含细胞自噬抑制剂的制剂及其在治疗气道粘液高分泌中的用途

摘要

本发明提供了含细胞自噬抑制剂的制剂及其用途。具体地，本发明提供细胞自噬抑制剂在用于制备治疗气道粘液高分泌制剂中的用途，以及含有细胞自噬抑制剂作为有效成分的制剂。本发明的实验表明，细胞自噬抑制剂可以显著地降低动物模型中粘液蛋白MUC5AC的表达，进而显著缓解气道粘液高分泌。

说明书

技术领域

本发明设计药物领域，具体的涉及细胞自噬抑制剂的治疗气道粘液高分泌的制剂及其用途。

背景技术

细胞自噬(autophagy)是机体一种重要的防御和保护机制。细胞可以通过自噬和溶酶体，消除、降解和消化受损、变性、衰老和失去功能的细胞器和变性蛋白质与核酸等生物大分子，为细胞的重建、再生和修复提供必须原料，实现细胞的再循环和再利用。从本义上讲，细胞自噬是机体保持内稳态和适应微环境改变的一种重要的自我调节和保护机制。然而，在某些特定的条件下，细胞器和各种生物大分子的过量消耗最终会导致细胞自噬死亡。因此，细胞自噬最终促进细胞存活还是死亡，将根据不同的细胞，不同的微环境，不同的诱导条件而异。

最新的研究表明细胞自噬过程的分子机制至少与30种以上的“Atg”基因和蛋白相关。其中，Beclin 1(BECN1,Atg6)能调控最初的双层膜结构的分离和形成，而在该双层膜结构捕获细胞器和生物大分子形成细胞自噬体的过程中，LC3B在Atg5-Atg12-Atg16等蛋白酶的作用下，被脂质化(lipidation)并被加成到细胞自噬体双层膜上。因而这些分子在自噬发生过程中起关键调控作用。

气道粘液是一种脂质、糖复合物以及蛋白质的稀释溶液，粘液蛋白MUC5AC是气道粘液的主要成分之一。气道粘液高分泌是哮喘等慢性气道疾病的特征性病理生理改变，主要表现为杯状细胞化生和粘液产生增多。吸烟、过敏原以及其他外界刺激性因子均可引起肺内炎症细胞募集和炎症介质释放，激活多种信号通路和转录因子，促进MUC5AC等粘液蛋白的高表达。

气道粘液高分泌是哮喘以及囊性肺纤维化等慢性气道疾病急性发作并加重的重要原因，但其调控的分子机制尚未明确。目前临床上对气道粘液高分泌尚缺乏有效的治疗手段。

综上所述，本领域迫切需要开发有效治疗或缓解气道粘液高分泌的制剂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够有效治疗或缓解气道粘液高分泌的制剂。

在本发明的第一方面中，提供了一种细胞自噬抑制剂的用途，用于制备一制剂，所述制剂用于治疗气道粘液高分泌或用于抑制粘液蛋白的表达。

在另一优选例中，所述的细胞自噬抑制剂选自下组：

(i)巴弗洛霉素A1(Bafilomycin A1)、氯喹(Chloroquine)、或其组合；

(ii)特异性抑制自噬相关蛋白的表达和/或活性的拮抗剂；

(iii)上述(i)和(ii)的任意组合。

在另一优选例中，所述的拮抗剂包括iRNA、siRNA、shRNA、或其组合。

在另一优选例中，所述的拮抗剂包括抗体。

在另一优选例中，所述制剂为药物组合物、或食品组合物。

在另一优选例中，所述组合物包含(a)细胞自噬抑制剂；和(b)药学上可接受的载体、或食品学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述的制剂含有(1)巴弗洛霉素A1(Bafilomycin A1)和/或氯喹(Chloroquine)以及(2)含有用于阻断细胞自噬的干扰RNA。

