桑白皮脂肪油在制备治疗脾虚水湿不化药物中的应用

摘要

本发明涉及桑白皮脂肪油在制备治疗脾虚水湿不化药物中的应用，用于制备治疗脾虚水湿不化的药物，实现桑白皮脂肪油在制备治疗脾虚水湿不化药物中的应用问题，一种桑白皮脂肪油在制备治疗脾虚水湿不化药物中的应用，所述的桑白皮脂肪油的制备方法是，将干燥的桑白皮药粉装在滤筒内，置于索氏提取器中，加入石油醚回流提取，得提取液，冷却至室温，过滤，得滤液，滤液置于蒸发皿中，水浴挥去溶剂，干燥后，冷却，即得桑白皮脂肪油，本发明原料丰富，易提取制备，成本低，药用价值高，有效用于制备治疗脾虚水湿不化药物，开辟了治疗脾虚水湿不化药物的新途径，经济和社会效益显著。

说明书

技术领域

本发明涉及医药，特别是一种桑白皮脂肪油在制备治疗脾虚水湿不化药物中的应用。

背景技术

传统中医理论认为，脾脏的主要生理功能有两项，一是主运化，二是主统血。其中脾的运化功能主要是指的运化水谷精微和运化水液这两个方面，如果是出现脾虚的情况，脾脏的运化功能就会受到影响，也就是水液的运化受到影响，就会导致水湿不化的情况，影响身体健康，要及时进行治疗。

桑白皮为桑科植物桑(拉丁学名：Morus alba L.)的干燥根皮，性寒、味甘，归肺经，具有泻肺平喘、利水消肿的功效，现代药理学研究表明，桑白皮具有免疫、降血脂、抗炎等作用，含黄酮类成分：桑素(mulberrin)，桑皮色烯素(mulberrochromene)，环桑素(cyclomulberrin)，环桑皮色烯素(cyclomulberro-chromene)，桑根皮素(morusin)，环桑皮素(cyclomorusin)，氧化二氢桑根皮素(oxydihydromomsin)，桑黄酮(kuwanon)A、B、C、D、E、F、G(即albanin F，moracenin B)、H(即albanin G，moracenin A)、I、K、L、Y、Z，桑白皮素(moracenin)C、D，桑根酮(sffnggenone)A～P。又含桑呋喃(mulberrofuran)A、B、C、K、N、0、M、P、Q，桦皮酸。香豆素类：5,7-羟基香豆素(5,7-dihydmxycoumarin)伞形花内酯(umbelliferone)、东莨菪内酯(即东莨菪素，scopoletin)、莨菪内酯等成分。多糖类：粘液素、桑多糖、甲克素、壳聚糖。还含α-及β-香树精、谷固醇、挥发油、鞣质等。但至今未见有桑白皮脂肪油在制备治疗脾虚水湿不化药物中的应用。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种桑白皮脂肪油在制备治疗脾虚水湿不化药物中的应用，用于制备治疗脾虚水湿不化的药物，实现桑白皮脂肪油在制备治疗脾虚水湿不化药物中的应用问题。

本发明解决的技术方案是，一种桑白皮脂肪油在制备治疗脾虚水湿不化药物中的应用，所述的桑白皮脂肪油的制备方法是，将干燥的桑白皮药粉装在滤筒内，置于索氏提取器中，加入石油醚回流提取，得提取液，冷却至室温，过滤，得滤液，滤液置于蒸发皿中，水浴挥去溶剂，干燥后，冷却，即得桑白皮脂肪油。

本发明原料丰富，易提取制备，成本低，药用价值高，有效用于制备治疗脾虚水湿不化药物，开辟了治疗脾虚水湿不化药物的新途径，经济和社会效益显著。

具体实施方式

以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。

一种桑白皮脂肪油在制备治疗脾虚水湿不化药物中的应用，所述的桑白皮脂肪油的制备方法是，将干燥的桑白皮粉末装入滤筒内，置于索式提取器中，加入溶剂石油醚溶解，石油醚的加入量为每10g桑白皮粉末加入石油醚100mL，60-90℃回流提取6h，得提取液，提取液冷却至室温，过滤，得滤液，滤液置于蒸发皿中，水浴挥去溶剂石油醚，100℃干燥1h，冷却30min，即得桑白皮脂肪油(平均提取率为2.8％)。

