一种化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分析方法

摘要

本发明提供一种化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分析方法，包括以下步骤：(1)提供未经处理的化妆品样品；(2)提供固定相，采用柱色谱的方法进行环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分离。

说明书

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及化妆品中糖皮质激素的分析方法。

技术背景

糖皮质激素，又名“肾上腺皮质激素”，是由肾上腺皮质分泌的一类甾体激素，也可由化学方法人工合成。临床上糖皮质激素作为抗感染药物，可抑制纤维细胞增生，减少5-羟色胺形成，外用可降低毛细血管的通透性、减少渗出和细胞浸润，具有抗炎、抗过敏、免疫抑制、抗增生等作用，因此在皮肤科疾病临床上的应用非常广泛。

糖皮质激素的使用必须遵循一定的原则，不能滥用。然而部分不法化妆品商家在化妆品中添加糖皮质激素，短期内使消费者的皮肤变得白皙、红润，达到快速吸引消费者、谋取暴利的目的。然而长期使用则会造成皮肤变薄、毛细管扩张、毛囊萎缩，导致出现干燥脱皮、红血丝、色素沉着等现象，一旦停用后就会出现瘙痒、红肿、丘疹等症状。轻度受害者只是肌肤问题恢复到使用前的状态，中度受害者则出现激素依赖性皮炎，重度受害者则可能会产生眼部并发症、类固醇性糖尿病、骨坏死和骨质疏松、精神失常、消化性溃疡等病症。

本发明中，所述环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素是指以具有17个碳的环戊烷骈多氢菲基本母核结构，具有C3的羰基、Δ4和17β酮醇侧链以及17α-OH和11β-OH。在此结构的基础上，通过对C-1～2位、C-6位、C-9α位、C-11β位及C-21位等位置进行修饰而得到了种类繁多的糖皮质激素药物。因此这些化合物的结构极为相似，使对多种糖皮质激素的同时监测、确定质谱条件带来了极大的挑战。针对上述现象，本发明提供一种化妆品中糖皮质激素的分析方法，更加涉及化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分析方法。

发明内容

本发明提供一种化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分析方法，包括以下步骤：

(1)提供未经处理的化妆品样品；

(2)提供固定相，采用柱色谱的方法进行环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分离。

作为本发明的一种实施方式，所述环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素为氟轻松、地索奈德、环索奈德、卤甲松、帕拉米松、帕拉米松乙酸酯、戊酸双氟可龙、异氟泼尼松、去羟米松、卤贝他索丙酸酯、氟尼缩松和/或依碳氯替泼诺中的一种或多种。

作为本发明的一种实施方式，所述环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素为卤贝他索丙酸酯、戊酸双氟可龙、地索奈德和/或帕拉米松乙酸酯中的一种或多种。

作为本发明的一种实施方式，所述固定相的制备原料包含：

硅胶

(甲基)含氟丙烯酸酯

(甲基)非含氟丙烯酸

硅烷偶联剂

交联剂

引发剂。

作为本发明的一种实施方式，所述固定相的制备原料还包含：

3,4-乙烯二氧噻吩

乙烯基咪唑

苯乙烯膦酸

辛烯基琥珀酸。

作为本发明的一种实施方式，所述(甲基)含氟丙烯酸酯和(甲基)非含氟丙烯酸的重量比为(0.01-1)：5。

作为本发明的一种实施方式，所述(甲基)含氟丙烯酸酯和(甲基)非含氟丙烯酸的重量比为(0.2-0.8)：5。

作为本发明的一种实施方式，所述硅烷偶联剂选自含有碳碳双键的硅烷偶联剂。

作为本发明的一种实施方式，所述交联剂选自含有至少两个碳碳双键的交联剂。

作为本发明的一种实施方式，所述固定相的制备方法步骤为：

(1)硅胶改性：将真空干燥过的硅胶和硅烷偶联剂在无水甲苯中，氮气保护下搅拌、回流反应18-36小时，冷却，抽滤，洗涤，干燥，得到改性后的硅胶；

(2)固定相的合成：将上述制备得到的改性后的硅胶与剩余的反应原料和CAS号为1221908-84-4的式(1)物质在溶剂中混合搅拌加热，加入引发剂，氮气保护，60℃下回流36-72小时，冷却，抽滤，洗涤，干燥，得到产物1，将产物1采用差分脉冲伏安法除去式(1)物质，得到最终产物，

式(1)物质的结构式如下：

具体实施方式

除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。

质量、浓度、温度、时间，或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，1-50的范围应理解为包括选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、或50的任何数字、数字的组合、或子范围、以及所有介于上述整数之间的小数值，例如，1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、和1.9。关于子范围，具体考虑从范围内的任意端点开始延伸的“嵌套的子范围”。例如，示例性范围1-50的嵌套子范围可以包括一个方向上的1-10、1-20、1-30和1-40，或在另一方向上的50-40、50-30、50-20和50-10。

