氧杂环庚烷‑2‑基‑吡唑‑4‑基‑杂环基‑甲酰胺化合物和使用方法

摘要

本申请公开了式I的氧杂环庚烷‑2‑基‑吡唑‑4‑基‑杂环基‑甲酰胺化合物，包括其立体异构体、几何异构体、互变异构体和药用盐，其中X为噻唑基、吡嗪基、吡啶基或嘧啶基，其可用于抑制Pim激酶及用于治疗由Pim激酶介导的病症例如癌症。本申请公开了使用式I化合物在体外、在原位和在体内诊断、预防或治疗哺乳动物细胞中的此类病症或相关病理状况的方法。

说明书

技术领域

本申请大体上涉及用于治疗由Pim激酶(Pim-1、Pim-2和/或Pim-3)介导的病症且因此可用作癌症疗法的氧杂环庚烷-2-基-吡唑-4-基-杂环基-甲酰胺化合物抑制剂。本申请还涉及包含这些化合物的组合物且更具体为药物组合物和单独或组合使用所述化合物治疗多种形式的癌症和过度增殖性病症的方法及使用所述化合物在体外、在原位和在体内诊断或治疗哺乳动物细胞或相关病理状况的方法。

背景技术

Pim激酶是三种高度相关的由基因Pim-1、Pim-2和Pim-3编码的丝氨酸和苏氨酸蛋白激酶的家族。基因名称源自短语莫洛尼前病毒插入(Proviral>Insertion,Moloney)，其为鼠莫洛尼病毒的常见整合位点，其中所述插入在转基因的由Myc驱动的淋巴瘤模型中导致Pim激酶的过表达和T细胞淋巴瘤的重新形成或肿瘤发生的显著加速(Cuypers等人(1984)Cell,vol.37(1)pp.141-50；Selten等人(1985)EMBO>

小鼠遗传学暗示拮抗Pim激酶可具有可接受的安全性；Pim-1-/-、Pim-2-/-、Pim-3-/-敲除小鼠是有活力的，虽然比野生型同窝动物稍小(Mikkers等人(2004)Mol CellBiol vol.24(13)pp.6104-154)。三种基因产生六种包含蛋白激酶域的蛋白质同工型且显然没有可识别的调节域。所有六种同工型都为不需要为了活性而进行翻译后修饰的组成性活性蛋白激酶，因此Pim激酶主要在转录水平调节(Qian等人(2005)J Biol Chem,vol.280(7)pp.6130-7)。Pim激酶的表达可被细胞因子和生长因子受体所高度诱导且Pim是Stat蛋白(包括Stat3和Stat5)的直接转录靶标。例如，Pim-1需要由gp130介导的Stat3增殖信号(Aksoy等人(2007)Stem Cells,vol.25(12)pp.2996-3004；Hirano等人(2000)Oncogenevol.19(21)pp.2548-56；Shirogane等人(1999)Immunity vol.11(6)pp.709-19)。

Pim激酶在细胞增殖和存活途径中的功能平行于PI3k/Akt/mTOR信号传导轴(Hammerman等人(2005)Blood vol.105(11)pp.4477-83)。事实上，PI3k轴的几种磷酸化靶标(包括Bad和eIF4E-BP1)是细胞生长和凋亡调节器且也是Pim激酶的磷酸化靶标(Fox等人(2003)Genes Dev vol.17(15)pp.1841-54；Macdonald等人(2006)Cell Biol vol.7 pp.1；Aho等人(2004)FEBS Letters vol.571(1-3)pp.43-9；Tamburini等人(2009)Bloodvol.114(8)pp.1618-27)。Pim激酶可影响细胞存活，这是因为Bad的磷酸化增加了Bcl-2的活性并因此促进了细胞存活。类似地，eIF4E-BP1由mTOR或Pim激酶引起的磷酸化导致对eIF4E的抑制，这促进了mRNA翻译和细胞生长。另外，已经认识到Pim-1通过使CDC25A、p21和Cdc25C磷酸化来促进细胞周期进程(Mochizuki等人(1999)J Biol Chemvol.274(26)pp.18659-66；Bachmann等人(2006)Int J Biochem Cell Biol vol.38(3)pp.430-43；Wang等人(2002)Biochim Biophys Acta vol.1593(1)pp.45-55)。

Pim激酶在具有由c-Myc驱动和由Akt驱动的肿瘤的转基因小鼠模型中显示出协同作用(Verbeek等人(1991)Mol Cell Biol vol.11(2)pp.1176-9；Allen等人Oncogene(1997)vol.15(10)pp.1133-41；Hammerman等人(2005)Blood vol.105(11)pp.4477-83)。Pim激酶参与在急性髓细胞样白血病(AML)中鉴别的癌基因(包括Flt3-ITD、BCR-abl和Tel-Jak2)的转化活性。这些癌基因在BaF3细胞中的表达引起Pim-1和Pim-2表达的上调，这引起IL-3非依赖性生长且后续的Pim抑制引起细胞凋亡和细胞生长停滞(Adam等人(2006)Cancer Research 66(7)3828-35)。Pim过表达和失调还已经作为多种造血癌症中的常见事件而被注意到，所述造血癌症包括白血病和淋巴瘤(Amson等人(1989)Proc Natl Acad SciUSA 86(22)8857-61)；Cohen等人(2004)Leuk Lymphoma 45(5)951-5；Hüttmann等人(2006)Leukemia 20(10)1774-82)及多发性骨髓瘤(Claudio等人(2002)Blood 100(6)2175-86)。多发性骨髓瘤(MM)是一种克隆B淋巴细胞恶性肿瘤，其特征在于终末分化的产生抗体的细胞在骨髓中的积累。

已经显示Pim-1是过表达的并与前列腺癌的进展是相关的(Cibull等人(2006)JClin Pathol 59(3)285-8；Dhanasekaran等人(2001)Nature 412(6849)822-6)。Pim-1的表达在小鼠模型中随着疾病的进展而增加(Kim等人(2002)Proc Natl Acad Sci USA 99(5)2884-9)。已经报道Pim-1在具有由c-Myc驱动的基因标签的人前列腺肿瘤样本亚类中是最高过表达的mRNA(Ellwood-Yen等人(2003)Cancer Cell 4(3)223-38)。还已经显示Pim-3在胰腺癌和肝细胞癌中是过表达的并具有功能性作用(Li等人(2006)Cancer Research 66(13)6741-7；Fujii等人(2005)Int J Cancer,114(2)209-18)。

除肿瘤学治疗和诊断应用外，Pim激酶可在正常的免疫系统功能中发挥作用且对Pim的抑制可治疗多种不同的免疫学病状，包括肿瘤发生(Nawijn等人(2011)NatureRev.11:23-34)、炎症、自身免疫性疾病、变态反应和用于器官移植的免疫抑制(Aho等人(2005)Immunology 116(1):82-8)。

发明内容

本申请涉及用于治疗由Pim激酶(Pim-1、Pim-2和/或Pim-3)介导的病症的氧杂环庚烷-2-基-吡唑-4-基-杂环基-甲酰胺化合物，其为式I化合物。

式I化合物具有以下结构：

其中X为噻唑基、吡嗪基、吡啶基或嘧啶基；

及其立体异构体、几何异构体、互变异构体和药用盐。包括R¹、R²和X在内的各个取代基如本申请所定义。

本申请一个方面为药物组合物，其包含式I化合物和药用载体、助流剂、稀释剂或赋形剂。所述药物组合物还可包含化学治疗剂。

本申请包括治疗疾病或病症的方法，所述方法包括向患有疾病或病症的患者给药治疗有效量的式I化合物，所述疾病或病症选自癌症、免疫病症、心血管疾病、病毒感染、炎症、代谢/内分泌功能障碍和神经学病症及由Pim激酶介导的疾病或病症。所述方法还包括给药额外的治疗剂，所述额外的治疗剂选自化学治疗剂、抗炎剂、免疫调节剂、亲神经性因子、用于治疗心血管疾病的药物、用于治疗肝病的药物、抗病毒剂、用于治疗血液病症的药物、用于治疗糖尿病的药物及用于治疗免疫缺陷病症的药物。

本申请包括式I化合物在制备用于治疗癌症、免疫病症、心血管疾病、病毒感染、炎症、代谢/内分泌功能障碍和神经学病症的药物中的用途，其中所述药物介导Pim激酶。

本申请包括用于治疗由Pim激酶介导的病状的试剂盒，其包含：a)包含式I化合物的第一药物组合物；及b)使用说明书。

本申请包括用作药物和用于治疗疾病或病症的式I化合物，所述疾病或病症选自癌症、免疫病症、心血管疾病、病毒感染、炎症、代谢/内分泌功能障碍和神经学病症及由Pim激酶介导的疾病或病症。

本申请包括制备式I化合物的方法。

附图简述

图1显示了由硝基-1H-吡唑1示例性合成4-氨基吡唑化合物5。

图2显示了由噻唑-4-甲酸酯化合物7示例性合成2-取代的噻唑-4-甲酸化合物6。

图3显示了由1,5-二取代的-1H-吡唑-4-胺化合物5与2-取代的噻唑-4-甲酸化合物6的偶联示例性合成N-(1,5-二取代的-1H-吡唑-4-基)-2-取代的噻唑-4-甲酰胺化合物10。

图4显示了由5-氯-4-硝基-1H-吡唑化合物3示例性合成6-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-3-胺化合物19。

图5显示了由1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物2示例性合成5-(5-叠氮基-6-氟氧杂环庚烷-2-基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物26。

图6显示了由5-(1-(烯丙基氧基)戊-4-烯基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物22示例性合成5-(5-叠氮基-4-氟氧杂环庚烷-2-基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物31和5-(4-叠氮基-5-氟氧杂环庚烷-2-基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物32。

图7显示了由1-取代的-4-硝基-5-(2,3,4,7-四氢氧杂-2-基)-1H-吡唑化合物23示例性合成5-(5-叠氮基-6-氟氧杂环庚烷-2-基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物35。

图8显示了由5-氯-4-硝基-1H-吡唑化合物3示例性合成2-甲基-N-(2-取代的-7-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-基)丙-2-亚磺酰胺化合物40。

图9显示了由1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-甲醛化合物36示例性合成(2R,3R,4S,5R)-5-羟基-3,5-二甲基-2-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)四氢-2H-吡喃-4-基氨基甲酸叔丁酯化合物47。

图10显示了由1-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)戊-4-烯-1-醇化合物21示例性合成3-甲氧基-2-甲基-7-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-基氨基甲酸叔丁酯化合物52。

具体实施方式

现详细描述本申请一些实施方案，其实例在所附结构和分子式中示例说明。虽然结合所列举的实施方案来描述本申请，但是应理解本申请不限于那些实施方案。相反地，本申请意在涵盖可包括在由权利要求书限定的本申请范围内的所有代替形式、修改形式和等同形式。本领域技术人员会认识到与本申请所述那些方法和材料类似或等同的多种方法和材料可用于实施本申请。本申请绝不限于所描述的方法和材料。在一份或多份所引入的文献、专利及类似材料与本申请(包括但不限于所定义的术语、术语用法、所描述的技术等)不同或矛盾的情况下以本申请为准。除非另有定义，本申请使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属领域技术人员通常所理解相同的含义。虽然与本申请所述那些方法和材料类似或等同的方法和材料可用于实施或测试本申请，但是以下描述了适当的方法和材料。通过引用的方式将本申请提及的所有出版物、专利申请、专利及其它参考文献全部引入到本申请中。除非另有说明，本申请使用的命名法基于IUPAC系统命名法。

定义

当说明取代基数目时，术语“一个或多个”是指一个取代基至最大可能数目的取代情况，即用取代基替换一个氢至替换全部氢。术语“取代基”表示对母体分子上的氢原子进行替换的原子或原子团。术语“取代”表示指定基团带有一个或多个取代基。当任何基团可带有多个取代基且提供各种可能取代基时，所述取代基是独立选择的且无需相同。术语“未取代”是指指定基团不带有取代基。术语“任选取代”是指指定基团是未取代的或被一个或多个独立选自可能取代基的取代基取代。当说明取代基数目时，术语“一个或多个”是指一个取代基至最大可能数目的取代情况，即用取代基替换一个氢至替换全部氢。

术语“烷基”用在本申请中是指具有1-12个碳原子(C₁-C₁₂)的饱和的直链或支链的一价的烃基，其中所述烷基可任选独立被下述一个或多个取代基取代。在另一个实施方案中，烷基具有1-8个碳原子(C₁-C₈)或1-6个碳原子(C₁-C₆)。烷基的实例包括但不限于甲基(Me、-CH₃)、乙基(Et、-CH₂CH₃)、1-丙基(n-Pr、正丙基、-CH₂CH₂CH₃)、2-丙基(i-Pr、异丙基、-CH(CH₃)₂)、1-丁基(n-Bu、正丁基、-CH₂CH₂CH₂CH₃)、2-甲基-1-丙基(i-Bu、异丁基、-CH₂CH(CH₃)₂)、2-丁基(s-Bu、仲丁基、-CH(CH₃)CH₂CH₃)、2-甲基-2-丙基(t-Bu、叔丁基、-C(CH₃)₃)、1-戊基(正戊基、-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃)、2-戊基(-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₃)、3-戊基(-CH(CH₂CH₃)₂)、2-甲基-2-丁基(-C(CH₃)₂CH₂CH₃)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH₃)CH(CH₃)₂)、3-甲基-1-丁基(-CH₂CH₂CH(CH₃)₂)、2-甲基-1-丁基(-CH₂CH(CH₃)CH₂CH₃)、1-己基(-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃)、2-己基(-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₂CH₃)、3-己基(-CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃))、2-甲基-2-戊基(-C(CH₃)₂CH₂CH₂CH₃)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH₃)CH(CH₃)CH₂CH₃)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH₃)CH₂CH(CH₃)₂)、3-甲基-3-戊基(-C(CH₃)(CH₂CH₃)₂)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)₂)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH₃)₂CH(CH₃)₂)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH₃)C(CH₃)₃、1-庚基、1-辛基等。

术语“亚烷基”用在本申请中是指具有1-12个碳原子(C₁-C₁₂)的饱和的直链或支链的二价的烃基，其中所述亚烷基可任选独立被下述一个或多个取代基取代。在另一个实施方案中，亚烷基具有1-8个碳原子(C₁-C₈)或1-6个碳原子(C₁-C₆)。亚烷基的实例包括但不限于亚甲基(-CH₂-)、亚乙基(-CH₂CH₂-)、亚丙基(-CH₂CH₂CH₂-)等。

术语“烯基”是指具有2-8个碳原子(C₂-C₈)的具有至少一个不饱和位点即碳-碳sp²双键的直链或支链的一价的烃基，其中所述烯基可任选独立被本申请所述的一个或多个取代基取代并包括具有“顺式”和“反式”取向或“E”和“Z”取向的基团。实例包括但不限于乙烯基(-CH＝CH₂)、烯丙基(-CH₂CH＝CH₂)等。

术语“亚烯基”是指具有2-8个碳原子(C₂-C₈)的具有至少一个不饱和位点即碳-碳sp²双键的直链或支链的二价的烃基，其中所述亚烯基可任选独立被本申请所述的一个或多个取代基取代并包括具有“顺式”和“反式”取向或“E”和“Z”取向的基团。实例包括但不限于亚乙烯基(-CH＝CH-)，亚烯丙基(-CH₂CH＝CH-)等。

术语“炔基”是指具有2-8个碳原子(C₂-C₈)的具有至少一个不饱和位点即碳-碳sp叁键的直链或支链的一价的烃基，其中所述炔基可任选独立被本申请所述的一个或多个取代基取代。实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)、丙炔基(炔丙基、-CH₂C≡CH)等。

术语“亚炔基”是指具有2-8个碳原子(C₂-C₈)的具有至少一个不饱和位点即碳-碳sp叁键的直链或支链的二价的烃基，其中所述亚炔基可任选独立被本申请所述的一个或多个取代基取代。实例包括但不限于亚乙炔基(-C≡C-)、亚丙炔基(亚炔丙基、-CH₂C≡C-)等。

术语“碳环”、“碳环基”、“碳环”和“环烷基”是指具有3-12个碳原子(C₃-C₁₂)呈单环形式或具有7-12个碳原子呈二环形式的一价的非芳族的饱和或部分不饱和的环。具有7-12个原子的二环碳环可排列成例如二环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统，而具有9或10个环原子的二环碳环可排列成二环[5,6]或[6,6]系统或可排列成桥环系统例如二环[2.2.1]庚烷、二环[2.2.2]辛烷和二环[3.2.2]壬烷。螺环部分也包括在该定义的范围内。单环碳环的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基等。碳环基任选独立被本申请所述的一个或多个取代基取代。

“芳基”是指通过由母体芳族环系的单个碳原子除去一个氢原子而得到的具有6-20个碳原子(C₆-C₂₀)的一价的芳族的烃基。一些芳基在示例性结构中表示为“Ar”。芳基包括包含与饱和环、部分不饱和环或芳族碳环稠合的芳族环的二环基团。典型的芳基包括但不限于由苯(苯基)、取代的苯、萘、蒽、联苯、茚、茚满、1,2-二氢萘、1,2,3,4-四氢萘等得到的基团。芳基任选独立被本申请所述的一个或多个取代基取代。

“亚芳基”是指通过由母体芳族环系的两个碳原子除去两个氢原子而得到的具有6-20个碳原子(C₆-C₂₀)的二价的芳族的烃基。一些亚芳基在示例性结构中表示为“Ar”。亚芳基包括包含与饱和环、部分不饱和环或芳族碳环稠合的芳族环的二环基团。典型的亚芳基包括但不限于由苯(亚苯基)、取代的苯、萘、蒽、联苯、茚、茚满、1,2-二氢萘、1,2,3,4-四氢萘等得到的基团。亚芳基任选被本申请所述的一个或多个取代基取代。

术语“杂环”、“杂环基”和“杂环”在本申请中可互换使用且是指具有3至约20个环原子的其中至少一个环原子是选自氮、氧、磷和硫的杂原子且其余环原子是C的饱和或部分不饱和(即在环中具有一个或多个双键和/或叁键)的碳环基团，其中一个或多个环原子任选独立被下述一个或多个取代基取代。杂环可为具有3-7个环成员(2-6个碳原子和1-4个选自N、O、P和S的杂原子)的单环或具有7-10个环成员(4-9个碳原子和1-6个选自N、O、P和S的杂原子)的二环例如二环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统。杂环参见Paquette,Leo A.；“Principles of Modern Heterocyclic Chemistry”(W.A.Benjamin,New York,1968),特别是第1、3、4、6、7和9章；“The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series ofMonographs”(John Wiley&Sons,New York,1950年至今),特别是第13、14、16、19和28卷；和J.Am.Chem.Soc.(1960)82:5566。“杂环基”还包括其中杂环基与饱和环、部分不饱和环、芳族碳环或芳族杂环稠合的基团。杂环的实例包括但不限于吗啉-4-基、哌啶-1-基、哌嗪基、哌嗪-4-基-2-酮、哌嗪-4-基-3-酮、吡咯烷-1-基、硫吗啉-4-基、S-二氧代硫吗啉-4-基、氮杂环辛烷-1-基、氮杂环丁烷-1-基、八氢吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、[1,4]二氮杂环庚烷-1-基、吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶子基、吗啉代、硫吗啉代、噻噁烷基、哌嗪基、高哌嗪基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、高哌啶基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氧杂氮杂基、二氮杂基、硫杂氮杂基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二噁烷基、1,3-二氧杂环戊基、吡唑啉基、二噻烷基、二硫杂环戊烷基、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂二环[3.1.0]己基、3-氮杂二环[4.1.0]庚基、氮杂二环[2.2.2]己基、3H-吲哚基、喹嗪基和N-吡啶基脲。螺环部分也包括在该定义的范围内。其中环原子被氧代(＝O)部分取代的杂环基的实例是嘧啶酮基和1,1-二氧代硫吗啉基。本申请杂环基团任选独立被本申请所述的一个或多个取代基取代。

术语“杂芳基”是指5、6或7元环的一价的芳族基团且包括具有5-20个原子的稠合环系(其中至少一个环是芳族的)，所述芳族基团和稠合环系含有一个或多个独立选自氮、氧和硫的杂原子。杂芳基的实例是吡啶基(包括例如2-羟基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基(包括例如4-羟基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基和呋喃并吡啶基。杂芳基任选独立被本申请所述的一个或多个取代基取代。

杂环或杂芳基在可能的情况下可为经碳键合(经碳连接)或经氮键合(经氮连接)的。作为实例而非限制，经碳键合的杂环或杂芳基在以下位置成键：吡啶的2、3、4、5或6位；哒嗪的3、4、5或6位；嘧啶的2、4、5或6位；吡嗪的2、3、5或6位；呋喃、四氢呋喃、噻吩、噻吩、吡咯或四氢吡咯的2、3、4或5位；噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位；异噁唑、吡唑或异噻唑的3、4或5位；氮丙啶的2或3位；氮杂环丁烷的2、3或4位；喹啉的2、3、4、5、6、7或8位；或异喹啉的1、3、4、5、6、7或8位。

作为实例而非限制，经氮键合的杂环或杂芳基在以下位置成键：氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑的1位；异吲哚或异吲哚啉的2位；吗啉的4位；及咔唑或β-咔啉的9位。

术语“治疗”是指治疗性处置及预防性措施，其目的是预防或减缓(减轻)不期望的生理学变化或病症例如癌症的形成或扩散。出于本申请目的，有益或期望的临床结果包括但不限于缓解症状、缩小疾病范围、稳定(即不恶化)疾病状态、延迟或减缓疾病进展、改善或缓和疾病状态及减退(无论是部分还是完全缓解)，无论是可检测的还是不可检测的。“治疗”还可指与在不接受治疗的情况下所预期的存活时间相比延长的存活时间。需要治疗的那些对象包括具有病症或障碍的那些对象及倾向于具有病症或障碍的那些对象或其中有待预防病症或障碍的那些对象。

短语“治疗有效量”是指本申请化合物的以下量，其(i)治疗或预防本申请所述特定疾病、病症或障碍、(ii)减轻、改善或消除本申请所述特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状或(iii)预防或延迟本申请所述特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状的发作。对于癌症，治疗有效量的药物可减小癌细胞数目；减小肿瘤尺寸；抑制(即在一定程度上减缓且优选终止)癌细胞侵润到周围器官中；抑制(即在一定程度上减缓且优选终止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。若药物可防止现存癌细胞生长和/或杀死现存癌细胞，则其可能是细胞抑制性和/或细胞毒性的。对于癌症疗法，效力可例如通过评估疾病进展时间(TTP)和/或确定应答率(RR)来度量。

术语“癌症”是指或描述哺乳动物中以不受调节的细胞生长为典型特征的生理状况。“肿瘤”包括一种或多种癌细胞。癌症的实例包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤。所述癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌(“NSCLC”)、肺腺瘤和肺鳞癌在内的肺癌、腹膜癌、肝细胞癌、包括胃肠癌在内的胃癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌及头颈癌。

“化学治疗剂”是可用于治疗癌症的化合物，无论作用机制如何。化学治疗剂的类别包括但不限于：烷化剂、抗代谢物、纺锤体毒素植物生物碱、细胞毒性/抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、抗体、光敏剂和激酶抑制剂。化学治疗剂包括用于“靶向疗法”和常规化学疗法的化合物。化学治疗剂的实例包括：厄洛替尼(Genentech/OSI Pharm.)、多西他赛(Sanofi-Aventis)、5-FU(氟尿嘧啶,5-氟尿嘧啶,CAS号51-21-8)、吉西他滨(Lilly)、PD-0325901(CAS号391210-10-9,Pfizer)、顺铂(顺-二胺,二氯化铂(II),CAS号15663-27-1)、卡铂(CAS号41575-94-4)、紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、曲妥单抗(Genentech)、替莫唑胺(4-甲基-5-氧代-2,3,4,6,8-五氮杂二环[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲酰胺,CAS号85622-93-1,Schering Plough)、他莫昔芬((Z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N,N-二甲基乙胺,)、多柔比星Akti-1/2、HPPD和雷帕霉素。

化学治疗剂的其它实例包括：奥沙利铂(Sanofi)、硼替佐米(Millennium Pharm.)、舒尼替尼(SU11248,Pfizer)、来曲唑(Novartis)、甲磺酸伊马替尼(Novartis)、XL-518(Mek抑制剂,Exelixis,WO2007/044515)、ARRY-886(Mek抑制剂,AZD6244,Array BioPharma,AstraZeneca)、SF-1126(PI3K抑制剂,Semafore Pharmaceuticals)、BEZ-235(PI3K抑制剂,Novartis)、XL-147(PI3K抑制剂,Exelixis)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、氟维司群(AstraZeneca)、甲酰四氢叶酸(亚叶酸)、雷帕霉素(西罗莫司,Wyeth)、雷帕霉素类似物、mTOR抑制剂例如依维莫司、MEK抑制剂(GDC-0973)、Bcl-2抑制剂例如navitoclax(ABT-263或ABT-199)、拉帕替尼(GSK572016,Glaxo Smith Kline)、洛那法尼(SARASAR^TM,SCH>BAY43-9006,Bayer Labs)、吉非替尼(AstraZeneca)、伊立替康(CPT-11,Pfizer)、替吡法尼(ZARNESTRA^TM,Johnson&Johnson)、ABRAXANE^TM(Cremophor-free)、紫杉醇的白蛋白工程化纳米微粒制剂(AmericanPharmaceutical>AstraZeneca)、苯丁酸氮芥、AG1478、AG1571(SU 5271；Sugen)、替西罗莫司(Wyeth)、帕唑帕尼(GlaxoSmithKline)、canfosfamide(Telik)、塞替派和环磷酰胺磺酸烷基酯，例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，例如苯佐替哌、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替哌；乙撑亚胺和甲基氨基吖啶，包括六甲蜜胺、三亚胺嗪、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫化磷酰胺和三羟甲蜜胺；番荔枝内酯(尤其是布拉它辛和布拉它辛酮)；喜树碱(包括合成性类似物托泊替康)；苔藓抑素；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成性类似物)；念珠藻环肽(特别是念珠藻环肽1和念珠藻环肽8)；多拉司他汀；倍癌霉素(包括合成性类似物KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素；水鬼蕉碱；sarcodictyin；海绵抑素；氮芥例如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、双氯乙基甲胺、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；硝基脲，例如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素，例如烯二炔抗生素(例如刺孢霉素、刺孢霉素γ1I、刺孢霉素ωI1(AngewChem.Intl.Ed.Engl.(1994)33:183-186)；蒽环类抗生素，dynemicin A；双膦酸盐，例如氯膦酸盐；埃斯培拉霉素；新抑癌蛋白生色团和相关色蛋白烯二炔抗生素生色团，aclacinomysin、放线菌素、authramycin、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、carabicin、去甲柔红霉素、嗜癌素、色霉素、放线菌素D、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉子基-多柔比星和去氧多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星、奈莫柔比星、麻西罗霉素、丝裂霉素例如丝裂霉素C、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌罗霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物，例如甲氨喋呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，例如二甲叶酸、甲氨喋呤、喋罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，例如氟达拉滨、6-巯嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，例如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮鸟苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、伊诺他滨、氟尿苷；雄激素，例如卡普睾酮、丙酸甲雄烷酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺素，例如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，例如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil；比生群；伊达曲杀；地磷酰胺；秋水仙胺；地吖醌；依氟鸟氨酸；依利醋铵；埃坡霉素；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美登醇，例如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；mopidanmol；根瘤菌剂；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基肼；丙卡巴肼；多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生；根霉素；西佐喃；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2’,2”-三氯三乙胺；单端孢菌毒素(尤其是T-2毒素、verracurin A、杆孢菌素A和anguidine)；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿糖胞苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；塞替派；6-硫代鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨喋呤；铂类似物，例如顺铂和卡铂；长春碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨诺消灵；替尼泊苷；伊达曲杀；柔红霉素；氨基喋呤；卡培他滨(Roche)；伊班膦酸盐；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇，例如视黄酸；及以上任何物质的药用盐、酸和衍生物。

还包括在“化学治疗剂”的定义中的为：(i)用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素药物，例如抗雌激素药物和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括枸橼酸他莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛西芬、LY117018、奥那司酮和(枸橼酸托米芬)；(ii)抑制芳香酶(其调节肾上腺中的雌激素产生)的芳香酶抑制剂，例如4(5)-咪唑、氨鲁米特、(醋酸甲地孕酮)、(依西美坦；Pfizer)、formestanie、法倔唑、(伏氯唑)、(来曲唑；Novartis)和(阿那曲唑；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素药物，例如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；及曲沙他滨(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂，例如MEK抑制剂(WO2007/044515)；(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，特别是抑制异常细胞增殖所涉及的信号传导途径中的基因表达的那些反义寡核苷酸，例如PKC-α、Raf和H-Ras例如oblimersen(Genta Inc.)；(vii)核酶，例如VEGF表达抑制剂(例如)和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗，例如基因疗法疫苗例如和rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂，例如rmRH；(ix)抗血管生成药物，例如贝伐珠单抗(Genentech)；及以上任何物质的药用盐、酸和衍生物。

还包括在“化学治疗剂”的定义中的为治疗性抗体例如阿仑珠单抗贝伐珠单抗（Genentech)；西妥昔单抗(Imclone)；帕木单抗(Amgen)、利妥昔单抗(Genentech/Biogen Idec)、培妥珠单抗(2C4,Genentech)、曲妥珠单抗(Genentech)和托西莫单抗(Corixa,GlaxoSmithKline)。

