一种虎杖总蒽醌与三七总皂苷组合物及其应用

摘要

本发明之目的就是提供一种虎杖总蒽醌与三七总皂苷组合物及其应用，可有效解决治疗早期糖尿病肾病的用药问题。本发明解决的技术方案是，该虎杖总蒽醌与三七总皂苷组合物是由质量比计的：虎杖总蒽醌：三七总皂苷=1‑1.5:1‑1.5。该组合物有效用于治疗早期糖尿病肾病实现组合物在制备治疗早期糖尿病药物中的应用。本发明组分简单，易于生产，服用方便，效果好，有效用于对早期糖尿病治疗的用药问题，是药物上的一大创新，经济和社会效益显著。

说明书

技术领域

本发明涉及医药，特别是一种虎杖总蒽醌与三七总皂苷组合物及其应用。

背景技术

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病常见的慢性微血管并发症之一,是糖尿病(diabetesmellitus,DM)对肾脏的特异性损伤，它威胁着患者的生命,影响着患者和家人的生活质量,且在世界范围内糖尿病肾病已成为糖尿病患者的主要死因。目前,对根治糖尿病肾病我们仍缺乏理想药物。从而改善患者生命生活质量。从中医角度来讲，瘀血是糖尿病肾病发生转化的主要病因。瘀血既是糖尿病的病理产物,又是糖尿病并发症发病的动因。血瘀贯穿糖尿病肾病的始终，因为中医讲究“对因治疗”，因此，要想阻止或延缓糖尿发生肾脏并发症或对已经出现糖尿病肾病延缓其发展至终末期肾病(end-stagerenaldisease,ESRD),达到“既病防变”的目的，就必须运用活血化瘀类药物对糖尿病肾病进行早期治疗，从而改善糖尿病肾病患者生命、生活质量，减少医疗浪费。

中药虎杖来源于蓼科植物虎杖(Polygonum cuspidatum Siebet Zucc)的根与茎，具有活血化瘀，清热解毒等功效。近年来，临床上虎杖常用于DN的防治，又因为糖尿病肾病以“虚为本，燥热为标”、“多虚多瘀”为特点，所以临床上虎杖多与黄芪、益母草等补气活血药配伍应用。药理研究表明，虎杖有效成分具有抗病毒、抗菌、消炎、抗氧化、抑制血小板聚集和利尿等作用,因此在临床被广泛应用。而在现代医学研究中表明虎杖总蒽醌能够通过多种途径对糖尿病肾病的肾脏进行保护。如降低尿蛋白、尿微量白蛋白，减少尿素氮、肌酐的产生等。

同时，三七作为活血药的代表中药在糖尿病肾病的治疗中也有很多应用。 很多文献证实三七总皂苷具有降血脂，改善动脉粥样硬化、抑制尿毒血清诱导的肾小管上皮细胞增殖和总胶原的分泌,从而延缓肾小管-间质纤维化进程,改善肾功能。研究还表明,三七总皂苷能降低血小板聚集,改善血液黏稠度,扩张肾脏血管,改善微循环。因为三七总皂苷具有多种生物活性，不仅在心脑血管方面得到了大力发展，而且广泛用于糖尿病肾病的研究和治疗。即使在症、舌、脉上无明显的瘀证表现,但是在肾小球硬化和肾间质纤维化过程中,血液流变的变性、免疫反应介导的凝血机制和脂代谢的紊乱以及肾脏病理学的改变都是血瘀的表现。

虽然虎杖总蒽醌与三七总皂苷均属于活血化瘀药，但是其作用有限，使用效果并不尽人意，那么能否将虎杖总蒽醌与三七总皂苷组合在一起构成的组合物用于治疗早起糖尿病肾病至今未见有公开报道。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种虎杖总蒽醌与三七总皂苷组合物及其应用，可有效解决治疗早期糖尿病肾病的用药问题。

本发明解决的技术方案是，该虎杖总蒽醌与三七总皂苷组合物是由质量比计的：虎杖总蒽醌：三七总皂苷＝1-1.5:1-1.5。该组合物有效用于治疗早期糖尿病肾病实现组合物在制备治疗早期糖尿病药物中的应用。