本发明的一方面提供一种化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分析方法，包括以下步骤：

(1)提供未经处理的化妆品样品；

(2)提供固定相，采用柱色谱的方法进行环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分离。

环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素

糖皮质激素(Glucocorticoid)，又名“肾上腺皮质激素”，是由肾上腺皮质分泌的一类甾体激素，也可由化学方法人工合成。由于可用于一般的抗生素或消炎药所不及的病症，如SARS、败血症等，具有调节糖、脂肪、和蛋白质的生物合成和代谢的作用。临床上糖皮质激素作为抗感染药物，可抑制纤维细胞增生，减少5-羟色胺形成，外用可降低毛细血管的通透性、减少渗出和细胞浸润，具有抗炎、抗过敏、免疫抑制、抗增生等作用，因此在皮肤科疾病临床上的应用非常广泛。

糖皮质激素的使用必须遵循一定的原则，不能滥用。然而部分不法化妆品商家在化妆品中添加糖皮质激素，短期内使消费者的皮肤变得白皙、红润，达到快速吸引消费者、谋取暴利的目的。然而长期使用则会造成皮肤变薄、毛细管扩张、毛囊萎缩，导致出现干燥脱皮、红血丝、色素沉着等现象，一旦停用后就会出现瘙痒、红肿、丘疹等症状。轻度受害者只是肌肤问题恢复到使用前的状态，中度受害者则出现激素依赖性皮炎，重度受害者则可能会产生眼部并发症、类固醇性糖尿病、骨坏死和骨质疏松、精神失常、消化性溃疡等病症。

糖皮质激素具有17个碳的环戊烷骈多氢菲基本母核结构，具有C3的羰基、Δ4和17β酮醇侧链以及17α-OH和11β-OH。在此结构的基础上，通过对C-1～2位、C-6位、C-9α位、C-11β位及C-21位等位置进行修饰而得到了种类繁多的糖皮质激素药物。

作为本发明的一种实施方式，所述环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素为氟轻松、地索奈德、环索奈德、卤甲松、帕拉米松、帕拉米松乙酸酯、戊酸双氟可龙、异氟泼尼松、去羟米松、卤贝他索丙酸酯、氟尼缩松和依碳氯替泼诺中的一种或多种。

作为本发明的一种实施方式，所述环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素为卤贝他索丙酸酯、戊酸双氟可龙、地索奈德和帕拉米松乙酸酯中的一种或多种。

氟轻松

中文别名游离氟轻松，CAS号为67-73-2，分子式：C₂₄H₃₀F₂O₆，为外用皮质激素，涂于皮肤患处，治疗皮肤过敏而引起瘙痒，粘膜的炎症，神经性皮炎、接触皮炎、日光性皮炎、牛皮癣等，特别适合用于婴儿湿疹，且疗效显著，副作用少，奏效快，止痒效果好。

地索奈德

中文别名地索奈德、待索利德、羟泼尼缩松，英文名称为Desonide，CAS号为638-94-8，分子式：C₂₄H₃₂O₆。主要用于治疗内源性湿疹，总体疗效显著,且不良反应发生率低，是一种安全有效的外用皮质类激素。

环索奈德

CAS号为126544-47-6，环索奈德是一种新型的吸入式糖皮质激素类哮喘治疗药，属于肾上腺皮质激素类药，同类药物还包括二丙酸倍氯米松、布地奈德、丙酸氟替卡松，本品以非活性形式给药，被气道的内源性酯酶当场活化，达到目标器官肺时转化成活性成分；一旦被活化，就表现出很高的局部抗炎活性，且局部及全身不良反应少。

卤甲松

卤甲松，CAS号为50629-82-8，化学式为C₂₂H₂₇ClF₂O₅，卤米松的用途：1.局部用肾上腺皮质激素类药物，有显著且快速的抗炎、抗过敏、抗瘙痒、抗渗出及抗增生的作用。2.适用于湿疹性皮肤病及各类轻度湿疹性和亚急性皮炎。

帕拉米松

帕拉米松，别名帕拉米松、Paramethasone，CAS号为53-33-8，化学式为C₂₂H₂₉FO₅，主要用于严重的细菌感染和严重的过敏性疾病、各种血小板减少性紫癜、粒细胞减少症、严重皮肤病、器官移植的免疫排斥反应、肿瘤的治疗及对糖皮质激素敏感的眼部炎症等。

帕拉米松乙酸酯

中文别名：帕拉米松乙酸酯，帕拉米松醋酸酯；帕拉米松21-醋酸酯。CAS号为1597-82-6。

戊酸双氟可龙

戊酸双氟可龙，英文名称Diflucortolone valerate，化学式C₂₇H₃₆F₂O₅，CAS号为59198-70-8。

异氟泼尼松

异氟泼尼松，英文名称：Isoflupredone，CAS号为338-95-4，化学式C₂₁H₂₇FO₅。

去羟米松

去羟米松，别称脱氧迈大松，去氧米松，去羟米松，分子式：C₂₂H₂₉FO₄，英文名称：Desoximetasone，CAS号382-67-2，可用做皮质激素类药物。