具有作为化学治疗剂的治疗潜力而与本申请式I化合物联用的人源化单克隆抗体包括：阿仑珠单抗、阿泊珠单抗、阿塞珠单抗、atlizumab、bapineuzumab、贝伐珠单抗、莫比伐珠单抗、莫坎妥珠单抗、西利珠单抗、赛妥珠单抗、cidfusituzumab、cidtuzumab、达克珠单抗、依库珠单抗、依法珠单抗、依帕珠单抗、厄利珠单抗、泛维珠单抗、芳妥珠单抗、奥吉妥珠单抗、奥英妥珠单抗、ipilimumab、拉贝珠单抗、lebrikizumab、林妥珠单抗、马妥珠单抗、美泊珠单抗、莫维珠单抗、motovizumab、那他珠单抗、尼妥珠单抗、nolovizumab、numavizumab、ocrelizumab、奥马珠单抗、帕利珠单抗、帕考珠单抗、pecfusituzumab、pectuzumab、培妥珠单抗、培克珠单抗、ralivizumab、雷珠单抗、瑞利珠单抗、瑞利珠单抗、resyvizumab、罗维珠单抗、卢利珠单抗、西罗珠单抗、西利珠单抗、索土珠单抗、他珠单抗、

tadocizumab、他利珠单抗、特非珠单抗、托珠单抗、托利珠单抗、曲司珠单抗、tucotuzumab celmoleukin、tucusituzumab、umavizumab、乌珠单抗和维西珠单抗。

“代谢物”是通过具体化合物或其盐在体内的代谢而产生的产物。可使用本领域已知的常规技术鉴定化合物的代谢物并使用例如本申请所述的测试确定它们的活性。所述产物可源自例如所给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、脱酯化、酶促裂解等。因此，本申请包括本申请化合物的代谢物，包括由以下方法产生的化合物，所述方法包括使本申请式I化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的一段时间。

术语“包装说明书”用于指通常包含在治疗产品的市售包装中的说明书，其含有关于使用所述治疗产品所涉及的适应症、用法、剂量、给药、禁忌症和/或注意事项的信息。

术语“手性”是指具有镜像配对体不可重叠性的分子，而术语“非手性”是指可与其镜像配对体重叠的分子。

术语“立体异构体”是指具有相同化学组成但原子或基团在空间中的排列是不同的化合物。

“非对映异构体”是指具有两个或更多个手性中心且其分子不互为镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质例如熔点、沸点、光谱性质和反应性。非对映异构体的混合物可通过高分辨分析操作例如电泳和色谱来分离。

“对映异构体”是指化合物的互为不可重叠镜像的两种立体异构体。

本申请使用的立体化学定义和常规用语大体上遵循S.P.Parker,Ed.,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；和Eliel,E.and Wilen,S.,“Stereochemistry of Organic Compounds”,John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994。本申请化合物可含有不对称或手性中心且因此以不同的立体异构形式存在。本申请化合物的所有立体异构形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体及其混合物例如外消旋混合物，构成本申请一部分。多种有机化合物以光学活性形式存在，即它们具有使平面偏振光的平面发生旋转的能力。在描述光学活性化合物时，前缀D和L或R和S用于表示分子围绕其一个或多个手性中心的绝对构型。前缀d和l或(+)和(-)作为符号用于表示平面偏振光由化合物引起的旋转，其中(-)或l表示化合物是左旋的。前缀为(+)或d的化合物是右旋的。对于给定的化学结构，这些立体异构体除互为镜像外都是相同的。具体的立体异构体也可称为对映异构体且所述异构体的混合物通常称为对映异构体混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋体，这可出现在化学反应或方法没有立体选择性或立体特异性的情况下。术语“外消旋混合物”和“外消旋体”是指两种对映异构物质的等摩尔混合物，其没有光学活性。对映异构体可通过手性分离方法例如超临界流体色谱法(SFC)而由外消旋混合物分离。经分离的对映异构体中手性中心处的构型指定可为暂时的且出于说明目的在表1结构中描述，而立体化学待确定，例如通过x-射线晶体学数据。

术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指具有不同能量的可通过低能垒而互相转化的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括通过质子迁移而进行的互相转化，例如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体包括通过一些成键电子的重组而进行的互相转化。

术语“药用盐”表示在生物学上或在其它情况下不是不期望的盐。药用盐包括酸和碱加成盐。短语“药用”表明物质或组合物必须与制剂包含的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物在化学和/或毒理学上是相容的。

术语“药用酸加成盐”表示与以下酸形成的那些药用盐：无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸及选自脂肪族、环脂族、芳香族、芳脂族、杂环、羧酸和磺酸类有机酸的有机酸例如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、枸橼酸、天冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、氨茴酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、双羟萘酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸和水杨酸。

术语“药用碱加成盐”表示与有机或无机碱形成的那些药用盐。可接受的无机碱的实例包括钠、钾、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰和铝盐。衍生自药用有机无毒碱的盐包括以下化合物的盐：伯胺、仲胺和叔胺、包括天然的经取代的胺在内的经取代的胺、环状胺及碱性离子交换树脂例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙基氨基乙醇、三甲胺、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶和聚胺树脂。

“溶剂化物”是指一个或多个溶剂分子与本申请化合物的缔合物或络合物。形成溶剂化物的溶剂的实例包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。

术语“EC₅₀”是半数最大有效浓度并表示在体内获得特定效应的最大值的50％所需要的特定化合物的血浆浓度。

术语“Ki”是抑制常数并表示特定抑制剂对受体的绝对结合亲和力。其使用竞争结合测定来测量且等于当特定抑制剂在不存在竞争性配体(例如放射性配体)的情况下占据50％受体时的浓度。Ki值可按对数方式换算为pKi值(-log Ki)，其中较高的值以指数表示较大的效力。

术语“IC₅₀”是半数最大抑制浓度并表示在体外获得对生物过程的50％抑制所需要的特定化合物的浓度。IC₅₀值可按对数方式换算为pIC₅₀值(-logIC₅₀)，其中较高的值以指数表示较大的效力。IC₅₀值不是绝对值，而是取决于实验条件例如所使用的浓度并可使用Cheng-Prusoff方程而换算为绝对抑制常数(Ki)(Biochem.Pharmacol.(1973)22:3099)。

术语“本申请化合物”和“式I化合物”包括式I化合物及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物和药用盐及前药。

本申请给出的任何式或结构(包括式I化合物)也意在表示所述化合物的水合物、溶剂化物和多晶型物或其混合物。

本申请给出的任何式或结构(包括式I化合物)也意在表示所述化合物未经标记的形式及经同位素标记的形式。经同位素标记的化合物具有本申请给出的结构式所描述的结构，但是一个或多个原子被具有所选原子质量或质量数的原子代替。可引入到本申请化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素例如但不限于²H(氘、D)、³H(氚)、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸F、³¹P、³²P、³⁵S、³⁶Cl和¹²⁵I。各种经同位素标记的本申请化合物为例如其中引入有放射性同位素例如³H、¹³C和¹⁴C的那些本申请化合物。所述经同位素标记的化合物可用于代谢研究、反应动力学研究、检测或成像技术例如正电子发射断层扫描术(PET)或单光子发射计算机断层扫描术(SPECT)(包括药物或底物组织分布测定)或对患者进行的放射治疗。经氘标记或取代的本申请治疗性化合物可具有改善的涉及分布、代谢和排泄(ADME)的DMPK(药物代谢和药代动力学)性质。用较重的同位素例如氘进行的取代可由于较大的代谢稳定性而得到一些治疗益处例如延长的体内半衰期或减小的剂量需求。经¹⁸F标记的化合物可用于PET或SPECT研究。经同位素标记的本申请化合物及其前药通常可如下制备：用容易获得的经同位素标记的试剂代替未经同位素标记的试剂来进行在下述方案或实施例和制备中公开的流程。另外，用较重的同位素特别是氘(即²H或D)进行的取代可由于较大的代谢稳定性而得到一些治疗益处例如延长的体内半衰期或减小的剂量需求或改善的治疗指数。应该理解的是，该上下文中的氘被认为是式(I)化合物中的取代基。所述较重的同位素(特别是氘)的浓度可通过同位素富集因子来定义。在本申请化合物中，未被具体指定为特定同位素的原子意在表示该原子的任何稳定同位素。除非另有说明，当一处位置被具体指定为“H”或“氢”时，所述位置应该被理解为具有呈天然丰度同位素组成的氢。因此，在本申请化合物中，被具体指定为氘(D)的任何原子意在表示氘。

氧杂环庚烷-2-基-吡唑-4-基-杂环基-甲酰胺化合物

本申请提供式I(包括式Ia-i)的氧杂环庚烷-2-基-吡唑-4-基-杂环基-甲酰胺化合物及其药物制剂，其可用于治疗由Pim激酶调节的疾病、病状和/或病症。

式I化合物具有以下结构：

及其立体异构体、几何异构体、互变异构体或药用盐，其中：

R¹选自H、C₁-C₁₂烷基、C₂-C₁₂烯基、C₂-C₁₂炔基、C₆-C₂₀芳基、C₃-C₁₂碳环基、C₂-C₂₀杂环基、C₁-C₂₀杂芳基和-(C₁-C₁₂亚烷基)-(C₂-C₂₀杂环基)；

R²独立选自F、Cl、Br、I、-CH₃、-CH₂CH₃、-CH(CH₃)₂、-C(CH₃)₃、-CH₂CH(CH₃)₂、-CH＝CH₂、-CH＝C(CH₃)₂、＝CH₂、-CH₂F、-CHF₂、-CF₃、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂NH₂、-CH₂NHCH₃、-CH₂CH₂NH₂、-CH₂CHCH₂NH₂、-CH₂CH(CH₃)NH₂、-CH₂OH、-CH₂CH₂OH、-C(CH₃)₂OH、-CH(OH)CH(CH₃)₂、-C(CH₃)₂CH₂OH、-CH₂CH₂SO₂CH₃、-CN、-CO₂H、-COCH₃、-COCH₂NH₂、-CO₂CH₃、-CO₂C(CH₃)₃、-COCH(OH)CH₃、-CONH₂、-CONHCH₃、-CON(CH₃)₂、-C(CH₃)₂CONH₂、-NO₂、-NH₂、-NHCH₃、-N(CH₃)₂、-NHCH₂CHF₂、-NHCH₂CF₃、-NHCH₂CH₂OH、-NHCOCH₃、-N(CH₃)COCH₃、-NHC(O)OCH₂CH₃、-NHC(O)OCH₂Cl₃、-NHC(O)OC₆H₅、-NHS(O)₂CH₃、-N(CH₃)C(CH₃)₂CONH₂、-N(CH₃)CH₂CH₂S(O)₂CH₃、＝O、-OH、-OCH₃、-OCHF₂、-OCH₂F、-OCH₂CH₃、-OCH(CH₃)₂、-OCH₂CH(CH₃)₂、-OC(CH₃)₃、-S(O)₂N(CH₃)₂、-SCH₃、-CH₂OCH₃、-S(O)₂CH₃、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、氮杂环丁基、氮杂环庚基、氧杂环丁基、氧杂环丁烷-3-基甲基氨基、(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基氨基、吡咯烷基、哌嗪基、哌啶基、(哌啶-4-基)乙基、吡喃基、(哌啶-4-基)甲基、吗啉代甲基和吗啉代；

n为1、2、3、4、5或6；

X选自以下结构：

其中波浪线表示连接点；且

R³选自H、Cl、Br、C₁-C₁₂烷基、-O-(C₁-C₁₂烷基)、-(C₁-C₁₂亚烷基)-(C₃-C₁₂碳环基)、-(C₁-C₁₂亚烷基)-(C₂-C₂₀杂环基)、-(C₂-C₈亚烯基)-(C₃-C₁₂碳环基)、-(C₂-C₈亚烯基)-(C₂-C₂₀杂环基)、C₆-C₂₀芳基、-(C₆-C₂₀亚芳基)-(C₂-C₂₀杂环基)、-(C₆-C₂₀亚芳基)-(C₆-C₂₀亚芳基)、-(C₆-C₂₀亚芳基)-(C₁-C₁₂亚烷基)-(C₂-C₂₀杂环基)、-(C₆-C₂₀亚芳基)-O-(C₂-C₂₀杂环基)、-(C₆-C₂₀亚芳基)-O-(C₁-C₁₂烷基)、C₃-C₁₂碳环基、C₂-C₂₀杂环基、C₁-C₂₀杂芳基、-(C₁-C₂₀杂芳基)-(C₂-C₂₀杂环基)和-(C₁-C₂₀杂芳基)-(C₁-C₁₂烷基)；其中烷基、烯基、炔基、亚烷基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基任选取代有一个或多个独立选自以下的基团：F、Cl、Br、I、-CH₃、-CH₂CH₃、-CH(CH₃)₂、-CH₂CH(CH₃)₂、-CH₂NH₂、-CH₂CH₂NH₂、-CH₂CHCH₂NH₂、-CH₂CH(CH₃)NH₂、-CH₂OH、-CH₂CH₂OH、-CH(CH₂OH)₂、-C(CH₂OH)₃、-CH(CH₃)OH、-C(CH₃)₂OH、-CH(OH)CH(CH₃)₂、-C(CH₃)₂CH₂OH、-CH₂CH₂SO₂CH₃、-CN、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CO₂H、-COCH₃、-COCH(CH₃)₂、-CO₂CH₃、-CO₂C(CH₃)₃、-COCH(OH)CH₃、-CONH₂、-CONHCH₃、-CON(CH₃)₂、-C(CH₃)₂CONH₂、-NO₂、-NH₂、-NHCH₃、-N(CH₃)₂、-NHCOCH₃、-N(CH₃)COCH₃、-NHS(O)₂CH₃、-N(CH₃)C(CH₃)₂CONH₂、-N(CH₃)CH₂CH₂S(O)₂CH₃、＝O、-OH、-OCH₃、-OCF₃、-OCH(CH₃)₂、-S(O)₂N(CH₃)₂、-SCH₃、-CH₂OCH₃、-S(O)₂CH₃、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、氮杂环丁基、氮杂环庚基、氧杂环丁基、苯基、吡咯烷基、哌嗪基、哌啶基、(哌啶-4-基)乙基、吡喃基、(哌啶-4-基)甲基、吗啉代甲基和吗啉代。

式I化合物的示例性实施方案包括其中R¹为H。

式I化合物的示例性实施方案包括其中R¹为C₁-C₁₂烷基或C₃-C₁₂碳环基。

式I化合物的示例性实施方案包括其中R¹选自-CH₃、-CH₂CH₃、-CH₂CHF₂和-CH₂CF₃。

式I化合物的示例性实施方案包括其中R²独立选自F、Cl、-OH、-CH₃、-CH₂CH₃、-CF₃、-NH₂、-NHCH₃、-N(CH₃)₂、-NHCH₂CHF₂、-NHCH₂CF₃、-CH₂NHCH₃和-OCH₃；且n为1、2或3。

式I化合物的示例性实施方案包括其中R³为C₆-C₂₀芳基，包括取代有一个或多个F的苯基。

式I化合物的示例性实施方案包括式Ia-d的结构：

式I化合物的示例性实施方案包括式Ie的结构：

式Ie化合物的示例性实施方案包括其中R²为F或OCH₃。

式Ie化合物的示例性实施方案包括其中X为噻唑基。

式I化合物的示例性实施方案包括式If的结构：

式If化合物的示例性实施方案包括其中R³为C₆-C₂₀芳基，包括其中R³为苯基或吡啶基，其中苯基或吡啶基任选取代有一个或多个选自以下的基团：F、Cl、Br、I、-CH₃、-CH₂CH₃、-CH(CH₃)₂、-CH₂CH(CH₃)₂、-CH₂NH₂、-CH₂CH₂NH₂、-CH₂CHCH₂NH₂、-CH₂CH(CH₃)NH₂、-CH₂OH、-CH₂CH₂OH、-CH(CH₂OH)₂、-C(CH₂OH)₃、-CH(CH₃)OH、-C(CH₃)₂OH、-CH(OH)CH(CH₃)₂、-C(CH₃)₂CH₂OH、-CH₂CH₂SO₂CH₃、-CN、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CO₂H、-COCH₃、-COCH(CH₃)₂、-CO₂CH₃、-CO₂C(CH₃)₃、-COCH(OH)CH₃、-CONH₂、-CONHCH₃、-CON(CH₃)₂、-C(CH₃)₂CONH₂、-NO₂、-NH₂、-NHCH₃、-N(CH₃)₂、-NHCOCH₃、-N(CH₃)COCH₃、-NHS(O)₂CH₃、-N(CH₃)C(CH₃)₂CONH₂、-N(CH₃)CH₂CH₂S(O)₂CH₃、＝O、-OH、-OCH₃、-OCF₃、-OCH(CH₃)₂、-S(O)₂N(CH₃)₂、-SCH₃、-CH₂OCH₃、-S(O)₂CH₃、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、氮杂环丁基、氮杂环庚基、氧杂环丁基、苯基、吡咯烷基、哌嗪基、哌啶基、(哌啶-4-基)乙基、吡喃基、(哌啶-4-基)甲基、吗啉代甲基和吗啉代。

式If化合物的示例性实施方案包括其中R³选自苯基、2-氟苯基、2,6-二氟苯基、2,6-二氟-4-甲基苯基、2,4,6-三氟苯基、2,4-二氟苯基、2-氟-4-羟基苯基和3-甲基吡啶-2-基。

生物学评价

式I化合物的Pim激酶活性可通过多种直接和间接检测方法确定。测定了本申请所述一些示例性化合物的Pim激酶结合活性，包括同工型Pim-1、Pim-2和Pim-3(实施例901)和针对肿瘤细胞的体外活性(实施例902)。本申请一些示例性化合物的Pim结合活性IC₅₀值小于约1微摩尔浓度(μM)。本申请一些化合物的基于肿瘤细胞的活性EC₅₀值小于约1微摩尔浓度(μM)，例如针对细胞系BaF3[鼠类白介素-3依赖性前B细胞系且可用作模型系统以评价激酶癌基因的效力和下游信号传导(“Ba/F3cells>50/EC₅₀的式I化合物可治疗性地用作Pim激酶抑制剂(Pim-1、Pim-2和/或Pim-3)。

hERG(人Ether-à-go-go相关基因)是编码称为K_v11.1的蛋白质(钾离子通道的α亚基)的基因(KCNH2)。该离子通道(有时简称为’hERG’)以其对协调心脏跳动的心电活动的贡献而著称(即hERG通道介导心脏动作电位中的复极化I_Kr电流)。当该通道传导电流通过细胞膜的能力由于施用药物或由于一些家族中的罕见突变(Hedley>

表1中的示例性式I化合物根据本申请方法来制备、表征和就抑制Pim激酶而进行测试且具有以下结构和相应的名称(ChemBioDraw Ultra,Version 11.0,CambridgeSoftCorp.,Cambridge MA)。表1中一些具有手性原子的化合物没有就立体化学而完全表征。立体化学的暂时指定或与其它基团的立体化学关系可在结构中描述。立体异构体的分离手段和表征数据在实施例中给出。

表1

式I化合物的给药

本申请化合物(以下称为“活性化合物”)的给药可通过能够将所述化合物递送至作用部位的任何方法进行。这些方法包括口服途径、十二指肠内途径、胃肠外注射(包括静脉内、皮下、肌内、血管内或输注)、局部给药、吸入给药和直肠给药。

所给药的活性化合物的量将取决于所治疗的受试者、病症或病状的严重度、给药速率、化合物的处置和处方医师的判断。然而，有效剂量为约0.001至约100mg/kg体重/天，优选约1至约35mg/kg/天，以单一剂量或分份剂量。对于体重为70kg的人，有效剂量可总计为约0.05至7g/天，优选约0.05至约2.5g/天。在一些情况下，低于上述范围的下限的剂量水平可为足够的，而在其它情况下，可使用较大的剂量而不会导致任何有害的副作用，条件是首先将上述较大的剂量分成若干个小的剂量用于在一整天中给药。

活性化合物可作为单一疗法施用或与一种或多种化学治疗剂例如本申请所述那些化学治疗剂组合施用。上述组合治疗可通过同时、依序或分开给药治疗的各个组分来实现。

本申请式I化合物可通过适于待治疗的病状的任何途径来给药。合适的途径包括口服、胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内、动脉内、皮内、鞘内和硬膜外)、经皮、直肠、经鼻、局部(包括含服和舌下)、阴道、腹膜内、肺内和鼻内。对于局部免疫抑制治疗，所述化合物可通过病灶内给药(包括灌注或在移植前使移植物与抑制剂接触)来给药。应该理解的是，优选的途径可随例如接受者的情况而变化。当所述化合物口服给药时，可将其与药用载体或赋形剂一起配制成丸剂、胶囊剂、片剂等。当所述化合物胃肠外给药时，可如下所述将其与药用胃肠外媒介物一起配制且配制成单位剂量注射形式。

治疗人类患者的剂量可为约10mg至约1000mg式I化合物。典型的剂量可为约100mg至约300mg所述化合物。剂量可每日给药一次(QID)、每日给药两次(BID)或更频繁地给药，这取决于具体化合物的药物动力学性质和药效学性质，包括吸收、分布、代谢和排泄。另外，毒性因素可影响剂量和给药方案。当口服给药时，丸剂、胶囊剂或片剂可每日或以更低的频率服用所指定的一段时间。方案可重复多个治疗周期。

用式I化合物进行治疗的方法

本申请化合物可用于治疗过度增殖性疾病、病状和/或病症，包括但不限于以Pim激酶例如Pim-1、Pim-2和Pim-3激酶的过表达为特征的那些过度增殖性疾病、病状和/或病症。因此，本申请另一个方面包括治疗或预防可通过抑制Pim激酶来治疗或预防的疾病或病状的方法。在一个实施方案中，所述方法包括向有此需要的哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体或药用盐。在一个实施方案中，用式I化合物和药用载体、辅料或媒介物治疗人类患者，其中所述式I化合物以可检测地抑制Pim激酶活性的量存在。

本申请包括组合物(例如药物组合物)，其包含式I化合物和/或其溶剂化物、水合物和/或盐及载体(药用载体)。本申请还包括组合物(例如药物组合物)，其包含式I化合物和/或其溶剂化物、水合物和/或盐及载体(药用载体)，还包含第二化学治疗剂例如本申请所述那些化学治疗剂。本申请组合物可用于抑制异常细胞生长或治疗哺乳动物(例如人类)中的过度增殖性病症例如癌症。例如，本申请化合物和组合物可用于治疗哺乳动物(例如人类)中的多发性骨髓瘤、淋巴瘤、急性髓细胞样白血病、前列腺癌、乳腺癌、肝细胞癌、胰腺癌和/或结肠直肠癌。

本申请包括抑制异常细胞生长或治疗哺乳动物(例如人类)中的过度增殖性病症例如癌症的方法，其包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物和/或其溶剂化物、水合物和/或盐或其组合物。例如，本申请包括治疗哺乳动物(例如人类)中的多发性骨髓瘤、淋巴瘤、急性髓细胞样白血病、前列腺癌、乳腺癌、肝细胞癌、胰腺癌和/或结肠直肠癌的方法，其包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物和/或其溶剂化物、水合物和/或盐或其组合物。

可根据本申请方法治疗的癌症包括但不限于乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌症、食道癌、喉癌、胃癌、皮肤癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、肝癌、胆道癌、肾癌、咽(口)癌、唇癌、舌癌、口癌、咽癌、小肠癌、结肠直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经系统癌症。可根据本申请方法治疗的癌症类型包括但不限于多发性骨髓瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、角化棘皮瘤、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞癌、肺腺癌、腺瘤、腺癌、甲状腺癌、滤泡癌、未分化癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和肾癌、骨髓样病症、淋巴样病症、毛细胞癌、口腔癌及霍奇金癌和白血病。

本申请包括抑制异常细胞生长或治疗哺乳动物(例如人类)中的过度增殖性病症例如癌症的方法，其包括与第二化学治疗剂例如本申请所述那些化学治疗剂组合向所述哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物和/或其溶剂化物、水合物和/或盐或其组合物。例如，本申请包括治疗哺乳动物(例如人类)中的多发性骨髓瘤、淋巴瘤、急性髓细胞样白血病、前列腺癌、乳腺癌、肝细胞癌、胰腺癌和/或结肠直肠癌的方法，其包括与第二化学治疗剂例如本申请所述那些化学治疗剂组合向所述哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物和/或其溶剂化物、水合物和/或盐或其组合物。

本申请包括治疗哺乳动物(例如人类)中的淋巴瘤的方法，其包括单独或与第二化学治疗剂组合向所述哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物和/或其溶剂化物、水合物和/或盐或其组合物，所述第二化学治疗剂为例如抗B细胞抗体治疗药物(例如和/或dacetuzumab)、吉西他滨、皮质类固醇(例如泼尼松龙和/或地塞米松)、化学疗法混合剂(例如CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松龙)和/或ICE(异环磷酰胺、环磷酰胺、依托泊苷)、生物制品和化学疗法的组合(例如-ICE、dacetuzumab--ICE、R-Gem和/或D-R-Gem)、Akt抑制剂、PI3K抑制剂(例如GDC-0941(Genentech)和/或GDC-0980(Genentech))、雷帕霉素、雷帕霉素类似物、mTOR抑制剂例如依维莫司或西罗莫司、MEK抑制剂(GDC-0973)和Bcl-2抑制剂(ABT-263或ABT-199)。

本申请包括治疗哺乳动物(例如人类)中的多发性骨髓瘤的方法，其包括单独或与第二化学治疗剂组合向所述哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物和/或其溶剂化物、水合物和/或盐或其组合物，所述第二化学治疗剂为例如美法仑、“Imids”(免疫调节剂例如沙立度胺、来那度胺和/或泊马度胺)、皮质类固醇(例如地塞米松和/或泼尼松龙)和硼替佐米或其它蛋白酶体抑制剂。

本申请包括治疗哺乳动物(例如人类)中的多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)或急性髓细胞样白血病(AML)的方法，其包括单独或与第二化学治疗剂组合向所述哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物和/或其溶剂化物、水合物和/或盐或其组合物，所述第二化学治疗剂为例如阿糖胞苷(araC)、蒽环类抗生素(例如柔红霉素和/或伊达比星)、抗髓样抗体治疗药物(例如SGN-33)、抗髓样抗体-药物缀合物(例如)。

本申请包括治疗哺乳动物(例如人类)中的慢性淋巴细胞性白血病(CLL)的方法，其包括单独或与第二化学治疗剂组合向所述哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物和/或其溶剂化物、水合物和/或盐或其组合物，所述第二化学治疗剂为例如氟达拉滨、环磷酰胺、抗B细胞抗体治疗药物(例如和/或dacetuzumab)。

本申请包括治疗哺乳动物(例如人类)中的慢性髓细胞样白血病(CML)的方法，其包括单独或与第二化学治疗剂组合向所述哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物和/或其溶剂化物、水合物和/或盐或其组合物，所述第二化学治疗剂为例如BCR-abl抑制剂(例如伊马替尼、尼洛替尼和/或达沙替尼)。

本申请包括治疗哺乳动物(例如人类)中的骨髓增殖异常疾病(MDS)和骨髓增殖性病症(包括真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)或骨髓纤维化(MF))的方法，其包括单独或组合向所述哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物和/或其溶剂化物、水合物和/或盐或其组合物。

本申请包括使用本申请化合物在体外、原位和体内诊断或治疗哺乳动物细胞、生物体或相关病理状态的方法。

本申请另一个方面提供本申请化合物，其用于在患有本申请所述疾病或病状的哺乳动物例如人类中治疗上述疾病或病状。本申请还提供本申请化合物在制备用于在患有本申请所述疾病和病状的温血动物例如哺乳动物例如人类中治疗上述疾病和病状的药物中的用途。

药物制剂

为了使用式(I)化合物以对哺乳动物(包括人类)进行治疗性处置(包括预防性处置)，通常根据标准药学实践将其配制为药物组合物。本申请该方面提供药物组合物，其包含本申请化合物及药用稀释剂或载体。

药物组合物可例如作为片剂、胶囊剂、丸剂、粉末剂、缓释制剂、溶液剂、混悬剂呈适于口服给药的形式、作为无菌溶液剂、混悬剂或乳剂呈适于胃肠外注射的形式、作为软膏剂或乳膏剂呈适于局部给药的形式或作为栓剂呈适于直肠给药的形式。药物组合物可呈适于单独给药精确剂量的单位剂量形式。药物组合物将包含常规药物载体或赋形剂和作为活性成分的本申请化合物。另外，其可包含其它医用或药用物质、载体、辅料等。

示例性胃肠外给药形式包括式I化合物于无菌水溶液(例如含水丙二醇或右旋糖溶液)中的溶液剂或混悬剂。可按需将所述剂型合适地缓冲。

合适的药物载体包括惰性稀释剂或填充剂、水和各种有机溶剂。药物组合物可按需含有额外的成分例如矫味剂、粘合剂、赋形剂等。因此，对于口服给药，可将含有各种赋形剂例如枸橼酸的片剂与各种崩解剂例如淀粉、海藻酸和一些复合硅酸盐及粘合剂例如蔗糖、明胶和阿拉伯胶一起使用。另外，润滑剂例如硬脂酸镁、月桂基硫酸钠和滑石经常可用于制片目的。类似类型的固体组合物也可在软和硬填充明胶胶囊中使用。因此，优选的材料包括乳糖和高分子量聚乙二醇。当含水混悬剂或酏剂用于口服给药时，其中的活性化合物可组合有各种甜味剂或矫味剂、着色物质或染料和(按需)乳化剂或助悬剂及稀释剂例如水、乙醇、丙二醇、丙三醇或其组合。

