法律状态公告日
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法律状态
2019-07-26
授权
授权
2017-11-17
实质审查的生效 IPC(主分类):C07H13/08 申请日:20170527
实质审查的生效
2017-10-20
公开
公开
技术领域
本发明涉及植物提取技术领域,尤其涉及了一种从银缕梅中提取单宁的方法。
背景技术
单宁又称植物多酚、鞣酸、单宁酸,是英文(Tannins)的译名,是一种多酚类化合物,广泛存在于树木的叶、芽、树皮和果实中,以及受昆虫侵袭而生成的虫瘿中。单宁为黄色或棕黄色无定形松散粉末,不溶于乙醚、苯、氯仿,易溶于水、乙醇、丙酮,水溶液有涩味。
单宁的提取方法现在主要有热水提取法、有机溶剂萃取法、微波辅助法、超声波法、超临界CO2萃取法、半仿生提取法等。目前,热水提取法和有机溶剂萃取法因操作时间长,效率较低,已很少被使用。半仿生提取法需要更换几种提取剂,略显繁琐,超临界CO2萃取法需要大量夹带剂。
单宁不是单一化合物,大致可分为两种,一种是缩合单宁,另一种是可水解的单宁。水解单宁和缩合单宁在结构组成上完全不同,因此它们在化学性质和应用范围上的差异显著。水解单宁在酸、碱、酶的作用下不稳定,易于水解;而缩合单宁则相对稳定,但在强酸作用下会缩合成不溶于水的物质,因而具有很强的生物和药理活性。目前植物多酚已广泛应用于医学、食品、制革和日用化工等相关领域,并发挥着不可替代的作用。近年来它在化妆品生产中也崭露头角。因单宁结构复杂,人工合成不易。
银缕梅作为被子植物最古老的物种,是仅存我国再发现的活化石树种。银缕梅树干扭曲,凹凸不平,树皮呈不规则薄片状剥落,常有大型坚硬虫瘿。银缕梅俗称“葫芦树”,因树干、枝条上经常生长虫瘿,又叫“木鱼树”。其病虫害较多,制约生长和开花结果。经常可看到叶斑病、瘿瘤病等。银缕梅带虫瘿的叶片中含单宁,如果我们在林业中不加以重视,一味地丢弃,不加以利用,这在目前单宁只能靠提取的情况下是一种资源的浪费。
银缕梅曾名小叶金缕梅,隶属金缕梅科。与“金缕梅”不是同一种物质。因为银缕梅无花瓣,其花期特殊,2-5年才开一次花,花期又短,只有一周,鉴别植物主要的依据是花、果特征,最初鉴定银缕梅依据的是一份只带果实的标本,才造成名称误定。金缕梅的药用价值、美容价值的研究、应用较多。金缕梅内含单宁质多种如Ellagtannin和Hamamlitannin可以调节皮脂分泌、具保湿及嫩白作用;有舒缓、收敛、抗菌、抗衰老的效果。而银缕梅的药用及经济价值却鲜见报到,主要原因,可能是银缕梅是珍贵濒稀植物,分布较狭窄,不易被发现。还有,研究者没有采用银缕梅提取单宁的原因,主要是银缕梅是珍贵濒危植物,分布较狭窄,不易被发现;再者,银缕梅先花后叶,有时,2-5年才开一次花,如果,没有亲眼见到银缕梅开花,植物鉴定都困难,更不要说对其进行研究了。鉴于此,有必要对它的药用及经济价值等作全面的研究探讨。
中国专利,申请公告号CN 105348332 A,公开了一种柿子单宁的提取方法,包括以下步骤:1)将柿子去皮,破碎,加入乙醇提取,将提取液过滤,取滤液备用;2)将滤液浓缩,加入95V%乙醇,放置过夜,离心,取上清液;3)将上清液过大孔树脂,先用水洗柱至无色,然后用乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液;4)将乙醇洗脱液浓缩回收溶剂,得到浸膏,加水溶解,过滤,取滤液通过截留分子量为450~600的中空纤维膜,收集截留液备用;5)将截留液通过截留分子量为14000~15000的中空纤维膜,收集透过液,干燥,即为柿子单宁粉末。但关于从金缕梅科提取单宁,特别是从银缕梅中提取单宁鲜有报道。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题,本发明目的之一在于提出了一种从银缕梅中提取单宁的方法。