卤贝他索丙酸酯

中文别名：卤贝他索丙酸酯，英文名称:Halobetasol Propionate，分子式是C₂₅H₃₁ClF₂O₅，用于缓解对皮质激素敏感的皮肤炎性和瘙痒病症。

氟尼缩松

中文同义词：氟尼缩松；6-氟-11,16A,17,21-四羟基孕-1,4-二烯-3,20-二酮-16,17-安奈德，CAS号：3385-03-3，分子式是C₂₄H₃₁FO₆。

依碳氯替泼诺

中文别名：氯替泼诺，英文名称：Loteprednol Etabonate，CAS：82034-46-6，分子式：C₂₄H₃₁ClO₇，为一种新型的糖皮质激素类药物。氯替泼诺眼用混悬液0.2％适用于季节性过敏性结膜炎的治疗；0.5％适用于眼睑和球结膜、角膜和眼球前部的甾体敏感的炎症的治疗，如：过敏性结膜炎、红斑性角膜炎、浅层点状角膜炎、带状疱疹性角膜炎、虹膜炎、睫状体炎、选择性感染性结膜炎。

柱层析法

柱层析法(chromatography)又称柱色谱技术，主要原理是根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，经多次反复分配将组分分离开来。

柱层析法中较关键的因素在于固定相和流动相。

常见的固定相为硅胶固定相、多孔石墨炭固定相、有机聚合物固定相、金属氧化物色谱固定相(氧化铝、二氧化钛、二氧化锆、氧化镁)等。

硅胶由于具有机械强度高、比表面积大、孔径结构可进行较好调变、表面可根据不同分离目的采用各种有机官能团进行较好的改性等特点，是现今研究较为成熟的一种色谱固定相。和硅胶相比，由于多孔石墨炭是一种可获得完全非极性的反相固定相，具有pH值适用范围宽，对碱性化合物的分离无拖尾，对异构体化合物的分离具有独特选择性等特点；当前，有机聚合物色谱固定相主要包括聚苯乙烯-二乙烯基苯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸、聚马来酸、聚丙烯酸酯和聚乙烯醇等聚合物。其中，聚苯乙烯-二乙烯基苯由于具有良好的刚性、小而均匀的粒径、适宜的孔径大小和分布，因此应用最为广泛；金属氧化物由于具有较高的机械强度、热稳定性、独特的分离选择性、较高的柱效等特点，近年来引起了人们广泛地关注。

作为本发明的一种实施方式，本发明中所述固定相的制备原料包含：

硅胶

(甲基)含氟丙烯酸酯

(甲基)非含氟丙烯酸

硅烷偶联剂

乙烯基咪唑

交联剂

引发剂。

作为本发明的一种实施方式，按照重量份计，所述固定相的制备原料包含：

作为本发明的一种优选方式，按照重量份计，所述固定相的制备原料包含：

作为本发明的一种实施方式，所述固定相的制备原料还包含：

3,4-乙烯二氧噻吩

苯乙烯膦酸

辛烯基琥珀酸。

作为本发明的一种实施方式，按照重量份计，所述固定相的制备原料还包含：

作为本发明的一种优选方式，按照重量份计，所述固定相的制备原料还包含：

硅胶

硅胶(Silica gel；Silica)别名：硅酸凝胶是一种高活性吸附材料，属非晶态物质，其化学分子式为mSiO₂·nH₂O；除强碱、氢氟酸外不与任何物质发生反应，不溶于水和任何溶剂，无毒无味，化学性质稳定。各种型号的硅胶因其制造方法不同而形成不同的微孔结构。硅胶的化学组份和物理结构，决定了它具有许多其他同类材料难以取代得特点：吸附性能高、热稳定性好、化学性质稳定、有较高的机械强度等。硅胶根据其孔径的大小分为：大孔硅胶、粗孔硅胶、B型硅胶、细孔硅胶等。

在用于制作固定相的材料中，硅胶基质色谱柱的柱效最高。因硅胶机械强度高，其填充床长时间在很高操作压力下工作，柱效仍保持恒定；刚性、高强度的微粒还使柱的反压较低，使用较长；其物理性质如粒径分布、孔结构、比表面积易于控制，表面易改性，因此是最主要的固定相基质。

分离载体是实现分离分析过程的核心。硅胶基质载体具有强度好，多孔结构，比表面积易于人为控制，良好的物理化学稳定性、生物相容性，具有足够的具有反应活性的硅羟基等优点，因而是各种分离载体的理想基质材料，同时也是众多复合材料分离介质的重要组成部分。基于硅胶基质的分离载体己经被广泛应用于催化、环境科学和色谱等领域，对其进行功能化修饰是至关重要的。众多分离难题的解决都与硅胶基质分离载体的功能化发展有着密不可分的联系。