制备各种具有特定量的活性化合物的药物组合物的方法对于本领域技术人员是已知的或将是显而易见的。参见例如Remington’s Pharmaceutical Sciences,MackPublishing Company,Ester,Pa.,15.sup.th Edition(1975)。

典型的制剂通过将式I化合物与载体、稀释剂或赋形剂混合来制备。合适的载体、稀释剂和赋形剂是本领域技术人员已知的且包括例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可溶胀性聚合物、亲水性或疏水性物质、明胶、油、溶剂、水等物质。所使用的具体载体、稀释剂或赋形剂将取决于施用本申请化合物的方式和目的。溶剂通常基于本领域技术人员认为就给予哺乳动物而言是安全的溶剂(GRAS)来选择。通常，安全溶剂为无毒含水溶剂例如水和可在水中溶解或混溶的其它无毒溶剂。合适的含水溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如PEG 400、PEG 300)等及其混合物。制剂还可包括一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、矫味剂和其它已知添加剂以使药物(即本申请化合物或其药物组合物)具有优质外观或有助于制造药物产品(即药品)。

制剂可使用常规溶出和混合操作来制备。例如，将大批药物物质(即本申请化合物或式I化合物的稳定化形式(例如与环糊精衍生物或其它已知复合剂的复合物))在一种或多种上述赋形剂存在下溶于合适的溶剂中。通常将本申请化合物配制成药物剂型以提供可容易控制的药物剂量且使患者能够依从所开具的方案。

用于施用的药物组合物(或制剂)可取决于给药药物的方法而以多种方式包装。通常，用于分配的制品包括其中存放有呈合适形式的药物制剂的容器。合适的容器是本领域技术人员已知的且包括例如瓶(塑料和玻璃)、小袋、安瓿、塑料袋、金属筒等物品。容器还可包括防撬装置以阻止不慎取得包装内含物。另外，在容器上具有描述容器内含物的标签。标签还可包括合适的警告信息。

可制备本申请化合物的药物制剂用于各种给药途径和类型。例如，具有所需纯度的式I化合物可任选与药用稀释剂、载体、赋形剂或稳定剂混合成冻干制剂、研磨粉末或水溶液形式(Remington’s Pharmaceutical Sciences(1980)第16版,Osol,A.Ed.)。配制可如下进行：在环境温度在合适的pH以合适的纯度与生理学上可接受的载体即在所使用的剂量和浓度对接受者是无毒的载体混合。制剂的pH主要取决于具体用途和化合物浓度，但是可为约3至约8。在pH为5的乙酸盐缓冲液中的制剂是合适的实施方案。

本申请使用的本申请化合物优选是无菌的。具体地，用于体内给药的制剂必须是无菌的。这样的灭菌通过经无菌滤膜过滤来容易地实现。

化合物通常可按固体组合物、冻干制剂或水溶液形式贮存。

包含式I化合物的本申请药物组合物将以与良好医学实践一致的方式(即给药量、浓度、时间安排、疗程、媒介物和途径)来配制、确定剂量和给药。在此背景下需要考虑的因素包括所治疗的具体病症、所治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床情况、病症的原因、递送药物的部位、给药的方法、给药的时间安排和医学实践者已知的其它因素。待给药的化合物的“治疗有效量”将取决于所考虑的上述因素且是预防、改善或治疗由凝血因子介导的病症所需要的最小量。上述量优选低于对宿主有毒或使宿主明显较易于出血的量。

作为一般性建议，每剂胃肠外给药的初始药物有效量的式I化合物将为每日约0.01-100mg/kg即约0.1-20mg/kg患者体重，所使用的化合物的典型初始范围为0.3至15mg/kg/日。

可接受的稀释剂、载体、赋形剂和稳定剂在所使用的剂量和浓度对接受者是无毒的且包括缓冲剂，例如磷酸盐、枸橼酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵、苄索氯胺；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯基吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，例如EDTA；糖，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子，例如钠；金属络合物(例如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，例如TWEEN^TM、PLURONICS^TM或聚乙二醇(PEG)。活性药物成分也可包埋在通过例如凝聚技术或界面聚合来制备的微囊中，例如分别为羟基甲基纤维素或明胶微囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊，在胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米粒和纳米囊)或巨乳液中。上述技术参见Remington’s>

可制备式I化合物的持续释放制剂。持续释放制剂的合适实例包括含有式I化合物的固体疏水性聚合物的半渗透性基质，所述基质呈成形物品例如膜或微囊形式。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如聚(甲基丙烯酸2-羟基乙基酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(US3773919)、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸的共聚物、非降解性乙烯-乙酸乙烯酯、降解性乳酸-羟乙酸共聚物例如LUPRON DEPOT^TM(由乳酸-羟乙酸共聚物和乙酸亮丙瑞林构成的注射用微球)和聚D-(-)-3-羟基丁酸。

制剂包括适于本申请所述给药途径的那些制剂。制剂可适宜地以单位剂量形式来提供并可通过药学领域已知的任何方法来制备。技术和制剂通常参见Remington’sPharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.,Easton,PA)。上述方法包括使活性成分与作为一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，制剂如下制备：使活性成分与液体载体或微细分散的固体载体或这两者均匀和紧密的结合，然后按需对产品进行成型。

可将适于口服给药的式I化合物的制剂制备为离散的单位例如各自含有预定量的式I化合物的丸剂、胶囊剂、扁囊剂或片剂。

压制片可如下制备：在合适的机器中对呈自由流动形式例如粉末或颗粒且任选混合有一种或多种选自粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、填充剂、崩解剂、防腐剂、表面活性剂和分散剂的赋形剂的活性成分进行压制。模制片可如下制备：在合适的机器中对用惰性液体稀释剂润湿的粉末状活性成分的混合物进行模制。可任选对片剂进行包衣或刻痕并任选进行配制以使活性成分从其中缓慢或受控释放。

可制备片剂、含片剂、糖锭剂、水性或油性混悬剂、可分散粉末剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊剂例如明胶胶囊剂、糖浆剂或酏剂以供口服。意在口服的式I化合物的制剂可根据制备药物组合物的领域已知的任何方法来制备且上述组合物可含有一种或多种包括甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂在内的物质以提供适口的制剂。含有与适于制备片剂的无毒的生理学上可接受的赋形剂混合的活性成分的片剂是可接受的。这些赋形剂可为例如惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；成粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可为未包衣的或可通过包括微囊化在内的已知技术来包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收且由此在较长的时段内提供持续的作用。例如，可使用时间延迟物质例如单独或与蜡组合的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。

对于治疗眼部或其它外部组织例如口和皮肤，制剂可优选以局部用软膏剂或乳膏剂形式来施用，其含有的活性成分的量为例如0.075至20％w/w。当配制成软膏剂时，活性成分可与石蜡性或水混溶性软膏基质一起使用。可选择地，活性成分可与水包油型乳膏基质一起配制成乳膏剂。

若需要，则乳膏基质的水相可包含多元醇即具有两个或更多个羟基的醇例如丙二醇、丁-1,3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG 400)及其混合物。局部用制剂可按需包含使活性成分通过皮肤或其它作用区域的吸收或渗透得以增强的化合物。上述皮肤渗透增强剂的实例包括二甲基亚砜和相关类似物。

本申请乳剂的油相可由已知成分以已知方式构成。当所述相可仅包含乳化剂时，其按需包含至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油两者的混合物。优选地，与亲脂性乳化剂一起包含的亲水性乳化剂作为稳定剂。还优选的是包含油和脂肪两者。同时，含有或不含有稳定剂的乳化剂构成所谓的乳化蜡且所述蜡与油和脂肪一起构成所谓的乳化乳膏基质，其形成乳膏剂的油性分散相。适用于本申请制剂的乳化剂和乳化稳定剂包括鲸蜡硬脂醇、苄醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸钠。

式I化合物的水性混悬剂含有活性物质与适于制备水性混悬剂的赋形剂的混合物。上述赋形剂包括助悬剂，例如羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素、聚维酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯胶；及分散剂或润湿剂，例如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、氧化烯与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如十七亚乙氧基鲸蜡醇)、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯)。水性混悬剂还可含有一种或多种防腐剂例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂例如蔗糖或糖精。

式I化合物的药物组合物可呈无菌注射剂例如无菌注射用水性或油性混悬剂形式。该混悬剂可使用上述那些合适的分散剂或润湿剂和助悬剂根据本领域已知方法来配制。无菌注射剂还可为在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射用溶液剂或混悬剂例如在1,3-丁二醇中的溶液剂或被制备为冻干粉末剂。可使用的可接受的媒介物和溶剂包括水、林格溶液和等张氯化钠溶液。另外，无菌不挥发性油通常可用作溶剂或混悬介质。出于该目的，可使用任何温和不挥发性油，包括合成性甘油一酯或甘油二酯。另外，脂肪酸例如油酸也可用于制备注射剂。

可与载体物质组合以制备单一剂量形式的活性成分的量将取决于所治疗的宿主和具体的给药模式而变化。例如，意在对人类口服给药的定时释放制剂可含有约1至1000mg活性物质化合物及合适和适宜量的可占总组合物的约5至约95％(重量:重量)的载体物质。可制备药物组合物以提供可容易测量的给药量。例如，意在静脉内输注的水性溶液剂可含有约3至500μg活性成分/毫升溶液，从而使合适体积的输注能够以约30mL/hr的速率进行。

适于胃肠外给药的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液剂，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者的血液等张的溶质；及水性和非水性无菌混悬剂，其可包含助悬剂和增稠剂。

适于局部给药至眼部的制剂还包括滴眼剂，其中将活性成分溶于或混悬于合适的载体(尤其是针对活性成分的水性溶剂)中。活性成分在上述制剂中存在的浓度优选为约0.5至20％w/w，例如约0.5至10％w/w，例如约1.5％w/w。

适于在口中局部给药的制剂包括糖锭剂，其包含于矫味基质(通常是蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)中的活性成分；锭剂，其包含于惰性基质(例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)中的活性成分；及漱口剂，其包含于合适液体载体中的活性成分。

适于直肠给药的制剂可呈现为栓剂形式，其具有包含例如可可脂或水杨酸酯的合适基质。

适于肺内或经鼻给药的制剂具有例如0.1至500微米的粒度(包括在0.1和500微米之间且增量为例如0.5、1、30、35微米等的粒度)，其如下给药：快速吸入通过鼻道或吸入通过口以到达肺泡囊。合适的制剂包括活性成分的水性或油性溶液剂。适于气雾或干粉给药的制剂可根据常规方法来制备并可与其它治疗剂例如迄今用于治疗或预防下述病症的化合物一起递送。

适于阴道给药的制剂可呈现为阴道栓剂、塞剂、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂形式，其除活性成分外还含有本领域已知的合适载体。

制剂可包装在单位剂量或多剂量容器例如密封的安瓿或小瓶中且可储存在冷冻干燥(冻干)状态下，其仅需要在使用前即刻加入无菌液体载体例如水以供注射。即时注射溶液剂和混悬剂由上述种类的无菌粉末、颗粒和片剂制备。优选的单位剂量制剂是含有本申请上述日剂量或单位日亚剂量或其合适分数的活性成分的那些制剂。

本申请还提供兽用组合物，其由此包含上述至少一种活性成分及兽用载体。兽用载体是可用于给药所述组合物目的的物质并可为固体、液体或气体物质，其在兽医领域中是惰性或可接受的且与活性成分相容。这些兽用组合物可胃肠外、口服或经任何其它所需途径给药。

组合疗法

式I化合物可单独或与用于治疗本申请所述疾病或病症例如过度增殖性病症(例如癌症)的其它治疗剂组合使用。在一些实施方案中，将式I化合物与具有抗过度增殖性质或可用于治疗过度增殖性病症(例如癌症)的第二化合物组合在药物组合制剂或作为组合疗法的给药方案中。药物组合制剂或给药方案的第二化合物优选具有与式I化合物互补的活性，从而使它们不会相互不利地影响。上述化合物合适地以就所预期的目的而言是有效的量组合存在。在一个实施方案中，本申请组合物包含式I化合物与本申请所述化学治疗剂的组合。

组合疗法可按同时或先后方案来给药。当先后给药时，组合可按两次或更多次给药来给药。组合给药包括使用分开的制剂或单一的药物制剂共给药和以任何顺序先后给药，其中优选的是存在两种(或所有)活性剂同时发挥其生物活性的一段时间。

任何上述共给药的药物的合适剂量是目前所使用的那些剂量且可由于新鉴定的药物和其它化学治疗剂或处置措施的组合作用(协同作用)而降低。

联合疗法可提供“协同作用”且被证实是“协同的”，即当活性成分一起使用时实现的作用大于分别使用所述化合物所实现的作用的总和。当活性成分：(1)在组合单位剂量制剂中共配制且同时给药或递送；(2)以分开的制剂交替或平行递送；或(3)通过一些其它方案来给药时，可实现协同作用。当以交替疗法递送时，当化合物例如通过以不同的注射器分开注射、分开的丸剂或胶囊剂或分开的输注剂而先后给药或递送时，可实现协同作用。通常，在交替疗法期间，将有效剂量的每种活性成分先后即顺次给药，而在组合疗法中，将有效剂量的两种或更多种活性成分一起给药。

在抗癌疗法的具体实施方案中，式I化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物或药用盐或前药可与其它化学治疗剂、激素药物或抗体药物例如本申请所述那些药物组合及与外科疗法和放射疗法组合。本申请组合疗法由此包括给药至少一种式I化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物或药用盐或前药及使用至少一种其它癌症治疗方法。式I化合物和其它药物活性化疗剂的量及相关的给药时间安排将被选择，从而实现所期望的组合治疗作用。

式I化合物的代谢物

本申请所述式I的体内代谢产物也落入本申请范围内。上述产物可源于例如所给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、脱酯化、酶促裂解等。因此，本申请包括式I化合物的代谢物，包括由以下方法产生的化合物，所述方法包括使本申请化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的一段时间。

代谢产物通常如下鉴定：制备本申请化合物的经放射性标记的(例如¹⁴C或³H)同位素，将其以可检测的剂量(例如大于约0.5mg/kg)胃肠外给药至动物例如大鼠、小鼠、豚鼠、猴或给药至人类，允许足以发生代谢的时间(通常约30秒至30小时)且将其转化产物与尿、血液或其它生物样品分离。这些产物是容易分离的，这是因为它们是经标记的(其它通过使用能够与在代谢物中存活的抗原表位结合的抗体来分离)。代谢物结构以常规方式例如通过MS、LC/MS或NMR分析来确定。通常，对代谢物的分析以与本领域技术人员已知的常规药物代谢研究相同的方式来进行。代谢产物可用于对本申请化合物的治疗剂量进行诊断性测定，只要它们不是在体内另外存在的。

制品

本申请另一个实施方案提供含有可用于治疗上述疾病和病症的物质的制品或“试剂盒”。试剂盒包含含有式I化合物的容器。试剂盒还可包含在容器上或与容器相关的标签或包装说明书。术语“包装说明书”用于指通常包含在治疗产品的市售包装中的说明书，其含有关于使用上述治疗产品所涉及的适应症、用法、剂量、给药、禁忌症和/或注意事项的信息。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、泡罩包装等。容器可由多种材料例如玻璃或塑料来形成。容器可容纳可有效治疗病症的式I或II化合物或其制剂并可具有无菌接口(例如容器可为静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针头刺穿的塞子的小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是式I化合物。标签或包装说明书指示组合物用于治疗所选择的病症例如癌症。另外，标签或包装说明书可指示待治疗的患者是患有病症例如过度增殖性病症、神经变性、心脏肥大、疼痛、偏头痛或神经创伤性疾病或事件的患者。在一个实施方案中，标签或包装说明书指示包含式I化合物的组合物可用于治疗起因于异常细胞生长的病症。标签或包装说明书还可指示组合物可用于治疗其它病症。可选择或额外地，制品还可包含第二容器，其包含药用缓冲液例如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格溶液和葡萄糖溶液。其还可包含从商业和使用者角度来看所期望的其它物质，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针头和注射器。

试剂盒还可包含关于给药式I化合物及第二药物制剂(若存在)的说明。例如，若试剂盒包含含有式I化合物的第一组合物和第二药物制剂，则试剂盒还可包含关于将第一和第二药物组合物同时、先后或分开给予有此需要的患者的说明。

在另一个实施方案中，试剂盒适于递送式I化合物的固体口服形式例如片剂或胶囊剂。上述试剂盒优选包含多个单位剂量。上述试剂盒可包含具有以其所预期的使用顺序而排列的剂量的卡片状物。上述试剂盒的一个实例是“泡罩包装”。泡罩包装在包装工业中是已知的且广泛用于包装药物单位剂量形式。可按需提供记忆辅助装置，其例如呈数字、字母或其它标记形式或具有指出在治疗安排中可进行给药的那些天的日历说明书。

根据一个实施方案，试剂盒可包含(a)在其中含有式I化合物的第一容器；及任选包含(b)在其中含有第二药物制剂的第二容器，其中第二药物制剂包含具有抗过度增殖活性的第二化合物。可选择或额外地，试剂盒还可包含第三容器，其包含药用缓冲液例如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格溶液和葡萄糖溶液。其还可包含从商业和使用者角度来看所期望的其它物质，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针头和注射器。

在试剂盒包含式I组合物和第二治疗剂的一些其它实施方案中，试剂盒可包含用于容纳分开的组合物的容器例如分开的瓶或分开的箔包装，然而分开的组合物也可包含在单一的未分开的容器中。典型地，试剂盒包含给药分开的组分的指导。当分开的组分优选以不同的剂量形式(例如口服和胃肠外)或以不同的剂量间隔来给药时或当主治医师需要对所组合的各个组分进行滴定时，试剂盒形式是特别有利的。

式I化合物的制备

式I化合物可通过以下合成途径来合成，所述合成途径包括与化学领域已知且尤其是借鉴本申请说明书的那些方法及用于其它杂环的那些方法类似的方法，所述其它方法参见：Comprehensive Heterocyclic Chemistry II,Editors Katritzky and Rees,Elsevier,1997,例如第3卷；Liebigs Annalen der Chemie,(9):1910-16,(1985)；Helvetica Chimica Acta,41:1052-60,(1958)；Arzneimittel-Forschung,40(12):1328-31,(1990)，将其各自明确地引入作为参考。原料通常可由商业来源例如AldrichChemicals(Milwaukee,WI)得到或使用本领域技术人员已知的方法来容易地制备(例如通过在Louis F.Fieser and Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis,v.1-23,Wiley,N.Y.(1967-2006ed.)或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4,Aufl.ed.Springer-Verlag,Berlin(包括增补)(也可由Beilstein在线数据库得到)中概述的方法来制备)。

可用于合成式I化合物的合成化学转化和保护基方法学(保护和脱保护)及必要的试剂和中间体是本领域已知的并参见例如R.Larock,Comprehensive OrganicTransformations,VCH Publishers(1989)；T.W.Greene and P.G.M.Wuts,ProtectiveGroups in Organic Synthesis,3^rd>

式I化合物可单独制备或以包含至少2种、例如5至1,000种或10至100种化合物的化合物库形式制备。式I化合物库可通过本领域技术人员已知的操作通过组合的“分裂和混合”措施或通过使用溶液相或固相化学的多平行合成来制备。因此，本申请另一个方面提供包含至少2种化合物或其药用盐的化合物库。

一般操作和实施例提供了制备式I化合物的示例性方法。本领域技术人员将认识到其它合成途径可用于合成式I化合物。尽管在附图、中间体和实施例中描述并讨论了具体的原料和试剂，但是可容易地替换为其它原料和试剂以提供多种衍生物和/或反应条件。另外，由所述方法制备的多种示例性化合物可在本公开的基础上使用本领域技术人员已知的常规化学方法来进一步修饰。

当制备式I化合物时，可能需要对中间体的远距离官能团(例如伯胺或仲胺)进行保护。对上述保护的需要将随着远距离官能团的性质和制备方法的条件而变化。合适的氨基保护基包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧基羰基(BOC)、苄基氧基羰基(CBz)和9-芴基亚甲基氧基羰基(Fmoc)。对上述保护的需要由本领域技术人员容易地确定。关于保护基及其使用的一般描述参见T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York,1991。

在制备式I化合物的方法中，可能有利的是将反应产物彼此和/或与原料分离。通过本领域常规技术将每步或多步的所需产物分离和/或纯化至所需要的均匀度。通常，上述分离涉及多相萃取、从溶剂或溶剂混合物中结晶、蒸馏、升华或色谱法。色谱法可涉及多种方法，包括例如：反相和正相色谱法；尺寸排阻色谱法；离子交换色谱法；高、中和低压液相色谱法和装置；小规模分析型色谱法；模拟移动床(SMB)和制备型薄层或厚层色谱法及小规模薄层和快速色谱法。

另一类分离方法涉及用所选择的试剂对混合物进行处理以与所需产物、未反应的原料、反应副产物等结合或以其它方式使所需产物、未反应的原料、反应副产物等是可分离的。上述试剂包括吸附剂或吸收剂例如活性炭、分子筛、离子交换介质等。可选择地，所述试剂可为酸(在碱性物质的情况下)、碱(在酸性物质的情况下)、结合剂例如抗体、结合蛋白、选择性螯合剂例如冠醚、液/液离子萃取试剂(LIX)等。对适当分离方法的选择取决于所涉及的物质的性质例如沸点和分子量(在蒸馏和升华中)、存在或不存在极性官能团(在色谱法中)、物质在酸性和碱性介质中的稳定性(在多相萃取中)等。

非对映异构体混合物可基于其物理化学差异通过本领域技术人员已知的方法例如色谱法和/或分级结晶被分离成其单独的非对映异构体。对映异构体可如下分离：对映异构体混合物通过与具有适当光学活性的化合物(例如手性助剂例如手性醇或Mosher’s酰氯)反应而转化为非对映异构体混合物，分离非对映异构体，然后将单独的非对映异构体转化(例如水解)为相应的纯的对映异构体。另外，一些本申请化合物可为阻转异构体(例如取代的联芳)且被认为是本申请一部分。对映异构体还可通过使用手性HPLC柱来分离。

基本上不含有其立体异构体的单一立体异构体例如对映异构体可通过对外消旋混合物进行拆分来得到，所述拆分所使用的方法为例如使用具有光学活性的拆分剂来形成非对映异构体(Eliel,E.and Wilen,S.“Stereochemistry of Organic Compounds”,JohnWiley&Sons,Inc.,New York,1994；Lochmuller,C.H.,(1975)J.Chromatogr.,113(3):283-302)。本申请手性化合物的外消旋混合物可通过任何合适的方法来分离，所述方法包括：(1)与手性化合物形成离子性非对映异构盐且通过分级结晶或其它方法来分离；(2)与手性衍生试剂形成非对映异构化合物，分离非对映异构体且转化为纯的立体异构体；和(3)在手性条件下直接分离基本上纯的或富集的立体异构体，例如在手性吸附剂上通过HPLC或SFC(超临界流体色谱)，参见White and Burnett(2005)Jour.of Chrom.A1074:175-185；和“Drug Stereochemistry,Analytical Methods and Pharmacology”,(1993)IrvingW.Wainer,Ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York。

在方法(1)中，非对映异构盐可如下形成：使对映异构体纯的手性碱例如马钱子碱、奎宁、麻黄碱、番木鳖碱、α-甲基-β-苯基乙基胺(安非他明)等与带有酸性官能团的不对称化合物例如羧酸和磺酸反应。可通过分级结晶或离子色谱法使非对映异构盐得以分离。为了分离氨基化合物的光学异构体，加入手性羧酸或磺酸例如樟脑磺酸、酒石酸、扁桃酸或乳酸可使非对映异构盐得以形成。

可选择地，通过方法(2)使待拆分的底物与手性化合物的一种对映异构体反应以形成非对映异构体对(E.and Wilen,S.“Stereochemistry of Organic Compounds”,JohnWiley&Sons,Inc.,1994,p.322)。非对映异构化合物可如下形成：使不对称化合物与对映异构体纯的手性衍生试剂例如薄荷基衍生物反应，接着分离非对映异构体且水解，得到纯的或富集的对映异构体。确定光学纯度的方法涉及制备外消旋混合物的手性酯[例如在碱存在下制备薄荷基酯例如(-)氯甲酸薄荷基酯或制备Mosher酯即乙酸α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基酯(Jacob III.J.Org.Chem.(1982)47:4165)]且就两种阻转异构性对映异构体或非对映异构体的存在分析¹H>

一般制备操作

图1显示了4-氨基吡唑化合物5的示例性合成。通过在合适的溶剂中或在纯态下用碱处理且接着加入烷基化试剂例如硫酸二甲酯将4-硝基-1H-吡唑1转化成1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物2。通过在合适的溶剂例如THF(四氢呋喃)中在适当温度例如-78℃用碱例如二(三甲基甲硅烷基)氨基锂(LHMDS)或nBuLi(丁基锂)处理可将化合物2转化成5-氯-4-硝基-1H-吡唑3。通过直接的SnAr或由过渡金属催化的交叉偶联反应例如Suzuki、Sonogashira、Heck、Buchwald、Goldberg条件在已知方法下可将化合物3转化成化合物4。通过合适的还原方法例如在四氢呋喃中用锌粉和甲酸铵处理或用H₂和过渡金属催化剂例如钯/炭进行氢化可由4合成4-氨基吡唑5。试剂R²Br和R²H的R²基团为形成制备式I化合物的中间体的前体。

图2显示了由噻唑-4-甲酸酯化合物7示例性合成2-取代的噻唑-4-甲酸化合物6。对7进行溴化，得到2-溴噻唑-4-甲酸酯化合物8，其通过Suzuki反应与钯催化和前催化剂及其中R³为芳基或杂芳基且X为硼酸或硼酸酯基团的R³-X试剂反应，得到2-取代的噻唑-4-甲酸酯化合物9。对酯进行水性碱水解，得到6。

Buchwald偶联反应可在Buchwald钯催化条件下用下表所列和以下文献所述的Buchwald前催化剂环钯配合物和配体试剂进行：Biscoe等人(2008)J.Am.Chem.Soc.130:6686-6687；Kinzel等人(2010)J.Am.Chem.Soc.132:14073-14075；Molander等人(2012)J.Am.Chem.Soc.134:11667-11673；Walker等人(2004)Angew.Chem.Int.Ed.43:1871；Billingsley等人(2007)Angew.Chem.Int.Ed.46:5359-5363；US6946560；US7026498；US7247731；US7560582；US6307087；US6395916；US7223879；US7858784，将其引入作为参考。上述试剂是市售的(Johnson Matthey Inc.,Wayne,PA；Sigma Aldrich Fine Chemical,St.Louis,MO；Strem Chemicals,Inc.,Newburyport,MA)。

图2显示了通过对5-氨基噻唑-4-甲酸酯例如7进行C-2溴化且随后进行Suzuki反应示例性合成2-取代的-4-羧基-5-氨基噻唑6。用溴化试剂在合适的溶剂中例如用NBS(N-溴琥珀酰亚胺)在二氯甲烷中可对5-氨基噻唑-4-甲酸酯例如7进行溴化，得到8。Suzuki型偶联反应可用于在式I化合物的合成中通过置换在噻唑、吡啶基、吡嗪基或嘧啶基环的2位的卤素来连接杂环或杂芳基。例如，可使2-溴(或氯)噻唑8与约1.5当量的芳基、杂环基或杂芳基硼酸或硼酸酯试剂R³-X和过量的碳酸钠水溶液在乙腈中反应。加入催化量或更多的低价钯试剂例如二(三苯基膦)二氯化钯(II)。各种硼酸或硼酸酯可用作试剂R³-X的X基团。硼酸酯包括频哪醇酯(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)。另外，杂环或杂芳基的氮原子可被保护成例如N-THP。试剂R³-X的R³基团如在式I化合物或制备式I化合物的有用前体中定义。在一些情况下，乙酸钾用于代替碳酸钠以调节水层的pH。在压力下在微波反应器例如Biotage>

在Suzuki偶联步骤中可使用多种钯催化剂以形成示例性式I化合物。低价的Pd(II)和Pd(0)催化剂可用于Suzuki偶联反应，包括PdCl₂(PPh₃)₂、Pd(t-Bu)₃、PdCl₂dppfCH₂Cl₂、Pd(PPh₃)₄、Pd(OAc)/PPh₃、Cl₂Pd[(Pet₃)]₂、Pd(DIPHOS)₂、Cl₂Pd(Bipy)、[PdCl(Ph₂PCH₂PPh₂)]₂、Cl₂Pd[P(对甲苯)₃]₂、Pd₂(dba)₃/P(对甲苯)₃、Pd₂(dba)/P(呋喃基)₃、Cl₂Pd[P(呋喃基)₃]₂、Cl₂Pd(PmePh₂)₂、Cl₂Pd[P(4-F-Ph)₃]₂、Cl₂Pd[P(C₆F₆)₃]₂、Cl₂Pd[P(2-COOH-Ph)(Ph)₂]₂、Cl₂Pd[P(4-COOH-Ph)(Ph)₂]₂及囊化催化剂PdEnCat^TM30、Pd>TMTPP30和Pd(II)EnCat^TMBINAP30(US2004/0254066)。

