糖芯片在检测沙门氏菌或筛选沙门氏菌拮抗剂中的应用

摘要

本发明涉及一种糖芯片在检测沙门氏菌或筛选沙门氏菌拮抗剂中的应用，糖芯片由化学改性的固相载体与甘露糖衍生物偶联得到。本发明提供了一种可用于快速检测沙门氏菌以及筛选抗粘附治疗药物的高通量方法，本发明制备的糖芯片可特异性检测不同的沙门氏菌菌株，检测方法简单、快速，检测效果好。

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种糖芯片在检测沙门氏菌或筛选沙门氏菌拮抗剂中的应用。

背景技术

沙门氏菌(salmonella)作为人畜共患病的主要食源性病原体，所引起的疾病遍布世界各处，严重危害社会健康以及经济发展。为了有效控制沙门氏菌，需要快速高效的检测方法。目前，主要有三种技术检测沙门氏菌：传统常规检测技术、免疫学检测技术和分子生物学检测技术，见表1：

表1常见沙门氏菌检测技术

从表中可见，以上多种检测手段仍各有缺陷，因此迫切需要开发一种快速、灵敏度高、特异性强、重现性好的检测沙门氏菌的方法和技术。

糖芯片(Carbohydrate microarray)技术是继基因芯片、蛋白质芯片之后的新兴的第三代大规模的生物检测技术。作为研究功能性糖的重要分析技术，其优势体现在用量少、通量高和特异性强等方面，可广泛用于研究糖-生物大分子之间的相互作用。糖芯片原理与其它生物芯片类似，主要基于糖-蛋白质特异性作用而制备，是将多种微量的、不同结构的糖类化合物以共价或非共价的方式固定在某种有机或无机材料所制备而成的基质片上，使基质表面具有生物学活性，进而对待测生物样品进行检测分析的手段；与糖探针具有特异性作用的待测样品可吸附在基质上，而无特异性作用的可被洗涤剂洗去。为获取固定在芯片上探针信息变化的过程，主要包括有标记和无标记两种检测方法：有标记法通常对探针或是待测样品进行标记，比如荧光标记、电化学标记、同位素标记等；而无标记法则是直接改变重量、介电性质、光学性质等本身性质的改变，常结合质谱、表面等离子体共振等仪器。

目前已有多种用于制作糖芯片、用于分析糖与蛋白相互作用的方法，这些方法也取得了很多瞩目的成果。但目前糖芯片的发展仍有许多困难，主要为以下两点：首先如何合成目标糖化合物以保证糖芯片的特异性；其次如何将糖化合物固定于基质上且保证其生物活性能够正常体现。其中糖类物质的设计与合成是构建糖芯片的一个关键因素。此外，目前糖芯片研究尚处于起步阶段，一般常用于蛋白质的检测，利用糖芯片检测细菌的研究也较少。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供糖芯片在检测沙门氏菌或筛选沙门氏菌拮抗剂中的应用。本发明公开了一种可用于快速检测沙门氏菌以及筛选抗粘附治疗药物的高通量方法，本发明的糖芯片可特异性检测不同的沙门氏菌菌株，检测方法简单、快速，检测效果好。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明公开了糖芯片在检测沙门氏菌或筛选沙门氏菌拮抗剂中的应用，其中糖芯片由化学改性的固相载体与甘露糖衍生物偶联得到。

进一步地，甘露糖衍生物为含有氨基的甘露糖衍生物。

优选地，甘露糖衍生物为1-氨基乙基-α-D-吡喃甘露糖萄糖苷(Man-1)、1-对氨基-α-D-吡喃甘露糖糖苷(Man-2)或p-[(N-2-乙二胺-2，3-二环氧丁基-1-烯基)氨基]-α-D-吡喃甘露糖糖苷(Man-3)。

进一步地，化学改性的固相载体表面修饰有环氧基、氨基和N-羟基琥珀酰亚胺基中的一种或几种。

进一步地，固相载体为玻片或硅片。

进一步地，沙门氏菌为可与甘露糖特异性结合的沙门氏菌株，具体为沙门氏菌ATCC9184、沙门氏菌ATCC31685、沙门氏菌S.typhimurium LB5010、沙门氏菌S.typhimurium AJB3、沙门氏菌ATCC 14028和沙门氏菌S.typhimurium SL1344中的一种或几种。