在另一优选例中，所述干扰RNA选自下组：Beclin-1siRNA、LC3B siRNA、ATG5siRNA、ATG12siRNA、或其组合。

在另一优选例中，所述的粘液蛋白包括MUC5AC。

在另一优选例中，所述的气道粘液高分泌由选自下组的因素所诱导的：烟雾、大气污染颗粒PM、和/或过敏原(如屋尘螨)。

在另一优选例中，所述的气道为人或非人哺乳动物的气道。

在本发明的第二方面，提供了一种用于治疗气道粘液高分泌的制剂，所述制剂包含(a)细胞自噬抑制剂，所述的细胞自噬抑制剂为巴弗洛霉素A1和氯喹；和(b)药学上可接受的载体、或食品学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述组合物中含有0.001-99wt％，较佳地0.1-90wt％，更佳地1-80wt％的细胞自噬抑制剂，按组合物的总重量计。

在另一优选例中，所述的制剂包括药物组合物、或食物组合物。

在另一优选例中，所述的制剂还含有用于阻断细胞自噬的干扰RNA。

在另一优选例中，所述干扰RNA选自下组：Beclin-1siRNA、LC3B siRNA、ATG5siRNA、ATG12siRNA、或其组合。

在本发明的第三方面，提供了一种非治疗性的、体外抑制粘液蛋白表达的方法，包括步骤：在细胞自噬抑制剂存在下，培养气道上皮细胞，从而抑制所述气道上皮细胞表达粘液蛋白。

在另一优选例中，所述的粘液蛋白包括MUC5AC。

在另一优选例中，所述的气道上皮细胞为人气道上皮细胞。

在另一优选例中，所述细胞自噬抑制剂巴弗洛霉素A1(Bafilomycin A1)和氯喹(Chloroquine)的浓度分别为10nM、10μM。

在另一优选例中，所述的细胞自噬抑制剂选自下组：巴弗洛霉素A1(Bafilomycin A1)、氯喹(Chloroquine)、或其组合

在另一优选例中，所述的细胞自噬抑制剂为干扰RNA，其选自下组：Beclin-1siRNA、LC3B siRNA、ATG5siRNA、ATG12siRNA、或其组合。

在本发明的第四方面，提供了一种非治疗性的缓解气道粘液高分泌的方法，包括步骤：(a)给需要的对象施用细胞自噬抑制剂。

在另一优选例中，所述的对象包括非人哺乳动物。

在另一优选例中，所述的对象包括啮齿动物，如小鼠、大鼠。

在另一优选例中，所述对象是经烟雾暴露诱导、大气污染颗粒PM诱导、或屋尘螨提取物诱导的动物模型。

在另一优选例中，所述的方法还包括步骤：(b)检测所述对象中MUC5AC的mRNA表达、和/或免疫荧光检测MUC5AC。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1显示了阻断HBE细胞中的细胞自噬可以显著降低香烟烟雾提取物诱导的MUC5AC表达。其中图1A显示了MUC5AC的mRNA表达。图1B显示了免疫荧光检测MUC5AC。

图2显示了应用细胞自噬抑制剂可以显著降低香烟烟雾提取物诱导的MUC5AC表达。其中图2A显示了MUC5AC的mRNA表达。图2B显示了免疫荧光检测MUC5AC。

图3显示了阻断HBE细胞中的细胞自噬可以显著降低大气污染颗粒PM诱导的MUC5AC表达。其中图3A显示了MUC5AC的mRNA表达。图3B显示了免疫荧光检测MUC5AC。

图4显示了细胞自噬相关基因缺陷能有效缓解香烟烟雾暴露诱导的气道粘液高分泌。其中图4A和4C分别显示了LC3B小鼠和Beclin-1小鼠烟雾暴露后气道粘液分泌的代表性图片。图4B和4D分别显示了各组小鼠PAS染色的半定量分析结果。

图5显示了细胞自噬相关基因缺陷可以显著降低PM干预诱导的气道粘液高分泌和MUC5AC表达。其中图5A显示了各组小鼠PM干预后气道粘液分泌的代表性图片。图5B显示了各组小鼠PAS染色的半定量分析结果。图5C显示了小鼠肺组织MUC5AC的mRNA表达水平。

图6显示了细胞自噬相关基因缺陷可以显著降低HDM干预诱导的气道粘液高分泌。图6A显示了各组小鼠HDM干预后气道粘液分泌的代表性图片。图6B显示了各组小鼠PAS染色的半定量分析结果。