各种固体吸附性钯清除剂可用于在Suzuki、Suzuki-Miyaura或Buchwald反应后除去钯。钯清除剂的示例性实施方案包括硫醇和硫脲。其它钯清除剂包括硅胶、受控孔径玻璃(TosoHaas)和衍生化低交联聚苯乙烯QuadraPure^TMAEA、QuadraPure^TMIMDAZ、QuadraPure^TMMPA、QuadraPure^TMTU(Reaxa>

图3显示了偶联的吡唑-噻唑化合物10的示例性合成。4-氨基吡唑化合物5与2-取代的-4-羧基-5-氨基噻唑6用酰胺形成(肽)偶联试剂例如二环己基碳二亚胺(DCC)、二异丙基碳二亚胺(DIC)、HATU(O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐)、HBTU(O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐或PyBOP((苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷子基鏻六氟磷酸盐)在合适的溶剂例如二氯甲烷或DMF中偶联，形成10中的酰胺键(Hermanson,G.,Bioconjugate Techniques,第2版(2008)Academic Press,SanDiego)。5的Boc和其它保护基可在常规条件下除去，从而在HCl/二噁烷和水或三氟乙酸/二氯甲烷等条件下由5的4-氨基除去Boc、Fmoc或其它对酸敏感的保护基。

图4显示了由5-氯-4-硝基-1H-吡唑化合物3示例性合成6-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-3-胺化合物19例如其中R¹为甲基的6-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-3-胺。在碱例如碳酸钾存在下在合适的溶剂例如DMSO中或通过文献所述的类似方法用丙二酸二甲酯置换来自3的氯，得到丙二酸2-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)酯化合物11。在文献所述的碱性、酸性或这两种条件的组合下对11进行脱羧，得到2-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)乙酸烷基酯化合物12。使用合适的碱例如氢化钠在合适的溶剂例如DMF中或通过文献所述的方法对14进行烯丙基化，得到2-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)戊-4-烯酸烷基酯化合物13。可通过合适的还原试剂例如DIBAL在合适的溶剂例如THF中或通过文献所述的方法对13进行还原，得到2-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)戊-4-烯-1-醇化合物14。使用合适的碱例如氢化钠在合适的溶剂例如DMF中或通过文献所述的方法对式14化合物进行烯丙基化，可得到5-(1-(烯丙基氧基)戊-4-烯-2-基)-4-硝基-1H-吡唑化合物15。在合适的条件下使用Grubb’s或相关钌催化剂(RCM＝由钌催化的异位反应)对15进行环合异位反应，可得到4-硝基-5-(2,3,4,7-四氢氧杂-3-基)-1H-吡唑化合物16。用Grubb’s或Wilkinson’s催化剂对18进行异构化，可得到4-硝基-5-(2,3,4,5-四氢氧杂-3-基)-1H-吡唑化合物17。以一锅法使用文献所述的环合异位反应条件可将化合物15直接转化成17。使用文献所述的条件对17进行硼氢化，可得到6-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-3-醇化合物18，其可被氧化成酮，接着进行还原胺化，得到6-(4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-3-胺化合物19，或对其进行磺酰化，接着用胺试剂进行置换。

图5显示了由1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物2示例性合成5-(5-叠氮基-6-氟氧杂环庚烷-2-基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物26。用合适的碱例如二(三甲基甲硅烷基)氨基锂在合适的溶剂例如THF中在所需要的温度或通过文献所述的操作使2与戊-4-烯醛20反应，得到1-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)戊-4-烯-1-醇化合物21。将21与碳酸二烯丙基酯在合适的催化剂例如三(二亚苄基丙酮)-二钯(0)和三苯基膦存在下在溶剂例如二噁烷中加热或使用文献所述的方法，得到5-(1-(烯丙基氧基)戊-4-烯基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物22。通过在合适的溶剂例如甲苯中与合适的催化剂例如第1代Grubbs催化剂一起加热(RCM)或通过文献所述的方法使22环化，得到1-取代的-4-硝基-5-(2,3,4,7-四氢氧杂-2-基)-1H-吡唑化合物23。用环氧化试剂例如m-CPBA(间氯过氧苯甲酸)在溶剂例如二氯甲烷中或通过文献所述的类似方法处理23，得到5-(3,8-二氧杂二环[5.1.0]辛-4-基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物24。根据文献方法用叠氮化钠使24的环氧环开环，得到4-叠氮基-7-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-3-醇化合物25。用试剂例如在合适的溶剂例如DCM中或通过文献所述的方法对25进行氟化，得到26。

图6显示了由5-(1-(烯丙基氧基)戊-4-烯基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物22示例性合成5-(5-叠氮基-4-氟氧杂环庚烷-2-基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物31和5-(4-叠氮基-5-氟氧杂环庚烷-2-基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物32。通过在合适的溶剂例如二氯甲烷中与合适的催化剂例如第2代Grubbs催化剂一起加热(RCM)或通过文献所述的方法使22环化，得到1-取代的-4-硝基-5-(2,3,6,7-四氢氧杂-2-基)-1H-吡唑化合物27。用环氧化试剂例如m-CPBA在溶剂例如二氯甲烷中或通过文献所述的类似方法使27环氧化，得到5-(4,8-二氧杂二环[5.1.0]辛-3-基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物28。用叠氮化物试剂处理(叠氮化)28，可得到开环化合物5-叠氮基-2-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-醇29和5-叠氮基-7-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-醇30的混合物。用氟化试剂例如(Sigma-Aldrich)在合适的溶剂例如DCM中或通过文献所述的方法对29和30进行氟化，分别得到33和34。

图7显示了由1-取代的-4-硝基-5-(2,3,4,7-四氢氧杂-2-基)-1H-吡唑化合物23示例性合成5-(5-叠氮基-6-氟氧杂环庚烷-2-基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物35。在分子筛存在下在合适的溶剂例如二氯甲烷中用N-溴琥珀酰亚胺和乙酸处理23，接着在合适的溶剂例如甲醇中用碳酸钾处理或通过文献所述的方法，得到5-(3,8-二氧杂二环[5.1.0]辛-4-基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物33。根据文献方法用叠氮化钠使33的环氧环开环，得到4-叠氮基-7-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-3-醇化合物34。用氟化试剂例如在溶剂例如DCM中或通过文献所述的方法对34进行氟化，得到35。

图8显示了由5-氯-4-硝基-1H-吡唑化合物3示例性合成2-甲基-N-(2-取代的-7-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-基)丙-2-亚磺酰胺化合物40。通过与乙烯基三氟硼酸钾和碳酸铯一起在溶剂例如DMF和水中在合适的催化剂例如1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物存在下加热，接着用臭氧在合适的溶剂例如二氯甲烷中处理所得烯烃或使用文献所述的方法，使3进行Suzuki反应，得到1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-甲醛化合物36。用(R)-三甲基(1-(1-(三甲基甲硅烷基氧基)环丙基)丙-2-基氧基)甲硅烷化合物37和三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯在合适的溶剂例如二氯甲烷中处理36或使用文献(Minbiole等人(2005)Org.Lett.7:515)所述的方法，得到5-((5R,7R)-7-取代的-4,6-二氧杂螺[2.5]辛-5-基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物38。用合适的Lewis酸例如四氯化钛在溶剂例如二氯甲烷中处理38或使用文献所述的方法，得到重排产物即(2R,7R)-2-取代的-7-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-酮化合物39。通过与(R)-2-甲基丙-2-亚磺酰胺一起在合适的Lewis酸例如乙醇钛(IV)存在下在溶剂例如THF中加热且接着用硼氢化钠在合适的溶剂中处理或使用文献所述的方法对39进行还原胺化，得到40。

图9显示了由1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-甲醛化合物36示例性合成(2R,3R,4S,5R)-5-羟基-3,5-二甲基-2-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)四氢-2H-吡喃-4-基氨基甲酸叔丁酯化合物47。将36与二烯((1E,3Z)-1-甲氧基-2-甲基戊-1,3-二烯-3-基氧基)三甲基甲硅烷48一起在Resolve-Al^TMEuFOD(三(1,1,1,2,2,3,3-七氟-7,7-二甲基-4,6-辛二酮酸)铕(III),Sievers’试剂,三(6,6,7,7,8,8,8-七氟-2,2-二甲基-3,5-辛二酮酸)铕,Sigma-Aldrich产品编号160938,CAS编号17631-68-4)存在下在合适的溶剂例如氯仿中加热或使用文献所述的方法，得到3,5-二甲基-2-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-2H-吡喃-4(3H)-酮化合物41。用合适的还原剂例如硼氢化钠在七水合氯化铈(III)存在下在合适的溶剂例如甲醇中或使用文献所述的类似方法处理41，得到3,5-二甲基-2-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-3,4-二氢-2H-吡喃-4-醇化合物42。将42与对甲苯磺酸一起在甲醇中加热或使用文献所述的方法，得到重排产物即5-(6-甲氧基-3,5-二甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物43。用Lewis酸例如三氟化硼乙醚合物和还原剂例如三乙基甲硅烷在合适的溶剂例如二氯甲烷中或使用文献所述的方法处理43，得到5-(3,5-二甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物44。用环氧化试剂例如m-CPBA或通过文献所述的类似方法对44进行环氧化，得到5-(1,5-二甲基-3,7-二氧杂二环[4.1.0]庚-4-基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物45。根据文献方法用叠氮化钠使45的环氧环开环，得到4-叠氮基-3,5-二甲基-6-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)四氢-2H-吡喃-3-醇化合物46。通过与三甲基膦一起在THF和水中加热对46进行Staudinger叠氮化物还原，接着用合适的保护基例如Boc保护基使用文献所概括或描述的那些方法对所得胺进行保护，得到47。

图10显示了由1-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)戊-4-烯-1-醇化合物21示例性合成3-甲氧基-2-甲基-7-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-基氨基甲酸叔丁酯化合物52。用3-氯丁-1-烯或乙酸丁-3-烯-2-基酯对21进行由钯催化的O-烷基化，得到5-(1-(丁-3-烯-2-基氧基)戊-4-烯基)-1-取代的-4-硝基-1H-吡唑化合物49。对49进行Grubbs催化剂环合，得到1-取代的-5-(7-甲基-2,3,4,7-四氢氧杂-2-基)-4-硝基-1H-吡唑化合物50。用间氯过氧苯甲酸对50进行烯烃环氧化，接着进行叠氮化物环氧环开环，得到4-叠氮基-2-甲基-7-(1-取代的-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-3-醇化合物51。用碘甲烷对51进行羟基甲基化，用三苯基膦进行叠氮化物还原及进行Boc保护，得到52，其可用作制备式I化合物的中间体。

实施例

中间体1>

向含有4-硝基-1H-吡唑(5g,44.2mmol)的500mL圆底烧瓶中加入氢氧化钠(1M,200mL)和硫酸二甲酯(31mL,330mmol)。将混合物在室温搅拌72h并用CH₂Cl₂(2×150mL)萃取混合物。分离有机层并蒸馏掉溶剂，得到1-甲基-4-硝基-1H-吡唑，其为白色固体(4.30g,76％)。

遵循WO2007/99326，向500mL 3颈圆底烧瓶中加入1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(4.30g,33.8mmol)和THF(12mL)。将混合物冷却至-78℃并历时20min经由加料漏斗滴加二(三甲基甲硅烷基)氨基锂/THF(1M,88.4mL,90mmol)。将棕色混合物搅拌30min并历时30min温热至-45℃。将混合物冷却回-78℃并历时15min经由加料漏斗加入溶于THF(20mL)中的六氯乙烷(10.5g,44.2mmol)。将混合物搅拌2.5h，由-78℃温热至-40℃并通过LCMS监测反应。反应完成后，用饱和NH₄Cl溶液(150mL)淬灭反应混合物并加入乙酸乙酯(100mL)。分离有机层并用乙酸乙酯(100mL)萃取水层。用水(150mL)洗涤合并的有机层，经Na₂SO₄干燥并蒸馏掉有机溶剂。经由快速色谱(CH₂Cl₂/7％MeOH)纯化粗产物，得到5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑，其为白色固体(1.40g,20％)。¹H>3)δ8.13(s,1H),3.92(s,3H)；ESIMSm/z＝162.0(M+1)

中间体2>

向(E)-2-氰基-2-(羟基亚氨基)乙酸乙酯(20g,0.14mol)于水(250mL)中的搅拌的溶液中加入饱和NaHCO₃水溶液(160mL)，接着加入Na₂S₂O₄(60g,0.423mol)。将反应混合物温热直至35℃并再搅拌2h。然后将其用NaCl(150g)饱和并用DCM(3×350mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩，得到2-氨基-2-氰基乙酸乙酯，其为红色油状物(7.8g,43％)，所述油状物未经进一步纯化即用于下一步。¹H-NMR(CDCl₃,500MHz)δ(ppm):4.45(s,1H),4.34(q,J＝7.0Hz,2H),1.36(t,J＝7.0Hz,3H)；MS(ESI)m/z:129[M+H]⁺。

中间体3>

向化合物2-氨基-2-氰基乙酸乙酯(0.64g,5mmol)于DCM(15mL)中的搅拌的溶液中加入饱和NaHCO₃水溶液(15mL)。在剧烈搅拌下加入苯甲酰氯(0.84g,6mmol)。将反应混合物在环境温度再搅拌30min，此时将其用DCM(3×15mL)萃取。用盐水(20mL)洗涤合并的有机层并经Na₂SO₄干燥，过滤，真空浓缩。通过硅胶柱色谱(5:1PE/EtOAc)纯化所得残余物，得到2-苯甲酰氨基-2-氰基乙酸乙酯(0.25g,22％)，其为白色固体：¹H-NMR(CDCl₃,500MHz)δ(ppm):7.83-7.85(m,2H),7.59(t,J＝7.5Hz,1H),7.49(t,J＝7.5Hz,2H),7.02(d,J＝7.0Hz,1H),5.72(d,J＝7.5Hz,1H),4.40(q,J＝7.5Hz,2H),1.39(t,J＝7.0Hz,3H)；MS(ESI)m/z:233[M+H]⁺。

中间体4>

步骤A：三氟甲磺酸3-氟-4-硝基苯基酯

在0℃向3-氟-4-硝基苯酚(10.00g,63.65mmol)和三氟甲磺酸酐(20.0mL,119mmol,1.87当量)于无水DCM(100.0mL)中的搅拌的溶液中滴加三乙胺(33.27mL,238.7mmol,3.75当量)。将所得棕色反应混合物在0℃搅拌2h，然后在环境温度搅拌16h。用水缓慢淬灭反应混合物并用DCM(3×100mL)萃取。用盐水(1×)洗涤合并的有机层，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。经由用0至65％DCM/己烷洗脱的快速柱色谱纯化粗油状物，得到15.67g(85.1％)三氟甲磺酸3-氟-4-硝基苯基酯，其为油状物。¹H>3)δ8.23(t,J＝8.52Hz,1H),7.34-7.27(m,2H)。

步骤B：4-环丙基-2-氟-1-硝基苯

将三氟甲磺酸3-氟-4-硝基苯基酯(7.15g,24.73mmol)、环丙基硼酸(2.55g,29.67mmol)、与二氯甲烷络合(1:1)的[1,1’-二(二苯基膦基)-二茂铁]二氯化钯(II)(1.62g,1.98mmol)和2M碳酸铯水溶液(19.8mL,39.56mmol)于甲苯(39.5mL)中的混合物脱气20min。将反应混合物在90℃在N₂下搅拌2.5h。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(200mL)稀释并经硅藻土垫过滤。用盐水洗涤滤液，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。经由用0至75％DCM/己烷洗脱的快速柱色谱纯化粗残余物，得到4.11g(91.7％)4-环丙基-2-氟-1-硝基苯，其为油状物。¹H>

步骤C：4-环丙基-2-氟苯胺

将4-环丙基-2-氟-1-硝基苯(3.36g,18.55mmol)、铁粉(4.35g,77.9mmol)、2M氯化铵/水(19.8mL)和3:2:1v/v EtOH:THF:H₂O(86mL)的混合物在N₂下回流搅拌17h。将反应混合物冷却至室温并经硅藻土垫过滤。用乙酸乙酯(约50mL)充分淋洗硅藻土垫。向滤液中缓慢加入饱和NaHCO₃水溶液以中和反应混合物。用乙酸乙酯(3×200mL)萃取反应混合物。用水和盐水洗涤合并的有机层，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。经由用0至75％乙酸乙酯/己烷洗脱的快速柱色谱纯化粗残余物，得到2.80g(99％)橙色油状物，其在20℃固化。¹H>3)δ6.75-6.63(m,3H),3.57(s,2H),1.87-1.72(m,1H),0.93-0.83(m,2H),0.64-0.51(m,2H)；MS(ESI)m/z:152.3[M+H]⁺。

步骤D：4-环丙基-2-氟-1-碘苯

在0℃向4-环丙基-2-氟苯胺(1.63g,10.78mmol)于水(20mL)中的搅拌的混合物中滴加浓硫酸(8.6mL,15.0当量)同时保持温度恒定在0℃。加入亚硝酸钠(781.0mg,11.32mmol,1.05当量)于水(2.7mL)中的溶液并搅拌5分钟。然后将该所得反应混合物加至碘化钾(3.76g,22.64mmol,2.1当量)于水(9.7mL)中的溶液中并将反应混合物在60℃搅拌3h。向冷却的反应混合物中加入DCM(400mL)。分离两相层并用DCM(2×150mL)萃取水层。用饱和Na₂S₂O₄水溶液、水和盐水洗涤合并的有机层，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。经由用100％庚烷洗脱的快速柱色谱纯化粗残余物，得到2.01g(71.28％)4-环丙基-2-氟-1-碘苯，其为澄清油状物。¹H>3)δ7.57(dd,J＝8.0,6.9Hz,1H),6.76(dd,J＝9.4,1.9Hz,1H),6.64(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),1.94-1.77(m,1H),1.09-0.95(m,2H),0.79-0.56(m,2H)。

步骤E：在高压管中放置4-环丙基-2-氟-1-碘苯(1.32g,5.04mmol)、硼酸二频哪醇酯(1.53g,6.04mmol)、乙酸钾(1.98g,20.15mmol)、[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(368.5mg,0.50mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(35mL)。将反应混合物用N₂脱气15分钟。将容器密封并将反应混合物在90℃搅拌16h。用乙酸乙酯(75mL)和水(25mL)稀释冷却的反应混合物，然后经硅藻土垫过滤。分离两相层并用水和盐水洗涤有机层，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。经由用0至75％EA/庚烷洗脱的快速柱色谱纯化粗残余物，得到859.0mg(65.1％)2-(4-环丙基-2-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷，其为澄清油状物。¹H>3)δ7.58(s,1H),6.83(d,J＝7.7Hz,1H),6.68(d,J＝10.8Hz,1H),1.91-1.81(m,1H),1.33(s,12H),0.98(dd,J＝8.3,2.0Hz,2H),0.74-0.66(m,2H)。

中间体5>

遵循实施例1的操作，由1-乙基-4-硝基吡唑起始，得到5-氯-1-乙基-4-硝基-1H-吡唑，其为无色固体(1.3g,74％)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.16(s,1H),4.26(q,J＝7Hz,2H),1.50(t,J＝7Hz,3H)。

中间体6>

遵循实施例1的操作，由1-环丙基甲基-4-硝基吡唑起始，得到5-氯-1-环丙基甲基-4-硝基-1H-吡唑，其为无色油状物(1.16g,56％)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.17(s,1H),4.07(d,J＝7Hz,2H),1.39-1.28(m,1H),0.66-0.59(m,2H),0.50-0.40(m,2H)。

中间体7>

遵循实施例1的操作，由1-环丙基-4-硝基吡唑起始，得到5-氯-1-环丙基-4-硝基-1H-吡唑，其为无色固体(0.23g,63％)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),3.62-3.54(m,1H),1.38-1.28(m,2H),1.25-1.13(m,2H)。

中间体8>

向冷却至-70℃的1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑(1.0g,5.13mmol)于无水THF(20mL)中的搅拌的溶液中滴加二(三甲基甲硅烷基)氨基锂的溶液(1M于THF中,8.47mL,8.47mmol)。在-70℃搅拌40min后，历时20min将反应混合物温热至-55℃。重新冷却至-70℃后，缓慢加入全氯乙烷(1.74g,7.34mmol)于THF(10mL)中的溶液并将反应混合物在-70℃搅拌1.5h。先后加入饱和氯化铵水溶液(30mL)和水(15mL)并用EtOAc(3×100mL)萃取混合物。合并的有机层经MgSO₄干燥并减压除去溶剂。通过硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化残余物，得到5-氯-1-(2,2-二氟乙基)-4-硝基-1H-吡唑，其为灰白色固体(438mg,37％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.24(s,1H),6.18(tt,J＝54.8,4.2Hz,1H),4.58(td,J＝12.8,4.2Hz,2H)。

中间体9>

遵循实施例37，对1-环丙基-4-硝基吡唑进行氯化，得到5-氯-1-环丙基-4-硝基-1H-吡唑，其为无色固体(0.23g,63％)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),3.62-3.54(m,1H),1.38-1.28(m,2H),1.25-1.13(m,2H)。

中间体10>

遵循实施例37，对1-(4-甲氧基苄基)-4-硝基-1H-吡唑进行氯化，得到5-氯-1-(4-甲氧基苄基)-4-硝基-1H-吡唑，其为黄色固体(536mg,46％)。¹H>3)δ8.17(s,1H),7.25(d,J＝8.3Hz,2H),6.89(d,J＝8.3Hz,2H),5.30(s,2H),3.80(s,3H)。

中间体11>

向1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-胺(990mg,6.0mmol)于乙酸(5mL)中的搅拌的溶液中滴加乙酸酐(0.57mL,6.0mmol)并将混合物在室温搅拌16h。向反应混合物中加入更多的乙酸酐(0.57mL,6.0mmol)，将其在冰浴中冷却以滴加发烟硝酸(0.28mL,6mmol)。将反应混合物在室温搅拌7h并减压除去溶剂。将残余物溶于EtOH(15mL)中并加入浓盐酸(10mL)。将混合物加热回流16h。减压浓缩后，将残余物在DCM(50mL)与5％NaHCO₃水溶液(100mL)之间分配。过滤混合物并用DCM(100mL)萃取水层。合并有机层，经MgSO₄干燥并减压除去溶剂，得到淡橙色固体(540mg)。将该固体(540mg,2.57mmol)溶于溴仿(2.9mL,33mmol)中并向溶液中滴加叔丁腈(0.92mL,7.71mmol)。将反应混合物在室温搅拌15min，然后在145℃加热1.5h。减压除去溶剂并通过硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化残余物，得到5-溴-4-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑，其为淡黄色固体(536mg,33％历经四步)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.30(s,1H),4.86(q,J＝7.8Hz,2H)。

中间体12>

遵循中间体5的操作，由1-乙基-4-硝基吡唑起始，得到5-氯-1-乙基-4-硝基-1H-吡唑，其为无色固体(1.3g,74％)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.16(s,1H),4.26(q,J＝7Hz,2H),1.50(t,J＝7Hz,3H)。

中间体13>

将4-硝基吡唑(1.13g,10mmol)和K₂CO₃(3.4g,25mmol)于MeCN(50mL)中的混合物在室温搅拌15min，然后加入3-(溴甲基)-3-甲基氧杂环丁烷(1.8g,11mmol)。将反应混合物在室温搅拌18h，过滤并用MeCN洗涤滤饼。减压浓缩滤液并通过硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化残余物，得到1-((3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基)-4-硝基-1H-吡唑，其为无色固体(1.43g,73％)。将溶于MeOH(20mL)中的一部分该固体(206mg,1.04mmol)用甲酸铵(260mg,4.13mmol)和10％钯/炭(50mg)处理。将混合物在80℃加热1.5h，冷却，经硅藻土过滤并减压浓缩滤液，得到1-((3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-胺，其为淡粉色胶状物(160mg,92％)。¹H>3)δ7.15(s,1H),6.97(s,1H),4.66(d,J＝6.1Hz,2H),4.37(d,J＝6.1Hz,2H),4.19(s,2H),2.91(s,2H),1.23(s,3H)。

中间体14>

遵循中间体5的操作，由1-环丙基甲基-4-硝基吡唑起始，得到5-氯-1-环丙基甲基-4-硝基-1H-吡唑，其为无色油状物(1.16g,56％)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.17(s,1H),4.07(d,J＝7Hz,2H),1.39-1.28(m,1H),0.66-0.59(m,2H),0.50-0.40(m,2H)。

中间体15>

将5-氯-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(200mg,1.25mmol)、二水合氟化钾(235mg,2.5mmol)和3,4-二氢-2H-吡喃-6-硼酸频哪醇酯(394mg,1.88mmol)于THF(3mL)中的混合物通过鼓泡氮气脱气15min。加入三(二亚苄基丙酮)二钯/三叔丁基鏻鎓四氟硼酸盐混合物(摩尔比:1/1.2,151mg,0.13mmol)并将混合物再脱气10min，然后在微波中在85℃加热2h。加入水(10mL)并用EtOAc(3×5mL)萃取混合物。使合并的有机层通过相分离管柱并减压浓缩。经由硅胶色谱(0-5％EtOAc/异己烷)纯化，得到5-(3,4-二氢-2H-吡喃-6-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑，其为黄色固体(215mg,82％)。¹H>3)δ8.04(s,1H),5.22(t,J＝3.9Hz,1H),4.20(t,J＝5.1Hz,2H),3.88(s,3H),2.31-2.24(m,2H),2.05-1.96(m,2H)。

中间体16>

使氮气鼓泡通过3-氯-2-甲基-4-硝基-吡唑(16g,100mmol)、乙烯基三氟硼酸钾(18g,134mmol)和碳酸铯(3.7M于水中,50mL,190mmol)于DMF(100mL)中的溶液。加入1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(900mg,1.10mmol)并继续脱气30min。将反应混合物在110℃加热18h。加入更多的1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(900mg,1.10mmol)并继续加热24h。加入更多的1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(400mg,0.49mmol)并继续加热4h。将反应混合物冷却至室温并加入盐水(200mL)和EtOAc(500mL)。用水(4×300mL)洗涤有机层，分离，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-40％EtOAc/异己烷)纯化，得到1-甲基-4-硝基-5乙烯基-1H-吡唑，其为无色固体(9.1g)。使臭氧鼓泡通过该固体(9.1g,59mmol)于DCM(400mL)中的冷却至-78℃的溶液。当溶液变蓝时，停止加入臭氧。使氮气通过溶液直至蓝色消失。将混合物温热至室温并用氮气冲洗15min。加入无水二甲硫醚(5mL)并将混合物温热至室温。搅拌12h后，减压除去溶剂。加入DCM(150mL)并用水(50mL)洗涤混合物。用DCM(3×100mL)萃取水层并用盐水(100mL)洗涤合并的有机层，分离，经Na₂SO₄干燥并浓缩，得到2-甲基-4-硝基-吡唑-3-甲醛，其为黄橙色固体(6.6g,43％历经两步)。¹H>3)δ10.51(s,1H),8.11(s,1H),4.23(s,3H)。

中间体17>

在0℃向1-(2-羟基丙基)环丙醇(2.0g,17.2mmol)于DCM(35mL)中的溶液中先后加入2,6-卢剔啶(5mL,42.9mmol)和三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯(6mL,32.9mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌18h。在0℃加入额外量的2,6-卢剔啶(5mL,42.9mmol)和三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯(6mL,32.9mmol)。将混合物搅拌1h并用饱和NaHCO₃水溶液(30mL)淬灭。用DCM(50mL)萃取混合物并用0.1M>3水溶液(100mL)。用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤有机层，分离，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到1-甲基-5-(5-甲基-6,8-二氧杂螺[2.5]辛-7-基)-4-硝基-吡唑，其为无色固体(1.0g,44％历经两步)。¹H>3)δ8.00(s,1H),6.59(s,1H),4.29-4.02(m,4H),2.33-2.23(m,1H),1.33(d,J＝6.2Hz,3H),1.17-1.12(m,1H),1.02-0.89(m,2H),0.70-0.52(m,2H)。

中间体18>

在-78℃向1-甲基-5-(5-甲基-6,8-二氧杂螺[2.5]辛-7-基)-4-硝基-吡唑(1.0g,3.95mmol)于DCM(20mL)中的溶液中滴加四氯化钛(6.6mL,59.3mmol)。当加入到一半时，反应混合物变得较难搅拌，因此加入更多的DCM(10mL)。将棕色浆液温热至0℃并搅拌1h。小心地加入固体碳酸钠(5g)，接着加入饱和NaHCO₃水溶液(100mL)和DCM(100mL)。用饱和NaHCO₃水溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤有机层，分离，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-酮，其为无色固体(749mg,75％)。¹H>3)δ8.02(s,1H),5.69(dd,J＝11.0,2.4Hz,1H),4.21-4.14(m,1H),4.01(s,3H),3.07-2.97(m,1H),2.79-2.63(m,3H),2.19-2.07(m,1H),2.07-1.91(m,1H),1.30(d,J＝6.2Hz,3H)。