进一步地，糖芯片能够检测的沙门氏菌的下限浓度为10⁶cells/mL。

在一具体实施例中，糖芯片的制备包括以下步骤：

将甘露糖衍生物溶在有机溶剂中得到混合溶液，然后将混合溶液在化学改性的固相载体上点样，点样后的固相载体在15-35℃下，50％～60％的湿度下孵育8-12h，取出后在45-65℃下干燥固定2-4h。

优选地，糖芯片的制备还包括在孵育后进行蛋白标记的步骤。

在一具体实施例中，蛋白标记的步骤如下：使用Cy3标记蛋白Con A、盐酸羟胺、杂交缓冲液以及灭菌水的混合溶液对糖芯片进行标记，将混合溶液与糖芯片加入芯片杂交盒中，在4-10r/min转速下，20-30℃，湿度为20-35％条件下杂交3h。

进一步地，混合溶液中甘露糖衍生物的浓度为10μmol/L-20mmol/L。

进一步地，有机溶剂选自无水乙醇、冰醋酸和N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的一种或几种。

Man-1的结构式如下：

在一具体实施例中，Man-1的合成路线如下所示：

Man-2的结构式如下：

在一具体实施例中，Man-2的合成路线如下所示：

Man-3的结构式如下：

在一具体实施例中，Man-3的合成路线如下所示：

本发明糖芯片检测沙门氏菌的原理为：

由于沙门氏菌具有I型菌毛，I型菌毛上的FimH蛋白是一种糖结合蛋白，能与甘露糖特异性结合。基于该特异性结合作用，利用糖芯片(Carbohydrate microarray)技术，构建不同甘露糖糖芯片，应用于沙门氏菌的检测和抗粘附治疗剂的筛选。本研究通过对甘露糖的连接臂进行设计，制备了三种甘露糖衍生物，带有不同连接臂的甘露糖与带有不同化学基团的固相载体连接，本文采用的活化玻片上带有离去基团，可与带有不同连接臂的甘露糖形成酰胺键，所制备的糖芯片可直接检测菌液，无需提取蛋白或核酸等，且所需菌液量很少；由于甘露糖所带连接臂与不同固相载体的连接会导致甘露糖大空间影响芯片表面甘露糖，从而影响甘露糖与蛋白的结合能力，因而不同甘露糖衍生物制备的糖芯片对沙门氏菌的检测能力有区别。

借由上述方案，本发明至少具有以下优点：

本发明公开了糖芯片在细菌检测及筛选抗粘附治疗剂方面的应用，本发明制备的糖芯片可特异性检测不同的沙门氏菌菌株，检测方法简单、快速，检测效果好，同时可应用于抗粘附治疗剂的筛选；本发明制备的糖芯片在低糖浓度下可检测到沙门氏菌，节约糖原料的消耗；本发明可利用自动点样仪构建糖芯片，可在同一个固相载体上点成千上万个样，实现了真正的高通量。因此，通过糖芯片技术可建立更多数量的平行实验从而检测大量样品，和传统的细菌检测方法相比，节省了大量时间和原料。

附图说明

图1图示了本发明不同糖芯片与沙门氏菌结合能力的对比结果；

图2图示了本发明糖芯片与沙门氏菌结合特异性；

图3图示了采用不同浓度的糖所制备的糖芯片与沙门氏菌结合能力的结果；

图4图示了不同浓度的细菌溶液与糖芯片杂交的荧光测试结果；

图5图示了糖芯片对不同抗黏附治疗剂筛选时各拮抗剂的浓度值结果。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1 1-氨基乙基-α-D-吡喃甘露糖萄糖苷(Man-1)化合物的制备

Man-1化合物的合成路线如下：

其具体步骤如下：

在冰浴的条件下，在500mL的茄形瓶中加入135mg DMPA(二羟甲基丙酸)和72mL Py(吡啶)，搅拌均匀后缓慢加入40mL醋酸酐后，加入5g甘露糖，搅拌反应8h，TLC检测原料反应完全。在反应液中加入200mL的二氯甲烷后，依次使用去离子水(3×300mL)、饱和碳酸钾溶液(3×300mL)清洗有机相至无气泡为止，再用饱和氯化钠溶液(1×300mL)清洗，最后使用无水硫酸钠干燥。收集有机相，减压蒸馏以除去有机相，得到全乙酰甘露糖(图中化合物1)，放于-20℃冰箱中保存。