本发明目的第二个目的在于从银缕梅中提取单宁在保健护肤品、抑菌的应用。
一种提取单宁的方法,其特征在于,从银缕梅中提取单宁。
根据权利要求1所述的一种从银缕梅中提取单宁的方法,方法步骤如下:
a)提取:将烘干、恒重后粉碎银缕梅叶片,1.0000-3.000g,粉碎,加少许液氮,在研磨机中研磨成粉末,加80-90%乙醇,微波热回流提取,合并提取液,离心,取上清液,通过减压蒸馏装置分离,即得单宁提取液;
b)步骤a)中单宁提取液用大孔树脂除杂,先用10%乙醇洗脱6个柱体积,再用75%乙醇洗脱10个柱体积,收集75%乙醇洗脱液,减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏;
c)步骤b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离,依次用体积比为80:1、55:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分;
d)步骤c)中组分4用正相硅胶进一步分离,依次用体积比为20:1、15:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分;
e)步骤d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离,用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱,收集8-10个柱体积洗脱液,洗脱液减压浓缩得到纯的单宁。
优选地,所述步骤a)中叶片粉末与有机溶剂的质量比为1∶10~15。
优选地,所述步骤a)中微波热回流提取时间为10-30min。
优选地,所述步骤b)中大孔树脂为AB-8型或D-101型大孔树脂。
优选地,任意一项所述制备方法制得的单宁。
单宁既能吸收紫外线,又能抑制酪氨酸酶和过氧化氢酶的活性,也能使黑色素还原脱色,还能有效清除活性氧,因此在化妆品中加入单宁具有综合美白效果。
优选地,所述的单宁在保健护肤品中的应用。
单宁对多种细菌、真菌和微生物有显著的抑制效果,在相同的抑制浓度下,不会影响人体细胞的生长发育。单宁又有独特的抗氧化性,能有效抵御生物氧化作用,它还有清除活性氧的功能,在化妆品中加入单宁能有效抑菌和具有保健防腐作用
优选地,所述的单宁在抑菌中的应用。
因此,本发明结合有机溶剂萃取法、微波辅助提取法原理和优点,采用液氮研磨、微波辅助提取法结合,尽量缩短微波辅助提取时间,减少微波提取的副作用。
与现有技术相比,本发明具有的有益效果在于:
本发明将含单宁植物材料经乙醇的水溶液通过微波方式提取,用离心法将提取液中的溶剂与固体物质分离,得到单宁溶液,将单宁溶液经大孔树脂纯化,洗脱液减压浓缩,再经真空冷冻干燥得到高纯度单宁,提取时间短,提取率高,提取所得单宁的纯度高。所得样品纯度为95-98%,提取时间10-30分钟,纯化后产物与原料比率为72-200mg/g.