硅胶的化学成分是二氧化硅，物理化学性质极其稳定。用作分离载体基质的

硅胶都是人工合成的。随着合成方法的逐渐改进和对硅胶基本性质研究的深入，目前所合成的硅胶具有机械强度高、比表面积大及表面易于修饰与控制的特点，其优异的物理、化学和机械特性使其成为功能化分离载体的一种不可替代的基质。

硅胶颗粒可以分为球型和无定型两种。一般而言，球型硅胶由于其可渗透性强，比无定型硅胶更有利于传质，且可减小操作压力，因而更适合用作高相液相色谱填料。较之硅胶颗粒的外形，粒径分布显得更为重要，因为它将直接影响硅胶基质填充柱的压力。在高效液相色谱中，色谱柱所用填料的粒径分布对其柱效影响很大。考虑到柱效的问题，硅胶颗粒的孔结构是非常重要的参数。因为孔结构不仅影响到孔径的计算，而且影响到孔径分布、孔容及表面积等重要参数，正是这些参数决定着其作为正、反相乃至其它高效液相色谱用填料的性能，且对其作为基质进行化学键合反应以及分离过程与机理等均有不可忽视的影响。孔结构有几个重要表征参数:平均孔径，比表面积，比孔容和孔径分布等。多孔硅胶可以分为微孔、中孔和大孔硅胶。一般将小于2nm的称为微孔硅胶，对于大于2nm而小于50nm的称为中孔硅胶，超过50nm的称为大孔硅胶。作为一种优选的技术方案，本发明选用的硅胶为中孔硅胶。此外，孔类型及分布亦是影响硅胶基质分离载体的重要参数。

以硅胶为基质制备的液相色谱固定相具有机械强度高、化学性质和热稳定性好等优点，现己广泛应用于化学、工业和催化等领域。其在化学方面主要应用于含量的测定和化合物的分离分析。硅胶表面含有丰富的硅轻基(Si-OH)，这些硅轻基是硅胶表而的主要吸附位点和最具反应活性的官能基团，是进行表而化学键合和改性的基础。一般来说，可通过3种途径对硅胶表而进行修饰，即涂层法、整体修饰和表面硅羟基的化学修饰。

(甲基)含氟丙烯酸酯

作为本发明的一种实施方式，本发明中所述(甲基)含氟丙烯酸酯单体选自甲基丙烯酸三氟甲酯、丙烯酸三氟甲酯、甲基丙烯酸三氟乙酯、丙烯酸三氟乙酯、甲基丙烯酸六氟丁酯、丙烯酸六氟丁酯、甲基丙烯酸八氟丙酯、丙烯酸八氟丙酯、甲基丙烯酸十二氟庚酯、丙烯酸十二氟庚酯、甲基丙烯酸十三氟辛酯、丙烯酸十三氟辛酯、甲基丙烯酸十七氟辛酯和丙烯酸十七氟辛酯中的一种或多种的组合。

作为本发明的一种优选方式，所述含氟丙烯酸酯单体选自丙烯酸十三氟辛酯、丙烯酸十七氟辛酯、甲基丙烯酸十二氟庚酯和甲基丙烯酸三氟甲酯中的一种多种的组合。

(甲基)非含氟丙烯酸

作为本发明的一种实施方式，所述(甲基)非含氟丙烯酸优选为直链丙烯酸。

作为本发明的一种实施方式，所述(甲基)非含氟丙烯酸选自丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酸-4-羟丁酯、甲基丙烯酸-4-羟丁酯、丙烯酸-6-羟己酯、甲基丙烯酸-6-羟己酯、丙烯酸-8-羟辛酯、甲基丙烯酸-8-羟辛酯、丙烯酸-10-羟癸酯、甲基丙烯酸-10-羟癸酯、丙烯酸磺丙酯、甲基丙烯酸磺丙酯、丙烯酸二甲氨基乙酯和甲基丙烯酸二甲氨基乙酯中的一种或多种。

作为本发明的一种实施方式，所述固定相制备原料还包含(甲基)非含氟丙烯酸酯单体，所述非含氟丙烯酸酯单体选自丙烯酸烷基酯、甲基丙烯酸烷基酯，具体可以列举(甲基)丙烯酸甲酯、(甲基)丙烯酸乙酯、(甲基)丙烯酸丙酯、(甲基)丙烯酸异丙酯、(甲基)丙烯酸丁酯、(甲基)丙烯酸异丁酯、(甲基)丙烯酸仲丁酯、(甲基)丙烯酸叔丁酯、(甲基)丙烯酸戊酯、(甲基)丙烯酸异戊酯、(甲基)丙烯酸己酯、(甲基)丙烯酸庚酯、(甲基)丙烯酸辛酯、(甲基)丙烯酸-2-乙基己酯、(甲基)丙烯酸异辛酯、(甲基)丙烯酸壬酯、(甲基)丙烯酸异壬酯、(甲基)丙烯酸癸酯、(甲基)丙烯酸异癸酯、(甲基)丙烯酸十一烷基酯、(甲基)丙烯酸十二烷基酯、(甲基)丙烯酸十三烷基酯、(甲基)丙烯酸十四烷基酯、(甲基)丙烯酸十五烷基酯、(甲基)丙烯酸十六烷基酯、(甲基)丙烯酸十七烷基酯、(甲基)丙烯酸十八烷基酯、(甲基)丙烯酸十九烷基酯、(甲基)丙烯酸二十烷基酯等碳数1～20(C1-20)的烷基(甲基)丙烯酸酯等。