将1.5g全乙酰甘露糖溶于10mL二氯甲烷中，加入0.84g溴乙醇以及活化后的分子筛(高温活化，抽真空，分别三次)，冰浴搅拌0.5h，在氮气的保护下，加入TMSOTf(三氟甲磺酸三甲基硅酯)0.84mL。搅拌均匀后，撤去冰浴，然后搅拌反应24h，TLC检测反应完全。反应液用同体积饱和碳酸钾终止反应，再用饱和碳酸氢钠(3×30mL)和饱和食盐水(3×30mL)萃取，合并有机相，并用无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液旋干后，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1-4:1)后得到白色粉末(图中化合物2，0.91g，60.3％)。

取0.5g化合物2溶于二氯甲烷后加入0.12g叠氮化钠，搅拌反应12h，TLC检测反应完全。反应液中加入同等体积的乙酸乙酯，用去离子水(3×30mL)萃取后，收集有机相，并用无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液旋干后，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1-4:1)得到白色粉末(图中化合物3，0.42g，83.0％)。

取0.4g化合物3溶于甲醇溶液，加入0.04g的甲醇钠-甲醇混合物，搅拌2h后，TLC检测反应完全，加入阳离子交换树脂调节pH至5-6，室温搅拌10min。抽滤，旋蒸除溶剂后，所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝50:1-10:1)后得到白色粉末(图中化合物4，0.2g，99.0％)。

取0.2g化合物4溶于2mL的甲醇溶液，加入10mg的10％的Pd/C，在4atm的氢气压力下，室温搅拌反应。TLC检测反应原料反应完全后，用硅藻土过滤，旋蒸出去溶剂后，将产品放于-20℃冰箱中保存，产物即为Man-1(0.15g，83.0％)。

实施例2 1-对氨基-α-D-吡喃甘露糖糖苷(Man-2)化合物的制备

Man-2化合物的合成路线如下：

具体步骤如下：

取2.0g全乙酰甘露糖(化合物1)溶于10mL二氯甲烷中，加入1.8g无水对硝基苯酚以及活化好的分子筛，冰浴搅拌0.5h后，在氮气的保护下，加入TMSOTf 1.12mL。搅拌均匀后，撤去冰浴，搅拌反应，TLC检测反应完全后，用等体积的饱和碳酸钾溶液终止反应后再用饱和碳酸氢钠(3×30mL)和饱和食盐水(3×30mL)萃取，合并有机相后用无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液旋干后，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1-4:1)后得到淡黄色粉末(图中化合物5，1.12g，59.3％)。

取1g化合物5溶于10mL甲醇，加入100mg的10％的Pd/C，在4atm的氢气压力下，室温搅拌反应。TLC检测反应原料反应完全后，用硅藻土过滤，旋蒸浓缩后，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1-1:1)后得到淡黄色粉末(图中化合物6，0.88g，88.9％)。

取0.8g化合物6溶于8mL甲醇溶液，加入0.08g的甲醇钠-甲醇混合物，搅拌2h后，TLC检测反应完全，加入阳离子交换树脂调节pH至5-6，室温搅拌10min。抽滤，旋蒸除溶剂后得到淡黄色粉末，最后将产品放于-20℃冰箱中保存，产物即为Man-2(0.48g，99.0％)。

实施例3 p-[(N-2-乙二胺-2，3-二环氧丁基-1-烯基)氨基]-α-D-吡喃甘露糖糖苷(Man-3)化合物的制备

Man-3化合物的合成路线如下：

具体步骤如下：

取1g化合物5，溶解于10mL二氯甲烷后加入芳香酸二酯0.63mL，搅拌反应，TLC检测反应完全，旋蒸除溶剂，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1-1:2)后得到黄色粉末(图中化合物7，0.73g，67.5％)。

