一种金霉素发酵培养基及利用该培养基的金霉素发酵生产方法

摘要

本发明提供一种金霉素发酵培养基及利用该培养基的金霉素发酵生产方法，每25mL发酵培养基水溶液中含有花生饼粉0.425‑0.825g、黄豆饼粉0.275‑0.475g、玉米淀粉2‑4g、淀粉酶0.003‑0.007g、氯化钠0.0425‑0.0825g、硫酸铵0.10‑0.20g、碳酸钙0.1‑0.3g、酵母粉0.05‑0.1g、硫酸镁0.00425‑0.00825g、棕榈油1.0‑1.5mL。本发明用价格较低的棕榈油完全替代豆油作为消泡剂，不但消泡效果好，而且使金霉素发酵生产的产量提高13%，棕榈油比豆油价格便宜750元/吨，因此本发明所述的发酵培养基既提高了金霉素产量，又降低了原料成本，实用性强。

说明书

技术领域

本发明属于金霉素生产技术领域，具体涉及一种金霉素发酵培养基及利用该培养基的金霉素发酵生产方法。

背景技术

金霉素是四环素类抗生素的一种，属于广谱抗生素，在畜禽养殖中经常加入到预混料中，提高畜禽抵抗力，金霉素生产一般是由金色链霉菌作为出发菌株，经过发酵制得。

金霉素发酵生产中会产生大量的泡沫，泡沫的产生会造成大量逃液，发酵液从排气管路或轴封逃出而增加染菌机会，泡沫严重时通气搅拌也无法进行，导致菌体呼吸受到阻碍，菌体代谢异常或菌体自溶。为了解决泡沫问题，目前金霉素发酵中采用的消泡剂只有豆油一种，但豆油成本高，从而使得金霉素的生产成本高，所以在稳定生产的前提下，为了降低生产成本，寻找替代豆油且安全可靠的消泡剂成了当务之急。

发明内容

本发明的目的在于提供一种金霉素发酵培养基及利用该培养基的金霉素发酵生产方法，该培养基中的豆油被棕榈油替代，棕榈油不仅消泡效果好，成本低，而且能提高金霉素发酵效能。

本发明采用如下技术方案：

一种金霉素发酵培养基，每25mL发酵培养基水溶液中含有花生饼粉0.425-0.825g、黄豆饼粉0.275-0.475g、玉米淀粉2-4g、淀粉酶0.003-0.007g、氯化钠0.0425-0.0825g、硫酸铵0.10-0.20g、碳酸钙0.1-0.3g、酵母粉0.05-0.1g、硫酸镁0.00425-0.00825g、棕榈油1.0-1.5mL。

一种金霉素发酵生产方法，包括以下步骤：

(1)砂土孢子制备：将金色链霉菌孢子接入砂土管中，干燥密封，0-10℃保存备用；

(2)母瓶斜面孢子培养：从砂土管中挑取适量砂土接种于母瓶斜面培养基上，于温度32±1℃、湿度40-65％的恒温室中培养3-5天；

(3)子瓶斜面孢子培养：从母瓶上挑取孢子丰满、无白点的单菌落，加水配成孢子液并接种于子瓶斜面培养基上，于温度32±1℃、湿度40-65％的恒温室中培养3-5天；

(4)种子液制备：将子瓶上培养的孢子接种于种子培养基上，230-295转/分、温度28±2℃、湿度40-65％，摇瓶培养16h制得种子液；

(5)金霉素发酵液制备：将步骤(4)所得种子液接种于发酵培养基上，于温度28±2℃的条件下发酵163±3h，即得金霉素发酵液；

所述发酵培养基组成如下：每25mL发酵培养基水溶液中含有花生饼粉0.425-0.825g、黄豆饼粉0.275-0.475g、玉米淀粉2-4g、淀粉酶0.003-0.007g、氯化钠0.0425-0.0825g、硫酸铵0.10-0.20g、碳酸钙0.1-0.3g、酵母粉0.05-0.1g、硫酸镁0.00425-0.00825g、棕榈油1.0-1.5mL。

本发明的有益效果如下：

本发明用价格较低的棕榈油完全替代豆油作为消泡剂，不但消泡效果好，而且使金霉素发酵生产的产量提高13％，棕榈油比豆油价格便宜750元/吨，因此本发明所述的发酵培养基既提高了金霉素产量，又降低了原料成本，实用性强。

具体实施方式

为了使本发明的技术目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面结合具体实施例对本发明的技术方案作出进一步的说明。