作为本发明的一种实施方式，所述(甲基)含氟丙烯酸酯的重量份为0.01-1份，所述(甲基)非含氟丙烯酸的重量份为4-6份；作为本发明的一种优选方式，所述(甲基)含氟丙烯酸酯的重量份为0.2-0.8份，所述(甲基)非含氟丙烯酸的重量份为5份。

作为本发明的一种实施方式，所述(甲基)含氟丙烯酸酯和(甲基)非含氟丙烯酸的重量比为(0.01-1)：5；更加进一步的，所述(甲基)含氟丙烯酸酯和(甲基)非含氟丙烯酸的重量比为(0.2-0.8)：5。

硅烷偶联剂

硅烷偶联剂是一类在分子中同时含有两种不同化学性质基团的有机硅化合物。

本发明中，所述硅烷偶联剂选自A-151、A-171、A-172、KH-540、KH-550、KH-551、KH-560、KH-570、KH-580、KH-602、KH-791、KH-901、KH-902中的一种或多种。

作为本发明的一种实施方式，所述硅烷偶联剂选自含有至少两个甲氧基的硅烷偶联剂。

作为本发明的一种实施方式，所述硅烷偶联剂选自含有双键的硅烷偶联剂。

作为本发明的一种实施方式，所述硅烷偶联剂选自乙烯基三甲氧基硅烷、甲基乙烯基二甲氧基硅烷、甲基苯基二甲氧基硅烷、乙烯基苯基二甲氧基硅烷、乙烯基苯基二甲氧基硅烷、丙基三甲氧基硅烷、乙烯基三(2-甲氧基乙氧基)硅烷、丁基三甲氧基硅烷、十二氟庚基丙基三甲氧基硅烷、二甲基二甲氧基硅烷、异丁基异丙基二甲氧基硅烷、3-(丙烯酰氧基)丙基二甲基甲氧基硅烷、3-甲氧基-2-(三甲基硅烷基)-吡啶、3-甲氧基-4-(三甲基硅烷基)-吡啶、甲基三甲氧基硅烷、叔丁基(乙基)二甲氧基硅烷、3-氨基丙基三甲氧基硅烷、十二烷基(甲基)二甲氧基硅烷、十六烷基三甲氧基硅烷、乙烯基甲氧基二甲基硅烷、甲基乙烯基二甲氧基硅烷、(乙烯基二甲氧基硅烷基)-苯、甲基乙烯基二甲氧基硅烷、乙烯基甲氧基二甲基硅烷、苯乙烯乙基三甲氧基硅烷、乙烯基三(2-甲氧基乙氧基)硅烷、巯丙基三甲氧基硅烷、巯基三甲基硅烷、巯基三甲氧基硅烷、二异丙烯氧基二甲基硅烷、3-(三甲基硅烷基)-4-戊烯酸、二甲氧基二乙烯基硅烷、四(丙-2-烯氧基)硅烷、四乙烯硅烷、二烯丙基二甲基硅烷中的一种。

作为本发明的一种优选方式，所述硅烷偶联剂选自甲基乙烯基二甲氧基硅烷、甲基苯基二甲氧基硅烷、乙烯基苯基二甲氧基硅烷、二甲基二甲氧基硅烷、3-甲氧基-2-(三甲基硅烷基)-吡啶、甲基三甲氧基硅烷、十二烷基(甲基)二甲氧基硅烷、十六烷基三甲氧基硅烷、甲基乙烯基二甲氧基硅烷、巯丙基三甲氧基硅烷、巯基三甲基硅烷、巯基三甲氧基硅烷中的一种。

作为本发明的一种优选方式，所述硅烷偶联剂选自二异丙烯氧基二甲基硅烷、二甲氧基二乙烯基硅烷、四(丙-2-烯氧基)硅烷、四(丙-2-烯氧基)硅烷、四乙烯硅烷、二烯丙基二甲基硅烷中的一种。

作为本发明的一种实施方式，所述硅烷偶联剂的重量份为1-10份；作为本发明的一种优选方式，所述硅烷偶联剂的重量份为2-8份。

乙烯基咪唑为1-乙烯基咪唑，CAS号为1072-63-5。

所述乙烯基咪唑的重量份为0.1-5份，更加优选为0.1-3份。

3,4-乙烯二氧噻吩的CAS号为126213-50-1。

所述3,4-乙烯二氧噻吩的重量份为0.1-5份，更加优选为0.1-3份。

所述苯乙烯膦酸的重量份为0.01-5份，更加优选为0.01-3份。

辛烯基琥珀酸的CAS号为28805-58-5。

所述辛烯基琥珀酸的重量份为3-8份，更加优选为4份。

交联剂：交联剂的作用是使得单体之间形成高度交联、刚性的聚合物。本发明中，所述交联剂选自含有乙烯基的交联剂。同时，根据含有乙烯基的数目，可将它们分为二元交联剂(如乙二醇二甲基丙烯酸酯、二乙烯基苯)、三元交联剂(三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、季戊四醇三丙烯酸酯)和四元交联剂。

