利用GST表达体系制备抗人PIAS3高效价抗体及应用

摘要

本发明属于生物工程技术领域，涉及利用GST表达体系制备的抗PIAS3 87‑121aa高效价抗体及应用。利用基因工程技术，将PIAS3 87‑121aa克隆到原核表达载体中，经酶切鉴定后，用重组质粒转化大肠杆菌，并IPTG诱导产生GST‑PIAS3 35aa融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫新西兰兔制备抗血清并用ProteinA/G纯化。抗体的效价及特异性采用ELISA和Western blot检测，并应用免疫组化的方法，应用该抗体检测到68KD全长的PIAS3蛋白位于前列腺上皮细胞的细胞质中表达，而在癌组织中表达缺失，这对于揭示PIAS3蛋白的功能意义重大。