本发明制备的桑白皮脂肪油具有显著提高胃排空率、小肠推进率、尿D-木糖排泄率；升高胃肠激素中血清GAS、血浆MTL、SP水平，降低血浆VIP水平，对脾虚引起的胃肠功能紊乱与胃肠激素异常有调节作用，有效用于制备治疗脾虚水湿不化的药物，并经实验取得了非常好的有益技术效果，有关试验资料如下：

1实验材料

1.1药物及试剂

桑白皮饮片购自河南省顺康医药有限责任公司中草药31部，由河南中医药大学陈随清教授和董诚明教授鉴定为桑科植物桑Morus alba L.的干燥根皮。D-木糖(郑州派尼化学试剂厂)；D-木糖测试盒(南京建成生物工程研究所)；蓝色葡聚糖2000(北京索莱宝科技有限公司)；大鼠GAS、MTL、SS、VIP、SP ELISA试剂盒(武汉基因美生物科技有限公司)。

1.2动物及饲料

Wistar大鼠，SPF级，体重150-170g，雌雄各半，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2012-0001。高脂低蛋白饲料、AIN-76A纯化饲料(北京华阜康生物科技股份有限公司，许可证号：SCXK(京)2014-0008)。

1.3仪器

大鼠代谢笼装置(江苏苏州冯氏实验动物有限公司)；Arium 611VF型超纯水仪(德国Sartorius公司)；Centrifuge-5810型、Centrifuge-5804R型离心机(德国Eppendorf公司)；BioMate*3S型分光光度计(美国Thermo Fisher Scientific公司)；AB204-N型万分之一精密分析天平(瑞典Mettler Toledo公司)；微量加样器(芬兰Biohit公司)；iMark酶标仪(美国Bio-Rad公司)；LRH系列生化培养箱(上海一恒科学仪器有限公司)。

2实验方法

2.1实验药物：本发明桑白皮脂肪油。

2.2动物分组及模型建立

Wistar大鼠48只，适应性喂养3d，随机分为对照组(NC)、模型组(M)、CMC-Na组(CMC)、四君子颗粒组(SJZ)、桑白皮水煎总提物组(MC)、桑白皮脂肪油组(MC-FO)，每组8只。采用高脂低蛋白饮食加力竭游泳法进行造模，每日下午以10％体重负重游泳至力竭，水温25±1℃，造模6周。

2.3给药

SJZ组给药剂量5.25g/kg，MC组给予桑白皮水煎液浓缩物1.036g/kg(相当于原药材5.6g/kg)，MC-FO组根据提取率按其在原药材中含量折算成同等剂量即0.1568g/kg给予受试动物。

将脂肪油加入0.5％CMC-Na溶液中，在磁力搅拌器上搅拌混匀，最终为淡黄色液体，并以给予CMC-Na溶液作为溶剂对照组。NC组、M组给予蒸馏水，CMC组给予0.5％CMC-Na溶液，给药体积为1.0mL/100g体重，连续灌胃28d。

2.4胃排空率和小肠推进率的测定

2.4.1胃排空率的测定

大鼠禁食12h后，灌胃给予2％蓝色葡聚糖2000(DB-2000)溶液，0.4mL/只。30min后进行麻醉、解剖操作，将大鼠的胃取出，然后沿胃大弯侧将胃剪开，将胃中残留物溶解于装有4mL双蒸水的10mL离心管中，将充分溶解后的溶液以3000r/min离心10min，取出上清液，将上清液装入2mL离心管中，以12000r/min离心10min，取出上清液备用；取2％DB-2000溶液0.4mL溶解于4mL的双蒸水中，以12000r/min离心10min，作为基准液。使用紫外分光光度计分别检测上述两组液体在620nm处的吸光度值，然后计算胃排空率，胃排空率(％)＝(1-胃中DB-2000吸光度值/基准DB-2000吸光度值)×100％。