1实施例

本发明的所述金霉素发酵生产方法，是由金色链霉菌作为出发菌株，具体工艺步骤包括砂土孢子制备、母瓶斜面孢子培养、子瓶斜面孢子培养、种子液制备、金霉素发酵液制备。

(1)砂土孢子制备：将河沙用质量分数为10％的盐酸浸泡并水洗，然后烘干过60目筛；将土用水浸泡后，烘干过80目筛；然后将所得砂和土按重量比2：1混合均匀，分装于12×100mm的小试管中，装量高度约1cm，纱布棉塞封口，间歇灭菌三次，灭菌条件为121-126℃、1小时，烘干做无菌试验，检查无菌后备用；

将分离筛选得到的金色链霉菌孢子在无菌条件下接入上述制备的砂土管中，贴上标签，记上砂土名称及埋藏日期，放入设有干燥剂的容器中，盖紧密封，置于0-10℃冰箱中保存备用；

(2)母瓶斜面孢子培养：在无菌条件下从砂土管中挑取适量砂土接种于母瓶斜面培养基上，要求菌落分布稍稀疏，标识后，放于温度32±1℃、湿度40-65％的恒温室中培养3-5天，孢子成熟后放于0-10℃冰箱保存备用；

(3)子瓶斜面孢子培养：从母瓶上挑取孢子丰满、无白点的单菌落4-10只，加入约5mL无菌水，搅匀配成孢子液，然后用玻璃铲挑孢子液接种于子瓶斜面培养基上，要求菌落分布较密，同时做露碟和肉汤无试检查，标识后，放于温度32±1℃、湿度40-65％的恒温室培养3-5天，孢子成熟后放于0--10℃冰箱保存备用；

步骤(2)和(3)斜面培养基的组成为：

(4)种子液制备：在洁净室中，用75％酒精(体积分数，下同)擦试所需接种的种子摇瓶，然后用已灭菌的接种铲以挖块法或刮取孢子法将子瓶中的孢子接种于种子培养基上，一根接种铲接一瓶种子，将接种后的种子摇瓶扎好瓶口，放到摇瓶机上培养，将摇瓶机旋转速度调至230-295转/分、温度28±2℃、湿度40-65％，摇瓶培养16h后，进行下一步的发酵；

(5)金霉素发酵液制备：将步骤(4)培养完成的种子摇瓶移入洁净室，用75％酒精擦试种子摇瓶外壁，然后用已灭菌的吸管或移液器吸取种子液接种于发酵培养基上，接种量为12％，扎好瓶口，上摇瓶机培养，将摇瓶机旋转速度调至230-295转/分、温度28±2℃、湿度40-65％，经163±3hr培养后，即得金霉素发酵液，测定其化学效价，对金霉素发酵液采用常规工艺做进一步的加工处理即得金霉素产品。

上述步骤(4)和步骤(5)中的摇瓶培养基组成为：

所述棕榈油为精炼8℃棕榈油，棕榈油是饱和油脂，富含C16和C18的脂肪酸。

2消泡试验

为了验证替代的可行性，本发明进行了消泡试验，消泡试验中，精炼8℃棕榈油按1：1的体积比完全替代豆油，消泡试验过程如下：

1、实验材料

(1)黄豆；(2)电炉、秒表、玻璃仪器等.

2、实验方法

取定量的黄豆磨制成一定浓度的黄豆浆，倒入烧杯中，移至电炉石棉网上，用电炉加热，控制升温速度，适当搅拌，加热至沸腾，待泡沫升至A毫升处，按下秒表并同时加入占干豆质量0.1％的消泡剂(豆油或棕榈油)，用玻璃棒搅拌，液面降至B毫升处时，即停止搅拌并记录下时间t1，继续观察待泡沫再回升至A毫升处时则按停秒表，记录下总时间(T)，总时间(T)减去(tl)为消泡时间(t)，共做三组上述消泡试验，统计结果如表1所示。

表1棕榈油和豆油的消泡效果对比

由表1可知，棕榈油完全替代豆油消泡可行，且效果良好。

3发酵效果对比

为了探究棕榈油对金霉素发酵液产量的影响，本发明在同样的发酵生产条件下，分别以棕榈油培养基和豆油培养基进行发酵生产，分别制备得到金霉素发酵液，并以化学方法分别测定所得发酵液中金霉素的效价，结果对比如表2所示：

表2棕榈油培养基和豆油培养基的发酵效果对比

由表2可知，以棕榈油完全替代豆油后的发酵培养基，使得金霉素发酵液的产量平均提高13.0％；且棕榈油比豆油成本低廉，因此本发明所述的培养基不仅降低了原料成本，消泡效果良好，而且提高了金霉素的发酵生产水平。

最后所应说明的是：上述实施例仅用于说明而非限制本发明的技术方案，任何对本发明进行的等同替换及不脱离本发明精神和范围的修改或局部替换，其均应涵盖在本发明权利要求保护的范围之内。