中间体19>

在氮气下向2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-酮(65mg,0.26mmol)于THF(1mL)中的冷却至-78℃的溶液中滴加L-selectride的溶液(1M于THF中,0.28mL,0.28mmol)。1h后，用MeOH(1mL)淬灭混合物并温热至室温。加入EtOAc(10mL)和盐水(10mL)并分离两层。用EtOAc(3×10mL)萃取水层并用盐水(10mL)洗涤合并的有机层，分离，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-醇，其为无色固体(54mg,81％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.01(2s,1H),5.63-5.59和5.56-5.50(2m,1H),4.26-4.01(m,5H),3.88-3.73(m,1H),2.21-1.72(m,4H),1.28-1.23(m,3H),0.99-0.81(m,2H)。

中间体20>

在-78℃向1-甲基-4-硝基-吡唑(9.7g,76.7mmol)和戊-4-烯醛(10.0g,84.4mmol)于THF(250mL)中的溶液中滴加LiHMDS于THF中的溶液(1M,192mL,191.7mmol)。将反应混合物温热至-40℃并搅拌4h。用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭反应混合物，温热至室温并减压除去溶剂。将残余物溶于EtOAc(100mL)中并用水(30mL)洗涤。分离有机层，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-30％EtOAc/异己烷)纯化，得到澄清油状物。在氮气下将该油状物(7.1g,33.6mmol)、碳酸二烯丙基酯(14.33g,100.9mmol)和三苯基膦(880mg,3.35mmol)溶于二噁烷(236mL)中，然后加入三(二亚苄基丙酮)-二钯(0)(780mg,0.84mmol)。将反应混合物在50℃加热1h并减压除去溶剂。经由硅胶柱色谱(0-40％EtOAc/异己烷)纯化，得到5-(1-烯丙基氧基戊-4-烯基)-1-甲基-4-硝基-吡唑，其为黄色油状物(8.35g,43％历经两步)。¹H>3)δ8.06(s,1H),5.90-5.73(m,2H),5.46(dd,J＝8.8,5.1Hz,1H),5.29-5.16(m,2H),5.10-5.00(m,2H),4.04(s,3H),3.92(d,J＝5.8Hz,2H),2.37-2.25(m,1H),2.22-2.09(m,1H),2.09-1.96(m,1H),1.84(dddd,J＝13.7,9.2,6.9,5.1Hz,1H)。

中间体21>-2-基)吡唑

将5-(1-烯丙基氧基戊-4-烯基)-1-甲基-4-硝基-吡唑(5g,19.92mmol)溶于甲苯(1L)中并将混合物脱气30min，然后加入亚苄基-二(三环己基膦)二氯化钌(二(三环己基膦)亚苄基二氯化钌(IV),“第1代Grubbs催化剂”,CAS No.172222-30-9,Sigma-AldrichProduct No.579726,US6111121)(878mg,0.99mmol)。将反应混合物再脱气20min，然后加热回流2h，冷却至室温并经硅藻土过滤。减压浓缩滤液。将残余物溶于EtOAc(200mL)中，用1MHCl水溶液(150mL)、水(150mL)、饱和NaHCO₃水溶液(2×150mL)和盐水(150mL)洗涤。分离有机层，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-20％EtOAc/异己烷)纯化，得到1-甲基-4-硝基-5-(2,3,4,7-四氢氧杂-2-基)吡唑，其为澄清油状物(3.3g,75％)。¹H>3)δ8.02(s,1H),5.99-5.91(m,1H),5.83-5.76(m,1H),5.59(dd,J＝9.4,3.0Hz,1H),4.42(dd,J＝15.8,5.5Hz,1H),4.24-4.17(m,1H),4.06(s,3H),2.58-2.48(m,1H),2.46-2.36(m,1H),2.14(ddt,J＝14.1,6.8,3.5Hz,1H),1.99-1.88(m,1H)。

中间体22>

在0℃向AD-mixα(1.51g)于叔丁醇(5.4mL)和水(5.5mL)中的溶液中加入1-甲基-4-硝基-5-(2,3,4,7-四氢氧杂-2-基)吡唑(240mg,1.08mmol)于叔丁醇(0.8mL)中的溶液。将反应混合物在0℃搅拌1h，然后缓慢加入固体硫代硫酸钠(1.4g)。将混合物再搅拌1h并用EtOAc(20mL)稀释。用EtOAc(4×15mL)萃取水层并将有机层合并，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-2.5％MeOH/EtOAc)纯化，得到7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3,4-二醇，其为无色固体(30mg,10％)。¹H>3)δ8.06-7.98(m,1H),5.49(dd,J＝8.9,5.7Hz,1H),4.20(dd,J＝13.7,3.2Hz,1H),4.16-4.10(m,1H),4.09(s,3H),4.04-3.97(m,1H),3.73(dd,J＝13.7,2.5Hz,1H),2.53-2.46(m,1H),2.32(dtd,J＝14.3,8.8,4.9Hz,1H),2.23(d,J＝5.8Hz,1H),2.19-2.01(m,2H),1.84-1.75(m,1H)。

中间体23>

在氮气下历时2h向(3R)-3-羟基丁酸乙酯(2.5g,18.9mmol)于THF(100mL)中的溶液中先后滴加异丙醇钛(IV)(6.02mL,19.9mmol)于THF(15mL)中的溶液和乙基溴化镁于乙醚中的溶液(3M,30.2mL,90.7mmol)。将反应混合物再搅拌2h，然后冷却至0℃并通过缓慢加入饱和氯化铵水溶液(75mL)淬灭。将溶液过滤并用DCM(3×20mL)萃取滤液。用盐水(75mL)洗涤合并的有机层，分离，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到1-[(2R)-2-羟基丁基]-环丙醇，其为黄色油状物(1.50g)。向该油状物(900mg,7.76mmol)于DCM(15mL)中的冷却至0℃的溶液中先后加入2,6-卢剔啶(2.26mL,19.40mmol)和三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯(3.1mL,17.10mmol)。将反应混合物在0℃搅拌2h，然后加入额外的2,6-卢剔啶(2.26mL,19.40mmol)和三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯(3.1mL,17.10mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌18h。将混合物冷却至0℃，用0.1MHCl水溶液(15mL)淬灭并用DCM(50mL)萃取。用0.1M>3溶液(10mL)。用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤有机层，分离，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到1-甲基-5-(5-乙基-6,8-二氧杂螺[2.5]辛-7-基)-4-硝基-吡唑，其为无色固体(655mg,4％历经三步)。¹H>3)δ8.00(s,1H),6.58(s,1H),4.13(s,3H),4.00-3.92(m,1H),2.29(t,J＝12.4Hz,1H),1.75-1.47(m,3H),1.00-0.87(m,5H),0.67-0.53(m,2H)。

中间体24>

遵循中间体5的操作，由1-甲基-5-(5-乙基-6,8-二氧杂螺[2.5]辛-7-基)-4-硝基-吡唑起始，得到2-乙基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-酮，其为无色固体(240mg,13％历经两步)。¹H>3)δ8.04(s,1H),5.67(dd,J＝11.0,2.4Hz,1H),4.02(s,3H),3.94(dd,J＝10.2,5.2Hz,1H),3.04(td,J＝13.3,3.3Hz,1H),2.79-2.63(m,3H),2.20-2.12(m,1H),2.05-1.92(m,1H),1.67-1.57(m,2H),0.94(t,J＝7.4Hz,3H)。

中间体25>

向2-乙基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-酮(120mg,0.45mmol)于THF(3mL)中的溶液中先后加入(R)-2-甲基丙-2-亚磺酰胺(70mg,0.58mmol)和乙醇钛(IV)(0.30mL,1.12mmol)。将反应混合物加热回流4h，然后冷却至室温。在-60℃将粗溶液滴加至硼氢化钠(69mg,1.80mmol)于THF(3mL)中的溶液中。将反应混合物温热至0℃，用MeOH(3mL)和盐水(50mL)淬灭并在室温搅拌18h。经用EtOAc(200mL)洗涤的硅藻土过滤混合物。用EtOAc(3×50mL)萃取水层并用盐水(150mL)洗涤合并的有机层，分离，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-10％MeOH/DCM)纯化，得到N-(2-乙基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基)-2-甲基-丙-2-亚磺酰胺，其为非对映异构体的混合物(比例5:2)，其为无色固体(118mg,71％历经两步)。¹H>3)δ8.03和8.02(2s,1H),5.60-5.51(m,1H),4.08和4.06(2s,3H),3.83-3.66(m,2H),3.62-3.50(m,1H),3.22和3.15(d,J＝6.2和4.0Hz,1H),2.11-1.96(m,4H),1.76(s,1H),1.63-1.54(m,2H),1.28-1.15(m,9H),0.91(td,J＝7.4,2.4Hz,3H)。

中间体26>

遵循中间体13的操作，由2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-酮起始，得到N-(2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基)-2-甲基-丙-2-亚磺酰胺，其为灰白色固体(208mg,40％历经两步)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.01(s,1H),5.63-5.51(m,1H),4.05(s,3H),3.86-3.72(m,2H),3.19-3.11(m,1H),2.22-1.69(m,6H),1.29-1.20(m,12H)。

中间体27>

向锌粉(<10μm,10.3g,159mmol)于无水Et₂O(120mL)中的混悬液中加入几滴三甲基甲硅烷基氯以引发反应。然后将反应混合物加热回流5min并小心地加入几滴1,2-二溴乙烷。滴加2-溴乙酸叔丁酯的溶液(18.8mL,127mmol)并将反应混合物加热回流1h。在室温加入2-甲基-4-硝基-吡唑-3-甲醛(77wt％于DMSO中,6.4g,31.8mmol)于THF(120mL)的溶液并继续搅拌150min。用EtOAc(200mL)和饱和氯化铵/1M>2SO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到3-羟基-3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)丙酸叔丁酯，其为无色固体(6.52g,77％)。向该固体(6.52g,24mmol)于二噁烷(168mL)中的溶液中加入碳酸二烯丙基酯(10.2g,72mmol)。将反应混合物用氮气脱气30min。一次性加入三(二亚苄基丙酮)-二钯(0)(557mg,0.60mmol)和三苯基膦(630mg,2.40mmol)并继续脱气15min。将反应混合物在65℃加热1h并冷却至室温。加入盐水(100mL)和EtOAc(150mL)并将各层分离。用EtOAc(3×150mL)萃取水层并用盐水(100mL)洗涤合并的有机层，分离，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到3-(烯丙基氧基)-3-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)丙酸叔丁酯，其为无色固体(7.7g,99％)。向该固体(7.7g,24mmol)于DCM(80mL)中的溶液中加入TFA(40mL)并将混合物在室温搅拌18h。冷却至0℃后，小心地加入碳酸钠(5g)、饱和NaHCO₃水溶液(100mL)和DCM(200mL)直至冒泡停止。缓慢加入浓HCl直至溶液为pH>2SO₄干燥并减压浓缩，得到3-烯丙基氧基-3-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)丙酸，其为黄色油状物(4.33g,55％历经三步)。¹H>3)δ11.5-10.3(br>

中间体28>-4-酮

在0℃在氮气下向3-烯丙基氧基-3-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)丙酸(4.33g,17mmol)于DCM(48mL)中的溶液中加入草酰氯(4.37mL,51mmol)，接着小心地加入DMF(0.05mL)以引发酰化反应。将反应混合物在室温搅拌3h并减压浓缩。将残余物溶于DME(28mL)中，加入乙烯基三丁基锡(2.48mL,8.50mmol)并将混合物用氮气脱气30min。加入反式-苄基(氯)-二(三苯基膦)钯(II)(129mg,0.17mmol)并继续脱气10min。将反应混合物加热至65℃且保持1h并冷却至室温。减压浓缩并经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到5-(烯丙基氧基)-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)戊-1-烯-3-酮，其为黄色糖浆状物(2.76g,61％)。在35℃将该糖浆状物(250mg,0.94mmol)于甲苯(90mL)中的溶液用氮气脱气30min。向反应混合物中加入溶于甲苯(2mL)中的Zhan 1B催化剂(26mg,0.04mmol)并继续脱气15min。在35℃搅拌1h后，将反应混合物冷却至室温并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-3,7-二氢-2H-氧杂-4-酮，其为无色固体(107mg,30％历经三步)。¹H>3)δ8.05(s,1H),6.44(ddd,J＝12.8,3.4,2.3Hz,1H),6.15(m,1H),6.01(dd,J＝11.1,3.4Hz,1H),4.72(ddd,J＝19.8,3.4,1.7Hz,1H),4.61(ddd,J＝19.6,2.4Hz,1H),4.08(s,3H),3.20-3.12(m,2H)。

中间体29>

向2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-3,7-二氢-2H-氧杂-4-酮(440mg,0.42mmol)于MeCN(3mL)中的溶液中加入Amberlite IRA 900F树脂(79mg,0.19mmol)和三甲基甲硅烷基叠氮(1.2mL,9.35mmol)。将反应混合物在65℃在防爆屏后加热24h，冷却至室温并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到纯的6-叠氮基-2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-酮及含有产物和原料的混合级分。将其减压浓缩并再次经受相同的反应条件。最后经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到6-叠氮基-2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-酮，其为无色固体(449mg)。向该固体(449mg,1.60mmol)中加入(50％于THF中,5mL)并将混合物在室温搅拌18h。加入DCM(50mL)并将反应混合物冷却至0℃。然后小心地加入饱和NaHCO₃水溶液(30mL)。用DCM(3×30mL)萃取水层并经Na₂SO₄干燥合并的有机层且减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到5-(6-叠氮基-4,4-二氟-氧杂环庚烷-2-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑(非对映异构体1-主要的)，其为无色固体(264mg,47％历经两步)。¹H>3)δ8.03(s,1H),5.67-5.58(m,1H),4.18-3.91(m,3H),4.08(s,3H),2.79-2.63(m,1H),2.63-2.40(m,3H)。

中间体30>

遵循中间体17的操作，还得到5-(6-叠氮基-4,4-二氟-氧杂环庚烷-2-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑(非对映异构体2-次要的)，其为无色固体(69mg,12％历经两步)。¹H>3)δ8.02(s,1H),5.73(dd,J＝10.9,4.5Hz,1H),4.34-4.29(m,1H),4.01(s,3H),4.01-3.93(m,1H),3.53(dd,J＝11.4,11.4Hz,1H),2.71-2.49(m,4H)。

中间体32>

向1-甲基-4-硝基-5-(2,3,4,7-四氢氧杂-2-基)吡唑(1.00g,4.74mmol)于DCM(25mL)中的溶液中加入m-CPBA(70-75％,1.75g,7.11mmol)并将反应混合物在室温搅拌18h。用DCM(50mL)稀释反应混合物，用饱和NaHCO₃水溶液(50mL)、水(50mL)和盐水(50mL)洗涤。分离有机层，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-30％EtOAc/异己烷)纯化，得到外消旋的5-(5,8-二氧杂二环[5.1.0]辛-4-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑，其为无色固体(490mg,43％)。¹H>3)δ8.22-7.87(m,1H),5.07(d,J＝9.9Hz,1H),4.50(dd,J＝14.5,3.1Hz,1H),4.05(s,3H),3.93(d,J＝14.4Hz,1H),3.35(t,J＝4.5Hz,1H),3.13(t,J＝3.6Hz,1H),2.55-2.47(m,1H),2.31-2.21(m,1H),2.16-2.04(m,1H),1.79(dd,J＝14.4,1.8Hz,1H)。

中间体33>

将5-(5,8-二氧杂二环[5.1.0]辛-4-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑(220mg,0.92mmol)于MeOH/水(6mL/1.2mL)中的溶液用氯化铵(122mg,2.30mmol)和叠氮化钠(299mg,4.60mmol)处理并将混合物在70℃在防爆屏后加热16h。用EtOAc(100mL)萃取反应混合物并用水(2×50mL)洗涤有机层，经MgSO₄干燥并减压浓缩。将残余物(500mg,1.77mmol)溶于无水DMF(15mL)中，冷却至0℃，加入氢化钠(60％于矿物油中,106mg,2.66mmol)并将混合物搅拌15min。加入碘甲烷(0.17mL,2.66mmol)并将反应混合物温热至室温且搅拌16h。加入水(20mL)并用EtOAc(2×150mL)萃取混合物。经MgSO₄干燥合并的有机层并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-30％EtOAc/异己烷)纯化，得到4-叠氮基-5-甲氧基-1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷，其为黄色油状物(280mg)。将该油状物(270mg,0.91mmol)于THF/水(13mL/2.5mL)中的溶液用三苯基膦(263mg,1.00mmol)处理并将反应混合物在70℃在防爆屏后加热18h。减压浓缩反应混合物。将残余物在0℃溶于无水DCM(15mL)中并先后加入一缩二碳酸二叔丁酯(238mg,1.09mmol)和DIPEA(0.66mL,4.55mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌3h，然后用水(20mL)淬灭并用DCM(100mL)萃取。分离有机层，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-40％EtOAc/异己烷)纯化，分离到四种非对映异构体。次要级分得到N-(4-甲氧基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(外消旋体)，其为无色固体(60mg,17％历经四步)。¹H>3)δ8.02(s,1H),5.58-5.51(m,1H),4.82(br>

中间体34>

遵循中间体20的操作，经由手性SFC进一步纯化所分离的主要级分(290mg)，得到((3S,4R,7S)-3-甲氧基-7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯，其为无色固体(101mg,29％历经四步)。¹H>3)δ8.02(s,1H),5.39(dd,J＝10.6,3.6Hz,1H),4.75(br>

中间体35>

遵循中间体21的操作，还得到((3R,4S,7R)-3-甲氧基-7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯，其为无色固体(101mg,29％历经四步)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.05-7.99(m,1H),5.39(dd,J＝10.6,3.6Hz,1H),4.75(br>

中间体36>

将5-(5,8-二氧杂二环[5.1.0]辛-4-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑(130mg,0.54mmol)于MeOH/水(3mL/0.6mL)中的溶液用氯化铵(72mg,1.35mmol)和叠氮化钠(177mg,2.72mmol)处理并将混合物在70℃在防爆屏后加热18h。用EtOAc(100mL)萃取反应混合物并用水(3×20mL)、盐水(20mL)洗涤有机层，分离，经MgSO₄干燥并减压浓缩。向所得残余物(100mg,0.35mmol)于DCM(3mL)中的溶液中加入(50％于THF中,0.32mL,0.89mmol)并将混合物在室温搅拌16h。用DCM(30mL)稀释混合物，在冰/水浴中冷却并通过滴加饱和NaHCO₃水溶液(30mL)淬灭。将所得混合物搅拌10min。分离有机层，经Na₂SO₄干燥并减压除去溶剂。经由硅胶柱色谱(0-40％EtOAc/异己烷)纯化，得到油状物(90mg)。将该油状物(90mg,0.35mmol)于THF/水(4mL/0.8mL)中的溶液用三苯基膦(92mg,0.35mmol)处理并将反应混合物在70℃在防爆屏后加热18h。减压浓缩混合物。将残余物在0℃溶于无水DCM(7mL)中并加入一缩二碳酸二叔丁酯(84mg,0.38mmol)和DIPEA(0.22mL,1.6mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌3h。加入水(10mL)并用DCM(20mL)萃取混合物。分离有机层，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-40％EtOAc/异己烷)纯化，得到N-(3-氟-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯，其为对映异构体的混合物，其为灰白色固体(70mg,36％历经四步)。¹H>3)δ8.01(s,1H),5.55-5.49(m,1H),5.10-4.92(m,2H),4.36-4.09(m,2H),4.02(s,3H),3.97-3.83(m,1H),2.32-2.18(m,1H),2.02-1.89(m,2H),1.83(d,J＝14.0Hz,1H),1.47(s,9H)。

中间体37>

经由手性SFC进一步纯化N-(3-氟-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯，得到((3R,4R,7S)-3-氟-7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯，其为灰白色固体(52mg)。¹H>3)δ8.01(s,1H),5.55-5.49(m,1H),5.09-4.91(m,2H),4.36-4.10(m,2H),4.01(s,3H),3.91(ddd,J＝26.6,14.4,2.2Hz,1H),2.31-2.19(m,1H),2.02-1.95(m,2H),1.83(d,J＝13.9Hz,1H),1.47(s,9H)。

中间体38>

遵循中间体24的操作，还得到((3S,4S,7R)-3-氟-7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯，其为灰白色固体(61mg)。¹H>3)δ8.01(s,1H),5.55-5.49(m,1H),5.10-4.92(m,2H),4.36-4.09(m,2H),4.02(s,3H),3.97-3.83(m,1H),2.32-2.18(m,1H),2.02-1.89(m,2H),1.83(d,J＝14.0Hz,1H),1.47(s,9H)。

中间体39>

将5-(1-烯丙基氧基戊-4-烯基)-1-甲基-4-硝基-吡唑(7.08g,28.2mmol)溶于DCM(910mL)中并将混合物脱气30min，然后加入第2代Grubbs催化剂(1.19g,1.41mmol)。将反应混合物在40℃加热18h并减压浓缩。先后经由硅胶柱色谱(0-10％EtOAc/异己烷)和反相制备型HPLC纯化，得到1-甲基-4-硝基-5-(四氢氧杂-2-基)吡唑的异构体的混合物(66/34)，其为澄清油状物(2.3g)。向该油状物(2.3g,10.31mmol)于DCM(50mL)中的溶液中加入m-CPBA(70-75％,3.56g,14.40mmol)并将反应混合物在室温搅拌4h。用DCM(50mL)稀释反应混合物并用饱和NaHCO₃水溶液(2×50mL)、水(50mL)和盐水(50mL)洗涤有机层，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-30％EtOAc/异己烷)纯化，得到5-(4,8-二氧杂二环[5.1.0]辛-5-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑，其为无色固体(1.0g,14％历经两步)。¹H>3)δ8.02(s,1H),5.51-5.44(m,1H),4.02(s,3H),3.93(dt,J＝12.7,3.4Hz,1H),3.62-3.53(m,1H),3.35-3.27(m,2H),2.58-2.51(m,1H),2.41-2.25(m,3H)。

中间体40>

向5-(4,8-二氧杂二环[5.1.0]辛-5-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑(1.04g,4.35mmol)于4:1MeOH:水(30mL)中的溶液中加入氯化铵(0.58g,10.88mmol)和叠氮化钠(1.41g,21.75mmol)。将混合物在70℃在防爆屏后加热16h。减压除去MeOH并加入EtOAc(20mL)。用饱和NaHCO₃水溶液(20mL)洗涤有机层，通过相分离管柱并减压浓缩。经由硅胶色谱(0-60％EtOAc/异己烷)纯化，得到5-叠氮基-2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-醇，其为淡黄色胶状物(718mg,58％产率)。¹H>3)δ8.03(s,1H),5.76(dd,J＝9.3,3.2Hz,1H),4.18-4.10(m,1H),4.08-4.04(m,4H),3.91(ddd,J＝9.4,6.6,6.2Hz,1H),3.79(ddd,J＝12.6,8.6,3.5Hz,1H),2.44(ddd,J＝15.3,9.4,3.8Hz,1H),2.37-2.29(m,1H),2.24(d,J＝3.2Hz,1H),2.12(ddd,J＝15.3,5.7,3.2Hz,1H),2.06-1.96(m,1H)。

中间体41>

遵循中间体26的操作，还得到5-叠氮基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-醇，其为淡黄色胶状物(285mg,23％产率)。¹H>3)δ8.04(s,1H),5.64(dd,J＝10.8,1.4Hz,1H),4.06-3.96(m,4H),3.95-3.83(m,2H),3.72(ddd,J＝10.8,9.0,4.9Hz,1H),2.43(d,J＝2.5Hz,1H),2.28(ddd,J＝14.1,4.9,1.4Hz,1H),2.21-2.12(m,2H),2.09-2.00(m,1H)。

中间体42>

向5-叠氮基-2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-醇(282mg,1.00mmol)于DCM(6mL)中的冷却至0℃的溶液中滴加的溶液(50％于THF中,0.46mL,1.25mmol)。将混合物温热至室温并搅拌16h。加入额外的(50％于THF中,0.23mL,0.63mmol)并将混合物在室温搅拌5h。在冰浴中冷却后，缓慢加入饱和NaHCO₃水溶液(10mL)。使有机层通过相分离管柱并减压浓缩。经由硅胶色谱(0-50％EtOAc/异己烷)纯化残余物，得到氟代化合物，其为澄清胶状物(205mg)。向该胶状物(200mg,0.70mmol)于THF(5mL)和水(1mL)中的溶液中加入三苯基膦(202mg,0.77mmol)并将混合物在60℃加热2h。用EtOAc(10mL)稀释混合物并用盐水(2×5mL)洗涤。使有机层通过相分离管柱并减压浓缩。将残余物溶于DCM(2mL)中并加入DIPEA(0.24mL,1.40mmol)和一缩二碳酸二叔丁酯(183mg,0.84mmol)。将混合物在室温搅拌2h。加入水(2mL)并用DCM(3×2mL)萃取混合物。使合并的有机层通过相分离管柱并减压浓缩。经由硅胶色谱(0-50％EtOAc/异己烷)纯化，得到N-(5-氟-2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯，其为澄清胶状物(240mg,66％历经三步)。¹H>3)δ8.02(s,1H),5.62(dd,J＝11.3,2.3Hz,1H),5.28-4.79(m,2H),4.29-4.19(m,1H),4.15-4.07(m,1H),4.04(s,3H),3.77(ddd,J＝12.9,8.1,4.5Hz,1H),2.41-2.07(m,3H),2.04(d,J＝10.8Hz,1H),1.44(s,9H)。

中间体43>

在氮气下向5-叠氮基-2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-醇(352mg,1.25mmol)于无水THF(6mL)中的冷却至0℃的溶液中加入氢化钠(60％于矿物油中,55mg,1.38mmol)。搅拌20min后，加入碘甲烷(0.09mL,1.38mmol)并将反应混合物温热至室温且搅拌90min。将混合物再次冷却至0℃并加入更多的氢化钠(60％于矿物油中,55mg,1.38mmol)。搅拌20min后，加入更多的碘甲烷(0.09mL,1.38mmol)并将反应混合物温热至室温且搅拌5h。加入水(5mL)并用EtOAc(3×5mL)萃取混合物。使合并的有机层通过相分离管柱并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-50％EtOAc/异己烷)纯化，得到中间体甲酯，其为澄清胶状物(155mg)。将该胶状物(154mg,0.52mmol)于THF/水(5mL/1mL)中的溶液用三苯基膦(150mg,0.57mmol)处理并将反应混合物在60℃在防爆屏后加热2h。用EtOAc(10mL)稀释混合物并用盐水(2×5mL)洗涤。使有机层通过相分离管柱并减压浓缩。将残余物溶于无水DCM(2mL)中并加入DIPEA(0.18mL,1.04mmol)和一缩二碳酸二叔丁酯(136mg,0.62mmol)。将反应混合物在室温搅拌3h。加入水(2mL)并用DCM(3×2mL)萃取混合物。使有机层通过相分离管柱并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-50％EtOAc/异己烷)纯化，得到N-(5-甲氧基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯，其为澄清胶状物(190mg,41％历经三步)。¹H>3)δ8.03(s,1H),5.67(dd,J＝10.5,2.0Hz,1H),4.96(s,1H),4.33(s,1H),4.06(s,3H),4.02-3.84(m,2H),3.62(d,J＝5.2Hz,1H),3.44(s,3H),2.52(dddd,J＝15.1,9.9,7.5,2.1Hz,1H),2.20-2.01(m,2H),1.90-1.78(m,1H),1.48(s,9H)。

中间体44>

向2-甲基-4-硝基-吡唑-3-甲醛(600mg,3.87mmol)于CDCl₃(20mL)中的溶液中加入Danishefsky’s二烯(836mg,5.81mmol)和Resolve-Al^TMEuFOD(157mg,0.39mmol)。将反应混合物在80℃在密封管中加热24h。加入额外的Resolve-Al^TMEuFOD(250mg,0.62mmol)并再继续加热24h。减压浓缩反应混合物。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-2H-吡喃-4(3H)-酮，其为黄色固体(710mg,82％)。在氮气下将一部分该固体(300mg,1.35mmol)溶于THF(10mL)中并冷却至-78℃。滴加L-selectride的溶液(1M于THF中,1.48mL,1.48mmol)并将混合物在-78℃搅拌30min。将混合物用MeOH(2mL)淬灭并温热至室温。加入EtOAc(30mL)和盐水(30mL)并将各层分离。用EtOAc(3×20mL)萃取水层，然后用盐水(30mL)洗涤合并的有机层，分离，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)四氢吡喃-4-酮，其为无色固体(224mg,61％历经两步)。¹H>3)δ8.06(s,1H),5.70(dd,J＝11.8,3.3Hz,1H),4.49(ddd,J＝11.8,7.5,1.3Hz,1H),4.15(s,3H),3.94-3.86(m,1H),2.83-2.63(m,3H),2.58-2.50(m,1H)。

中间体45>

在-70℃向2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)四氢吡喃-4-酮(300mg,1.33mmol)于DCM(12mL)中的溶液中先后滴加三氟化硼乙醚合物(0.75mL,1.73mmol)和(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷溶液(2M于己烷中,0.87mL,1.73mmol)。将反应混合物在-70℃搅拌90min，用水(10mL)淬灭，用DCM(12mL)稀释并温热至室温。使有机层通过相分离管柱并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-酮(其为无色固体)(121mg)及其区域异构体2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-酮(151mg)。在0℃向7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-酮(121mg,0.51mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中逐份加入NaBH₄(23mg,0.61mmol)。继续搅拌1h并用1M>2SO₄干燥并减压浓缩，得到7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-醇，其为非对映异构体的1:1混合物，其为无色油状物(85mg,27％历经两步)。产物未经进一步纯化即以非对映异构体的1/1混合物形式使用。¹H>3)δ8.02和8.01(s,1H),5.61-5.56和5.54-5.50(m,1H),4.26-4.14(m,1H),4.07和4.04(s,3H),3.90-3.80和3.81-3.63(m,1H),2.20-1.80(m,8H)。