各图中，“CTL”或“control”表示对照。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究，首次意外地发现细胞自噬抑制剂能够非常有效地治疗气道粘液高分泌。实验表明，通过抑制细胞自噬，可以显著地降低动物模型中粘液蛋白MUC5AC的表达，进而显著缓解气道粘液高分泌。在此基础上完成了本发明。

术语定义

如本文所用，“气道粘液高分泌”即Airway mucus hyper production，指在病理过程中，气道产生大量的粘液(就是通常所说的痰)，导致呼吸气流受限。气道粘液高分泌的病症特点是痰的产生、在气道内腔有大量粘液以及杯状细胞增生等，其病理后遗症包括气道阻塞、气流受限以及气体交换减值等。

如本文所用，“粘液蛋白MUC5AC”指由人MUC5AC所编码的粘(液)蛋白Mucin 5AC(Muc5AC)。该蛋白是气道粘液各种成分中最主要的和最具有代表性的粘液蛋白。

如本文所用，“Beclin-1”指细胞自噬发生过程中一个关键的调控蛋白，它直接调控细胞自噬体双层膜结构的形成。Beclin1基因也称BECN1基因。

如本文所用，“LC3B”指细胞自噬发生过程中一个关键的调控蛋白，它是细胞自噬体的关键组成蛋白之一。

如本文所用，“ATG5”指细胞自噬发生过程中一个关键的调控蛋白，它与ATG12形成复合体，联合调控LC3B参与细胞自噬体的形成。

如本文所用，“ATG12”指细胞自噬发生过程中一个关键的调控蛋白，它与ATG5形成复合体，联合调控LC3B参与细胞自噬体的形成。

细胞自噬抑制剂

如本文所用，术语“细胞自噬抑制剂”指能够抑制细胞自噬的物质，所述抑制剂可以是小分子化合物，也可以是大分子化合物(如抗体)。代表性的细胞自噬抑制剂包括Bafilomycin A1、Chloroquine、干扰RNA、抗体等。

Bafilomycin A1包括巴弗洛霉素A1或其药学上可接受的盐。巴弗洛霉素A1的分子式为C₃₅H₅₈O₉(分子量：622.83)，结构式如下：

Chloroquine指氯喹或其药学上可接受的盐。氯喹的分子式为C₁₈H₂₆C_lN₃(分子量：319.87)，其结构式如下

RNA干扰(RNAi)

在本发明中，一类有效的细胞自噬抑制剂是干扰RNA。

如本文所用，术语“RNA干扰(RNA interference，RNAi)”是指：一些小的双链RNA可以高效、特异地阻断体内特定基因的表达，促使mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，其也称为RNA干预或者RNA干涉。RNA干扰是高度特异的在mRNA水平上的基因沉默机制。

如本文所用，术语“小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)”是指一种短片段双链RNA分子，能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA，这个过程就是RNA干扰途径(RNA interference pathway)。

在本发明中，干扰RNA包括siRNA、shRNA以及相应的构建物。

一种典型的构建物为双链，并且其正链或负链含有式I所示的结构：

Seq_正向-X-Seq_反向>

式中，

Seq_正向为细胞自噬相关基因或片段的核苷酸序列；

Seq_反向为与Seq_正向基本上互补的核苷酸序列；

X为位于Seq_正向和Seq_反向之间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seq_正向和Seq_反向不互补。

在本发明的一个优选例中，Seq_正向、Seq_反向的长度为19-30bp，较佳地为20-25bp。

在本发明中，一种典型的shRNA如式II所示，

式中，

Seq’_正向为Seq_正向序列对应的RNA序列或序列片段；

Seq’_反向为与Seq’_正向基本上互补的序列；

X’为无；或为位于Seq’_正向和Seq’_反向之间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seq’_正向和Seq’_反向不互补，

||表示在Seq_正向和Seq_反向之间形成的氢键。

在另一优选例中，所述的间隔序列X的长度为3-30bp，较佳地为4-20bp。

其中，Seq_正向序列所针对的靶基因包括(但并不限于)：Beclin-1、LC3B、ATG5、ATG12、或其组合。

组合物和施用方法

本发明还提供了一种含有细胞自噬抑制剂作为活性成分的用于治疗或缓解所述气道粘液高分泌的组合物。所述的组合物包括(但并不限于)：药物组合物、食品组合物、膳食补充剂、饮料组合物等。

