一种检测烟草样品中松萝科植物特征成分的方法

摘要

本发明涉及一种检测烟草样品中松萝科植物特征成分的方法，该方法包括以下步骤：a)用含内标物的萃取溶剂萃取烟草样品，获得样品溶液；b)用松萝科植物特征成分、内标物和所述萃取溶剂配制系列浓度标准溶液；c)用气相色谱‑质谱法测定所述系列浓度标准溶液中的松萝科植物特征成分，绘制标准工作曲线；d)用气相色谱‑质谱法测定所述样品溶液中的松萝科植物特征成分的含量，采用内标标准曲线法定量；e)计算烟草样品中松萝科植物特征成分的含量。该方法重复性好，分析检测灵敏度高。

说明书

技术领域

本发明属于烟草领域，具体涉及一种检测烟草样品中松萝科植物特征成分的方法。

背景技术

松萝科植物提取物具有独特的自然清香和浓郁的树脂气息，留香比较持久，是重要的天然香料。松萝科植物提取物应用于卷烟加香后，可以增进陈烟风味，能掩盖烟草杂气和泥土气息，衬托独特的卷烟风格，赋予卷烟苔样的青香香气风格，明显增加烟气浓度，并且能改善口腔和喉部的舒适感，在烟用香精的调配中也起着举足轻重的作用。

松萝科植物提取物的加工工艺不同，产品以浸膏或净油形式存在，其中还有大量的色素、植物蜡等杂质，导致其香气质量和纯度欠佳，给卷烟余味带来不利影响。浸膏质量和成分随土壤成分、气候条件、生长季节、生成年龄、收割时间、储运情况等变化而变化，即使同一地区的树苔原料，发酵、加工等工艺的细微变化也会引起其中特征成分含量的波动。测定烟草样品中松萝科植物的特征成分，直接客观地判断成分的含量波动，对卷烟配方设计、产品维护及质量控制等方面都有指导借鉴意义。

