葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测样品的前处理方法

摘要

本发明公开了一种葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测样品的前处理方法，本发明利用葡萄酒中含有的乙醇为萃取剂，直接在葡萄酒中一次加入足量的脱水剂(无水硫酸镁、无水硫酸钠)、分相盐(硫酸铵、磷酸氢二钾)、净化剂(N‑丙基乙二胺)，离心取上清液直接进行色谱、质谱分析。本发明方面在一步操作中实现了农残提取、浓缩与净化，方法简单可靠。

说明书

技术领域

本发明涉及农药残留检测领域，特别是涉及一种葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测样品的前处理方法。

背景技术

拟除虫菊酯是常用的广谱性杀虫剂，食品与饮料中该类农药的残留会对人体造成伤害。有研究表明拟除虫菊酯可以扰乱动物神经的正常生理，进而对动物产生危害。目前已有许多国家对食品、饮料中拟除虫菊酯的残留量做了严格控制。对于瓜果、蔬菜、谷类等农作物及植物油、葡萄酒等加工农产品中拟除虫菊酯的检测已有较多报道。

现行葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留定量测定方法主要是气相色谱法、气相色谱-质谱联用法。这些测定方法灵敏、精密、准确，但是需要对样品进行前处理(提取、浓缩、净化)。

目前，葡萄酒中农药残留测定的标准前处理方法是溶剂萃取结合固相萃取柱净化浓缩，该方法操作步骤冗长，且需要消耗大量有机溶剂，提取效率偏低。因此，研究葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留测定的快速检测前处理方法非常必要。

QuEChERS(Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged and Safe)方法最早由Anastassiades,M.提出，它采用乙腈为萃取液，在萃取液中加入无水MgSO₄除水，并加入氯化钠作为分相盐，然后取上清液加入净化剂(N-丙基乙二胺等)净化后直接进样分析。QuEChERS方法在蔬菜、水果等样品中得到广泛应用。目前，有研究者将QuEChERS方法引入到葡萄酒检测的样品前处理中，取得了较好的效果。然而，QuEChERS法仍然需要加入萃取液乙腈，提取液没有经过浓缩，且仍然需要对提取液进一步净化。

发明内容

本发明的目的是提供一种葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测样品的前处理方法，尤其是一种葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测的一步法样品前处理技术，即在一步操作中实现农残提取、浓缩与净化。

本发明的另一目的是提供一种葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测的方法。

葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测样品的前处理方法，包括以下步骤：取一定量的葡萄酒，一次性加入足量的脱水剂、分相盐和净化剂，振荡，离心，取上清液直接进行实验测定。

本发明所述的葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测样品的前处理方法，其中，所述的脱水剂为无水硫酸镁或无水硫酸钠中的至少一种；所述分相盐为氯化钠、硫酸铵、磷酸氢二钾中的至少一种；所述净化剂为N-丙基乙二胺；

所述葡萄酒的用量记为X mL，脱水剂的用量则为0.2X～0.4X g；分相盐的用量则为0.2X～0.4X g；净化剂的用量则为10X～30X mg。。

本发明所述的葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测样品的前处理方法，其中，具体包括以下步骤：取1瓶葡萄酒，摇匀，准确量取10.00mL，置于20mL塑料离心管中，一次性加入足量的脱水剂、分相盐和净化剂，涡旋振荡2min，在4000r·min^-1下离心，然后直接取上层清液进行实验测定。

本发明所述的葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测样品的前处理方法，其中，所述脱水剂的用量为2-4g；所述分相盐的用量为2-4g；所述净化剂的用量为100-300mg。

本发明所述的葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测样品的前处理方法，其中，所述葡萄酒中乙醇含量为12％-13％。

本发明所述的葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测样品的前处理方法进行葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测的方法，具体包括以下步骤：

(1)取不含农药残留的葡萄酒1瓶，其酒精含量记为A％，摇匀，

(2)准确量取10.00mL，置于20mL塑料离心管中，一次性加入足量的脱水剂、分相盐和净化剂，涡旋振荡2min，在4000r·min^-1下离心，直接取上层清液进行测定，此测定结果为空白样品；

(3)准确量取10.00mL的葡萄酒3份，分别加入农药混合标准溶液10μL，一次性加入与步骤2中等量的脱水剂、分相盐和净化剂，涡旋振荡2min，在4000r·min^-1下离心，直接取上层清液进行回收率测定，标准曲线法计算测定结果。

本发明所述的葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测的方法，其中，所述农药混合标准溶液为6种农药混合而成，包括胺菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯，浓度均为10μg/mL。

本发明所述的葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测的方法，其中，回收率测定条件和方法为：

GC-ECD条件，DB-1701石英毛细管色谱柱，30.0m×0.25mm×0.25μm，日本岛津公司，固定相为甲基聚硅氧烷涂层，弱/中极性；

色谱柱温度由程序升温设定：初始温度220℃，保持1min，以5℃·min^-1升温至250℃，继而以20℃·min^-1升温至280℃，保持15min；进样口温度为280℃；检测器为300℃；进样量为1μL，分流进样，分流比为20；

定量方法为标准曲线法定量，若测定结果为X，葡萄酒样品中农药含量C＝X/(100/A)μg/mL，A为酒精含量。

本发明方法与现有技术相比，其突出效果在于：

(1)本发明方法是一种快速、准确、简便的样品前处理方法。葡萄酒中含有12％-13％的乙醇，加入适量脱水剂(无水硫酸镁、无水硫酸钠)、分相盐(氯化钠、硫酸铵、磷酸氢二钾)时，在盐析作用下乙醇与葡萄酒中的水及水溶性色素、丹宁分层，脂溶性农药残留进入上层，由于乙醇的含量较少，恰恰起到了提取液浓缩的效果，同时，在萃取过程中加入N-丙基乙二胺可以有效地吸附色素，起到净化作用。

