一种表达受茶碱调控的适体核酶修饰型sgRNA的载体及应用

摘要

本发明公开了一种表达受茶碱调控的适体核酶修饰型sgRNA的载体，在表达的sgRNA‑AZ 2.0骨架的四碱基环(tetraloop)以及茎环2(stem loop 2)位置插入适体核酶P1‑F5；通过Kpn Ⅰ与EcoR Ⅰ位点和EcoR Ⅰ与Spe Ⅰ位点分别将U6启动子、sgRNA‑AZ 2.0骨架依次连入载体pUC19/EKSHL中，获得载体pU6‑sgRNA‑AZ 2.0；使用BsaⅠ酶切载体pU6‑sgRNA‑AZ 2.0，并利用粘性末端设计并连入针对目标基因的sgRNA序列，获得pU6‑sgRNA‑AZ 2.0‑target site。能有效介导Cas9蛋白的基因组编辑作用，并使其编辑活性受到茶碱调控；且能介导dCas9‑KRAB蛋白对目的基因的转录抑制，并使其抑制活性受到茶碱调控。