超临界压缩抗溶剂沉淀法制备依泽替米贝超细微粒的方法

摘要

本发明涉及应用超临界压缩抗溶剂沉淀法制备依泽替米贝超细微粒的方法，包括：将依泽替米贝原料药溶于有机溶剂中，配制依泽替米贝溶液；将CO

说明书

【技术领域】

本发明涉及医药领域，尤其是涉及一种应用超临界压缩抗溶剂沉淀法制备依泽替米贝超细微粒的方法。

【背景技术】

超临界抗溶剂法(Supercritical Anti-solvent，SAS)由Gallgher等人于1989年第一次提出，基本原理是将需要制粒的溶质溶于适当的溶剂中形成一定浓度的溶液，之后向溶液中通入超临界流体，此时超临界流体会与溶质竞争有机溶剂。由于超临界流体对有机溶剂极高的溶解能力使其可以与溶剂以任意比例互溶，因此溶质会瞬间达到极大的过饱和度结晶析出形成超细微粒。按照具体仪器设备以及操作方式的不同，超临界抗溶剂法可细分为气体抗溶剂法(GAS，Gas Anti-solvent)，压缩抗溶剂沉淀法(PCA，Precipitation with a Compressed Anti-solvent)或气溶胶溶剂萃取法(ASES，Aerosol Solvent Extraction System)，超临界流体增强溶液分散法(SEDS，Solution Enhanced Dispersion by Supercritical fluids)，超临界抗溶剂雾化法(SAS-A，Supercritical Anti-solvent Atomization)及气体饱和溶液微粒形成法(PGSS，Particles from Gas-Saturated Solutions)等。

与化学法、冷冻干燥、喷雾干燥、射流研磨法等传统制粒技术相比，超临界流体制粒技术的优势体现在制得的微粒有更小的粒径，更窄的粒度分布，无或者极少溶剂残留，无污染或较少污染，参数易调节，晶型易控制，适用于热敏性物质。在科学技术日益发展的今天，超临界制粒技术作为一种新型的制粒技术越来越受到国内外相关领域研究学者的关注。

本发明采用的是超临界压缩抗溶剂沉淀法，具体地，首先将超临界流体通入结晶釜并维持稳态，之后通过喷嘴将样品溶液喷入结晶釜，在此过程中每一个细小的液滴都会被充满结晶釜的超临界流体紧密包裹，传质极为快速，顷刻间析出细密的产物，所得微粒在粒度等性质上表现出色。

依泽替米贝，分子式C₂₄H₂₁F₂NO₃，外观为白色粉末状固体，是由先灵葆雅公司和默克公司共同研制开发的世界首个选择性胆固醇吸收抑制剂，本品是第一个获得美国FDA批准上市(2002年)的胆固醇吸收选择性抑制剂类药物。依泽替米贝通过与小肠刷状缘膜小囊泡上膜蛋白结合，抑制小肠对饮食中和经胆汁输送到肠道中的胆固醇的吸收，降低血清和肝脏中的胆固醇含量，药物经吸收后在肝脏中与葡萄糖醛酸结合后经肝肠循环，几乎特异地定位于小肠黏膜细胞。然而依泽替米贝几乎不溶于水，体内吸收差，生物利用度低。采用超临界压缩抗溶剂沉淀法可显著减小药物粒径，提高微粒的比表面积，从而改善其溶解性能和生物利用度。

【发明内容】

本发明的目的是提供一种应用超临界压缩抗溶剂沉淀法制备依泽替米贝超细微粒的方法，以制得粒径小、粒度分布均匀的依泽替米贝超细微粒，增大微粒的比表面积，提高其溶解度，从而改善难溶性药物依泽替米贝的生物利用度。

上述目的是通过如下技术方案实现的：

应用超临界压缩抗溶剂沉淀法制备依泽替米贝超细微粒的方法，包括如下步骤：

步骤S1，将依泽替米贝原料药溶于有机溶剂中，配制依泽替米贝溶液；

步骤S2，将CO₂以一定的体积流量通入结晶釜，调节结晶釜内的温度和压力，并维持在稳定状态；

步骤S3，将步骤S1配制的依泽替米贝溶液以预设的进样流速通入结晶釜；

步骤S4，依泽替米贝溶液通入完毕后，持续通入CO₂，整个过程维持结晶釜内的温度和压力不变，一段时间后卸压；

步骤S5，待结晶釜内的压力降至与大气压相等后，打开结晶釜收集依泽替米贝超细微粒，之后进行一系列表征分析，包括马尔文激光粒度仪分析、扫描电子显微镜(SEM)分析及X射线衍射(XRD)分析。