在本发明中，细胞自噬抑制剂可直接用于疾病治疗，例如，用于气道粘液高分泌方面的治疗。在使用本发明细胞自噬抑制剂时，还可同时使用其他治疗剂，如有助于排痰的药物等。

本发明还提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明细胞自噬抑制剂以及药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、粉剂、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。本发明的药物组合也可以被制成粉剂用于雾化吸入。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约1微克/千克体重-约5毫克/千克体重。此外，本发明细胞自噬抑制剂还可与其他治疗剂一起使用。

对于本发明的药物组合物，可通过常规的方式施用于所需的对象(如人和非人哺乳动物)。代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、注射、雾化吸入等。

使用药物组合物时，是将安全有效量的细胞自噬抑制剂施用于哺乳动物，其中该安全有效量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约8毫克/千克体重，较佳地该剂量是约10微克/千克体重-约1毫克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

本发明的的主要优点包括：

(a)细胞自噬抑制剂缓解气道粘液高分泌效果显著。

(b)抑制细胞自噬对大气污染等原因诱发的气道粘液高分泌防治均效果。

(c)细胞自噬可以作为多种原因诱发的气道疾病粘液高分泌防治的全新靶点。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。

通用方法和材料

1.细胞培养

实施例中用到的人体气道上皮细胞系(HBE)均购于中国科学院上海细胞库，用含有10％胎牛血清，50U/ml盘尼西林和50U/ml链霉素的RPMI1640培养基培养。复苏后3-12代用于细胞实验。

2.香烟烟雾提取物(CSE)的制备

实施例中用到的CSE均采用标准的研究性香烟(2R1F，产自The TobaccoResearch Institute,University of Kentucky,Lexington,KY)制备，剪下香烟的过滤嘴，每根香烟烟雾燃烧6分钟，烟雾被缓慢泵入10毫升RPMI1640培养基，所得溶液调整PH值至7.4，再用0.22μm过滤器除菌,即100％CSE，储存于﹣80℃冰箱。

3.PM颗粒制备

实施例中用到的PM颗粒均由美国路易斯安娜州立大学Cormier教授提供，经高温燃烧人工合成，粒径在0.2μm左右，包含稳定的自由基。

4.siRNA转染

实施例中用到的siRNA为市售产品，均购自Santa cruz公司(ATG5-siRNA,SC-41445；ATG12-siRNA,SC-72578；LC3B-siRNA,SC-29390；Beclin-1-siRNA,sc-29797)。这些siRNA分别特异性地抑制ATG5、ATG12、LC3B、Beclin-1。

转染试剂为GenMuteTM转染试剂。转染方法参考转染试剂的说明书。转染48小时后，检测基因的沉默效率。

5.RNA提取和Q-PCR

所有实施例中均使用常规Trizol试剂提取细胞RNA。取1g提取的总RNA，采用TaKaRa逆转录试剂盒合成cDNA，应用SYBR Green Ex TagTM系统进行Q-PCR研究，最终采用2-ΔΔCt法确定靶基因的mRNA的相对表达量，ΔΔCt的计算公式如下：ΔΔCt＝ΔCt,q–ΔCt,c b；ΔCt,q表示待测样本q靶基因的Ct值与同一样本管家基因(β-actin)的Ct值得差值，ΔCt,b表示对照组靶基因的Ct值与管家基因Ct值的差值。

具体实施例中人源的MUC5AC引物为：

sense:5′-CAGCACAACCCCTGTTTCAAA-3′(SEQ ID NO.:1)，

antisense:5′-GCGCACAGAGGATGACAGT-3′(SEQ ID NO.:2)；

具体实施例中小鼠的MUC5AC引物为：

sense:5′-CTGTGACATTATCCCATAAGCCC-3′(SEQ ID NO.:3)，

antisense:5′-AAGGGGTATAGCTGGCCTGA-3′(SEQ ID NO.:4)。

6.免疫荧光检测MUC5AC

细胞种植于载玻片上，经干预后，用PBS冲洗，用4％福尔马林固定，用0.1％Triton-X100破膜处理，后进行抗体染色。Zeiss LSM激光共聚焦显微镜检测MUC5AC免疫荧光表达。