取0.5g化合物7，溶解于5mL甲醇溶液后加入0.05g甲醇钠-甲醇混合物，搅拌2h后，TLC检测反应完全，加入阳离子交换树脂调节pH至5-6，室温搅拌10min。抽滤，旋蒸除溶剂，所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝50:1-10:1)后得到黄色粉末(图中化合物8，0.28g，95.3％)。

取0.20g化合物8，溶解于2mL甲醇溶液后，加入50mg乙二胺溶液搅拌，TLC检测反应结束。旋蒸除溶剂，所得产品放于-20℃冰箱中保存，产物即为Man-3(0.22g，98.0％)。

实施例4环氧玻片的制备

环氧玻片的反应路线如下：

通过GPTS(丙基三甲氧基硅烷)途径，选择偶联剂硅烷偶联剂(2,3-环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷)作为手臂分子，其烷氧基可与载体玻片表面羟基进行反应，从而形成硅醇键，硅烷分子有序偶联在玻片表面，得到环氧玻片。

具体操作如下：

将玻片(20片)分别在超纯水中摇洗4次，在无水乙醇摇洗2次，每次均为5-10min，结束后在常温下离心干燥10min(600r/min)；将离心干燥后的玻片置于5％HCl溶液中，以40℃，60r/min的条件下缓慢均匀摇动4小时；再将玻片置于食人鱼溶液Piranha solution中(其中食人鱼溶液的配比：30％H₂O₂:98％H2SO4＝1:1，冰浴搅拌下，将30％H₂O₂缓滴入到98％浓H₂SO₄中，体积比为1:1)，85℃水浴2h；浸泡后的玻片在超纯水中摇洗4次，无水乙醇中摇洗2次，每次5-10min，清洗后在常温下离心甩干(600r/min)；使用12％NaOH溶液对离心干燥后的玻片进行处理，温度为40℃，转速为60rpm/min的条件下慢速均匀摇动过夜；过夜后取出玻片，将玻片浸入超纯水中摇洗4次，无水乙醇中摇洗2次，每次5-10min，清洗后在常温下离心甩干(600r/min)；干燥后的玻片在5％GPTS(配置方法：12.5mL>

实施例5 NHS玻片的制备

NHS玻片的制备路线如下：

通过APTS(氨丙基三乙氧基硅烷)途径，首先制备氨基化玻片，其中偶联剂为氨基偶联剂，该偶联剂具有带氨基的硅烷基团，可与载体玻片表面的羟基进行反应，形成硅醇键，使得氨基分子有序偶联在玻片表面。路线如下：

再进一步用TGDD(四乙二醇二琥珀酰亚氨基二琥珀酸)修饰上述氨基化玻片，得到NHS玻片，路线如下：

NHS玻片的制备方法具体步骤如下：

1)取10片上述氨基化玻片基于提篮中，放图含TGDD的DMF溶液(TGDD:10mM，DIPA:100mM，此溶液经0.22μm有机膜过滤)中，在40℃条件下以摇速60-70rmp反应过夜。

2)反应结束后，超声15min，用无水乙醇清洗3次，每次10min，可回收第三次摇洗的无水乙醇用于下次修饰片基的第一次清洗。摇速110-120rmp；清洗后的片基于室温1000rmp离心甩干，得到NHS玻片，将其放入干燥器中室温保存备用。

实施例6 NHS糖芯片的制备与验证

以Man-1、Man-2与NHS玻片为例，糖芯片的具体制备步骤如下：

(1)将20M溶液Man-1(称取1.8mg Man-1，溶于25％的DMF水溶液中，DMF:灭菌水＝100μL:300μL)和Man-2(称取2.2mg Man-2，溶于25％的DMF水溶液中，DMF:灭菌水＝100μL:300μL)溶液，以及空白对照组25％的DMF水溶液，用点样仪将3组溶液分别在NHS玻片上点样，重复点样多次，每一个样点容纳1nL溶液；点样后的玻片尽快放置在恒温湿度箱中(50％～60％的湿度)孵育过夜。