2.4.2小肠推进率的测定

前期处理同测定胃排空率的方法一致，解剖之后取幽门括约肌至回肠末端小肠的部分，将其放置于用生理盐水润湿的平板上使其平铺展开，在不施加任何的牵引力的情况下，分别量取幽门括约肌至色素的最前端及幽门括约肌至回肠末端的距离，两者的比值即为小肠的推进率。小肠推进率(％)＝小肠内色素推进的距离/小肠全长×100％。

2.5大鼠尿D-木糖排泄率的测定

大鼠禁食12h后，按1mL/100g体重灌胃给予3％D-木糖溶液，将大鼠放入代谢笼中，收集5h尿液，3000r/min离心10min，取上清液备用。按照D-木糖试剂盒说明书检测尿中D-木糖的含量。

2.6胃肠激素的测定

大鼠麻醉后采用腹主动脉取血方式进行取血，血清管不抗凝，血浆管采用EDTA-K₂抗凝，静置2h后，血清管3000r/min离心10min，血浆管3000r/min离心15min，分别取上清液，分装，冻存于-80℃冰箱中待测。按照ELISA试剂盒说明书检测血清GAS和血浆MTL、VIP、SP、SS的水平。

2.7数据处理

采用SPSS17.0软件统计分析，结果均用表示，采用单因素方差分析(One-WayANOVA)，P<0.05表示具有显著性差异。

3结果

3.1桑白皮脂肪油组分对脾虚水湿不化大鼠胃肠功能的影响

与NC组比较，M组胃排空率、小肠推进率、尿D-木糖排泄率均显著降低(P<0.05或P<0.01)，说明大鼠胃肠功能紊乱。给药后，MC-FO组胃排空率、小肠推进率、尿D-木糖排泄率均显著升高(P<0.05或P<0.01)，表明桑白皮脂肪油组分对脾虚引起的胃肠功能紊乱具有一定的改善作用。见表1。

表1桑白皮脂肪油组分对脾虚水湿不化大鼠胃肠功能的影响(n＝6)

注：与NC组比，^*P<0.05，^**P<0.01；与M组相比，^#P<0.05，^##P<0.01。

3.2桑白皮脂肪油组分对脾虚水湿不化大鼠胃肠激素的影响

与NC组比较，M组血清GAS、血浆MTL、SP均显著降低(P<0.01)，血浆SS、VIP显著升高(P<0.05或P<0.01)，说明大鼠胃肠激素异常。给药后，MC-FO组血清GAS、血浆MTL、SP显著升高(P<0.05或P<0.01)，血浆VIP显著降低(P<0.01)，表明桑白皮脂肪油组分对脾虚引起的胃肠激素异常具有一定的调节作用。见表2。

表2桑白皮脂肪油组分对脾虚水湿不化大鼠胃肠激素的影响(n＝6)

注：与NC组比，^*P<0.05，^**P<0.01；与M组相比，^#P<0.05，^##P<0.01。

结合以上2个实验结果可知，与NC组相比，CMC-Na组胃肠功能紊乱、胃肠激素异常，提示CMC-Na溶液作为溶剂对照对本实验没有影响。

4结论

本发明发现桑白皮各化学拆分组分对脾虚水湿不化大鼠胃肠功能及胃肠激素有影响，桑白皮脂肪油是改善胃肠功能的有效部位，为后期桑白皮性味归属奠定基础。

本发明采用高脂低蛋白饮食加负重力竭游泳法建立脾虚水湿不化大鼠模型，该模型符合中医病因病机。中医理论中“脾为后天之本，气血生化之源”，其主要功能是“主运化”。当脾气不足，失其健运时会引起脾虚证，多因饮食不节，劳累过度，久病耗伤脾气所致。脾失健运则机体的消化、吸收等功能减退，说明中医学“脾”的主要生理功能及病理表现与现代医学消化系统的关系密切。脾虚证涉及多系统多器官功能异常，胃肠功能紊乱是一个相当重要的方面。前人研究发现，脾虚时胃肠运动节律紊乱，胃排空加快或延迟，肠推进加快但随病情加重而减弱。