发明内容

发明人发现，使用气相色谱质谱法(GC-MS)检测烟草样品中松萝科植物特征成分，若仅依靠总离子流丰度的方法，难以实现对其特征成分的跟踪，原因在于：

1.松萝科植物提取物在烟草中的施加量不超过0.005％，其中的特征致香成分仅占其中的1/10；

2.烟丝中含有大量的酸、碱、糖、蛋白、淀粉、果胶、蜡质等，复杂的基质严重干扰特征成分的鉴别；

3.烟丝热解燃烧后，随烟气迁移进入口腔的有效成分更为稀少。

因此，除了感官评价外，为了更有效认识这种特征香料在烟草样品中的形态，需要更好的检测烟草样品中松萝科植物特征成分的方法。

本发明第一方面提供一种烟草样品中松萝科植物特征成分的检测方法，包括以下步骤：

a)用含内标物的萃取溶剂萃取烟草样品，获得样品溶液；

b)用松萝科植物特征成分、内标物和所述萃取溶剂配制系列浓度标准溶液；

c)用气相色谱-质谱法测定所述系列浓度标准溶液中的松萝科植物特征成分，绘制标准工作曲线；

d)用气相色谱-质谱法测定所述样品溶液中的松萝科植物特征成分的含量，采用内标标准曲线法定量；

e)计算烟草样品中松萝科植物特征成分的含量；

所述内标物为乙酸苯乙酯；

所述萃取溶剂为二氯甲烷；

所述气相色谱-质谱法参数包括：采用选择离子法，色谱柱为苯基亚芳基聚合物(性能上等同于5％-苯基)-甲基聚硅氧烷毛细管色谱柱；

所述松萝科植物特征成分选自：苔黑酚、苔黑酚单甲醚、苔黑酚羧酸乙酯和β-苔黑酚羧酸甲酯中的一种或多种。

所述松萝科植物特征成分可以包括苔黑酚。

所述松萝科植物特征成分可以包括苔黑酚单甲醚。

所述松萝科植物特征成分可以包括苔黑酚羧酸乙酯。

所述松萝科植物特征成分可以包括β-苔黑酚羧酸甲酯。

在一个实施方案中，本发明任一项所述的方法，所述气相色谱-质谱法的色谱参数包括以下一项或多项：

-色谱柱型号：J&W DB-5ms；

-色谱柱尺寸：30m×0.25mm×0.25μm；

-进样口温度：240～260℃(例如250℃)；

-进样量：0.5～1.5μL(例如1μL)；

-分流比：8～12:1(例如10:1)；

-载气流速：1～2mL/min(例如1.5mL/min)；

-吹扫气流速：4～6mL/min(例如5mL/min)；

-采用程序升温，升温程序为：

初始50～70℃(例如60℃)，保持1～3min(例如2min)，

以3～5℃/min(例如4℃/min)速率升温至230～250℃(例如240℃)，保持0.5～1.5min(例如1min)，

以15～25℃/min(例如20℃/min)速率升温至250～270℃(例如260℃)，保持4～6min(例如5min)。

在一个实施方案中，本发明任一项所述的方法，所述气相色谱-质谱法的质谱参数包括以下一项或多项：

-离子源：电子轰击源；

-电子能：60～80eV；

-传输线温度：200～300℃(例如250℃)；

-离子源温度：200～300℃(例如250℃)；

-四级杆温度100～200℃(例如150℃)；

-溶剂延迟：6～10min(例如8min)；

-采用SCAN和SIM同时扫描，质量扫描范围m/z 45～300；

在一个实施方案中，本发明任一项所述的方法，所述气相色谱-质谱法的质谱参数包括以下一项或多项：

-乙酸苯乙酯的定性离子为m/z43，91和104的离子，定量离子为m/z104的离子；

-苔黑酚单甲醚的定性离子为m/z76，107和138的离子，定量离子为m/z138的离子；

-苔黑酚的定性离子为m/z67，95和124的离子，定量离子为m/z124的离子；

-β-苔黑酚羧酸甲酯的定性离子为m/z136，164和196的离子，定量离子为m/z136的离子；

-苔黑酚羧酸乙酯的定性离子为m/z122，150和196的离子，定量离子为m/z150的离子。

在一个实施方案中，本发明任一项所述的方法，步骤a)包括：

-将烟草样品用含内标的萃取溶剂超声萃取，过滤，收集滤液；

-在滤液中加入饱和氯化钠溶液和盐酸，振荡，离心分液，收集有机相；

-将有机相用无水硫酸钠干燥，用PTFE滤膜过滤，获得样品溶液。

在一个实施方案中，本发明任一项所述的方法，所述烟草样品为卷烟主流烟气的总粒相物，步骤a)包括：

-用剑桥滤片收集卷烟主流烟气的总粒相物；

-将含有总粒相物的剑桥滤片用含内标的萃取溶剂超声萃取，过滤，收集滤液；

-在滤液中加入饱和氯化钠溶液和盐酸，振荡，离心分液，收集有机相。

在一个实施方案中，本发明任一项所述的方法，所述烟草样品为烟丝，步骤a)包括：

-将烟丝用含内标的萃取溶剂超声萃取，过滤，收集滤液；

-在滤液中加入饱和氯化钠溶液和盐酸，振荡，离心分液，收集有机相。

在一个实施方案中，本发明任一项所述的方法，步骤b)中，所述系列浓度标准溶液为基质匹配系列浓度标准溶液；

优选地，所述基质匹配系列浓度标准溶液的制备方法包括以下步骤：

-用溶剂萃取烟草样品，获得烟草样品的基质溶液；

-用松萝科植物特征成分、所述内标物和所述萃取溶剂配制不同浓度的松萝科植物特征成分的溶液；

-将基质溶液氮吹至近干，再分别加入不同浓度的松萝科植物特征成分的溶液，得到基质匹配系列标准溶液。

在一个实施方案中，本发明任一项所述的方法，所述系列浓度标准溶液的浓度范围为0.01μg/mL～2.0μg/mL。

在一个实施方案中，本发明任一项所述的方法，所述盐酸浓度范围为2％～5％。

在一个实施方案中，本发明任一项所述的方法，其包括以下步骤中的一步或多步：

1.标准溶液的配制

1.1内标溶液和标准溶液的配制：称取乙酸苯乙酯的标准品，加入溶剂定容，配成内标储备溶液。准确称取松萝科植物特征成分，加入溶剂定容，配成标准储备溶液。移取系列体积标准储备溶液和适量内标储备溶液，配制成一般系列标准溶液。

1.2基质匹配标准溶液的配制：对应不同烟草制品，使用萃取溶剂萃取并前处理，得到烟草制品的基质溶液。移取适量基质溶液，氮吹至近干，再加入等体积的1.1配制的一般标准溶液，得到基质匹配系列标准溶液。

