一种改良的毕赤酵母蛋白表达载体及其构建方法

摘要

本发明公开了一种改良的毕赤酵母蛋白表达载体及其构建方法。本发明根据载体pPinkα‑HC序列，选择其中一段约300bp的序列设计一对引物pPinkα‑HCM‑Fse1‑F和pPinkα‑HCM‑BamH1‑R，在其两头的粘性末端酶Fse1和BamH1中插入了新的唯一的酶切位点Sal1、Pst1、PspOM、Nco1、Apa1、EcoR1，并在后面接上6个His标签CATCATCATCATCATCAT，实现了粘性末端的酶切位点数量多、内切酶的通用性好、价格低廉、酶切位点之间的间隔充裕、适合为双酶切提供保护碱基，同时还插入了6个His标签，以方便对获取的目标蛋白做Western blot验证。