作为本发明的一种实施方式，所述交联剂优选三元交联剂，例如三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、季戊四醇三丙烯酸酯。

作为本发明的一种实施方式，所述交联剂的重量份为0.01-5份，更加进一步为0.01-3份。

引发剂：在一些实施方式中，所述引发剂选自过氧化二酰、过氧化酯、过氧化酮、过氧化二烷烃、过氧化碳酸酯以及氢过氧化物中的至少一种。

所述引发剂选自2，5-二甲基-2，5-双(叔丁过氧基)己烷、2，5-二甲基-2，5-双(叔丁过氧基)己炔-3、α，α-双(叔丁过氧基)二异丙苯，1，4-双(叔丁过氧基)二异丙苯、二叔丁基过氧化物、过氧化二异丙苯、过氧化苯甲酰、过氧化月桂酰、过氧化醋酸叔丁酯、叔丁基过氧化苯甲酸酯、过氧化(2-乙基己酸)叔丁酯、2，5-二甲基-2，5-双(过氧化苯甲酰)己烷、1，1-双(过氧化叔丁基)环己烷、1，1-双(过氧化叔丁基)-3，3，5-三甲基环己烷、4，4-双(过氧化叔丁基)戊酸正丁酯、过氧化二碳酸双(4-叔丁基环己酯)、过氧化叔丁基碳酸异丙酯、二过氧化邻苯二甲酸二叔丁酯、叔丁基过氧化氢、对烷基过氧化氢、2，2-双(过氧化叔丁基)丁烷、过氧化甲乙酮、过氧环己酮、甲基异丁基酮过氧化物、过氧化丁二酸、2，2-双(4，4-二叔丁过氧环己基)丙烷、过氧化月桂酸叔丁酯、过氧化硬脂酰、1，3-双(2-叔丁过氧基异丙基)苯、过氧化对氯苯甲酰、过氧化2，4-二氯苯甲酰、叔丁基枯茗过氧化物、过氧化氢异丙苯中的一种。

作为本发明的一种实施方式，所述引发剂的重量份为0.01-5份，更加优选为0.01-3份。

本发明中，所述固定相的制备方法如下：

(1)硅胶改性：将真空干燥过的硅胶和硅烷偶联剂在无水甲苯中，氮气保护下搅拌、回流反应18-36小时，冷却，抽滤，洗涤，干燥，得到改性后的硅胶；

(2)固定相的合成：将上述制备得到的改性后的硅胶与剩余的反应原料和CAS号为1221908-84-4的式(1)物质在溶剂中混合搅拌加热，加入引发剂，氮气保护，60℃下回流36-72小时，冷却，抽滤，洗涤，干燥，得到产物1，将产物1采用差分脉冲伏安法除去式(1)物质，得到最终产物，

式(1)物质的结构式如下：

发明人在完成本发明的过程中发现，本发明可以很好的采用柱层次分离的方法分离化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素，并为后续的定性定量分析做好了前期的准备。同时，本发明所提供的化妆品无需经过前期处理，可直接进行分析，并同时达到很好的分离效果。(甲基)含氟丙烯酸酯、(甲基)非含氟丙烯酸、3,4-乙烯二氧噻吩、乙烯基咪唑、苯乙烯膦酸和辛烯基琥珀酸按一定重量比制备得到的固定相，对化妆品中的环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素具有不同的分离效果，尤其对卤贝他索丙酸酯、戊酸双氟可龙、地索奈德和帕拉米松乙酸酯的分离效果特别明显。

实施方式1：本实施方式提供一种化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分析方法，包括以下步骤：

(1)提供未经处理的化妆品样品；

(2)提供固定相，采用柱色谱的方法进行环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分离。

实施方式2：实施方式1所述的化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分析方法，所述环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素为氟轻松、地索奈德、环索奈德、卤甲松、帕拉米松、帕拉米松乙酸酯、戊酸双氟可龙、异氟泼尼松、去羟米松、卤贝他索丙酸酯、氟尼缩松和/或依碳氯替泼诺中的一种或多种。

实施方式3：实施方式1所述的化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分析方法，所述环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素为卤贝他索丙酸酯、戊酸双氟可龙、地索奈德和/或帕拉米松乙酸酯中的一种或多种。

实施方式4：实施方式1所述的化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分析方法，所述固定相的制备原料包含：