2.样品前处理

2.1萃取溶液的配制：在萃取溶剂中加入适量的内标储备溶液，得到内标萃取溶液。

2.2烟草制品的前处理：烟草制品使用适当体积的内标萃取溶液并辅以超声萃取，过滤后滤液使用饱和食盐水和盐酸洗涤。混合溶液静置后离心分层，移除水相，有机相用无水硫酸钠干燥后，气相色谱质谱进样。

3.样品的定性检测：气相色谱质谱总离子流图确定待测组分的保留时间，确定待测组分的定性离子和定量离子。

4.样品的定量检测

4.1绘制标准工作曲线：将步骤1.2中的基质匹配标准溶液进行气相色谱质谱选择离子测定，以目标成分与内标的定量离子峰面积比为纵坐标，以目标成分的质量浓度为横坐标，绘制对应烟草制品基质中的松萝科植物特征成分的标准工作曲线，得到线性回归方程。

4.2样品的测定：将步骤2.2中的待测溶液进行气相色谱质谱选择离子测定，将获得的待测溶液中目标成分/内标的定量离子峰面积比代入4.1中的线性回归方程，计算得到目标成分的质量浓度，进而换算得到在烟草制品中的含量。

在一个实施方案中，本发明任一项所述的方法，所述烟草样品选自烟叶、烟丝、再造烟叶、电子烟液、卷烟纸、内衬纸、滤棒、卷烟包装盒中的一种或多种。

在一个实施方案中，本发明的方法包括：

1.标准溶液的配制

1.1内标溶液和标准溶液的配制：称取乙酸苯乙酯的标准品，加入萃取溶剂定容，配成内标储备溶液。称取松萝科植物特征成分，加入萃取溶剂定容，配成标准储备溶液。移取系列体积标准储备溶液和适量内标储备溶液，配制成一般系列标准溶液。

1.2基质匹配标准溶液的配制：使用萃取溶剂萃取不含松萝科植物特征成分的对照烟草样品，得到烟草样品的基质溶液。移取适量基质溶液，氮吹至近干，再加入等体积的1.1配制的一般系列标准溶液，得到基质匹配系列标准溶液。

2.样品前处理

2.1萃取溶液的配制：在萃取溶剂中加入适量的内标储备溶液，得到内标萃取溶液。

2.2烟草样品的前处理：烟草样品使用适当体积的内标萃取溶液并辅以超声萃取，过滤后滤液使用饱和食盐水和盐酸洗涤。混合溶液静置后离心分层，移除水相，有机相用无水硫酸钠干燥后，气相色谱质谱进样。

3.样品的定性检测：气相色谱质谱总离子流图确定待测组分的保留时间，确定待测组分的定性离子和定量离子。

4.样品的定量检测

4.1绘制标准工作曲线：将步骤1.2中的基质匹配标准溶液进行气相色谱质谱选择离子测定，以目标成分与内标的定量离子峰面积比为纵坐标，以目标成分的质量浓度为横坐标，绘制对应烟草样品基质中的松萝科植物特征成分的标准工作曲线，得到线性回归方程。

4.2样品的测定：将步骤2.2中的待测溶液进行气相色谱质谱选择离子测定，将获得的待测溶液中目标成分/内标的定量离子峰面积比代入4.1中的线性回归方程，计算得到目标成分的质量浓度，进而换算得到在烟草样品中的含量。

本发明的有益效果

公开实施方案的一个或多个方法具有以下一项或多项优点：

1.使用萃取溶剂直接提取法，与经典的同时蒸馏萃取法相比，避免了高温加热所造成的成分降解以及微量成分的丧失，也缩短了前处理的时间；

2.使用气相色谱质谱选择离子法，大幅降低了烟草样品复杂基质的干扰，提高了检测的灵敏度；

3.为了进一步降低基质效应对定量结果的影响，针对不同基质绘制相应的工作曲线，保证不同烟草样品间数据的可比性；

4.通过优化气相色谱质谱参数，使得检测方法的检出限和定量限较低、加标回收率接近100％、相对标准偏差(RSD)较低。

附图说明

图1浓度为0.1μg/mL的一般标准溶液的总离子流色谱图和选择离子色谱图；

图2浓度为1.0μg/mL的基质匹配标准溶液的总离子流色谱图和选择离子色谱图；

图1、2中，各曲线含义如下：0-松萝科植物特征成分的总离子流色谱；1-苔黑酚单甲醚的选择离子色谱，2-苔黑酚的选择离子色谱，3-β-苔黑酚羧酸甲酯的选择离子色谱，4-苔黑酚羧酸乙酯的选择离子色谱。