附图说明
图1为实施例1制备的单定的红外谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
本申请中采用的银缕梅叶片,都是岳西县黄尾镇林业站鉴定过的,挂牌保护的野生林植物。
实施例1
一种提取单宁的方法,从银缕梅中提取单宁。
所述的一种从银缕梅中提取单宁的方法,方法步骤如下:
a)提取:将烘干、恒重后粉碎银缕梅叶片,1.000g,粉碎,加少许液氮,在研磨机中研磨成粉末,加80%乙醇,微波热回流提取,合并提取液,离心,取上清液,通过减压蒸馏装置分离,即得单宁提取液;
b)步骤a)中单宁提取液用大孔树脂除杂,先用10%乙醇洗脱6个柱体积,再用75%乙醇洗脱10个柱体积,收集75%乙醇洗脱液,减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏;
c)步骤b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离,依次用体积比为80:1、55:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分;
d)步骤c)中组分4用正相硅胶进一步分离,依次用体积比为20:1、15:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分;
e)步骤d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离,用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱,收集8个柱体积洗脱液,洗脱液减压浓缩得到纯的单宁。
所述步骤a)中叶片粉末与有机溶剂的质量比为1∶10。
所述步骤a)中微波热回流提取时间为10min。
所述步骤b)中大孔树脂为AB-8型大孔树脂。上柱流速1.5mL/min,上样质量浓度1.2mg/mL;洗脱流速1.5mL/min,乙醇体积分数60%。
AB-8型大孔树脂预处理方法:将大孔吸附树脂用无水乙醇浸泡24h后,用水冲洗至无醇味;用3%HCl处理3h,用水洗至中性;然后用3%NaOH浸泡3h,用水洗至中性;再用3%HCI处理3h,用水洗至中性后浸泡在无水乙醇中或直接使用。做大孔树脂时应在宽敞的容器中使树脂充分溶胀,才能装柱。
树脂上柱:先给树脂柱中加入1/3的水,然后将准确量好体积的AB-8树脂用水转移到树脂柱中,再用70%的乙醇2倍树脂体积处理,流速为1倍树脂体积,过完醇后用水洗至无醇味即可进行使用。
药液上柱:上样量为200mL浓缩液/500g树脂,提取的单宁,5mg/mL,过大孔树脂柱,流速为1.5mL/min,静置70min;用4L水洗脱去糖,直到流出液澄清为止。
树脂的解吸:将60%乙醇洗脱单宁,800mL,收集洗脱液,蒸干,残渣用无水乙醇溶解,定量转移至5ml容量瓶中,稀释至刻度,作为供试品溶液,于50℃旋转蒸发,再进行真空冷冻干燥,得到浅棕色粉末状的纯化物。
树脂的清洗、再生:先给树脂柱中加入水,再10%-20%-30%-50%-95%的乙醇处理,逐渐加大乙醇的浓度,流速为1倍树脂体积,过完醇后用水洗至无醇味即可进行使用。一般洗至树脂柱无色时,树脂柱即可再生。如果树脂颜色变深,可用稀酸或稀碱洗脱,最后再用水洗。
所得样品纯度为95%,纯化后产物与原料比率为72mg/g.
任意一项所述制备方法制得的单宁。
单宁在保健护肤品中的应用。
银缕梅叶单宁的红外谱图见图1,由图1可见,波数3390.1cm-1谱峰为酚类分子-OH的伸缩振动;1712.97cm-1谱峰、1613.87cm-1谱峰、1537.46cm-1谱峰、1514.56cm-1谱峰、1446.71cm-1谱峰共五个谱峰是苯环的骨架伸缩振动,属于明显的五指峰;1321.15cm-1谱峰是来自酚羟基的弯曲振动;1200cm-1谱峰是芳族和乙烯基的反对称伸缩振动,1032.9cm-1谱峰是其对称伸缩振动,一般来说,芳族和乙烯基的对称伸缩振动在1075-1020cm-1处。图1结果表明银缕梅叶单宁提取物为多羟基苯酚脂类化合物。
实施例2
一种提取单宁的方法,从银缕梅中提取单宁。
所述的一种从银缕梅中提取单宁的方法,方法步骤如下:
a)提取:将烘干、恒重后粉碎银缕梅叶片,3.0000g,粉碎,加少许液氮,在研磨机中研磨成粉末,加90%乙醇,微波热回流提取,合并提取液,离心,取上清液,通过减压蒸馏装置分离,即得单宁提取液;
b)步骤a)中单宁提取液用大孔树脂除杂,先用10%乙醇洗脱6个柱体积,再用75%乙醇洗脱10个柱体积,收集75%乙醇洗脱液,减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏;
c)步骤b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离,依次用体积比为80:1、55:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分;
d)步骤c)中组分4用正相硅胶进一步分离,依次用体积比为20:1、15:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分;
e)步骤d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离,用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱,收集10个柱体积洗脱液,洗脱液减压浓缩得到纯的单宁。
所述步骤a)中叶片粉末与有机溶剂的质量比为1∶15。
所述步骤a)中微波热回流提取时间为30min。
所述步骤b)中大孔树脂为AB-8型大孔树脂。
所得样品纯度为98%,纯化后产物与原料比率为200mg/g.
