

(2)利胆作用

采用麻醉大鼠胆管引流法。取大鼠140只，Wister种，雄性，220～280克，分为14组，生理盐水对照组10ml/kg，艽龙胶囊25mg/kg组，实施例3-11原料药10mg/kg组，龙胆苦苷10mg/kg组,秦艽地上部分龙胆总苷提取物25mg/kg 组，阳性药清开灵对照组1ml/kg(原药未标明含量)。大鼠禁食不禁水12小时，戊巴比妥钠麻醉下(30mg/kg,i,p)开腹，分离胆总管，向肝脏方向插入细塑料管，引流胆汁，每30分钟收集胆汁一次，经十二指肠给药，给药后收集胆汁共 3小时，计算给药3h后胆汁流量(ml)(《利胆汤对大鼠利胆作用的实验研究》，孔俊飞，硕士学位论文，2014年)，进行组间比较，经t检验，P＜0.01表示药物有利胆作用。

实施例3-5原料药10mg/kg组具有明显利胆作用，利胆作用明显优于实施例 6-11原料药组、艽龙胶囊组、龙胆苦苷组以及秦艽地上部分龙胆总苷提取物组。 (表5)

表5利胆作用

注：与生理盐水对照组比^**P＜0.01

(3)镇痛作用

采用小鼠醋酸扭体法。取小鼠150只，昆明种，雄性，体重18～26g，分为 15组，生理盐水对照组10ml/kg，艽龙胶囊25mg/kg组，实施例3-11原料药10 mg/kg组，龙胆苦苷10mg/kg组，秦艽地上部分龙胆总苷提取物25mg/kg组，阳性对照药复方阿斯匹林组220mg/kg，西沙比利组0.2mg/kg。小鼠禁食不禁水 12小时，灌胃给药，1小时后腹腔注射0.6％醋酸10ml/kg，记录给醋酸后0～10 分钟内小鼠扭体次数，作为痛反应指标。进行给药组与生理盐水对照组间t检验， P＜0.05及P＜0.01，表示有显著性镇痛作用。

结果表明，实施例3-5原料药10mg/kg组具有明显镇痛作用，其作用明显优于实施例6-11原料药组、艽龙胶囊组、龙胆苦苷组以及秦艽地上部分龙胆总苷提取物组。(表6)

表6镇痛作用

注：与生理盐水对照组比^*P＜0.05^**P＜0.01

参考文献

[1]傅超美，张永萍主编，《中药新药研发学》，中国中医药出版社，第1版，2017 年。

[2]陈奇主编，中药药理研究方法学人民卫生出版社，第3版，2011年。

[3]利胆汤对大鼠利胆作用的实验研究，孔俊飞，硕士学位论文，2014年。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考文献，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域的技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。