具体实施方式

现在将详细提及本发明的具体实施方案。具体实施方案的例子图示在附图中。尽管结合这些具体的实施方案描述本发明，但应认识到不打算限制本发明到这些具体实施方案。相反，这些实施方案意欲覆盖可包括在由权利要求限定的发明精神和范围内的替代、改变或等价实施方案。在下面的描述中，阐述了大量具体细节以便提供对本发明的全面理解。本发明可在没有部分或全部这些具体细节的情况下被实施。在其它情况下，为了不使本发明不必要地模糊，没有详细描述熟知的工艺操作。

以下实施例中，检测烟草样品中松萝科植物特征成分的方法的试剂与仪器如下：

试剂：卷烟样品(福建中烟工业有限责任公司技术中心提供)；苔黑酚(>98％，Arcos)，苔黑酚单甲醚、苔黑酚羧酸乙酯(>98％，TCI)，β-苔黑酚羧酸甲酯(>98％，Sigma-Aldrich)，乙酸苯乙酯(标准品，JKChemical)；二氯甲烷(HPLC，JKChemicl)，盐酸(37％，JKChemical)，纯水(自制)；氯化钠、无水硫酸钠(A.R.，国药)。

仪器：TRACE1310气相色谱+ISQ LT四极杆质谱(美国Thermo公司)；RM-20H转盘吸烟机(德国Borgwaldt公司)；S150超声波萃取仪(德国Elma公司)；2-16P离心机(德国SIGMA公司)；Turbo Vap II氮吹仪(瑞典Biotage公司)；ML204电子天平(瑞士Metler Toledo公司，感量0.1mg)。

以下实施例中，检测烟草样品中松萝科植物特征成分的方法的采用气相色谱质谱法。

以下实施例中，气相色谱质谱的色谱条件如下：

色谱柱：J&W DB-5ms(30m×0.25mm×0.25μm)；进样口温度：250℃；进样量：1.0μL；分流比：10:1；载气流速：1.5mL/min；吹扫气流速：5mL/min；升温程序：60℃,保持min→以4℃/min升温→240℃,保持1min→以20℃/min升温→260℃,保持5min。

以下实施例中，气相色谱质谱的质谱条件如下：

离子源：EI；电子能：70eV；传输线温度：250℃；离子源温度：250℃；四级杆温度150℃；溶剂延迟：8min；采用SCAN和SIM同时扫描，质量扫描范围m/z 45～300；以下实施例中，检测烟草样品中松萝科植物特征成分的方法中，一般系列标准溶液的配制方法如下：

分别称取苔黑酚、苔黑酚单甲醚、苔黑酚羧酸乙酯和β-苔黑酚羧酸甲酯的纯品各50mg，加入萃取溶剂二氯甲烷溶解，并定容至50mL，配制成浓度1000μg/mL的标准储备溶液。

称取乙酸苯乙酯的标准品32mg，加入萃取溶剂二氯甲烷溶解，并定容至50mL，配制成浓度640μg/mL的内标储备溶液。

分别准确移取1.0μL、2.5μL、5.0μL、10μL、25μL、50μL的标准储备溶液和25μL的内标储备溶液，至50mL的容量瓶中，二氯甲烷定容待用。得到一般系列标准溶液，浓度分别为：0.02μg/mL(S1)、0.05μg/mL(S2)、0.1μg/mL(S3)、0.2μg/mL(S4)、0.5μg/mL(S5)、1.0μg/mL(S6)，内标浓度为0.32μg/mL。

准确移取1.0mL的内标储备溶液于2000mL二氯甲烷中，配制成含内标浓度为0.32μg/mL的内标萃取溶剂。

图1是浓度为0.1μg/mL的一般标准溶液的总离子流色谱图和选择离子色谱图。图1中，各曲线含义如下：0-松萝科植物特征成分的总离子流色谱；1-苔黑酚单甲醚的选择离子色谱，2-苔黑酚的选择离子色谱，3-β-苔黑酚羧酸甲酯的选择离子色谱，4-苔黑酚羧酸乙酯的选择离子色谱。