中间体46>

向1-甲基-4-硝基-5-(2,3,4,7-四氢氧杂-2-基)吡唑(1.0g,4.5mmol)于DCM(18mL)中的溶液中加入分子筛，接着加入NBS(0.80g,4.48mmol)和乙酸(0.26mL,4.48mol)。将反应混合物在室温搅拌60h。用DCM(30mL)稀释混合物并用水(15mL)、饱和NaHCO₃水溶液(15mL)和盐水(15mL)洗涤。分离有机层，经MgSO₄干燥并减压除去溶剂。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到中间体溴乙酸酯，其为区域异构体的混合物，其为澄清油状物(1.17g)。重复所述操作，得到更多的物质。向该油状物(1.55g,4.3mmol)于MeOH(60mL)中的溶液中一次性加入K₂CO₃(2.66g,19.2mmol)。将该混合物搅拌1h，然后加入水(50mL)。加入EtOAc(150mL)并将各层分离。有机层经MgSO₄干燥并减压除去溶剂，得到5-(5,8-二氧杂二环[5.1.0]辛-4-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑，其为澄清油状物(0.86g,61％历经两步)。¹H>3)δ8.02(s,1H),5.53-5.45(m,1H),4.53(dd,J＝13.5,5.2Hz,1H),4.07(s,3H),3.58-3.48(m,1H),3.36-3.25(m,2H),2.55-2.42(m,1H),2.07-1.87(m,3H)。

中间体47>

遵循中间体23的操作，由5-(5,8-二氧杂二环[5.1.0]辛-4-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑(中间体33)起始，得到N-(3-氟-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯(290mg,53％历经四步)，其为灰白色固体。¹H>3)δ8.02(s,1H),5.50(dd,J＝9.9,3.8Hz,1H),4.96-4.73(m,2H),4.14-3.95(m,3H),4.03(s,3H),2.30-2.16(m,3H),1.95-1.84(m,1H),1.47(s,9H)。

中间体48>

向2-甲基-4-硝基-吡唑-3-甲醛(487mg,3.14mmol)于CDCl₃(12mL)中的溶液中加入[(Z)-1-[(E)-2-甲氧基-1-甲基-乙烯基]丙-1-烯氧基]-三甲基-甲硅烷(944mg,4.71mmol)和Resolve-Al^TMEuFOD(127mg,0.31mmol)。将反应混合物在80℃在密封管中加热18h。将反应混合物冷却至室温并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到3,5-二甲基-2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-2,3-二氢吡喃-4-酮，其为非对映异构体的混合物，其为黄色油状物(829mg)。将该油状物(829mg,3.14mmol)和七水合氯化铈(III)(4.8g,12.56mmol)于MeOH(10mL)中的溶液在室温搅拌15min。冷却至0℃后，逐份加入硼氢化钠(143mg,3.8mmol)并将混合物在0℃搅拌1h。用1M>4干燥并减压浓缩。将残余物溶于MeOH(40mL)中并用对甲苯磺酸一水合物(87mg)处理。将混合物加热回流18h并减压浓缩。将残余物溶于DCM(30mL)中并用NaHCO₃水溶液(2×20mL)洗涤有机层，用盐水(20mL)洗涤，通过相分离管柱并减压浓缩，得到5-(6-甲氧基-3,5-二甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑，其为黄色油状物(558mg,51％历经三步)。¹H>3)δ8.15-7.98(m,1H),5.90(d,J＝3.6Hz)和5.78(d,J＝3.2Hz)(1H),5.72(d,J＝5.6Hz)和5.64(d,J＝10.8Hz)(1H),4.80和4.76(2s,1H),4.16和4.06(2s,3H),3.42和3.40(2s,3H),2.65-2.58(m,1H),1.77和1.65(2s,3H),0.90(d,J＝7.2Hz)和0.83(d,J＝7.2Hz)(3H)。

中间体49>

向5-(6-甲氧基-3,5-二甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑(100mg,0.38mmol)于DCM(1mL)中的冷却至-78℃的溶液中加入三氟化硼乙醚合物(0.14mL,1.13mmol)和三乙基甲硅烷(0.36mL),2.68mmol)。在-78℃搅拌1h后，将反应混合物温热至室温并搅拌18h。加入饱和NaHCO₃水溶液(5mL)和DCM(5mL)并使有机层通过相分离管柱且减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-60％EtOAc/异己烷)纯化，得到5-(3,5-二甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑，其为黄色油状物。重复所述反应，得到更多的物质。向5-(3,5-二甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑(305mg,1.29mmol)于DCM(6.5mL)中的冷却至0℃的溶液中加入m-CPBA(70-75％,382mg,1.54mmol)并将混合物在0℃搅拌90min。加入更多的m-CPBA(70-75％,191mg,0.774mmol)并历时6h将混合物缓慢温热至室温。经用DCM(15mL)洗涤的硅藻土过滤混合物并用饱和NaHCO₃水溶液(2×10mL)洗涤滤液。使有机层通过相分离管柱并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-60％EtOAc/异己烷)纯化，得到5-(2,6-二甲基-4,7-二氧杂二环[4.1.0]庚-3-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑，其为单一非对映异构体，其为灰白色固体(189mg,53％历经两步)。¹H>3)δ8.08(s,1H),5.32-5.28(m,1H),4.15-4.08(m,1H),4.06(s,3H),3.78(d,J＝12.9Hz,1H),3.30(d,J＝5.6Hz,1H),2.71-2.61(m,1H),1.38(s,3H),0.92(d,J＝7.0Hz,3H)。

中间体50>

遵循中间体27的操作，由5-(2,6-二甲基-4,7-二氧杂二环[4.1.0]庚-3-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑起始，得到4-叠氮基-3,5-二甲基-6-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)四氢吡喃-3-醇，其为灰白色固体(140mg,63％)。¹H>3)δ8.09(s,1H),5.74(d,J＝2.9Hz,1H),4.14(s,2H),3.79-3.64(m,3H),3.58(s,1H),2.58(qdd,J＝7.6,2.9,2.2Hz,1H),1.81(s,1H),1.25(s,3H),1.18(d,J＝7.6Hz,3H)。

中间体51>

将4-叠氮基-3,5-二甲基-6-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)四氢吡喃-3-醇(140mg,0.47mmol)于THF/水(1mL/0.2mL)中的溶液用三苯基膦(373mg,1.42mmol)处理并将反应混合物在65℃在防爆屏后加热18h。加入更多的THF(1mL)及三甲基膦的溶液(1M于甲苯中,1mL,1.0mmol)。将混合物在65℃在防爆屏后加热3h。减压除去溶剂并将残余物溶于无水DCM(4mL)中。先后加入一缩二碳酸二叔丁酯(115mg,0.53mmol)和DIPEA(0.18mL,1.05mmol)并将反应混合物在室温搅拌72h。减压浓缩混合物。经由硅胶柱色谱(0-60％EtOAc/异己烷)纯化，得到N-[5-羟基-3,5-二甲基-2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)四氢吡喃-4-基]氨基甲酸叔丁酯，其为灰白色固体(112mg,64％历经两步)。¹H>3)δ8.05(s,1H),5.52(d,J＝2.7Hz,1H),4.11-4.01(m,6H),2.67-2.58(m,1H),2.54(s,1H),1.61(s,1H),1.48(s,9H),1.36(s,3H),0.98(d,J＝7.2Hz,3H)。

中间体52>

遵循中间体30的操作，还得到2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)四氢吡喃-4-醇，其为非对映异构体的混合物，其为黄色胶状物(91mg,12％历经两步)。¹H>3)δ8.06和8.03(2s,1H),5.88(dd,J＝8.3,6.1Hz)和5.70(dd,J＝11.8,3.2Hz)(1H),4.49(dd,J＝11.8,7.4Hz)和4.40(s)(1H),4.15-3.72(m,2H),4.15和4.09(s,3H),2.85-2.55(m,1H),2.03-1.89(m,3H),1.79-1.66(m,1H)。

中间体53>

在氮气下在室温将碳酸钾(15.40g,111.42mmol)一次性加至5-氯-1-甲基-4-硝基-吡唑(6.0g,37.140mmol)和丙二酸叔丁酯·甲酯(8.74g,50.139mmol)于无水DMSO(100mL)中的搅拌的溶液中。将混合物在75℃加热3小时，然后冷却并在室温静置过夜。将混合物倒入水(500mL)中，用2N HCl(80ml,pH 5)酸化并用EtOAc(2×250mL,2×200ml)萃取。将合并的有机物干燥(MgSO₄)并减压除去溶剂。经由硅胶色谱(0-30％EtOAc/庚烷)纯化残余物，得到2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)丙二酸1-叔丁酯·3-甲酯，其为无色固体(10.3g,92.7％)。

中间体54>

将2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)丙二酸1-叔丁酯·3-甲酯(6.92g,23.1mmol)和甲酸(100mL)的混合物在50℃加热5小时，然后冷却至室温。减压除去甲酸，用盐水稀释残余物并用DCM萃取3次。将合并的有机物干燥(MgSO₄)并减压除去溶剂。经由硅胶色谱(0-60％EtOAc/庚烷)纯化残余物，得到2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)乙酸甲酯(4.15g,90％)。

中间体55>

在0℃向2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)乙酸甲酯(869mg,4.36mmol)于无水DMF(10mL)中的溶液中加入氢化钠(218mg,5.45mmol,60质量％)，混合物立即变成暗红色。在0℃搅拌15min后，缓慢加入烯丙基溴(0.57mL,6.54mmol)，在0℃搅拌10min，然后在室温搅拌1h。将反应混合物用水(20mL)淬灭并用EA(200mL,50mL)萃取。用水(15×3mL)、盐水(10mL)洗涤合并的有机层，干燥(MgSO₄)并减压除去溶剂。经由硅胶色谱(0-100％EtOAc/庚烷)纯化残余物，得到2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)戊-4-烯酸甲酯(713mg,68％)。¹H>

中间体56>

在氮气气氛下在0℃将DIBAL-H(1.0mol/L)于甲苯中的溶液(16.03mmol,16mL)加至2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)戊-4-烯酸甲酯(959mg,4.01mmol)于THF(16mL)中的溶液中。将混合物在0℃搅拌30min。在0℃将1N HCl(25mL)溶液缓慢加至反应混合物中，接着加入乙酸乙酯(30mL)。分离后，用饱和NaHCO₃溶液(30mL)和盐水(30mL)洗涤有机层。用乙酸乙酯萃取合并的水层直至在水层中不再有所期望的产物。将有机层合并，随后干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发，得到浅棕色油状物(610mg)。在使用0-100％乙酸乙酯/庚烷的硅胶上纯化粗物质，得到2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)戊-4-烯-1-醇，其为浅黄色固体(676mg,80％)。

中间体57>

在0℃向2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)戊-4-烯-1-醇(91mg,0.43)于无水DMF(5mL)中的溶液中加入氢化钠(20mg,0.49mmol,60质量％)。在0℃搅拌15min后，缓慢加入烯丙基溴(79mg,0.64mmol)，在0℃搅拌10min，然后温热至室温且保持2h。将反应混合物用水(10ml)淬灭并用EA(3×50ml)萃取。用盐水洗涤合并的有机层并浓缩至干。经由硅胶色谱(0-100％EtOAc/庚烷)纯化残余物，得到5-[1-(烯丙基氧基甲基)丁-3-烯基]-1-甲基-4-硝基-吡唑(84mg,78％)。

中间体58>-3-基)吡唑

将1,3-二(2,4,6-三甲基苯基)-2-咪唑烷亚基)二氯(苯基亚甲基)(三环己基膦)钌(“第2代Grubb催化剂”,CAS Reg.No.246047-72-3,Sigma-AldrichProduct No.569747,US6111121,US7329758)(375mg,0.42mmol)于甲苯(15ml)中的溶液加至5-[1-(烯丙基氧基甲基)丁-3-烯基]-1-甲基-4-硝基-吡唑(527mg,2.10mmol)于甲苯(115mL)中的溶液中。将所得溶液加热回流(120℃)2.5h。冷却至室温后，减压除去溶剂并经由硅胶色谱(0-100％EtOAc/庚烷)纯化残余物，得到1-甲基-4-硝基-5-(2,3,4,5-四氢氧杂-3-基)吡唑(133mg,30％)。

中间体59>

在0℃将硼烷二甲硫醚络合物(2.0mol/L)于THF中的溶液(0.91mL,1.82mmol)加至1-甲基-4-硝基-5-(2,3,4,5-四氢氧杂-3-基)吡唑(204mg,0.91mmol)于无水THF(8mL)中的溶液中。将混合物在0℃搅拌15min，然后温热至室温且保持2h。加入1M NaOH(1.5mL)和过氧化氢(30质量％于水中,0.8mL)并将混合物在室温搅拌2h。将反应混合物用水淬灭并用DCM(2×)和EA(1×)萃取。用盐水(10ml)洗涤合并的有机层并浓缩至干。经由硅胶色谱(0-100％EtOAc/庚烷)纯化残余物，得到6-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-醇(53mg,24％)。

中间体60>

向6-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-醇(53mg,0.22mmol)于DCM(6mL)中的溶液中加入Dess-Martin高碘剂(192mg,0.44mmol)和碳酸氢钠(93mg,1.10mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，用水淬灭并用DCM(3×)萃取。将合并的有机层浓缩至干并经由硅胶色谱(0-100％EtOAc/庚烷)纯化，得到6-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-酮(53mg,定量的)。

中间体61>

将6-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-酮(53mg,0.23mmol)、乙酸铵(219mg,2.76mmol)、氰基硼氢化钠(38mg,0.57mmol)和几粒分子筛溶于甲醇(2mL)中。加入乙酸(35mg,0.57mmol)并将混合物在室温在氮气气氛下搅拌3天。用饱和碳酸氢钠淬灭反应混合物并用DCM(3×)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO₄)并减压除去溶剂。将残余物溶于DCM(5mL)中并加入一缩二碳酸二叔丁酯(63mg,0.69mmol)和DIPEA(0.067mL,0.38mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，然后经由硅胶色谱(0-100％EtOAc/庚烷)纯化，得到N-[6-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(53mg,81％)。

中间体62>

遵循中间体23的操作，由5-(5,8-二氧杂二环[5.1.0]辛-4-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑(中间体33)起始，得到N-[4-氟-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯和N-[3-氟-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯的不可分离的混合物，其为油状物(290mg,53％历经四步)。¹H>3)δ8.02(s,1H),5.58-5.47(m,1H),4.96-4.73(m,2H),4.14-3.93(m,5H),2.30-2.16(m,3H),2.04-1.83(m,2H),1.47(s,9H)。

中间体63>

将deoxo-Fluor的溶液(50％于THF中,0.576mL,1.56mmol)滴加至5-叠氮基-2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-醇(353mg,1.25mmol,中间体27)于DCM(6mL)中的冰冷的溶液中。将混合物温热至室温同时搅拌16h，然后在冰浴中冷却并缓慢加入饱和NaHCO₃水溶液(10mL)。使有机层通过相分离管柱并减压浓缩。经由硅胶色谱(0-50％EtOAc/异己烷)纯化，得到5-(5-叠氮基-4-氟氧杂环庚烷-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑，其为澄清胶状物。向该胶状物(145mg,0.51mmol)于THF(5mL)和水(1mL)中的溶液中加入三苯基膦(147mg,0.56mmol)并将混合物在60℃加热2h。将混合物用EtOAc(10mL)稀释并用盐水(2×5mL)洗涤。使有机层通过相分离管柱并减压浓缩。将残余物溶于DCM(2mL)中并加入DIPEA(0.178mL,1.02mmol)和一缩二碳酸二叔丁酯(134mg,0.61mmol)。将混合物在室温搅拌2h。加入水(2mL)并用DCM(3×2mL)萃取混合物。使合并的有机层通过相分离管柱，减压浓缩并经由硅胶色谱(0-50％EtOAc/异己烷)纯化残余物，得到N-[5-氟-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯，其为澄清胶状物(180mg,39％历经三步)。¹H>3)δ8.01(s,1H),5.54(dd,J＝10.5,4.2Hz,1H),5.10-4.92(m,2H),4.21-4.09(m,2H),4.05(s,3H),3.74-3.62(m,1H),2.57-2.38(m,1H),2.35-2.15(m,2H),1.91-1.81(m,1H),1.46(s,9H)。

中间体64>

先后向5-(5,8-二氧杂二环[5.1.0]辛-4-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑(2.85g,11.9mmol,中间体19)于MeOH(60mL)和水(11.5mL)中的溶液中加入NH₄Cl(1.58g,29.8mmol)和叠氮化钠(3.87g,59.5mmol)。将反应混合物在70℃加热18h，然后冷却至室温。减压除去溶剂并将残余物溶于EtOAc(150mL)中。用盐水(50mL)洗涤有机层，分离，经MgSO₄干燥并减压浓缩，得到叠氮基醇，其为橙色油状物，其为区域异构体的80/20混合物。向该油状物(1.9g,6.7mmol)于DCM(40mL)中的溶液中加入Dess-Martin高碘剂(1.8g,4.26mmol)并将混合物在室温搅拌3h。加入饱和NaHCO₃水溶液(50mL)和20％硫代硫酸钠溶液(50mL)并将反应混合物搅拌30min直至观察到盐完全溶解。用DCM(50mL)稀释混合物并分离有机层，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-50％EtOAc/异己烷)纯化，得到4-叠氮基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-酮，其为油状物(1.05g,86％历经两步)。¹H>3)δ8.05(s,1H),5.38(dd,J＝10.1,2.7Hz,1H),4.63-4.51(m,2H),4.30-4.20(m,1H),4.08(s,3H),2.29-2.16(m,4H)。

中间体65>

向4-叠氮基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-酮(440mg,1.57mmol,中间体55)于DCM(10mL)中的溶液中加入(50％于THF中,1.42mL,3.92mmol)并将混合物在室温搅拌18h。加入DCM(20mL)，将混合物冷却至0℃并小心地加入饱和NaHCO₃水溶液(20mL)。用DCM(3×20mL)萃取水层并经Na₂SO₄干燥合并的有机层且减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-30％EtOAc/异己烷)纯化，得到5-(5-叠氮基-6,6-二氟氧杂环庚烷-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑，其为油状物(280mg)。将该油状物(280mg,0.93mmol)于THF/水(10mL/1.8mL)中的溶液用三苯基膦(267mg,1.02mmol)处理并将反应混合物在70℃在防爆屏后加热18h。减压浓缩反应混合物。将残余物溶于无水DCM(15mL)中，冷却至0℃并先后加入一缩二碳酸二叔丁酯(243mg,1.12mmol)和DIPEA(0.15mL,1.12mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌72h。加入水(20mL)并用DCM(100mL)萃取混合物。分离有机层，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-35％EtOAc/异己烷)纯化，得到N-[3,3-二氟-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯，其为澄清油状物(310mg,59％历经三步)。¹H>3)δ8.03(s,1H),5.48-5.42(m,1H),5.10-5.01(m,1H),4.49-4.35(m,2H),4.04(s,3H),3.99-3.80(m,1H),2.17-1.98(m,4H),1.48(s,9H)。

中间体66>

在氮气下向4-叠氮基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-酮(中间体55)(1g,3.57mmol)于无水THF(25mL)中的冷却至-78℃的溶液中加入L-selectride(1M于THF中,4.3mL,4.3mmol)并将混合物在-78℃搅拌45min。将混合物温热至室温并加入水(10mL)。减压除去溶剂并将残余物溶于EtOAc(100mL)中。用水(40mL)和盐水(40mL)洗涤有机层，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-60％EtOAc/异己烷)纯化，得到外消旋的4-叠氮基-7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-3-醇(相对立体化学如上所示)，其为黄色油状物(580mg,58％)。¹H>3)δ8.02(s,1H),5.63(dd,J＝10.6,3.5Hz,1H),4.21-4.14(m,3H),4.01(s,3H),3.69-3.58(m,1H),2.45-2.33(m,1H),2.27-2.08(m,2H),2.01-1.84(m,2H)。

中间体67>

在氮气下历时10min向4-叠氮基-7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-3-醇(中间体57)(182mg,0.65mmol)于无水DMF(5mL)中的溶液中逐份加入氢化钠(60％于矿物油中的分散液,39mg,0.97mmol)。再过45min后，滴加甲基碘(0.06mL,0.97mmol)并将混合物在室温搅拌18h。再先后加入氢化钠(60％于矿物油中的分散液,39mg,0.97mmol)和甲基碘(0.06mL,0.97mmol)并将混合物在室温搅拌48h。将混合物用水(20mL)淬灭并用EtOAc(3×20mL)萃取。用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤合并的有机层，分离，经MgSO₄干燥并减压除去溶剂。经由硅胶柱色谱(0-50％EtOAc/异己烷)纯化，得到5-(5-叠氮基-6-甲氧基氧杂环庚烷-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑，其为油状物(100mg)。将该油状物(100mg,0.37mmol)于THF/水(5mL/1mL)中的溶液用三苯基膦(97mg,0.37mmol)处理并将反应混合物在70℃在防爆屏后加热18h。减压浓缩混合物。在0℃将残余物溶于无水DCM(3mL)中并加入一缩二碳酸二叔丁酯(89mg,0.4mmol)和DIPEA(0.18mL,1.02mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌3h。加入水(10mL)并用DCM(20mL)萃取混合物。分离有机层，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-50％EtOAc/异己烷)纯化，得到外消旋的(3-甲氧基-7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯(相对立体化学如上所示)，其为澄清油状物(119mg,47％历经三步)。¹H>3)δ8.02(s,1H),5.39(dd,J＝10.6,3.6Hz,1H),4.75(br>

中间体68>

将1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(9.7g,76.7mmol)和4-戊烯醛(10g,84.4mmol)于无水THF(250mL)中的溶液冷却至-78℃并在氮气下搅拌。历时3h滴加LiHMDS的溶液(1M于THF中,192mL,191.7mmol)。将反应混合物温热至-40℃并搅拌2h，通过滴加饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭，温热至室温并用EtOAc(200mL)稀释。用饱和氯化铵溶液(50mL)洗涤有机层，分离，经MgSO₄干燥并减压除去溶剂。先后经由硅胶色谱(0-100％EtOAc/DCM)和硅胶色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)戊-4-烯-1-醇，其为淡黄色油状物(5.75g,36％)。¹H>3)δ8.06(s,1H),5.85-5.78(m,1H),5.32-5.26(m,1H),5.12-5.04(m,2H),3.98(s,3H),3.45(d,J＝8.7Hz,1H),2.92-2.09(m,3H),1.90-1.86(m,1H)。

中间体69>

在氮气下向1-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)戊-4-烯-1-醇(0.84g,3.98mmol,中间体59)于无水THF(25mL)中的搅拌的溶液中加入碘(1.52g,5.97mmol)。搅拌5min后，先后加入Na₂CO₃(0.63g,5.97mmol)和三氟甲磺酸银(3.07g,11.94mmol)且暗红色溶液变黄。将混合物在室温搅拌1h，用THF(25mL)稀释并经硅藻土过滤。用THF/DCM洗涤黄色固体并减压浓缩滤液。经由硅胶色谱(0-40％EtOAc/DCM)纯化，得到5-(5-(碘甲基)四氢呋喃-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑，其为淡黄色胶状物(640mg,48％)。¹H>3)δ8.03(s,1H),5.91-5.87(m,1H),4.39-4.35(m,1H),4.02(s,3H),3.37-3.30(m,2H),2.69-2.67(m,1H),2.45-2.41(m,1H),2.05-1.89(m,2H)。

中间体70>

向5-(5-(碘甲基)四氢呋喃-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(640mg,1.90mmol,中间体60)于无水DMF(10mL)中的溶液中加入叠氮化钠(250mg,3.80mmol)并将混合物在室温搅拌36h。用EtOAc(25mL)稀释混合物并用水(2×10mL)和盐水(20mL)洗涤。使有机层通过相分离管柱并减压浓缩，得到5-(5-(叠氮基甲基)四氢呋喃-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑，其为黄色油状物(480mg,100％)。¹H>3)δ8.05(s,1H),5.84-5.70(m,1H),4.49-4.45(m,1H),4.03(s,3H),3.56-3.39(m,2H),2.66-2.65(m,1H),2.29-2.22(m,1H),2.02-1.92(m,2H)。

中间体71>

将5-(5-(叠氮基甲基)四氢呋喃-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(520mg,2.07mmol,中间体61)于THF/水(20mL/4mL)中的溶液用三苯基膦(600mg,2.28mmol)处理并将反应混合物在70℃在防爆屏后加热1.5h。将混合物冷却至室温并减压除去有机溶剂。用DCM(40mL)萃取水层并使有机层通过相分离管柱并减压浓缩，得到淡黄色油状物。将该油状物溶于DCM(20mL)中并加入DIPEA(0.72mL,4.14mmol)，接着分两份加入一缩二碳酸二叔丁酯(540mg,2.48mmol)于DCM(1mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌1h。加入水(10mL)并使有机层通过相分离管柱并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-60％EtOAc/异己烷)纯化，得到((5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)四氢呋喃-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯，其为无色胶状物(145mg,21％历经两步)。¹H>3)δ8.04(s,1H),5.80-5.76(m,1H),4.85(br>

中间体72>

将5-(4-氟-8-氧杂二环[5.1.0]辛-4-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(2.75g,10.8mmol,中间体155)于DMF/水(35mL/10mL)中的溶液用氯化铵(1.43g,27.0mmol)和叠氮化钠(3.5g,53.9mmol)处理并将混合物在100℃在防爆屏后加热18h。用EtOAc(200mL)萃取反应混合物并用水(8×30mL)、盐水(30mL)洗涤有机层，分离，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(30-40％EtOAc/异己烷)纯化，得到2-叠氮基-5-氟-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)环庚醇，其为第二洗脱的异构体，其为白色固体(2.16g,67％)。¹H>3)δ8.06和8.05(2s,1H),4.08和4.06(2s,3H),3.88-3.78(m,1H),3.65-3.58(m,1H),2.87-2.55(m,2H),2.31-2.21(m,2H),2.18-2.00(m,3H),1.98-1.85(m,2H)。

中间体73>

将2-叠氮基-5-氟-5-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)环庚醇(300mg,1.05mmol,中间体63)于THF/水(15mL/3mL)中的溶液用三苯基膦(290mg,1.11mmol)处理并将混合物在60℃在防爆屏后加热18h。加入盐水(5mL)并用EtOAc(2×50mL)萃取混合物。将有机层合并，经MgSO₄干燥并减压浓缩。在氮气下向所得油状物于无水DCM(20mL)中的溶液中缓慢加入DIPEA(0.88mL,5.03mmol)，接着加入一缩二碳酸二叔丁酯(263mg,1.21mmol)于无水DCM(10mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌4天。加入水(30mL)并用DCM(80mL)萃取混合物。分离有机层，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(40-50％EtOAc/异己烷)纯化，得到N-[5-氟-2-羟基-5-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)环庚基]氨基甲酸叔丁酯，其为无色油状物(218mg,58％历经两步)。¹H>3)δ8.06和8.05(2s,1H),4.86(br>

中间体74>

先后向2-甲基-4-硝基-吡唑-3-甲醛(370mg,2.39mmol,中间体3)于甲苯(50mL)中的溶液中加入2-乙基-2-(羟基甲基)丙-1,3-二醇(315mg,2.35mmol)和对甲苯磺酸(20mg,0.10mmol)。将反应混合物加热回流36h同时共沸除去水。将混合物冷却至室温并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到(5-乙基-2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲醇(反式异构体)，其为第一洗脱的异构体，其为无色固体(244mg,38％)。¹H>3)δ8.02(s,1H),6.38(s,1H),4.16(s,3H),4.02(d,J＝11.5Hz,2H),3.97(d,J＝5.2Hz,2H),3.42(d,J＝3.8Hz,2H),1.90(m,3H),0.99(t,J＝7.6Hz,3H)。

中间体75>

遵循中间体66的操作，还得到(5-乙基-2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲醇(顺式异构体)，其为第二洗脱的异构体，其为无色固体(118mg,18％)。¹H>3)δ8.02(s,1H),6.37(s,1H),4.13(s,3H),4.12(d,J＝12.8Hz,2H),3.98(d,J＝3.9Hz,2H),3.73(d,J＝11.8Hz,2H),1.74(br>

中间体76>

先后向2-甲基-4-硝基-吡唑-3-甲醛(718mg,4.63mmol,中间体3)于甲苯(100mL)中的溶液中加入2-(羟基甲基)丙-1,3-二醇(700mg,6.73mmol)和对甲苯磺酸(88mg,0.463mmol)。将反应混合物加热回流18h同时共沸除去水。将混合物冷却至室温并减压浓缩。用DCM(50mL)稀释残余物并用饱和NaHCO₃水溶液(50mL)洗涤。用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤有机层，分离，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到(2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲醇(反式异构体)，其为第一洗脱的异构体，其为无色固体(220mg,20％)。¹H>3)δ8.02(s,1H),6.42(s,1H),4.34(dd,J＝11.6,4.7Hz,2H),4.12(s,3H),3.81(t,J＝11.5Hz,2H),3.56(t,J＝5.1Hz,2H),2.53-2.38(m,1H),1.67(t,J＝4.6Hz,1H)。