在胃肠功能检测中，胃排空率和小肠推进率是评估胃肠动力状况的重要指标。胃排空率是反映胃容量、近端胃与远端胃之间的压力梯度、收缩性和协调性的指标，在一定程度上反映胃的生理功能。小肠推进率则反映了小肠的运动状态。DB-2000是不被肠道吸收的色素，采用DB-2000灌胃检测大鼠胃排空率和小肠推进率，可以较直接反映胃肠动力状态，是目前检测实验动物胃排空率、小肠推进率的主要实验方法。

木糖吸收情况是临床判断脾虚证的重要指标之一。D-木糖是一种水溶性的戊糖，在小肠内的吸收与细胞膜表面的Na-K-ATP酶活性有关。而脾虚水湿不化症状时大鼠体内Na-K-ATP酶活性降低，小肠黏膜具有吸收功能的绒毛寿命及长度变短，并且数量减少，从而导致D-木糖吸收率降低。D-木糖口服后通过被动扩散的方式在小肠内吸收，不需要消化酶的参与，其吸收后在体内不被肝脏代谢而经肾排出，规定时间内尿中D-木糖的量可反映小肠的吸收功能，是诊断胃肠功能降低的客观指标。

本发明结果显示桑白皮脂肪油组分提高胃排空率、小肠推进率、尿D-木糖排泄率，表明其对脾虚引起的胃肠功能紊乱具有一定的改善作用。

脾虚证是以胃肠道消化吸收功能降低为主要表现的神经体液调节紊乱、营养物质代谢低下的一种虚损性疾病。大量研究证明实验动物及脾虚病人消化道胃肠激素分泌出现异常，研究认为，胃肠激素的紊乱与脾虚证关系密切，二者互为因果关系。

为从微观层面揭示桑白皮对脾虚水湿不化证相关胃肠运动的作用机制，我们观察了GAS、MTL、VIP、SS、SP这五个比较有代表性的胃肠激素。GAS能提高胃电慢波频率和加速胃窦收缩，舒张幽门泵，促进胃排空，对小肠、结肠的收缩也有一定的促进作用。MTL由十二指肠及空肠黏膜单核细胞分泌，可直接作用于平滑肌细胞上的受体，引起平滑肌收缩和加快小肠蠕动。MTL还可以启动消化间期移行性复合运动Ⅲ期收缩，增强胃体收缩，加速胃排空液体，被认为是一种内源性激素促胃动素。VIP是胃肠抑制性神经递质，延迟胃排空，抑制小肠环形括约肌的收缩，降低十二指肠收缩频率，松弛结肠平滑肌，减弱结肠运动。SS是一种典型的脑肠肽，对胃排空、肠道内容物转运、回肠胆囊收缩等生物功能均有抑制作用。SP在周围神经系统中的含量较中枢系统要低，在整个胃肠道均有分布，是调节胃肠运动的兴奋性神经递质，可以松弛食管下段括约肌、刺激胃蛋白酶分泌，抑制胃酸分泌，对胃肠道平滑肌有强烈双重收缩作用。

本发明结果显示桑白皮脂肪油组分能显著升高血清GAS、血浆MTL、SP水平，降低血浆VIP水平，表明其对脾虚引起的胃肠激素异常有调节作用。

综上所述桑白皮脂肪油组分能改善脾虚水湿不化大鼠的胃肠功能，对胃肠激素具有一定的调节作用，推断桑白皮脂肪油对脾虚引起的胃肠功能紊乱具有一定的改善作用，其作用机制可能与调节血液中紊乱的胃肠激素趋于正常水平有关，有效用于制备治疗脾虚水湿不化的药物，开拓了桑白皮的新用途和药用价值，是治疗脾虚水湿不化药物上的一大创新，经显著的经济和社会效益。