(2)糖芯片孵育过夜后，在温度为60℃的真空干燥器中真空固定2h。

(3)将固定后的糖芯片取出降温后，放置于装有100mL 1×PBST的层析皿中振荡清洗2次(5min/次)；在1×PBST溶液一次清洗后，改变芯片上下位置再重新清洗第二次；两次1×PBST清洗结束后，再用1×PBS清洗2次，每次5min。振荡使用的振荡器为HY-2调速多用振荡器，振荡时芯片放置方向应与振荡方向平行，以保证振荡清洗时芯片受力均匀。确保芯片清洗干净后，使用微型玻片甩干机甩干，转速控制在75r/min以内，保证两面甩干。

(4)将干燥后的芯片置于约600μL的封闭缓冲液(含1％BSA、0.1％吐温20的1×PBS缓冲液)中，并使芯片上方内部空间溶液可以均匀转动且无多个小气泡形成，以保证其流动性；最后搁置在温度为25℃，湿度为25％的条件下封闭1h，通过该封闭过程将玻片上没有结合糖基团的部位封闭。

(5)取出封闭结束的芯片，重复(3)的清洗流程。

(6)取20μL Cy3标记蛋白Con A、30μL 4M的盐酸羟胺、300μL的2×杂交缓冲液以及250μL的灭菌水混合，最后配成至600μL混合溶液，加入芯片杂交盒中，与所制作的糖芯片进行杂交；杂交箱内以4r/min速度缓慢旋转(温度：25℃，湿度：25％，杂交时间：3h)；杂交后的糖芯片经1×PBST和1×PBS清洗后甩干。

(7)利用芯片扫描仪扫描糖芯片，激光强度为100％预扫描后，选定点样区域，精确扫描。扫描结果显示，清洗之后与清洗之前的荧光值比较大于0.5，糖芯片制成。

实施例7利用糖芯片检测沙门氏菌

选用环氧化玻片和NHS玻片分别与上述3种甘露糖衍生物反应以制备糖芯片，然后与沙门氏菌ATCC31685菌株杂交，用芯片扫描仪检测荧光信号强度。

结果如图1所示，图1(a)为使用NHS玻片制备的糖芯片，其中1-4列中的甘露糖衍生物为Man-1，5-8列为Man-2，9-12列为Man-3，每孔直径约为180μm；三种糖芯片可检测到不同强度的荧光信号，其中使用Man-1制备的糖芯片的荧光值为3100，使用Man-3的为1830，使用Man-2的为1050。图1(b)为使用环氧玻片制备的糖芯片，其中1-4列中的甘露糖衍生物为Man-1，5-8列为Man-2，9-12列为Man-3，每孔直径约为180μm，三种甘露糖衍生物的浓度均为10mmol/L；三种糖芯片可检测到不同强度的荧光信号，其中使用Man-1制备的糖芯片的荧光值为850，使用Man-3的为450，使用Man-2的荧光信号检测接近背景值，难以捕捉。对比图1(a)(b)可发现，环氧玻片与三种甘露糖衍生物的结合效果均不如NHS玻片；不同甘露糖化合物所制成的糖芯片与沙门氏菌的结合能力不同，NHS玻片与Man-1所制成的糖芯片结合沙门氏菌能力最强。

选取两种对甘露糖具有不同亲和力的沙门氏菌ATCC9184和ATCC31685，将细菌稀释于芯片杂交溶液中，利用NHS玻片与Man-1所制成的糖芯片进行检测。结果如图2所示，图2(a)检测的细菌为ATCC31685，图2(b)检测的细菌为ATCC9184，在细菌浓度为10⁹cells·mL^-1时，与甘露糖亲和力较低的ATCC9184菌株经糖芯片检测后的荧光信号强度(平均荧光值约为230，接近于背景值)远低于与甘露糖具有高亲和力的ATCC31685菌株(平均荧光信号约为3000)。

将糖芯片制备时的条件做以下改变：在10μmol/L-20mmol/L内改变Man-1的浓度，利用NHS玻片与Man-1制备糖芯片，将封闭后的芯片在室温下杂交孵化1h，然后将杂交后的玻片取出，先后用1×PBST和1×PBS缓冲液清洗2次(5min/次)，再用超纯水清洗1次(5min/次)，以洗去未杂交上的细胞；然后测定不同浓度的糖制备的糖芯片对检测的荧光信号的影响，所检测的沙门氏菌的菌浓度为10⁹cells/mL，结果如图3所示。