中间体77>

遵循中间体68的操作，还得到(2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲醇(顺式异构体)，其为无色固体(268mg,24％)。¹H>3)δ8.02(s,1H),6.49(s,1H),4.28(d,J＝11.9Hz,2H),4.20(d,J＝3.3Hz,2H),4.12(s,3H),4.06(dd,J＝7.8,3.7Hz,2H),1.82(t,J＝4.9Hz,1H),1.78-1.71(m,1H)。

中间体78>

遵循中间体68的操作，由2-甲基-2-(羟基甲基)丙-1,3-二醇起始，得到(5-甲基-2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲醇，其为第一洗脱的异构体，其为无色固体(167mg,13％)。¹H>3)δ8.03(s,1H),6.38(s,1H),4.19(s,3H),4.02(d,J＝11.3Hz,2H),3.89(d,J＝11.3Hz,2H),3.43(d,J＝4.5Hz,2H),1.65-1.40(m,1H),1.36(s,3H)。

中间体79>

遵循中间体70的操作，还得到(5-甲基-2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲醇(顺式异构体)，其为第二洗脱的异构体(480mg,38％)。¹H>3)δ8.02(s,1H),6.40(s,1H),4.16-4.06(m,5H),3.91(s,2H),3.72(d,J＝11.9Hz,2H),0.85(s,3H)。OH未观察到。

中间体80>

经由手性SFC进一步纯化N-[3,3-二氟-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯(中间体56)，得到N-[(4R,7S)-3,3-二氟-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯，其为第二洗脱的异构体，其为灰白色固体(57mg,47％)。¹H>3)δ8.04(s,1H),5.48-5.42(m,1H),5.06(d,J＝9.5Hz,1H),4.49-4.38(m,2H),4.05(s,3H),3.98-3.82(m,1H),2.18-2.00(m,4H),1.48(s,9H)。

中间体81>

遵循中间体72的操作，还得到N-[(4S,7R)-3,3-二氟-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯，其为第一洗脱的异构体，其为灰白色固体(65mg,53％)。¹H>3)δ8.04(s,1H),5.48-5.42(m,1H),5.05(d,J＝9.2Hz,1H),4.50-4.36(m,2H),4.05(s,3H),3.98-3.84(m,1H),2.18-2.00(m,4H),1.48(s,9H)。

中间体82>

在0℃先后向(5-乙基-2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲醇(反式异构体)(610mg,2.25mmol,中间体66)于无水DCM(15mL)中的溶液中加入Et₃N(0.45mL,3.38mmol)和甲磺酰氯(0.21mL,2.70mmol)。历时1.5h将反应混合物缓慢温热至室温。将混合物重新冷却至0℃并用1M>3水溶液(15mL)和水(15mL)洗涤有机层，分离，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到甲磺酸(5-乙基-2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲基酯，其为白色固体(816mg,定量的)。¹H>3)δ8.01(s,1H),6.38(s,1H),4.14(s,3H),4.05-3.88(m,6H),3.22-2.92(m,3H),1.96(q,J＝7.6Hz,2H),1.03(t,J＝7.6Hz,3H)。

中间体83>

向甲磺酸(5-乙基-2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲基酯(816mg,2.25mmol,中间体74)于无水DMSO(10mL)中的溶液中一次性加入邻苯二甲酰亚胺钾(2.1g,11.3mmol)。将反应混合物在180℃加热5h，冷却至室温并用EtOAc(50mL)和水(30mL)稀释。用水(3×30mL)、2NNaOH(2×20mL)和水(20mL)洗涤有机层，分离，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到2-((5-乙基-2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲基)异二氢吲哚-1,3-二酮，其为无色固体(317mg,35％)。¹H>3)δ8.00(s,1H),7.93-7.88(m,2H),7.82-7.76(m,2H),6.31(s,1H),4.14(s,3H),4.06(d,J＝11.8Hz,2H),3.85(d,J＝11.8Hz,2H),3.51(s,2H),1.92(q,J＝7.6Hz,2H),1.14(t,J＝7.6Hz,3H)。

中间体84>

将5-(5,8-二氧杂二环[5.1.0]辛-4-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑(400mg,1.67mmol,中间体19)于MeOH/水(9mL/1.7mL)中的溶液用氯化铵(221mg,4.2mmol)和叠氮化钠(544mg,8.37mmol)处理并将混合物在70℃在防爆屏后加热18h。用EtOAc(100mL)萃取反应混合物并用水(3×20mL)和盐水(20mL)洗涤有机层，分离，经MgSO₄干燥并减压浓缩。在氮气下在室温历时10min向残余物(310mg,1.1mmol)于无水DMF(5mL)中的溶液中逐份加入氢化钠(60％于矿物油中的分散液,53mg,1.32mmol)。再过45min后，滴加三氘代甲基碘(0.21mL,3.3mmol)并将混合物在室温搅拌18h。先后加入更多的氢化钠(60％于矿物油中的分散液,310mg,1.1mmol)和更多的三氘代甲基碘(0.21mL,3.3mmol)并将混合物在室温搅拌48h。加入水(20mL)并用EtOAc(3×20mL)萃取混合物。用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤合并的有机层，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-40％EtOAc/异己烷)纯化，得到5-[5-叠氮基-6-(三氘代甲氧基)氧杂环庚烷-2-基]-1-甲基-4-硝基-吡唑，其为油状物(140mg)。将该油状物(140mg,0.47mmol)于THF/水(5mL/0.9mL)中的溶液用三苯基膦(135mg,0.52mmol)处理并将反应混合物在70℃在防爆屏后加热18h。减压浓缩混合物。在0℃将所得残余物溶于无水DCM(9mL)中并加入一缩二碳酸二叔丁酯(123mg,0.56mmol)和DIPEA(0.25mL,1.41mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌3h。加入水(10mL)并用DCM(20mL)萃取混合物。分离有机层，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-60％EtOAc/异己烷)纯化，得到外消旋的N-[7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-3-(三氘代甲氧基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯(相对立体化学如上所示)，其为灰白色固体(125mg,28％历经四步)。¹H>3)δ8.01(s,1H),5.39(dd,J＝10.6,3.6Hz,1H),4.85-4.67(m,1H),4.32(dd,J＝14.2,1.9Hz,1H),4.06(s,3H),3.90-3.82(m,1H),3.75(dd,J＝14.2,3.2Hz,1H),3.40-3.33(m,1H),2.20-1.82(m,4H),1.46(m,9H)。

中间体85>

经由手性SFC进一步纯化N-[7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-3-(三氘代甲氧基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯，得到N-[(3R,4S,7R)-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-3-(三氘代甲氧基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯，其为第一洗脱的异构体，其为灰白色固体(54mg,43％)。¹H>3)δ8.01(s,1H),5.39(dd,J＝10.6,3.6Hz,1H),4.85-4.68(m,1H),4.32(dd,J＝14.2,1.9Hz,1H),4.06(s,3H),3.90-3.82(m,1H),3.75(dd,J＝14.0,3.2Hz,1H),3.40-3.33(m,1H),2.20-1.83(m,4H),1.46(s,9H)。

中间体86>

遵循中间体77的操作，还得到N-[(3S,4R,7S)-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)-3-(三氘代甲氧基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯，其为第二洗脱的异构体，其为灰白色固体(52mg,41％)。¹H>3)δ8.02(s,1H),5.39(dd,J＝10.6,3.6Hz,1H),4.85-4.66(m,1H),4.33(dd,J＝14.2,1.9Hz,1H),4.07(s,3H),3.90-3.83(m,1H),3.75(dd,J＝14.2,3.2Hz,1H),3.40-3.33(m,1H),2.21-1.83(m,4H),1.47(m,9H)。

中间体87>

在0℃先后向(5-甲基-2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲醇(反式异构体)(248mg,1.02mmol,中间体66)于无水DCM(10mL)中的溶液中加入Et₃N(0.20mL,1.53mmol)和甲磺酰氯(0.10mL,1.22mmol)。历时1.5h将反应混合物缓慢温热至室温。将混合物重新冷却至0℃并加入1M>3水溶液(10mL)和水(10mL)洗涤有机层，分离，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到无色油状物。将该油状物溶于DMF(20mL)中并加入叠氮化钠(400mg,6.12mmol)。将反应混合物在140℃在防爆屏后加热18h。将反应混合物冷却至室温并用水(20mL)和EtOAc(50mL)稀释。用水(3×20mL)洗涤有机层，分离，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到5-(5-(叠氮基甲基)-5-甲基-1,3-二氧杂环己烷-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑，其为无色固体(300mg,定量的,历经两步)。¹H>3)δ8.03(s,1H),6.36(s,1H),4.17(s,3H),3.88(s,4H),3.20(s,2H),1.40(s,3H)。

中间体88>

向4-叠氮基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-醇(660mg,2.34mmol,中间体57)于DCM(12mL)中的溶液中加入(50％于THF中,2.12mL)并将混合物在室温搅拌18h。用DCM(22mL)稀释混合物，冷却至0℃并小心地加入饱和NaHCO₃水溶液(20mL)。用DCM(3×20mL)萃取水层并经Na₂SO₄干燥合并的有机层且减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-30％EtOAc/异己烷)纯化，得到5-(5-叠氮基-6-氟氧杂环庚烷-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑，其为油状物(440mg)。将该油状物(440mg,1.54mmol)于THF/水(15mL/2.8mL)中的溶液用三苯基膦(487mg,1.86mmol)处理并将反应混合物在70℃在防爆屏后加热18h。减压浓缩反应混合物。将残余物溶于无水DCM(15mL)中，冷却至0℃并先后加入一缩二碳酸二叔丁酯(402mg,1.84mmol)和DIPEA(0.8mL,4.62mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌18h。加入水(20mL)并用DCM(100mL)萃取混合物。分离有机层，经MgSO₄干燥并减压浓缩。先后经由硅胶柱色谱(0-35％EtOAc/异己烷)和手性制备型SFC纯化，得到N-[(3S,4R,7S)-3-氟-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯，其为白色固体(223mg,27％历经三步)。¹H>3)δ8.02(s,1H),5.37(dd,J＝10.5,3.0Hz,1H),4.89(br>

中间体89>

遵循中间体80的操作，还得到N-[(3R,4S,7R)-3-氟-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯，其为白色固体(247mg,91％)。¹H>3)δ8.05(s,1H),5.39(dd,J＝10.7,2.9Hz,1H),4.85(br>

中间体90>

遵循中间体79的操作，由(5-甲基-2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲醇(顺式异构体,中间体67)起始，得到5-(5-(叠氮基甲基)-5-甲基-1,3-二氧杂环己烷-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑，其为无色固体(519mg,87％历经两步)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.02(s,1H),6.39(s,1H),4.14(s,3H),4.04(d,J＝12.0Hz,2H),3.73(d,J＝12.0Hz,2H),3.70(s,2H),0.87(s,3H)。

中间体91>

向5-(5-(叠氮基甲基)-5-甲基-1,3-二氧杂环己烷-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(顺式异构体)(519mg,1.84mmol,中间体82)于无水MeOH(25mL)和THF(10mL)中的溶液中加入甲酸铵(300mg,4.76mmol)和10％Pd/C(300mg,0.28mmol)。将混合物加热回流30min，然后冷却至室温。经硅藻土过滤混悬液并用EtOAc(200mL)洗涤滤饼。减压浓缩滤液并将粗残余物溶于无水THF(11mL)和DCM(2mL)中且冷却至0℃。先后加入Et₃N(0.38mL,2.86mmol)和三氟乙酸酐(0.30mL,2.10mmol)。将反应混合物缓慢温热至室温并搅拌18h。将混合物重新冷却至0℃并用水(10mL)淬灭且用EtOAc(20mL)萃取。用盐水(10mL)洗涤有机层，分离，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到2,2,2-三氟-N-((5-甲基-2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲基)乙酰胺，其为无色油状物(410mg,63％历经两步)。¹H>3)δ7.95(s,1H),7.24(s,1H),6.33(s,1H),4.17(s,3H),3.92(d,J＝12.0Hz,2H),3.75(d,J＝6.8Hz,2H),3.71(d,J＝12.0Hz,2H),0.80(s,3H)。

中间体92>

向5-(5-(叠氮基甲基)-5-甲基-1,3-二氧杂环己烷-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(反式异构体；300mg,1.02mmol,中间体79)于THF(3mL)和水(0.3mL)中的溶液中加入三苯基膦(322mg,1.22mmol)。将反应混合物在70℃加热1h。将混合物冷却至室温并减压浓缩。在0℃先后向粗残余物于无水THF(10mL)中的溶液中加入Et₃N(0.20mL,1.53mmol)和三氟甲磺酸酐(0.16mL,1.12mmol)。将反应混合物缓慢温热至室温并搅拌18h。将混合物重新冷却至0℃并加入更多的Et₃N(0.20mL,1.53mmol)和三氟甲磺酸酐(0.16mL,1.12mmol)。将反应混合物缓慢温热至室温并搅拌6h。将混合物重新冷却至0℃，用水(10mL)淬灭并用DCM(20mL)萃取。使有机层通过相分离管柱并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到2,2,2-三氟-N-((5-甲基-2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲基)乙酰胺，其为无色固体(171mg,0.49mmol)。

中间体93>

先后向(E)-3-甲基戊-3-烯-2-酮(2.69mL,24.1mmol)于DCM(200mL)中的冷却至0℃的溶液中加入Et₃N(10.5mL,79.5mmol)和TESOTf(6.0mL,26.5mmol)。将混合物温热至室温并搅拌18h。加入饱和NaHCO₃水溶液(100mL)和DCM(200mL)。用DCM(3×200mL)萃取水层并用盐水(100mL)洗涤合并的有机层，分离，经MgSO₄干燥并减压浓缩，得到(E)-三乙基((3-甲基戊-1,3-二烯-2-基)氧基)甲硅烷。先后向2-甲基-4-硝基-吡唑-3-甲醛(1.0g,8mmol,中间体3)于CDCl₃(28mL)中的溶液中加入(E)-三乙基((3-甲基戊-1,3-二烯-2-基)氧基)甲硅烷(1.6g,7.55mmol)和EuFOD(220mg,0.50mmol)。将反应混合物在压力管中在65℃在防爆屏后加热18h。将混合物冷却至室温并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到5-(5,6-二甲基-4-((三乙基甲硅烷基)氧基)-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑，其为无色油状物(2.92g,定量的)。¹H>3)δ8.07(s,1H),5.64(dd,J＝10.9,3.6Hz,1H),4.33-4.28(m,1H),4.25-3.94(m,3H),2.50-2.41(m,1H),2.31(m,1H),1.61(s,3H),1.31(d,J＝6.4Hz,3H),1.05-0.97(m,6H),0.73-0.61(m,9H)。

中间体94>

向5-(5,6-二甲基-4-((三乙基甲硅烷基)氧基)-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(507mg,1.38mmol,中间体85)于无水MeCN(3.5mL)中的冷却至-20℃的溶液中加入叠氮化钠(404mg,6.22mmol)，接着滴加硝酸铈铵(2.27g,4.15mmol)于CH₃CN(10.4mL)中的溶液。将反应混合物在-20℃搅拌1h，历时1h缓慢温热至0℃，然后用水(20mL)淬灭并用EtOAc(20mL)萃取。用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤有机层，分离，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)纯化，得到3-叠氮基-2,3-二甲基-6-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮，其为白色固体(187mg,46％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.05(s,1H),5.78(dd,J＝12.3,3.2Hz,1H),4.21(s,3H),3.73(dd,J＝12.3,6.2Hz,1H),3.13(dd,J＝14.6,12.3Hz,1H),2.73(dd,J＝14.6,3.2Hz,1H),1.44(s,3H),1.41(d,J＝6.1Hz,3H)。

中间体95>

向3-叠氮基-2,3-二甲基-6-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮(335mg,1.14mmol,中间体86)于无水DCM(10ml)中的溶液中加入的溶液(50％于THF中,830mg,1.88mmol)并将混合物在室温搅拌18h。加入饱和NaHCO₃水溶液(20mL)和DCM(20mL)。用DCM(3×20mL)萃取水层并用盐水(20mL)洗涤合并的有机层，分离，经MgSO₄干燥并减压浓缩。经由硅胶柱色谱(20％EtOAc/异己烷)纯化，得到5-(5-叠氮基-4,4-二氟-5,6-二甲基四氢-2H-吡喃-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑(掺杂有一些乙烯基氟)，其为淡黄色油状物(157mg,44％)。¹H>3)δ8.04(s,1H),5.69(dd,J＝12.2,2.9Hz,1H),4.13(s,3H),3.76(qd,J＝6.3,1.6Hz,1H),2.59-2.40(m,1H),2.38-2.28(m,1H),1.48(s,3H),1.32(d,J＝6.2Hz,3H)。

中间体96>

在0℃先后向2-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)四氢吡喃-4-醇(450mg,1.98mmol,中间体39)于无水DCM(24mL)中的溶液中加入Et₃N(0.33mL,2.97mmol)和MsCl(0.44mL,4.0mmol)。将反应混合物在0℃搅拌30min，然后在室温搅拌18h。将混合物重新冷却至0℃并用饱和NaHCO₃水溶液(10mL)淬灭。用0.1M>2SO₄干燥并减压浓缩，得到无色固体(220mg)。向该固体(220mg,0.87mmol)于THF(2.5mL)和水(0.5mL)中的溶液中加入三苯基膦(344mg,1.31mmol)。将反应混合物在65℃在防爆屏后加热4h。将混合物重新冷却至室温并减压浓缩。将残余物溶于DCM(5mL)中，用一缩二碳酸二叔丁酯(287mg,1.31mmol)和DIPEA(0.44mL,2.62mmol)处理并将反应混合物在室温搅拌16h。减压浓缩混合物。经由硅胶柱色谱(30％EtOAc/异己烷)纯化，得到(2-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸叔丁酯，其为黄色油状物(155mg,24％历经四步)。¹H>3)δ8.03(s,1H),5.44(d,J＝11.6Hz,1H),4.52(s,1H),4.19(dd,J＝11.9,4.6Hz,1H),4.06(s,3H),3.68-3.60(m,1H),2.29(d,J＝12.6Hz,1H),2.03(d,J＝8.4Hz,1H),1.75(s,1H),1.61-1.47(m,2H),1.45(s,9H)。

中间体97>

向5-(5,8-二氧杂二环[5.1.0]辛-4-基)-1-甲基-4-硝基-吡唑(2.7g,11.3mmol,中间体19)于MeOH/水(60mL/15mL)中的溶液中加入氯化铵(1.51g,28.3mmol)和叠氮化钠(3.67g,56.5mmol)。将混合物在70℃在防爆屏后加热4h。减压除去MeOH并用EtOAc(100mL)萃取水性残余物。用NaHCO₃水溶液(3×20mL)洗涤有机层，通过相分离管柱并减压浓缩。先后经由硅胶柱色谱(0-100％EtOAc/异己烷)和手性SFC色谱纯化，得到(3S,4R,7S)-4-叠氮基-7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-3-醇，其为第二洗脱的异构体，其为澄清胶状物(1.4g,41％)。¹H>3)δ8.03(s,1H),5.43-5.37(m,1H),4.18(dd,J＝13.9,2.1Hz,1H),4.06(s,3H),3.97-3.77(m,3H),2.45(d,J＝3.9Hz,1H),2.32-2.09(m,2H),2.10-1.85(m,2H)。

中间体98>

向(3S,4R,7S)-4-叠氮基-7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-3-醇(1.4g,4.96mmol,中间体90)于DCM(35mL)中的溶液中加入Dess-Martin高碘剂(2.52g,5.96mmol)并将混合物在室温搅拌2h。加入饱和NaHCO₃水溶液(60mL)和20％硫代硫酸钠溶液(50mL)并将反应混合物搅拌30min直至观察到盐完全溶解。分离有机层，经MgSO₄干燥并减压除去溶剂。经由硅胶柱色谱(0-40％EtOAc/异己烷)纯化，得到(4R,7S)-4-叠氮基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-酮，其为灰白色固体(1.1g,82％)。¹H>3)δ8.05(s,1H),5.38(dd,J＝10.2,2.7Hz,1H),4.62-4.49(m,2H),4.31-4.22(m,1H),4.08(s,3H),2.31-2.17(m,3H),2.15-2.04(m,1H)。

中间体99>

遵循中间体57的操作，由(4R,7S)-4-叠氮基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-酮起始，得到(3R,4R,7S)-4-叠氮基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-醇，其为暗橙色油状物(850mg,74％)。¹H>3)δ8.02(s,1H),5.68-5.60(m,1H),4.24-4.14(m,3H),4.01(s,3H),3.72-3.58(m,1H),2.45-2.31(m,1H),2.30-2.09(m,2H),2.01-1.81(m,2H)。

中间体100>

遵循中间体58的操作，由(3R,4R,7S)-4-叠氮基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-醇起始，得到N-[(3R,4R,7S)-3-甲氧基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯，其为无色油状物(357mg,32％历经三步)。¹H>3)δ8.00(s,1H),5.60-5.53(m,1H),5.12-5.02(m,1H),4.21-4.08(m,2H),4.01(s,3H),3.79(dd,J＝13.2,4.4Hz,1H),3.75-3.70(m,1H),3.41(s,3H),2.28-2.07(m,1H),1.97-1.89(m,2H),1.80-1.72(m,1H),1.47(s,9H)。

中间体101>

向(3S,4R,7R)-4-叠氮基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-醇(中间体90)(1.19g,4.22mmol)于THF(50mL)和水(10mL)中的溶液中加入三苯基膦(1.22g,4.64mmol)并将混合物在70℃加热24h。用EtOAc(100mL)稀释混合物并用盐水(2×25mL)洗涤。分离有机层，经MgSO₄干燥并减压浓缩。使残余物通过用MeOH洗涤且用3％7N>3于MeOH/DCM中的溶液洗脱的SCX柱，得到油状物。将该油状物溶于DCM(13.5mL)中并加入DIPEA(1.08mL,6.21mmol)和一缩二碳酸二叔丁酯(1.36g,6.21mmol)。将混合物在室温搅拌3h，然后减压浓缩。经由硅胶色谱(0-60％EtOAc/异己烷)纯化，得到((3S,4R,7S)-3-羟基-7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯(掺杂有一些三苯基膦氧化物)，其为澄清胶状物(895mg,60％历经两步)。¹H>3)δ8.02(s,1H),5.42-5.36(m,1H),4.83(d,J＝6.7Hz,1H),4.22(d,J＝13.4Hz,2H),4.08(s,3H),3.86-3.76(m,3H),2.18-2.07(m,1H),2.02-1.89(m,3H),1.47(s,9H)。

中间体102>

遵循实施例65的操作，由N-[(3R,4R,7S)-3-甲氧基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯(中间体93)起始并用6-溴-5-氟-吡啶-2-甲酸(参见US2010/56576A1)替换2-溴-5-(叔丁氧基羰基氨基)噻唑-4-甲酸，得到N-[(3R,4R,7S)-7-[4-[(6-溴-5-氟-吡啶-2-羰基)氨基]-2-甲基-吡唑-3-基]-3-甲氧基-氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯(掺杂有四甲基脲)，其为澄清油状物(169mg,30％历经两步)。¹H>3)δ10.37(s,1H),8.26-8.17(m,2H),7.63-7.55(m,1H),5.02(br>

中间体103>

遵循中间体65的操作，由((3S,4R,7S)-3-氟-7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体80)起始并用2-溴噻唑-4-甲酸(市售的)替换2-溴-5-(叔丁氧基羰基氨基)噻唑-4-甲酸，得到((3S,4R,7S)-7-(4-(2-溴噻唑-4-甲酰氨基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-氟氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯。

中间体104>

遵循中间体65的操作，由((3R,4R,7S)-3-氟-7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体24)起始并用2-溴噻唑-4-甲酸(市售的)替换2-溴-5-(叔丁氧基羰基氨基)噻唑-4-甲酸，得到((3R,4R,7S)-7-(4-(2-溴噻唑-4-甲酰氨基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-氟氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯。

中间体105>

遵循中间体65的操作，由((3R,4R,7S)-3-甲氧基-7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体93)起始并用2-溴噻唑-4-甲酸(市售的)替换2-溴-5-(叔丁氧基羰基氨基)噻唑-4-甲酸，得到((3R,4R,7S)-7-(4-(2-溴噻唑-4-甲酰氨基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-甲氧基氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯。

中间体106>

遵循中间体65的操作，由((3S,4R,7S)-3-甲氧基-7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体21)起始并用2-溴噻唑-4-甲酸(市售的)替换2-溴-5-(叔丁氧基羰基氨基)噻唑-4-甲酸，得到((3S,4R,7S)-7-(4-(2-溴噻唑-4-甲酰氨基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-甲氧基氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯。

中间体107>

遵循实施例65的操作，由N-[(3S,4R,7S)-3-氟-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯(中间体80)起始并用6-溴-5-氟-吡啶-2-甲酸(参见US2010/56576A1)替换2-溴-5-(叔丁氧基羰基氨基)噻唑-4-甲酸，得到((3S,4R,7S)-7-(4-(6-溴-5-氟吡啶-2-甲酰氨基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-氟氧杂环庚烷-4-基)氨基甲酸叔丁酯。

中间体108>

向2-溴噻唑-4-甲酸甲酯(3.27mmol,741mg)于四氢呋喃(15mL)和水(1.5mL)中的溶液中加入2,6-二氟-4-甲氧基苯基硼酸(1.8当量,5.88mmol,1160mg)和氟化钾(3.3当量,10.8mmol,627mg)。将混合物用氮气脱气，然后加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.2当量,0.654mmol,617mg)和三叔丁基膦(1.0M于甲苯中；0.4当量,1.31mmol,1.3mL)并将反应混合物在微波中在100℃加热30分钟。将反应混合物浓缩并在用0至50％EtOAc/庚烷洗脱的硅胶上纯化残余物，得到2-(2,6-二氟-4-甲氧基-苯基)噻唑-4-甲酸甲酯(2.40mmol,685mg,74％产率)。

向2-(2,6-二氟-4-甲氧基-苯基)噻唑-4-甲酸甲酯(2.403mmol,685.5mg)于甲醇(15mL)和水(5mL)中的溶液中加入氢氧化锂(1.9当量,4.54mmol,111mg)。将反应混合物在室温搅拌过夜。用1N HCl(水溶液)淬灭反应混合物，然后在EtOAc与盐水之间分配。浓缩有机层。在高真空下干燥残余物，得到2-(2,6-二氟-4-甲氧基-苯基)噻唑-4-甲酸(650mg,定量的)，其为棕色固体。

中间体109>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与2-氟-4-甲氧基苯基硼酸反应，得到标题化合物。

中间体110>

在-78℃向1-(3,5-二氟苯基)乙醇(10.2mmol,1660mg,市售的)于四氢呋喃(100mL)中的溶液中滴加正丁基锂(2.5mol/L)于己烷中的溶液(2.4当量,24.4mmol,9.8mL)。将混合物在-78℃搅拌2小时。加入2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(2.50当量,25.4mmol,5.29mL)并将反应混合物搅拌过夜，温热至室温。将反应混合物用饱和NaHCO₃(水溶液)淬灭并用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机层，用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩滤液，得到所期望的产物，其未经进一步纯化即使用。

中间体111>

使2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷与2-(3,5-二氟苯基)丙-2-醇(参见US2012/225062)反应，得到标题化合物。

中间体112>

使2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷与1-(3,5-二氟苯基)环丁醇(参见US2012/225062)反应，得到标题化合物。

中间体113>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与1-(3,5-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)乙醇反应，得到标题化合物。

中间体114>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与1-(3,5-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)环丁醇反应，得到标题化合物。

中间体115>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与2-(3,5-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)丙-2-醇反应，得到标题化合物。

中间体116>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与(2-(二氟甲基)苯基)硼酸反应，得到标题化合物。

中间体117>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与(3-氟吡啶-4-基)硼酸反应，得到标题化合物。

中间体118>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与(2,5-二氟苯基)硼酸反应，得到标题化合物。

中间体119>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与(5-氯-2-氟苯基)硼酸反应，得到标题化合物。

中间体120>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与(2,6-二氟-3-甲基苯基)硼酸反应，得到标题化合物。

中间体121>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与(R)-1-(3,5-二氟苯基)乙醇(商业来源)反应，得到标题化合物。

中间体122>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与(S)-1-(3,5-二氟苯基)乙醇(商业来源)反应，得到标题化合物。

中间体123>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与(2,3-二氟苯基)硼酸反应，得到标题化合物。

中间体124>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与(5-乙基-2-氟苯基)硼酸反应，得到标题化合物。

中间体125>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与(3-氯-2-氟苯基)硼酸反应，得到标题化合物。

中间体126>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与(2-氯-3-氟苯基)硼酸反应，得到标题化合物。

中间体127>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与(5-环丙基-2-氟苯基)硼酸反应，得到标题化合物。

中间体128>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与(2-(三氟甲基)苯基)硼酸反应，得到标题化合物。

中间体129>

使1,3-二氟-5-甲基苯与丁基锂和2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷反应，得到标题化合物。