优选地，步骤S1中所述有机溶剂为乙醇。

优选地，步骤S1中依泽替米贝溶液的质量浓度为10-30mg/mL。

优选地，步骤S2中CO₂的体积流量为3.5-4.5L/min，调节结晶釜内的温度至36-44℃，调节结晶釜内的压力至8-20MPa。

优选地，步骤S3中依泽替米贝溶液的进样流速为0.5-2.0mL/min。

优选地，步骤S4中所述一段时间为90min。

本发明提供的方法制备得到的依泽替米贝超细微粒与未经处理的原料药相比，其晶型未发生改变。

本发明的有益效果：

本发明提供的方法制备得到的依泽替米贝超细微粒的粒径相比原料药(平均粒径为44.557μm)减小了80％左右，由此可见本发明提供的方法可显著降低药物颗粒的粒径，从而提高其溶解性能；采用本发明制备的依泽替米贝超细微粒与未经处理的原料药相比，药物晶型未发生改变；本发明在技术层面上可克服其他技术普遍存在的有机溶剂残留问题，操作条件温和，制粒过程绿色高效，制备得到的药物微粒具有较高的安全性。

【附图说明】

图1为超临界压缩抗溶剂沉淀法流程装置图，其中：

1：CO₂储罐，2：低温恒温槽，3：高压泵，4：样品溶液储液槽，5：高压输液泵，6：进样喷嘴，7：结晶釜，8：溶剂回收器，9：转子流量计；

图2为未经处理的原料药依泽替米贝的SEM图像；

图3为实施例1中制备的依泽替米贝超细微粒的SEM图像；

图4为未经处理的原料药依泽替米贝和制备的依泽替米贝超细微粒的XRD图谱，其中1为未经处理的原料药依泽替米贝的XRD图谱，2为实施例1中制备的依泽替米贝超细微粒的XRD图谱，3为实施例2中制备的依泽替米贝超细微粒的XRD图谱，4为实施例3中制备的依泽替米贝超细微粒的XRD图谱，5为实施例4中制备的依泽替米贝超细微粒的XRD图谱。

【具体实施方式】

下面结合附图和实施例对本发明的内容作进一步解释。给出这些实施例仅为更好地理解本发明，而非限制本发明的范围。

仪器与材料

实验原料及试剂

依泽替米贝(纯度＞99％，常州市远大医药化工有限公司)；CO₂(纯度＞99％，南京上元工业气体厂)；乙醇(分析纯，南京化学试剂有限公司)；蒸馏水(中国药科大学自制)。

实验仪器

Helix超临界微粒制备系统(美国Applied Separations公司)；SDC-6低温恒温槽(南京新辰生物科技有限公司)；Helix L-1500高压输液泵(美国Applied Separations公司)；JY1002电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；TYW-2空气压缩泵(苏州市同一机电有限公司)；MS2000激光粒度仪(英国Malvern公司)；S-3400N扫描电子显微镜(日本Hitachi公司)；D2 PHASER X射线粉末衍射仪(德国Bruker公司)。

操作流程

超临界压缩抗溶剂沉淀法流程装置图参见图1，操作流程如下：

实验开始之前务必确保仪器的所有阀门均处于关闭状态；

配制样品溶液并取适量清洗高压输液泵进样系统；

打开低温恒温槽，同时启动主机，打开加热开关对仪器进行预热，约60min后，依次打开CO₂钢瓶进气阀门、CO₂INLET阀门及TOP>2先后经过冷却装置和缓冲罐从釜顶通入结晶釜；