硅胶

(甲基)含氟丙烯酸酯

(甲基)非含氟丙烯酸

硅烷偶联剂

交联剂

引发剂。

实施方式5：实施方式4所述的化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分析方法，所述固定相的制备原料还包含：

3,4-乙烯二氧噻吩

乙烯基咪唑

苯乙烯膦酸

辛烯基琥珀酸。

实施方式6：实施方式4所述的化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分析方法，所述(甲基)含氟丙烯酸酯和(甲基)非含氟丙烯酸的重量比为(0.01-1)：5。

实施方式7：实施方式4所述的化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分析方法，所述(甲基)含氟丙烯酸酯和(甲基)非含氟丙烯酸的重量比为(0.2-0.8)：5。

实施方式8：实施方式4所述的化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分析方法，所述硅烷偶联剂选自含有碳碳双键的硅烷偶联剂。

实施方式9：实施方式4所述的化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分析方法，所述交联剂选自含有至少两个碳碳双键的交联剂。

实施方式10：实施方式1所述的化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分析方法，所述固定相的制备方法步骤为：

(1)硅胶改性：将真空干燥过的硅胶和硅烷偶联剂在无水甲苯中，氮气保护下搅拌、回流反应18-36小时，冷却，抽滤，洗涤，干燥，得到改性后的硅胶；

(2)固定相的合成：将上述制备得到的改性后的硅胶与剩余的反应原料和CAS号为1221908-84-4的式(1)物质在溶剂中混合搅拌加热，加入引发剂，氮气保护，60℃下回流36-72小时，冷却，抽滤，洗涤，干燥，得到产物1，将产物1采用差分脉冲伏安法除去式(1)物质，得到最终产物，

式(1)物质的结构式如下：

下面通过实施例对本发明进行具体描述。有必要在此指出的是，以下实施例只用于对本发明作进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的专业技术人员根据上述本发明的内容做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

另外，如果没有其它说明，所用原料都是市售的，且以下物料所用份数均为重量份。

实施例1：本实施例提供一种化妆品中环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分析方法，包括以下步骤：

(1)提供未经处理的化妆品样品；

(2)提供固定相，采用柱色谱的方法进行环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素的分离。

所述固定相的制备原料为：

所述硅胶的粒径5um，孔径孔容0.62cm³/g，比表面积270m²/g，兰州化物所。

所述(甲基)含氟丙烯酸酯为甲基丙烯酸三氟甲酯。

所述(甲基)非含氟丙烯酸为丙烯酸-4-羟丁酯和丙烯酸-2-乙基己酯按照重量比为1：0.5的混合物。

且所述(甲基)含氟丙烯酸酯和所述(甲基)非含氟丙烯酸的重量比为0.5：5。

所述硅烷偶联剂为二甲氧基二乙烯基硅烷。

所述交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯。

所述引发剂为过氧环己酮。

物质均购买于上海国药集团化学试剂有限公司。

所述固定相的制备方法为：

(1)硅胶改性：按照重量份比，将真空干燥过的硅胶和硅烷偶联剂在50重量份的无水甲苯中，氮气保护下搅拌、60℃下回流反应24小时，冷却，抽滤，洗涤，干燥，得到改性后的硅胶；

(2)固定相的合成：将上述制备得到的改性后的硅胶与剩余的反应原料和5重量份的CAS号为1221908-84-4的式(1)物质在80重量份的无水甲苯中混合搅拌加热，加入引发剂，氮气保护，60℃下回流48小时，冷却，抽滤，洗涤，干燥，得到产物1，将产物1采用差分脉冲伏安法除去式(1)物质，得到最终产物，