中间体130>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与2-(2,6-二氟-4-甲基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷反应，得到标题化合物。

中间体131>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与(4-氯-2-氟苯基)硼酸反应，得到标题化合物。

中间体132>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与(2-氟-6-甲基苯基)硼酸反应，得到标题化合物。

中间体133>

将5-溴-2-氟-苯甲腈(12.4mmol,2470 mg)于吡啶(6.5mL)中的溶液用硫化铵(40质量％于水中,1.1当量,13.6mmol,2.32mL)和三乙胺(1.1当量,13.6mmol,1.90mL)处理。将反应混合物在50℃加热3小时，然后冷却至室温。将反应混合物在EtOAc与水之间分配。用水(3×)和盐水(3×)洗涤有机层，用MgSO₄干燥，然后浓缩。在用0至50％EtOAc/庚烷洗脱的硅胶上纯化残余物，得到5-溴-2-氟-硫代苯甲酰胺(2.84g,94％产率)。

将5-溴-2-氟-硫代苯甲酰胺(11.8mmol,2840mg)和溴丙酮酸乙酯(1.05当量,12.4mmol,1.56mL)于乙醇(30mL)中的混合物在80℃加热过夜。将混合物浓缩并在用0至20％EtOAc/庚烷洗脱的硅胶上纯化残余物，得到2-(5-溴-2-氟-苯基)噻唑-4-甲酸乙酯(2960mg,76.14％产率)，其为澄清油状物。

向2-(5-溴-2-氟-苯基)噻唑-4-甲酸乙酯(8.97mmol,2960mg)于甲醇(40mL)和水(10mL)中的溶液中加入氢氧化锂(1.6当量,14.2mmol,347mg)。将反应混合物在50℃搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，浓缩，混悬于水中，然后用2N HCl(水溶液)淬灭。收集固体，用水洗涤并在高真空下干燥，得到2-(5-溴-2-氟-苯基)噻唑-4-甲酸(2410mg,89％产率)，其为白色固体。

中间体134>

遵循中间体133的操作，用6-(三氟甲基)吡啶-2-甲腈替换5-溴-2-氟-苯甲腈，得到标题化合物。

中间体135>

遵循中间体133的操作，用2-氟-4-甲基苯甲腈替换5-溴-2-氟-苯甲腈，得到标题化合物。

中间体136>

使2-(3,5-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)丙-2-醇与6-溴-5-氟吡啶-2-甲酸甲酯(参见US2012/225062)反应，得到标题化合物。

中间体137>

使1-(3,5-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)环丁醇与6-溴-5-氟吡啶-2-甲酸甲酯(参见US2012/225062)反应，得到标题化合物。

中间体138>

使1-(3,5-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)乙醇与6-溴-5-氟吡啶-2-甲酸甲酯(参见US2012/225062)反应，得到标题化合物。

中间体139>

使(2,6-二氟-4-羟基苯基)硼酸与6-溴-5-氟吡啶-2-甲酸甲酯(参见US2012/225062)反应，得到标题化合物。

中间体140>

在0℃向6-[2,6-二氟-4-(1-羟基乙基)苯基]-5-氟-吡啶-2-甲酸甲酯(1.21mmol,376mg；中间体136的合成途径中的倒数第二个中间体)于N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中加入氢化钠(60质量％于矿物油中,1.5当量,1.81mmol,72.5mg)。将混合物搅拌2分钟，然后加入碘甲烷(3.0当量,3.62mmol,0.226mL)。将反应混合物在室温搅拌2天。将反应混合物用水淬灭并用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)并浓缩。在用0至50％EtOAc/庚烷洗脱的硅胶上纯化残余物，得到6-(2,6-二氟-4-(1-甲氧基乙基)苯基)-5-氟吡啶-2-甲酸甲酯(392mg,63％)。用MeOH(15mL)和水(5mL)稀释该酯并加入氢氧化锂(60mg)。将混合物在室温搅拌过夜。通过加入1N>2SO₄)并真空浓缩，得到标题化合物(定量的)，其未经纯化即使用。

中间体141>

将溶于四氢呋喃(10mL)中的3,5-二氟苯甲醛(1.0g,7.0mmol)的溶液在冰浴中冷却。缓慢加入环丙基溴化镁(0.5M于THF中,1.2当量,8.4mmol)并将混合物在0℃搅拌60min。将反应混合物用饱和氯化铵淬灭并用EtOAc萃取两次。经Na₂SO₄干燥合并的有机萃取物，过滤并浓缩，得到标题化合物，其具有足以直接使用的纯度。

中间体141>

使2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷、丁基锂与环丙基(3,5-二氟苯基)甲醇反应，得到标题化合物。

中间体142>

使环丙基(3,5-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)甲醇与6-溴-5-氟吡啶-2-甲酸甲酯(参见US2012/225062)反应，得到标题化合物。

中间体143>

在氮气下向1-溴-3,5-二氟-苯(4.00g,20.7mmol)于四氢呋喃(70mL)中的溶液中加入镁(6.0当量,124mmol)并将溶液在85℃加热3小时。将溶液冷却至室温并经由注射器加入3-氧代四氢呋喃(1当量,20.726mmol)于THF(20mL)中的溶液。将混合物在室温搅拌3天。将反应混合物用饱和NaHCO₃淬灭，用EtOAc萃取并用盐水洗涤。通过CombiFlash(0至100％EtOAc/庚烷)纯化，得到标题化合物(405mg,9.7％)。

中间体144>

使3-(3,5-二氟苯基)四氢呋喃-3-醇、丁基锂与2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷反应，得到标题化合物。

中间体145>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与3-(3,5-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)四氢呋喃-3-醇反应，得到标题化合物。

中间体146>

向2-[2,6-二氟-4-(3-羟基四氢呋喃-3-基)苯基]噻唑-4-甲酸甲酯(250mg,0.732mmol)于二氯甲烷(1mL)中的溶液中加入三氟乙酸(1mL)。将混合物在微波中在120℃加热2h。真空浓缩后，通过(0至100％EtOAC/庚烷)纯化，得到2-(4-(2,5-二氢呋喃-3-基)-2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸甲酯(57mg,24％产率)，其为烯烃异构体的混合物。

将该混合物用30mL MeOH稀释并通过H-cube氢化仪(1mL/min,60巴,70℃)，浓缩后，得到2-(2,6-二氟-4-(四氢呋喃-3-基)苯基)噻唑-4-甲酸甲酯(44mg)。用THF(3mL)和水(1.5mL)稀释该酯并加入LiOH(6.5mg,2.0当量)。在室温搅拌2.5小时后，将混合物用1N>2SO₄)并真空浓缩，得到标题化合物(42mg,定量的)。

中间体147>

向2-溴噻唑-4-甲酸甲酯(500mg,2.16mmol)、2,6-二氟-4-羟基苯基硼酸(2当量,767mg)和氟化钾(3.3当量,414mg)于四氢呋喃(10mL)和水(1mL)中混悬液中加入二(三叔丁基膦)钯(0)(0.1当量,110mg)并将混合物在微波反应器中加热至120℃且保持15min。真空浓缩后，通过CombiFlash(0至100％EtOAc/庚烷)纯化反应混合物，得到241mg标题化合物，其为与2-溴噻唑-4-甲酸甲酯的约1:1混合物，其未经进一步纯化即直接使用。

中间体148>

向2-(2,6-二氟-4-羟基-苯基)噻唑-4-甲酸甲酯(207mg,0.763mmol)和(R)-3-羟基四氢呋喃(3当量,206mg)于四氢呋喃(5mL)中的溶液中加入三苯基膦(3当量,600mg)和偶氮二甲酸二异丙酯(3当量,0.45mL)。将混合物在室温搅拌2天。将混合物浓缩并在EtOAc与水之间分配。用饱和NaHCO₃、盐水洗涤有机层，经Na₂SO₄干燥并浓缩。用THF(3mL)和水(1mL)稀释该残余物并加入LiOH(36mg)。在室温搅拌2.5小时后，将反应混合物用1N>2SO₄)并真空浓缩，得到标题化合物，其掺杂有三苯基膦氧化物和其它副产物，其未经进一步纯化即使用。

中间体149>

遵循中间体147的操作，用(S)-3-羟基四氢呋喃替换(R)-3-羟基四氢呋喃，得到标题化合物。

中间体150>

在微波反应小瓶中将4-溴-1-甲基-5-(三氟甲基)吡唑(520mg,2.27mmol,市售的)、二(频哪醇合)二硼(1.3当量,749mg)、二(三苯基膦)二氯化钯(II)(0.05当量,79mg)和乙酸钾(2当量,4445mg)溶于甲苯(15mL)中。将混合物在微波反应器中加热至150℃且保持10min。冷却至室温后，将混合物经硅藻土(EtOAc淋洗)过滤。浓缩滤液，得到标题化合物，其具有足以直接使用的纯度。

中间体151>

使4-溴-5-氟-1,3-二甲基-1H-吡唑(市售的)、二(频哪醇合)二硼、二(三苯基膦)二氯化钯(II)和乙酸钾于甲苯中反应，得到标题化合物。

中间体152>

使2-溴噻唑-4-甲酸甲酯与3-(3,5-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)氧杂环丁烷-3-醇(参见US2012/225062)反应，增加以下氟化步骤且然后进行酯水解后，得到标题化合物：将2-(2,6-二氟-4-(3-羟基氧杂环丁烷-3-基)苯基)噻唑-4-甲酸甲酯(50mg)于二氯甲烷(5mL)中的溶液冷却至-78℃，然后加入deoxo-fluor(1.5当量,50wt％于甲苯中的溶液)。历时30分钟将混合物缓慢温热至室温。然后通过加入饱和NaHCO₃(水溶液)淬灭反应混合物，然后将混合物用EtOAc稀释并用盐水洗涤。将有机萃取物干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。通过CombiFlash(0至100％EtOAc/庚烷)纯化，得到2-(2,6-二氟-4-(3-氟氧杂环丁烷-3-基)苯基)噻唑-4-甲酸甲酯。

中间体153>

以与((2R*,3S*,4R*,6R*)-6-(3-氨基吡啶-4-基)-3-羟基-2,3-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸叔丁酯(WO2012/004217)类似的方式制备，用1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-甲醛替换3-硝基吡啶-4-甲醛。

表1式I化合物

实施例101>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝498.18

实施例102>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝450.1643

实施例103>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝478.1722

实施例104>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝458.1878

实施例105>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝418.1565

实施例106>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝498.18

实施例107>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝478.1956

实施例108>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝498.1722

实施例109>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝474.1643

实施例110>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝432.1722

实施例111>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝524.1878

实施例112>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝524.1878

实施例113>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝446.1878

实施例114>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝490.18

实施例115>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝501.47

实施例116>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝501.47

实施例117>

步骤1：制备1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)戊-4-烯-1-醇并通过在使用以下条件的手性固定相上进行的超临界流体(SFC)色谱分离两种对映异构体：

柱：Chiralpak AD-H(5×25cm；5μm)

流动相：CO₂:MeOH(+0.2％Et₂NH)＝55:45

流速：180g/min

背压：100巴

柱温：35℃

两种对映异构体在2.82和3.98min洗脱且后一个峰稍后被确定为所期望的对映异构体(1S)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)戊-4-烯-1-醇117a且用于所有后续化学。在0℃向(1S)-1-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)戊-4-烯-1-醇117a(101.8g,481.9mmol)于无水四氢呋喃(109mL)中的溶液中滴加二乙基锌/己烷(1mol/L,240.9mL,240.9mmol,1.10当量)。将反应混合物温热至室温并搅拌2小时，在此期间大部分正在逸出的气体已经减弱，但是仍在产生。向混合物中加入乙酸1-甲基烯丙基酯(25.0g,219.0mmol)、乙酸钯(II)(2.46g,10.95mmol,0.05当量)、2-(二叔丁基膦基)联苯(4.95g,16.43mmol,0.075当量)、乙酸铵(16.88g,219.0mmol,1.00当量)和无水四氢呋喃(219mL)并在室温搅拌3天。将混合物用水和乙酸乙酯稀释，经硅藻土过滤，用EtOAc萃取5次，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。将残余物分成4批并经硅胶进行色谱纯化(330g,0-20％EtOAc/庚烷,26.6min梯度,在UV下在4:1庚烷:EtOAc中产物的Rf为约0.3,在UV下在4:1庚烷:EtOAc中原料的Rf为约0.1)，得到所期望的产物1-甲基-5-[(1S)-1-(1-甲基烯丙基氧基)戊-4-烯基]-4-硝基-吡唑，其为两种非对映异构体的混合物117b(19.17g,33％产率)。¹H>

步骤2：向1-甲基-5-[(1S)-1-(1-甲基烯丙基氧基)戊-4-烯基]-4-硝基-吡唑117b(2.50g,9.42mmol)于无水二氯甲烷(942mL)中的溶液中加入(1,3-二(2,4,6-三甲基苯基)-2-咪唑烷亚基)二氯(邻异丙氧基苯基亚甲基)钌(第2代Grubbs催化剂,CASReg.No.301224-40-8,825mg,0.94mmol,0.10当量)。然后将混合物在42℃加热并搅拌3天。将反应混合物浓缩并经硅胶进行色谱纯化(80g,0-20％EtOAc/庚烷,25min梯度,在UV或用KMnO₄染色下在4:1庚烷:EtOAc中产物的Rf为约0.4和0.3)。使样品经受SFC纯化(条件如下所示)以分离非对映异构体。得到1-甲基-5-[(2S,7S)-7-甲基-2,3,4,7-四氢氧杂-2-基]-4-硝基-吡唑117c(0.54g,24％)和1-甲基-5-[(2S,7R)-7-甲基-2,3,4,7-四氢氧杂-2-基]-4-硝基-吡唑117d(0.49g,22％)。1-甲基-5-[(2S,7S)-7-甲基-2,3,4,7-四氢氧杂-2-基]-4-硝基-吡唑的¹H>-2-基]-4-硝基-吡唑的¹H>

SFC条件：

柱：Phenomenex Cellulose-1(4.6×50mm；3μm)

流动相：CO₂:MeOH(+0.1％甲酸)＝95:5

流速：4mL/min

背压：120巴

柱温：40℃

保留时间：1-甲基-5-[(2S,7S)-7-甲基-2,3,4,7-四氢氧杂-2-基]-4-硝基-吡唑为0.588min；1-甲基-5-[(2S,7R)-7-甲基-2,3,4,7-四氢氧杂-2-基]-4-硝基-吡唑为0.678min

步骤3：向1-甲基-5-[(2S,7S)-7-甲基-2,3,4,7-四氢氧杂-2-基]-4-硝基-吡唑117c(0.20g,0.84mmol)于无水二氯甲烷(16mL)中的溶液中加入间氯过氧苯甲酸(727mg,4.215mmol,5.0当量)。将样品在室温搅拌3天。蒸发溶剂并将残余物经硅胶进行色谱纯化(40g,0-30％EtOAc/庚烷,28min梯度,在UV下在2:1庚烷:EtOAc中产物的Rf为约0.3)，得到1-甲基-5-[(1S,4S,6S,7R)-6-甲基-5,8-二氧杂二环[5.1.0]辛-4-基]-4-硝基-吡唑117e(213.5mg,66％)。¹H>

步骤4：将1-甲基-5-[(1S,4S,6S,7R)-6-甲基-5,8-二氧杂二环[5.1.0]辛-4-基]-4-硝基-吡唑117e(0.14g,0.56mmol)、甲醇(5mL)和水(1mL)合并。先后向其中加入氯化铵(149mg,2.78mmol,5.0当量)和叠氮化钠(182.5mg,2.780mmol,5.0当量)。将混合物在70℃加热过夜。LC-MS似乎显示大部分为产物，但是似乎仍存在少量原料。加入氯化铵(149mg,2.78mmol,5.0当量)和叠氮化钠(182.5mg,2.780mmol,5.0当量)并将混合物在70℃加热过夜。冷却至室温后，将反应混合物用水稀释并用CH₂Cl₂萃取3次。经MgSO₄干燥合并的有机相，过滤，蒸发并经硅胶进行色谱纯化(4g,0-100％EtOAc/庚烷,11min梯度,在UV下在1:1庚烷:EtOAc中的Rf为约0.3)，得到(2S,3S,4R,7S)-4-叠氮基-2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-醇117g(148mg,90％)。¹H>

遵循与步骤3和4相同的操作，将1-甲基-5-[(2S,7R)-7-甲基-2,3,4,7-四氢氧杂-2-基]-4-硝基-吡唑转化成(2R,3S,4R,7S)-4-叠氮基-2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-醇117h。

步骤5：在0℃向(2S,3S,4R,7S)-4-叠氮基-2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-醇117g(0.15g,0.50mmol)于无水四氢呋喃(4mL)中的溶液中加入氢化钠(60％于矿物油中,60.0mg,1.50mmol,3.0当量)。将混合物在0℃搅拌1小时，然后滴加碘甲烷(0.15mL,2.50mmol,5.0当量)。将反应混合物缓慢温热至室温并搅拌过夜。滴加水并将混合物用EtOAc萃取三次，经MgSO₄干燥，过滤，蒸发并经硅胶进行色谱纯化(4g,0-30％EtOAc/庚烷,22min梯度,在UV下在2:1庚烷:EtOAc中产物的Rf为约0.3)，得到5-[(2S,5R,6S,7S)-5-叠氮基-6-甲氧基-7-甲基-氧杂环庚烷-2-基]-1-甲基-4-硝基-吡唑117i(121mg,78％)。¹H>

步骤6：将5-[(2S,5R,6S,7S)-5-叠氮基-6-甲氧基-7-甲基-氧杂环庚烷-2-基]-1-甲基-4-硝基-吡唑117i(0.12g,0.39mmol)、三苯基膦(123mg,0.47mmol,1.20当量)、四氢呋喃(5mL)和水(1mL)合并，在60℃加热并搅拌4天。将反应混合物用H₂O和EtOAc稀释，用EtOAc萃取3次，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。将残余物重新溶于无水二氯甲烷(5mL)中。加入N,N-二异丙基乙胺(0.14mL,0.78mmol,2.0当量)和一缩二碳酸二叔丁酯(112mg,0.51mmol,1.30当量)并搅拌1小时。蒸发反应混合物并经硅胶进行色谱纯化(12g,0-40％EtOAc/庚烷,22min梯度,在UV下在2:1庚烷:EtOAc中的Rf为约0.2)，得到N-[(2S,3S,4R,7S)-3-甲氧基-2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯117j(116mg,77％)。¹H>

步骤7：在MeOH中用10％Pd/炭还原N-[(2S,3S,4R,7S)-3-甲氧基-2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯117j并使中间体胺即(2S,3S,4R,7S)-7-(4-氨基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-甲氧基-2-甲基氧杂环庚烷-4-基氨基甲酸叔丁酯与2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸和PyBOP在DIPEA和CH₂Cl₂中偶联。用4M>1H>

实施例118>N-(5-((2S,5R,6S,7R)-5-氨基-6-甲氧基-7-甲基氧杂环庚烷-2-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酰胺118

遵循实施例11117的操作，对(2R,3S,4R,7S)-4-叠氮基-2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-醇进行O-甲基化，得到5-((2S,5R,6S,7R)-5-叠氮基-6-甲氧基-7-甲基氧杂环庚烷-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑118b，将其还原并进行Boc-保护，得到(2R,3S,4R,7S)-3-甲氧基-2-甲基-7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-基氨基甲酸叔丁酯118c。

遵循实施例117的步骤7，将中间体118c转化成N-[5-[(2S,5R,6S,7R)-5-氨基-6-甲氧基-7-甲基-氧杂环庚烷-2-基]-1-甲基-吡唑-4-基]-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酰胺118。¹H>

实施例119>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝461.1956

实施例120>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝467.18

实施例121>

向(2S,3S,4R,7S)-4-叠氮基-2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-醇117g(0.085g,0.286mmol)于无水二氯甲烷(6mL)中的溶液中加入二(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫(Deoxo-Fluor,CAS Reg.No.202289-38-1,50质量％于甲苯中)(0.37mL,0.858mmol,3.0当量)。将反应混合物在室温搅拌1小时，然后用饱和Na₂CO₃缓慢淬灭。将混合物用CH₂Cl₂萃取3次，经MgSO₄干燥，过滤，蒸发并经硅胶进行色谱纯化(4g,0-100％EtOAc/庚烷,22min梯度,在UV下在2:1庚烷:EtOAc中产物的Rf为约0.3)，得到5-((2S,5R,6R,7S)-5-叠氮基-6-氟-7-甲基氧杂环庚烷-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑121a(44.6mg,52％)。¹HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.01(s,1H),5.73-5.68(m,1H),4.59(ddd,J＝48.6,4.2,1.6Hz,1H),4.14-3.88(m,5H),2.48-2.33(m,1H),2.21-2.12(m,1H),2.02-1.83(m,2H),1.33(dd,J＝6.6,1.2Hz,3H)。LCMS:m/z＝299.2(M+H)。

遵循实施例117的步骤6和7中的操作，将121a转化成N-(5-((2S,5R,6R,7S)-5-氨基-6-氟-7-甲基氧杂环庚烷-2-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酰胺121。¹H>

实施例122>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝457.1643

实施例123>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝452.1565

实施例124>

先后向(2S,3S,4R,7S)-4-叠氮基-2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-醇117g(0.59g,1.98mmol)于无水二氯甲烷(12mL)中的溶液中加入碳酸氢钠(831mg,9.89mmol,5.0当量)和Dess-Martin高碘剂(1.27g,2.966mmol,1.5当量)。将混合物在室温搅拌1小时，然后将其用水稀释，用二氯甲烷萃取3次，经MgSO₄干燥，过滤，蒸发并经硅胶进行色谱纯化(40g,0-40％EtOAc/庚烷,28min梯度,在UV下在1:1庚烷:EtOAc中产物的Rf为约0.5)，得到(2S,4R,7S)-4-叠氮基-2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-酮124a(525mg,90％)。¹H>

在-78℃向(2S,4R,7S)-4-叠氮基-2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-酮124a(525mg,1.78mmol)于无水四氢呋喃(16mL)中的溶液中滴加三仲丁基硼氢化锂(1.0M于THF中,2.1mL,2.1mmol,1.2当量)。将所得溶液在-78℃搅拌1小时并用H₂O淬灭。将混合物用EtOAc萃取3次，经MgSO₄干燥，过滤，蒸发并经硅胶进行色谱纯化(4g,0-50％EtOAc/庚烷,22min梯度)。得到(2S,3R,4R,7S)-4-叠氮基-2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-醇124b(在UV下在1:1庚烷:EtOAc中的Rf为约0.5)(294mg,55％)。¹H>1H>

向(2S,3R,4R,7S)-4-叠氮基-2-甲基-7-(2-甲基-4-硝基-吡唑-3-基)氧杂环庚烷-3-醇124b(294mg,0.991mmol)于无水二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入二(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫(50质量％于甲苯中,1.29mL,2.97mmol,3.0当量)。将混合物在室温搅拌1小时，然后将其用饱和Na₂CO₃小心地淬灭。将所得溶液用CH₂Cl₂萃取3次，经MgSO₄干燥，过滤，蒸发并经硅胶进行色谱纯化(4g,0-20％EtOAc/庚烷,33min梯度,在UV下在2:1庚烷:EtOAc中产物的Rf为约0.3)，得到5-[(2S,5R,6S,7S)-5-叠氮基-6-氟-7-甲基-氧杂环庚烷-2-基]-1-甲基-4-硝基-吡唑124c(26.5mg,9％)。¹H>

遵循实施例117的步骤6和7中的操作，将5-((2S,5R,6S,7S)-5-叠氮基-6-氟-7-甲基氧杂环庚烷-2-基)-1-甲基-4-硝基-1H-吡唑124c还原并进行Boc-保护，得到(2S,3S,4R,7S)-3-氟-2-甲基-7-(1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-基)氧杂环庚烷-4-基氨基甲酸叔丁酯124d，将其在MeOH中用10％Pd/炭还原并使中间体胺即(2S,3S,4R,7S)-7-(4-氨基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-氟-2-甲基氧杂环庚烷-4-基氨基甲酸叔丁酯与2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酸和PyBOP在DIPEA和CH₂Cl₂中偶联。用4M>1H>

实施例125>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝457.1643

实施例126>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝438.1409

实施例127>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝417.1643

实施例128>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝417.1643

实施例129>

根据本申请操作和中间体制备所述化合物。MS(M+H/1)＝438.1409

实施例901>

生成呈在细菌中表达的融合蛋白形式的PIM-1、-2和-3酶并通过IMAC柱色谱纯化(Sun,X.,Chiu,J.F.和He,Q.Y.(2005)Expert Rev.Proteomics,2:649-657)。经荧光标记的Pim特异性肽底物由American PeptideCompany(Sunnyvale，CA)定制合成。反应缓冲液含有10mM HEPES(pH 7.2)、10mM MgCl₂、0.01％Tween>

PIM反应在384孔板中以每孔最终体积为10μL进行。标准酶反应如下引发：将5μL 2×ATP和测试化合物加到5μL 2×酶和FAM-肽于反应缓冲液中的溶液中，其含有20pM PIM1、50pM PIM2或55pM PIM3、1μM FAM-肽和10μM ATP。在室温温育90分钟后，通过加入10μL终止缓冲液使磷酸化反应停止。每个独立反应中的产物和底物通过在Caliper(Caliper Life Sciences,Hopkinton,MA)上运行的12吸样针(sipper)微流体芯片(Caliper Life Sciences,Hopkinton,MA)分离。通过使用Caliper’s Optimizer软件(Hopkinton,MA)选择电压和压力使产物和底物的分离最佳化。分离条件使用-500V的下游电压、-2150V的上游电压和-1.2psi的筛选压力。产物和底物荧光团在488nm激发并在530nm检测。使用HTS Well Analyzer软件(Caliper Life Sciences,Hopkinton,MA)由电泳图计算底物转化。计算测试化合物的Ki值。示例性化合物的代表性PIM1LC3K Ki值(以微摩尔浓度为单位)参见表1。

实施例902>

由DSMZ保藏机构得到BaF3亲本细胞系。生成用PIM1或PIM2转染的BaF3细胞系。小鼠IL-3购自R&D Systems。G418购自Clontech。用于BaF3亲本细胞系的培养基含有RPMI、10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、2ng/mL mIL-3。用于BaF3PIM1细胞系和BaF3PIM2细胞系的培养基含有RPMI、10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、250μg/mL。用于MM1.S(多发性骨髓瘤细胞)细胞系的培养基含有RPMI、10％FBS、2mM L-谷氨酰胺。

将BaF3(鼠类白介素-3依赖性前B细胞系)亲本细胞、BaF3PIM1细胞、BaF3PIM2细胞和MM1.S(多发性骨髓瘤)细胞分别以2k/孔、5k/孔、5k/孔和10k/孔以45μL/孔接种在384孔板中。以5μL/孔加入测试化合物。将BaF3细胞(亲本的和转染的)温育过夜，而将MM1.S细胞在37℃、5％CO₂温育72小时。以50μL/孔加入CELL>试剂(Promega)，将板温育30分钟并在HT Analyst上读取其发光值。计算测试化合物的IC₅₀/EC₅₀值。

如上所述测试本申请代表性化合物并发现其展现出如在下表2中所示的Ki/IC₅₀/EC₅₀[以μM(微摩尔浓度)为单位]。

表2

实施例903>

如下进行hERG测定(2点)：

根据研究单位标准操作(ChanTest,Cleveland,OH)评价所选本申请化合物抑制hERG(人Ether-à-go-go相关基因)钾通道电流的体外效能。简言之，加入测试物后，在自动化PatchXpress 7000A系统(Molecular Devices,Sunnyvale,CA)中历时5分钟以1和10mM评价表达hERG的HEK-293细胞(n＝2/浓度)。hERG测定(2点)数据以最大电流的百分比表示。

如下进行hERG测定(IC₅₀)：

根据研究单位标准操作(ChanTest,Cleveland,OH)评价抑制hERG钾通道电流的体外效能。简言之，加入测试物后，使用自动化PatchXpress 7000A系统(Molecular Devices,Sunnyvale,CA)历时5分钟在表达hERG的HEK-293细胞(n＝2/浓度)中确定hERG抑制(％max)。基于在测试物浓度为0.01、0.1、1、10、30和100μM时的hERG抑制计算IC₅₀值。测量本申请一些化合物的hERG>50和IC₂₀值并与化合物5-氨基-N-(5-((4R,5R)-4-氨基-5-氟氮杂环庚烷-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2,6-二氟苯基)噻唑-4-甲酰胺[其中相应的R²为经氮连接的杂环基或经碳连接的碳环基的一系列PIM抑制剂中的No.139(US2013/0079321)]比较。该hERG数据表明本申请化合物降低了对QTc延长的易感性的可能性。过度延长的QTc间隔可导致严重的室性心律不齐和猝死(De>

词语“包含”和“包括”当在本说明书及所附权利要求书中使用时意在具体说明存在所描述的特征、整数、组成或步骤，但是它们不排斥或排除存在或添加有一个或多个其它特征、整数、组成、步骤或其组合。

尽管已经通过示例说明和实施例在一定程度上详细描述了上述发明从而用于理解清晰的目的，但是所述描述和实施例不应该被理解为限制本申请范围。本申请引用的所有专利和科学文献的全部公开内容都通过引用的方式明确地引入到本申请中。

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