7.小鼠香烟烟雾暴露模型

采用美国Teague Enterprises的小动物烟雾暴露装置，将研究小鼠给予烟雾暴露(100支烟/天，5天/周)，对照组小鼠暴露于空气中，持续12周。

8.小鼠PM干预模型

每只小鼠以每天100μg PM(溶解于50μL PBS)剂量连续气道滴注4天，对照小鼠只滴注相同剂量PBS。末次干预24小时后取小鼠肺组织进行分析。

9.小鼠屋尘螨提取物(HDM)干预模型

以HDM致敏并激发建立哮喘模型。致敏：第0天,第3天和第5天每只哮喘模型组小鼠分别气道滴注10μg HDM(溶解于50μL PBS)。激发：第10天，第12天和第14天，每只哮喘模型组小鼠每只哮喘模型组小鼠同样气道滴注10μgHDM(溶解于50μL PBS)。对照小鼠只滴注相同剂量PBS。末次干预24小时后取小鼠肺组织进行分析。

10.肺组织处理

通过气管插管向左肺灌注4％福尔马林内固定，后放入装有4％福尔马林的5ml试管中外固定，标本常温送病理作PAS染色。

11.统计分析

所有实施例中的实验数据均采用GraphPad Prism5.0软件进行统计，所得结果均以均数±标准误(x±SEM)表示，进行独立样本的t检验或者one-wayANOVA检验。P<0.05表示有显著性差异。

实施例1

阻断细胞自噬对降低CSE诱导的HBE细胞中MUC5AC表达的作用

在实施例中，在HBE细胞中，利用细胞自噬相关基因如ATG5、ATG12、或LC3B的siRNA阻断细胞自噬，香烟烟雾提取物CSE诱导，检测MUC5AC的表达情况。

方法如下：HBE细胞首先给与不同siRNA干预24小时，随后给与1％CSE后续干预24小时，收集细胞，分别提取RNA或者做免疫荧光检测MUC5AC的mRNA或者蛋白表达。

结果见图1所示，阻断HBE细胞中的细胞自噬可以显著降低香烟烟雾提取物诱导的MUC5AC表达。其中图1A显示了MUC5AC的mRNA表达，图1B显示了免疫荧光检测MUC5AC。(***，p<0.001)

实施例2

施用细胞自噬抑制剂对降低CSE诱导的HBE细胞中MUC5AC表达的作用

在实施例中，在HBE细胞中，应用细胞自噬抑制剂Bafilomycin A1(Baf A1)和Chloroquine(CQ)，香烟烟雾提取物CSE诱导，检测MUC5AC的表达情况。

方法如下：HBE细胞给与Baf A1(10nM)或者CQ(10μM)与1％CSE同时干预24小时，收集细胞，分别提取RNA或者做免疫荧光检测MUC5AC的mRNA或者蛋白表达。

结果见图2所示，应用细胞自噬抑制剂可以显著降低香烟烟雾提取物诱导的MUC5AC表达。其中图2A显示了MUC5AC的mRNA表达，图2B显示了免疫荧光检测MUC5AC。(**，p<0.01；***，p<0.001)

实施例3

阻断细胞自噬对降低PM诱导的HBE细胞中MUC5AC表达的作用

在实施例中，在HBE细胞中，利用细胞自噬相关基因Beclin-1、或ATG5的siRNA阻断细胞自噬，大气污染颗粒PM诱导，检测MUC5AC的表达情况。

方法如下：HBE细胞首先给与不同siRNA干预24小时，随后给与PM(100μg/ml)后续干预24小时，收集细胞，分别提取RNA或者做免疫荧光检测MUC5AC的mRNA或者蛋白表达。

结果见图3所示，阻断HBE细胞中的细胞自噬可以显著降低大气污染颗粒PM诱导的MUC5AC表达。其中图3A显示了MUC5AC的mRNA表达，图3B显示了免疫荧光检测MUC5AC。(*，p<0.05)

实施例4

细胞自噬相关基因缺陷对降低烟雾诱导的小鼠气道粘液高分泌的作用

在实施例中，香烟烟雾暴露模型诱导细胞自噬相关的Beclin-1、或LC3B基因缺陷小鼠，检测小鼠肺组织中的气道粘液分泌情况，上皮细胞中PAS染色阳性提示上皮细胞杯状化生和粘液高分泌。

