具有至少一个突变氨基酸残基的人G蛋白α亚基Gxi1

摘要

在本申请中，给出了在核苷酸和受体结合状态中稳定Gαi1亚基的残基的单个氨基酸分辨率的综合图谱。这些图谱通过测量丙氨酸突变对Gαi1和视紫红质‑Gαi1复合物的稳定性的影响而产生。使用这些数据，已经鉴定到GTP酶和螺旋结构域中负责与活化相关的结构完整性和构象变化的稳定簇。在活化簇I中，螺旋α1和α5填充链β1‑3以稳定核苷酸结合状态。在受体结合状态下，这些相互作用被α5和链β4‑6之间的相互作用替代。该簇中的关键残基是Y320和F336，前者对于受体结合状态的稳定至关重要而后者稳定核苷酸结合状态。由该活化簇的重排引起的螺旋α1的去稳定化导致了域间界面的弱化和GDP的释放。本申请详细公开了人G蛋白α亚基Gαi1的突变配体，其中至少一个氨基酸残基已被丙氨酸替换，如果所述至少一个氨基酸残基是非丙氨酸残基的话，或者至少一个氨基酸残基已被甘氨酸替换，如果所述至少一个氨基酸残基是丙氨酸的话，并且其中所述至少一个氨基酸残基包含在含有位置R32A、K54A、I55A、I56A、H57A、R176A、E245A、Y296A、T327A、N331A、V332A和D350A的氨基酸残基的第一组中，或包含在含有G42A、A59G、T177A、D200A、A226G、E297A、A300G和F334A的第二组中，或包含在含有V50A、A59G、R178A 30和K180A的第三组中。