图3中，1-12列的糖浓度依次降低，浓度值分别为20mmol/L、10mmol/L、5mmol/L、2.5mmol/L、1.25mmol/L、625μmol/L、313μmol/L、156μmol/L、78μmol/L、39μmol/L、20μmol/L、10μmol/L。从图3中可看出，所检测到的荧光信号随着糖浓度的升高而升高，在10mmol/L时，荧光强度几乎达到最大值，这表明在糖芯片中固定的甘露糖已经饱和，即使增加糖浓度，荧光强度也不再增加；第7列(图3中白色框所标示处)代表糖浓度为313μmol/L时，仍可检测到高于背景值的荧光信号。此外，图4中，以10mmol/L的Man-1糖溶液制作糖芯片后与不同浓度的细菌溶液杂交，从左至右，细菌溶液浓度分别为10⁸cells/mL、10⁷cells/mL、10⁶cells/mL、10⁵cells/mL和10⁴cells/mL，可以看到，图中所检测的荧光信号随着细菌浓度降低而降低。当ATCC31685菌株浓度大于或等于10⁶cells/mL时，可检测到荧光信号；继续降低菌株浓度后，荧光信号难以检测，所以可知本实验糖芯片检测沙门氏菌的最低细菌检测浓度为10⁶cells/mL。

结果表明，糖芯片技术可应用于沙门氏菌检测，并且在低糖浓度下(313μmol/L)可检测到沙门氏菌，可节约糖原料的消耗。另外，现有糖芯片的构建为手动构建，由于孔径大，同一玻片上只能点200多个的样，因此这类糖芯片大多只能称为“多阵列”(Multiarray)，与“微阵列”(Microarray)还有较大差距。而本发明可利用自动点样仪构建糖芯片，每一个构建的点样孔径为180-200μm，可大大增加点阵密度，即可在同一个玻片上可以点成千上万个样，实现了真正的高通量。因此，通过糖芯片技术可建立更多数量的平行实验从而检测大量样品，和传统的细菌检测方法相比，节省了大量时间和原料。

实施例8利用糖芯片筛选凝集素FimH拮抗剂

有关文献表明，凝集素FimH与肠道细菌黏附上皮细胞相关，可引起尿路感染等疾病；多种甘露糖衍生物和甘露糖(在微摩尔条件下)便可以阻断细菌黏附(FimH蛋白介导)，因而可作为相关疾病的治疗剂。

选取三种已经报导的拮抗剂(可有效抑制凝集素FimH作用)，加入含有ATCC31685细胞的芯片杂交溶液(含有1mmol/L CaCl₂，1mmol/L>2及盐酸羟胺)中，并与本发明制备的糖芯片孵化。所选拮抗剂分别为D-甘露糖、p-硝基苯基-α-D-吡喃甘露糖苷(p-NPMan)和一种共价键连接D-甘露糖的双亲性聚合物分子PGMA-Mannose(PGMA，聚甲基丙烯酸缩水甘油酯)。芯片杂交溶液是用于检测细菌和糖芯片结合用的溶液，如果拮抗剂在孵育时可以阻断细菌与芯片结合，则此拮抗剂具有较好的受体结合作用。

使用本发明的糖芯片所检测到的结果(图5)表明：三种拮抗剂的浓度不一，较低的浓度代表相应的抑制细菌效果更优，PGMA-Mannose(50μmol/L)抑制细菌的效果明显优于比p-NPMan(1000μmol/L)，而p-NPMan(1000μmol/L)又优于甘露糖(50000μmol/L)。使用本发明的糖芯片所检测的拮抗剂的效果与报道一致：p-NPMan相比于甘露糖是一种更好的拮抗剂，它可与生物大分子形成稳定交互，且带芳基、杂芳基或杂环基的甘露糖化合物已被证明可作为预防或治炎性肠病的拮抗剂用于抑制大肠杆菌引起的尿路感染；而PGMA-Mannose与沙门氏菌的结合远远强于单糖与沙门氏菌的结合。

通过上述实验可证明，本发明的糖芯片可用于检测拮抗剂对凝集素的抑制作用，并对其进行定量分析，从而加速了细菌黏附拮抗剂的研究进展，为新药开发提供了一种有效工具。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。