检查装置各连接处的气密性；

打开空气压缩泵和PUMP按钮，缓慢升压至设定压力；

打开BOTTOM OUTLET阀门并调节转子流量计至CO₂流量的预设范围，一段时间后系统达到稳定状态；

打开Solvent Pump以预设的进样流速向结晶釜中通入样品溶液；

进样完毕后，关闭Solvent Pump，维持CO₂流量不变，直至釜内颗粒表面的残留溶剂几乎全部被CO₂带走；

关闭CO₂钢瓶进气阀门、空气压缩泵和PUMP按钮，系统缓慢卸压，直至结晶釜内压力与大气压相等，之后关闭主机及所有阀门；

旋开釜盖收集产物；

彻底清洁整个系统。

实施例1

精准称量依泽替米贝原料药250mg，配制25mg/mL的依泽替米贝-乙醇溶液10mL；在超临界抗溶剂制粒系统的操作面板上设置结晶温度为44℃，预热系统60min；预热完毕后向系统中通入CO₂并维持CO₂的体积流量在3.5-4.5L/min的范围内，缓慢升压至结晶压力为8MPa；采用高效液相泵以1.1mL/min的进样流速将先前配制好的样品溶液注入结晶釜中；进样完毕后继续通入CO₂，90min后停止进气，缓慢卸压至结晶釜内压力与大气压相等；关闭系统，从结晶釜中收集产物。所制得的依泽替米贝超细微粒粒径为8.576μm，外观为非常疏松的白色针状固体，SEM观测显示微粒形貌呈多边形细长棱柱状伴之以不规则颗粒状，XRD分析表明产物晶型与原料药相比未发生变化。

实施例2

精准称量依泽替米贝原料药100mg，配制10mg/mL的依泽替米贝-乙醇溶液10mL；在超临界抗溶剂制粒系统的操作面板上设置结晶温度为42℃，预热系统60min；预热完毕后向系统中通入CO₂并维持CO₂的体积流量在3.5-4.5L/min的范围内，缓慢升压至结晶压力为12MPa；采用高效液相泵以0.5mL/min的进样流速将先前配制好的样品溶液注入结晶釜中；进样完毕后继续通入CO₂，90min后停止进气，缓慢卸压至结晶釜内压力与大气压相等；关闭系统，从结晶釜中收集产物。所制得的依泽替米贝超细微粒粒径为8.185μm，外观为非常疏松的白色针状固体，SEM观测显示微粒形貌呈多边形细长棱柱状伴之以不规则颗粒状，XRD分析表明产物晶型与原料药相比未发生变化。

实施例3

精准称量依泽替米贝原料药300mg，配制30mg/mL的依泽替米贝-乙醇溶液10mL；在超临界抗溶剂制粒系统的操作面板上设置结晶温度为38℃，预热系统60min；预热完毕后向系统中通入CO₂并维持CO₂的体积流量在3.5-4.5L/min的范围内，缓慢升压至结晶压力为16MPa；采用高效液相泵以2.0mL/min的进样流速将先前配制好的样品溶液注入结晶釜中；进样完毕后继续通入CO₂，90min后停止进气，缓慢卸压至结晶釜内压力与大气压相等；关闭系统，从结晶釜中收集产物。所制得的依泽替米贝超细微粒粒径为6.299μm，外观为非常疏松的白色针状固体，SEM观测显示微粒形貌呈多边形细长棱柱状伴之以不规则颗粒状，XRD分析表明产物晶型与原料药相比未发生变化。

实施例4

精准称量依泽替米贝原料药150mg，配制15mg/mL的依泽替米贝-乙醇溶液10mL；在超临界抗溶剂制粒系统的操作面板上设置结晶温度为36℃，预热系统60min；预热完毕后向系统中通入CO₂并维持CO₂的体积流量在3.5-4.5L/min的范围内，缓慢升压至结晶压力为20MPa；采用高效液相泵以1.4mL/min的进样流速将先前配制好的样品溶液注入结晶釜中；进样完毕后继续通入CO₂，90min后停止进气，缓慢卸压至结晶釜内压力与大气压相等；关闭系统，从结晶釜中收集产物。所制得的依泽替米贝超细微粒粒径为8.187μm，外观为非常疏松的白色针状固体，SEM观测显示微粒形貌呈多边形细长棱柱状伴之以不规则颗粒状，XRD分析表明产物晶型与原料药相比未发生变化。