(2)本发明方法可对六种常用拟除虫菊酯药物(胺菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯)实现快速准确测定。

(3)本发明方法绿色环保，检测限低、准确度高、精密度好。

下面结合附图说明和具体实施例对本发明所述的葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测样品的前处理方法作进一步说明。

附图说明

图1为有机干红葡萄酒中加入农药混合标准溶液的色谱图。

具体实施方式

实施例1采用葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测样品的前处理方法对有机干红葡萄酒样品加标回收率的检测试验

取不含农药残留的有机干红葡萄酒1瓶，酒精含量为12.5％，摇匀，准确量取10.00mL，置于20mL塑料离心管中，加入磷酸氢二钠2g、无水硫酸镁3g、N-丙基乙二胺150mg，涡旋振荡2min，离心(4000r·min^-1)，然后，直接取上层清液进行测定，此测定结果为空白样品。

同于上述操作，取3份10.00mL有机干红葡萄酒，分别加入农药混合标准溶液10μL，进行回收率测定，标准曲线法计算测定结果。所述农药混合标准溶液为6种农药混合而成，包括胺菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯，浓度均为10μg·mL^-1。

样品加入农药标准后的色谱图如图1所示。其中，胺菊酯(9.992)、甲氰菊酯(9.931)、氯氟氰菊酯(11.581)、氯氰菊酯(12.19)、氰戊菊酯(14.211)和溴氰菊酯(15.153)，加入浓度均为10μg·mL^-1。

其中，回收率测定条件和方法为：

GC-ECD条件，DB-1701石英毛细管色谱柱(30.0m×0.25mm×0.25μm，日本岛津公司，固定相为甲基聚硅氧烷涂层，弱/中极性)；

色谱柱温度由程序升温设定：初始温度220℃，保持1min，以5℃·min^-1升温至250℃，继而以20℃·min^-1升温至280℃，保持15min；进样口温度为280℃；检测器为300℃；进样量为1μL，分流进样，分流比为20。

定量方法为标准曲线法定量，若测定结果为X，葡萄酒样品中农药含量C(μg/mL)为：C＝X/(100/12.5)，12.5为酒精含量V/V，若酒精含量变化公式类推即可。

表1有机干红葡萄酒加标回收实验测定结果(n＝3)

测定结果表明：葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测样品的前处理方法应用于有机红葡萄酒中测定拟除虫菊酯类农药的回收率为81.1-93.1％之间，RSD在0.658-5.41％之间。检出限低于0.003μg/mL。

实施例2葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测样品的前处理方法对干红葡萄酒样品的检测试验

取干红葡萄酒1瓶，酒精含量为12.0％，摇匀，准确量取10.00mL，置于20mL塑料离心管中，加入硫酸铵3g、无水硫酸钠2g、N-丙基乙二胺200mg，涡旋振荡2min，离心(4000r·min^-1)，然后，直接取上层清液进行测定，此测定结果为空白样品。

同于上述操作，取3份10.00mL干红葡萄酒，分别加入农药混合标准溶液10μL，进行回收率测定，标准曲线法计算测定结果。所述农药混合标准溶液为6种农药混合而成，包括胺菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯，浓度均为10μg·mL^-1。

回收率测定条件和方法与实施例1相同。

结果表明：干红葡萄酒中未检出拟除虫菊酯类农药残留。样品加入农药标准溶液后的色谱图与实施例1基本相同。加标回收率为82-96％。

实施例3葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测样品的前处理方法对干白葡萄酒样品的检测试验

取干白葡萄酒1瓶，酒精含量为12.0％，摇匀，准确量取10.00mL，置于20mL塑料离心管中，加入磷酸氢二钾3g、无水硫酸钠4克、N-丙基乙二胺100mg，涡旋振荡2min，离心(4000r·min^-1)，然后，直接取上层清液进行测定，此测定结果为空白样品。

同于上述操作，取3份10.00mL干白葡萄酒，分别加入农药混合标准溶液10μL，进行回收率测定，标准曲线法计算测定结果。所述农药混合标准溶液为6种农药混合而成，包括胺菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯，浓度均为10μg·mL^-1。

回收率测定条件和方法与实施例1相同。

结果表明：干白葡萄酒中未检出拟除虫菊酯类农药残留。样品加入农药标准溶液后的色谱图与实施例1，基本相同。加标回收率为84.5-95.0％。

实施例4葡萄酒中拟除虫菊酯类农药残留检测样品的前处理方法对冰红葡萄酒样品的检测试验

取干冰红葡萄酒1瓶，酒精含量为13.0％，摇匀，准确量取10.00mL，置于20mL塑料离心管中，加入硫酸铵4g、无水硫酸镁2克、N-丙基乙二胺300mg，涡旋振荡2min，离心(4000r·min^-1)，然后，直接取上层清液进行测定，此测定结果为空白样品。

同于上述操作，取3份10.00mL冰红葡萄酒，分别加入农药混合标准溶液10μL，进行回收率测定，标准曲线法计算测定结果。所述农药混合标准溶液为6种农药混合而成，包括胺菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯，浓度均为10μg·mL^-1。

回收率测定条件和方法与实施例1相同。

结果表明：冰红葡萄酒中未检出拟除虫菊酯类农药残留。样品加入农药标准溶液后的色谱图与实施例1，基本相同。加标回收率为84.1-98.2％。

以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。