根据气相色谱质谱总离子流图确定待测组分的保留时间，确定待测组分的定性离子和定量离子。

选择离子扫描参数如表1所示：

表1

实施例1.成品卷烟烟丝的检测

1.烟丝基质匹配系列标准溶液的配制

1.1烟丝基质溶液的制备：剥除2支不含松萝科植物特征成分的对照卷烟烟丝，用20mL内标萃取溶液萃取，超声20min，过滤。滤液中加入10mL饱和食盐水和0.5mL 5％盐酸，震荡10min，6000rpm离心10min使两相充分分离，移除水相。有机相经无水硫酸钠干燥后，用PTFE滤膜(0.45μm)过滤，续滤液待用。

1.2基质匹配标准溶液的配制：分别移取2.0mL烟丝基质溶液至六个氮吹瓶中，在氮气保护下吹扫至溶液近干。再往氮吹瓶中分别加入一般系列标准溶液，即得到烟丝基质匹配系列标准溶液，浓度分别为0.02μg/mL(S1l)、0.05μg/mL(S2l)、0.1μg/mL(S3l)、0.2μg/mL(S4l)、0.5μg/mL(S5l)、1.0μg/mL(S6l)，内标浓度为0.32μg/mL。

2.样品前处理

称取两支样品卷烟的烟丝，加入20mL内标萃取溶液，超声萃取20min，过滤。滤液中加入10mL饱和氯化钠，并滴加0.5mL 5％盐酸，振荡10min，6000rpm离心分液10min。移除水相。有机相用无水硫酸钠干燥，用PTFE滤膜(0.45μm)过滤。色谱进样。

3.样品含量的测定

3.1工作曲线、检出限和检测限

取上述配制的烟丝基质匹配系列标准溶液进行气相色谱质谱检测，以目标物与内标物的定量离子峰面积比为纵坐标，以目标物的质量浓度为横坐标，进行回归分析，得到烟丝中四种目标物的标准工作曲线及其相关系数，具体结果如表1.1所示。

由表1.1可知，对基质匹配标准溶液中的目标物响应信号，采用最低浓度标样重复10次进样，以3倍信噪比为方法的检出限(LOD)，10倍信噪比为定量限(LOQ)，可知方法具有较高的灵敏度。

图2浓度为1.0μg/mL的基质匹配标准溶液的总离子流色谱图和选择离子色谱图。图2中，各曲线含义如下：0-松萝科植物特征成分的总离子流色谱；1-苔黑酚单甲醚的选择离子色谱，2-苔黑酚的选择离子色谱，3-β-苔黑酚羧酸甲酯的选择离子色谱，4-苔黑酚羧酸乙酯的选择离子色谱。

表1.1工作曲线、检出限和检测限

3.2回收率和精密度

取对照卷烟烟丝样品，添加3个不同浓度的目标物纯品溶液，并加入内标萃取溶液进行以上的样品前处理，进行气相色谱质谱分析，按照加标量(0.1μg/mL、0.2μg/mL和0.5μg/mL)和测定值计算其回收率。同时对同一样品溶液平行测定5次(n＝5)，得到四种成分的精密度测定数据，见表1.2。由表1.2可以看出，四种成分的回收率在70.4％～114.5％之间，相对标准偏差(RSD)均小于11.7％，说明本方法的回收率高、准确性和重复性好，可以满足定量需要。

表1.2回收率和精密度

3.3烟丝中含量

运用以上建立的测试方法，分别测试了四个牌号的成品卷烟烟丝，如表1.3，在四个牌号中均未检出苔黑酚单甲醚，苔黑酚的含量相近，而牌号4烟丝中的β-苔黑酚羧酸甲酯和苔黑酚羧酸乙酯含量均最高。

表1.3烟丝中松萝科植物特征成分含量的测试结果

对比例1

在卷烟烟丝中加入微量松萝科植物提取物，参照实施例1的方法，分别使用二氯甲烷、乙酸乙酯和正己烷三种常用有机溶剂对烟丝进行萃取，以乙酸苯乙酯作为内标，用气相色谱相对峰面积考察三种溶剂对松萝科植物成分的萃取效率。如表1.4所示，对于苔黑酚，二氯甲烷的萃取效率明显好于乙酸乙酯和正己烷；对于其他三种成分，二氯甲烷和乙酸乙酯的提取效率接近，均优于正己烷。综合以上结果，对于松萝科植物成分，二氯甲烷是较为合适的萃取溶剂。结合表1.2的加标回收率结果，也说明实施例1的检测结果更接近真实值。

