一种基于固相连接CRISPR/Cas9gRNA串联表达载体构建新技术

摘要

本发明公开了一种基于固相连接的CRISPR/Cas9gRNA串联表达载体构建新技术,该技术使用链霉亲和素磁珠和biotin偶联的PCR起始片段、延伸片段和终止片段，通过精确设计的酶切位点，使每个片段能通过粘末端精确连接。经过酶切，清洗，连接的步骤的循环而将多个片段在短时间内高效连接多个gRNA表达载体构建技术。该技术能够将构建周期从15‑20天缩短到1天内完成，极大地节约成本和时间。