任意一项所述制备方法制得的单宁。
单宁在抑菌中的应用。
实施例3
一种提取单宁的方法,从银缕梅中提取单宁。
所述的一种从银缕梅中提取单宁的方法,方法步骤如下:
a)提取:将烘干、恒重后粉碎银缕梅叶片,1.3680g,粉碎,加少许液氮,在研磨机中研磨成粉末,加85%乙醇,微波热回流提取,合并提取液,离心,取上清液,通过减压蒸馏装置分离,即得单宁提取液;
b)步骤a)中单宁提取液用大孔树脂除杂,先用10%乙醇洗脱6个柱体积,再用75%乙醇洗脱10个柱体积,收集75%乙醇洗脱液,减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏;
c)步骤b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离,依次用体积比为80:1、55:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分;
d)步骤c)中组分4用正相硅胶进一步分离,依次用体积比为20:1、15:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分;
e)步骤d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离,用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱,收集8-10个柱体积洗脱液,洗脱液减压浓缩得到纯的单宁。
所述步骤a)中叶片粉末与有机溶剂的质量比为1∶12。
所述步骤a)中微波热回流提取时间为18min。
所述步骤b)中大孔树脂为AB-8型大孔树脂。
所得样品纯度为96.5%,纯化后产物与原料比率为138mg/g。
优选地,任意一项所述制备方法制得的单宁。
单宁在保健护肤品中的应用。
实施例4
一种提取单宁的方法,从银缕梅中提取单宁。
所述的一种从银缕梅中提取单宁的方法,方法步骤如下:
a)提取:将烘干、恒重后粉碎银缕梅叶片,2.8750g,粉碎,加少许液氮,在研磨机中研磨成粉末,加88%乙醇,微波热回流提取,合并提取液,离心,取上清液,通过减压蒸馏装置分离,即得单宁提取液;
b)步骤a)中单宁提取液用大孔树脂除杂,先用10%乙醇洗脱6个柱体积,再用75%乙醇洗脱10个柱体积,收集75%乙醇洗脱液,减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏;
c)步骤b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离,依次用体积比为80:1、55:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分;
d)步骤c)中组分4用正相硅胶进一步分离,依次用体积比为20:1、15:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分;
e)步骤d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离,用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱,收集9个柱体积洗脱液,洗脱液减压浓缩得到纯的单宁。
所述步骤a)中叶片粉末与有机溶剂的质量比为1∶14。
所述步骤a)中微波热回流提取时间为22min。
所述步骤b)中大孔树脂为D-101型大孔树脂。
所得样品纯度为97.2%,纯化后产物与原料比率为186.4mg/g.
任意一项所述制备方法制得的单宁。
单宁在抑菌中的应用。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
机译: 原始金缕梅提取物的非治疗性美容用途,美容护理方法和原始金缕梅提取物
机译: 提供一种具有缩合特性的缩合单宁的植物提取物的方法,该植物提取物经共聚改性后用于皮肤的鞣制和复鞣中,一种具有收敛性的缩合单宁的植物提取物,其经共聚改性,以及使用含有单宁酸的改性植物提取物
机译: 的方法用于在一片金缕梅束中的高湿条件下,该方法分别用于制造无捻纱线或几乎捻捻的纱线,分别用于这些方法和金缕梅原料。这些方法的应用得到了纱线。