方法如下：各组小鼠利用Teague E10小动物烟雾暴露装置给与香烟烟雾暴露(每周5天，每天2小时)连续3个月后，处死小鼠，肺组织PAS染色检测气道上皮细胞杯状化生和粘液高分泌。

结果见图4所示，细胞自噬相关基因缺陷可以有效缓解香烟烟雾暴露诱导的气道粘液高分泌。其中图4A和4C分别显示了LC3B小鼠和Beclin-1小鼠烟雾暴露后气道粘液分泌的代表性图片，图4B和4D分别显示了各组小鼠PAS染色的半定量分析结果。(***，p<0.001；N.D.，not detectable，没有检测到)

实施例5

细胞自噬相关基因缺陷对降低PM干预诱导的小鼠气道粘液高分泌的作用

在实施例中，PM干预诱导细胞自噬相关的Beclin-1基因缺陷小鼠，检测小鼠肺组织中的气道粘液分泌情况。

方法如下：每只小鼠以每天100μg PM(溶解于50μL PBS)剂量连续气道滴注4天，对照小鼠只滴注相同剂量PBS。末次干预24小时后取小鼠肺组织，检测其MUC5AC的mRNA表达水平，肺组织PAS染色检测气道上皮细胞杯状化生和粘液高分泌。

结果见图5所示，细胞自噬相关基因缺陷可以显著降低PM干预诱导的气道粘液高分泌和MUC5AC表达。其中图5A显示了各组小鼠PM干预后气道粘液分泌的代表性图片，图5B显示了各组小鼠PAS染色的半定量分析结果，图5C显示了小鼠肺组织MUC5AC的mRNA表达水平。(**，p<0.01；N.D.，not detectable，没有检测到)。

实施例6

细胞自噬相关基因缺陷对降低HDM干预诱导的小鼠气道粘液高分泌的作用

在实施例中，HDM干预诱导细胞自噬相关的LC3B基因缺陷小鼠，检测小鼠肺组织中的气道粘液分泌情况。

方法如下：小鼠经第0、3、5天3次致敏和第10、12、14天3次HDM激发，末次激发24小时后取小鼠肺组织，PAS染色检测气道上皮细胞杯状化生和粘液高分泌。

结果见图6所示，细胞自噬相关基因缺陷可以显著降低HDM干预诱导的气道粘液高分泌。其中图6A显示了各组小鼠HDM干预后气道粘液分泌的代表性图片，图6B显示了各组小鼠PAS染色的半定量分析结果。(***，p<0.001；N.D.，not detectable，没有检测到)

讨论

气道粘液高分泌是很多慢性气道疾病如哮喘的主要临床特征之一，这些疾病的急性加重包括死亡常常伴有大量的呼吸道粘液栓。目前临床上对于慢性气道疾病患者粘液高分泌尚缺乏有效的防治办法，因此，如何抑制气道粘液高分泌是慢性气道疾病防治所面临的挑战和机遇。

本发明人的上述实验提示，细胞自噬是慢性气道疾病粘液高分泌发生发展过程中的一个关键因素。在体外培养的气道上皮HBE细胞中，本发明人利用不同自噬相关分子如Beclin-1，ATG5，ATG12等的siRNA阻断细胞自噬，能有效降低CSE或者PM诱导的MUC5AC的表达。此外，在HBE细胞中，细胞自噬抑制剂Baf A1和CQ也能显著抑制CSE诱导的MUC5AC的表达。同时，利用细胞自噬相关Beclin-1和LC3B基因缺陷的小鼠，本发明在烟雾暴露诱导模型、在PM诱导的气道损伤模型、以及在HDM诱导的哮喘模型中都发现，自噬缺陷小鼠中气道粘液高分泌的水平均显著降低。这些不同疾病模型的研究结果均提示同一结论，即抑制细胞自噬能有效缓解气道粘液高分泌，细胞自噬有望成为临床上防治气道粘液高分泌的全新靶点。

本发明的实验结果提示，无论是对于香烟烟雾诱导的模型、还是过敏原诱导的哮喘、抑或是大气颗粒污染诱导的气道粘液高分泌，细胞自噬均能作为一个有效的防治粘液高分泌的关键靶点。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。