式(1)物质的结构式如下：

差分脉冲伏安法：以pH＝7.0的0.2M磷酸盐缓冲液为支持电解质。

实施例2：与实施例1的区别在于，所述固定相的制备原料无乙烯基咪唑。

实施例3：与实施例1的区别在于，所述固定相的制备原料无3,4-乙烯二氧噻吩。

实施例4：与实施例1的区别在于，所述固定相的制备原料无苯乙烯膦酸。

实施例5：与实施例1的区别在于，所述固定相的制备原料无辛烯基琥珀酸。

实施例6：与实施例1的区别在于，所述(甲基)含氟丙烯酸酯和(甲基)非含氟丙烯酸的重量比为2：5。

实施例7：与实施例1的区别在于，所述(甲基)含氟丙烯酸酯和(甲基)非含氟丙烯酸的重量比为0.1：5。

实施例8：与实施例1的区别在于，所述(甲基)含氟丙烯酸酯和(甲基)非含氟丙烯酸的重量比为0.7：5。

实施例9：与实施例1的区别在于，所述固定相的制备原料无(甲基)含氟丙烯酸酯。

实施例10：与实施例1的区别在于，所述固定相的制备原料无(甲基)非含氟丙烯酸。

实施例11：与实施例1的区别在于，所述固定相的制备过程未加入式(1)物质。

实施例12：与实施例1的区别在于，所述固定相的制备原料无乙烯基咪唑和3,4-乙烯二氧噻吩。

实施例13：与实施例1的区别在于，所述固定相的制备原料无苯乙烯膦酸和辛烯基琥珀酸。

实施例14：与实施例1的区别在于，所述固定相的制备原料无乙烯基咪唑、苯乙烯膦酸和3,4-乙烯二氧噻吩。

实施例15：与实施例1的区别在于，所述固定相的制备原料无乙烯基咪唑、苯乙烯膦酸、辛烯基琥珀酸和3,4-乙烯二氧噻吩。

实施例16：与实施例1的区别在于，所述固定相为常规硅胶，为安捷伦的7890A。

性能测试：

色谱柱的填装：制备的固定相采用匀浆法进行装柱。以四氯化碳作为匀浆液，甲醇作为顶替液，装柱压力为45MPa。称取3g固定相置于烧杯中，加入四氯化碳后超声至颗粒在四氯化碳中均匀分布，然后将混合物倒入装柱机匀浆罐中，拧紧上盖，启动泵并调节其频率，使压力迅速上升并维持在45MPa，35min后停泵，缓慢降压至零，卸下色谱柱，此时固定相已装入150×4.6mm i.d.清洗干净的不锈钢管柱中，用干净光滑的刀片削平色谱柱管开口端填料，装上筛板，拧紧柱接头。标上装柱是流动相方向、柱子名称、柱尺寸和装柱日期。在逐渐升高的流速下，将新装色谱柱在色谱仪上用0.2-1mL/min的用甲醇冲洗一天后备用。

色谱方法：Agilent 1260高效液相色谱仪，使用固定相填装的色谱柱，流动相为甲醇-水；样品为流动相溶解并过0.45μm微孔滤膜，储于冰箱中待用；流速为1mL/min；柱温为30℃；检测器为紫外检测器；进样量为20μL。

分离化妆品中的环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素：以甲醇和水作为流动相，在C18色谱柱上对化妆品中的环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素进行了分离。

流动相：甲醇/水＝35：65；流速：1mL/min；检测波长：254nm；柱温：30℃。

待测样品：选取娥佩兰Naturie薏苡仁化妆水，在其中加入环戊烷骈多氢菲类糖皮质激素：卤贝他索丙酸酯、戊酸双氟可龙、地索奈德和帕拉米松乙酸酯。

实施例1的测试结果：

分析物质色谱柱保留因子地索奈德0.492帕拉米松乙酸酯1.356戊酸双氟可龙9.472卤贝他索丙酸酯16.823

实施例2的测试结果：

分析物质色谱柱保留因子地索奈德0.526帕拉米松乙酸酯1.134戊酸双氟可龙5.982卤贝他索丙酸酯8.018

实施例3的测试结果：

分析物质色谱柱保留因子地索奈德0.510帕拉米松乙酸酯1.204戊酸双氟可龙6.718卤贝他索丙酸酯8.915

实施例4的测试结果：

实施例5的测试结果：

分析物质色谱柱保留因子地索奈德0.510帕拉米松乙酸酯1.304戊酸双氟可龙7.183卤贝他索丙酸酯10.416

实施例6的测试结果：

分析物质色谱柱保留因子地索奈德0.613帕拉米松乙酸酯0.853戊酸双氟可龙8.163卤贝他索丙酸酯8.453

实施例7的测试结果：

分析物质色谱柱保留因子地索奈德0.613帕拉米松乙酸酯1.131戊酸双氟可龙8.053卤贝他索丙酸酯9.153

实施例8的测试结果：

实施例9的测试结果：

分析物质色谱柱保留因子地索奈德0.545帕拉米松乙酸酯1.115戊酸双氟可龙2.982卤贝他索丙酸酯3.154

实施例10的测试结果：

分析物质色谱柱保留因子地索奈德0.546帕拉米松乙酸酯0.754戊酸双氟可龙5.854卤贝他索丙酸酯8.156

实施例11的测试结果：

分析物质色谱柱保留因子地索奈德0.658帕拉米松乙酸酯0.715戊酸双氟可龙0.758卤贝他索丙酸酯0.803

实施例12的测试结果：

实施例13的测试结果：

分析物质色谱柱保留因子地索奈德0.681帕拉米松乙酸酯0.750戊酸双氟可龙1.985卤贝他索丙酸酯3.754

实施例14的测试结果：

分析物质色谱柱保留因子地索奈德0.691帕拉米松乙酸酯0.996戊酸双氟可龙1.316卤贝他索丙酸酯1.758

实施例15的测试结果：

分析物质色谱柱保留因子地索奈德0.655帕拉米松乙酸酯0.913戊酸双氟可龙1.253卤贝他索丙酸酯1.598

实施例16的测试结果：

前述的实例仅是说明性的，用于解释本公开的特征的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制。而且在科技上的进步将形成由于语言表达的不准确的原因而未被目前考虑的可能的等同物或子替换，且这些变化也应在可能的情况下被解释为被所附的权利要求覆盖。