双gRNA、双gRNA文库、双gRNA载体文库及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种双gRNA、双gRNA文库、双gRNA载体文库及其制备方法和应用。该双gRNA由第一启动子、gRNA‑a、crRNA支架序列、第二启动子和gRNA‑b顺次连接而成。该双gRNA文库包括针对靶基因的多个双gRNA。该双gRNA载体文库即由该双gRNA文库与载体连接而成。本发明的双gRNA中，gRNA‑a和gRNA‑b分别由不同的启动子控制其独立表达，并分别与靶基因上的两个靶位点互补配对，这使得该双gRNA能够招募Cas9核酸酶在两个sgRNA作用位点对靶基因进行剪切，有效提高靶基因的敲除效率。