表1.4三种溶剂对成分的萃取效率比较

实施例2.卷烟主流烟气的检测

1.烟气基质匹配标准溶液的配制

1.1烟气基质溶液的制备：按照GB/T 5606.1-2004国家标准和ISO 3308:2012烟草行业标准规定，使用转盘型吸烟机对20支纯烟丝卷烟进行抽吸，剑桥滤片捕集总粒相物。滤片用40mL内标萃取溶液萃取，超声15min。移除滤片，往萃取溶剂中加入10mL饱和食盐水和0.5mL 5％盐酸，震荡10min，6000rpm离心10min使两相充分分离，移除水相。有机相经无水硫酸钠干燥后，用PTFE滤膜过滤，续滤液待用。

1.2基质匹配标准溶液的配制：分别移取2.0mL烟气基质溶液至六个氮吹瓶中，在氮气保护下吹扫至溶液近干。再往氮吹瓶中加入一般系列标准溶液，即得到烟气基质匹配标准溶液。所得标准曲线溶液浓度分别为0.02μg/mL(S1f)、0.05μg/mL(S2f)、0.1μg/mL(S3f)、0.2μg/mL(S4f)、0.5μg/mL(S5f)、1.0μg/mL(S6f)，内标浓度为0.32μg/mL。

2.样品前处理

用转盘型吸烟机收集20只卷烟的总粒相物，剑桥滤片加入40mL内标萃取溶液，超声萃取15min。移取20mL萃取溶剂，加入10mL饱和氯化钠，再加入0.5mL 5％盐酸，振荡10min，离心分液(6000rpm，10min)。移除水相，油相用无水硫酸钠干燥，过滤膜(PTFE，0.45μm)。色谱进样。

3.样品含量的测定

3.1工作曲线、检出限和检测限

取上述配制的烟气基质匹配标准溶液进行气相色谱质谱检测，以目标物与内标物的定量离子峰面积比为纵坐标，以目标物的质量浓度为横坐标，进行回归分析，得到烟气中四种目标物的标准工作曲线及其相关系数，具体结果如表2.1所示。

由表2.1可知，对标准溶液中的目标物响应信号，采用最低浓度标样重复10次进样，以3倍信噪比为方法的检出限(LOD)，10倍信噪比为定量限(LOQ)，可知方法具有较高的灵敏度。

表2.1工作曲线、检出限和检测限

3.2回收率和精密度

用转盘型吸烟机收集20只卷烟的总粒相物，添加3个不同浓度的目标物纯品溶液，并加入内标萃取溶液进行以上的样品前处理，进行气相色谱质谱分析，按照加标量(0.1μg/mL、0.2μg/mL和0.5μg/mL)和测定值计算其回收率。同时对同一样品溶液平行测定5次(n＝5)，得到四种成分的精密度测定数据，见表2.2。由表2.2可以看出，四种成分的回收率在71.5％～108.5％之间，相对标准偏差(RSD)均小于9.3％，说明本方法的回收率高、准确性和重复性好，可以满足定量需要。

表2.2回收率和精密度

3.3烟气中含量

运用以上建立的测试方法，分别测试了三个牌号的成品卷烟烟气，如表2.3，在三个牌号中均未检出苔黑酚单甲醚和苔黑酚，而牌号7主流烟气的β-苔黑酚羧酸甲酯和苔黑酚羧酸乙酯含量均最低。

表2.3烟气中松萝科植物特征成分含量的测试结果

上述实施例使用选择离子方法测定了四种松萝科植物特征成分的含量，可以实现卷烟制品中松萝科植物特征成分的测定，从而为卷烟香精的调配、施加和感官评吸，提供准确的数据参考。本发明采用溶剂直接萃取，气相色谱质谱选择离子法进行分析，采用基质匹配内标标准曲线法定量。具有提取效率高、操作简便、排除基质干扰、定量准确等一项或多项优点。

最后应当说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者对部分技术特征进行等同替换；而不脱离本发明技术方案的精神，其均应涵盖在本发明请求保护的技术方案范围当中。