本发明组分简单，易于生产，服用方便，效果好，有效用于对早期糖尿病治疗的用药问题，是药物上的一大创新，经济和社会效益显著。

附图说明

图1为本发明虎杖总蒽醌与三七总皂苷及其配比应用对大鼠体重的影响；

图2为本发明虎杖总蒽醌与三七总皂苷及其不同配比应用对大鼠体重的影 响；

图3为本发明对大鼠尿蛋白和尿微量白蛋白的影响图；

图4为本发明对DN大鼠尿蛋白和尿微量白蛋白的影响图；

图5为本发明对大鼠尿素氮肾功能的影响图；

图6为本发明对大鼠血肌酐肾功能的影响图；

图7为本发明对大鼠肾脏的影响图；

图8为本发明对大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C的影响图；

图9为本发明对大鼠肾组织TGF-β1的含量表达图；

图10为本发明对大鼠肾组织中AGEs的表达情况图；

图11为本发明对大鼠肾组织中RAGE的表达情况图；

图12为本发明对大鼠肾组织中FN的表达情况图；

图13为本发明对大鼠肾组织中Smad3a的表达情况图。

具体实施方式

以下结合实施例和具体情况对本发明的具体实施方式做详细说明，

本发明在具体实施中可由以下实施例给出：

实施例1：本发明所称的组合物为虎杖总蒽醌与三七总皂苷的组合物，虎杖总蒽醌与三七总皂苷质量比为1：1。

实施例2：本发明所称的组合物为虎杖总蒽醌与三七总皂苷的组合物，虎杖总蒽醌与三七总皂苷质量比为1.5：1。

实施例3：本发明所称的组合物为虎杖总蒽醌与三七总皂苷的组合物，虎杖总蒽醌与三七总皂苷质量比为1：1.5。

实施例1和实施例3给出的虎杖总蒽醌与三七总皂苷组合物有效用于治疗早期糖尿病肾病，实现在制备、治疗早期糖尿病肾病药物中的应用，所述的虎 杖总蒽醌与三七总皂苷均为市售产品(现有产品)。

本发明组合物经实地试验取得了非常满意的有益技术效果，有关试验资料如下：

(一)、材料与方法

1、材料

1.1、药材

虎杖总蒽醌，批号：ZL140215869含量：50％由南京泽朗医药科技有限公司提供。

三七总皂苷，批号：DR20131106含量：80％由上海历鼎生物技术有限公司提供。玉泉丸，批号：140302规格：60克/盒成都九芝堂金鼎药业有限公司生产。

1.2、试剂

链脲佐菌素(STZ)，美国sigma公司生产，货号：S01300，北京博爱港商贸中心提供；

生理盐水，河南双鹤华利药业有限公司，批号：1410045B；

甘油三酯(TG)试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20150203；

总胆固醇(T--CHO)试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20150204；

低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20150209；

高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20150204；

大鼠(Rat)尿微量白蛋白Elisa试剂盒，中国原子能科学研究所提供批号：20150102B；

尿蛋白总量试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20150115；

尿素氮(BUN)试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20150205；

肌酐(Cr)试剂盒(肌氨酸氧化酶法)，南京建成生物工程研究所，批号：20150206；

兔抗大鼠AGEs多克隆抗体(bs-1158R)，规格：0.2ml/支，北京博奥森生物技术有限公司生产；

兔抗大鼠RAGE多克隆抗体(bs-0177R)，规格：0.2ml/支，北京博奥森生物技术有限公司生产；

兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗体(bs-0103R)，规格：0.2ml/支，北京博奥森生物技术有限公司生产；

兔抗大鼠Smad3(bs-3484R)多克隆抗体，规格：0.2ml/支，北京博奥森生物技术有限公司生产；

兔抗大鼠FN(bs-4859R)多克隆抗体，规格：0.2ml/支，北京博奥森生物技术有限公司生产；

二抗：SP Kit(Broad Spectrum)广谱SP免疫组化检测试剂盒(SP-0022)规格：0.2ml/支，北京博奥森生物技术有限公司生产；

DAB显色试剂盒，福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3、仪器

离心机，北京医疗仪器修理厂；

超低温冰箱，SANYO生产；

电子天平，LT2002E，常熟市天量仪器有限责任公司2000/0.01g；

可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司；

UV-2000分光光度计，尤尼柯(上海)仪器有限公司；

Biotek酶标仪，Epoch，美国伯腾仪器有限公司；

组织脱水机，EX45521303，Thermo SCIENTIFIC；；

病理组织漂烘仪，常州市中威电子仪器有限公司；

切片机，MiSCrom HM325，Thermo SCIENTIFIC；

染色机，HIS80S30Y,Thermo SCIENTIFIC；

光学显微镜BX-61，日本OLYMPUS(奥林巴斯)公司；

电热恒温水浴箱DHG-9031，上海生产；

1.4、动物与饲料

SD大鼠，雄性，体重：180～200g；由山东省实验动物中心提供，许可证号：SCXK鲁20130001；

饲料，清洁级，由河南省实验动物中心提供，许可证号:SCXK(豫2010-0002)；

1.5、0.1M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH4.3)配制方法

①准确称取柠檬酸(C₆H₈O₇·H₂O)2.1g，加入双蒸水至100ml，配成A溶液；

②柠檬酸钠(Na₃H₅O₇·H₂O)2.94g，加双蒸水100ml配成B溶液；

③用时将A、B液按1：1混合，用PH计测定PH值，调节PH＝4.3，即是所需配置STZ的柠檬酸缓冲液。

2、方法

2.1、糖尿病肾病模型的建立

将正常SD大鼠喂养1周适应环境后，禁食12小时，选取100只，除空白组10只外，其余90只以65mg·kg^-1剂量一次腹腔注射STZ，STZ溶于0.1mol·l^-1>-1作为糖尿病模型建立标准，共成模77只，将未成模的排除实验。

2.2、分组与给药方法

将成模大鼠随机分为7组：模型组、玉泉丸组、虎杖总蒽醌组、三七总皂苷组、本发明组合物组(其中，虎杖总蒽醌与三七总皂苷质量比分别为1:1、1.5:1、1:1.5)，每组11只。虎杖总蒽醌组灌服8.75mg/Kg(相当于原药材15g)，三七总皂苷组灌服35mg/Kg(相当于成人服用三七总皂苷制剂血塞通片的7倍)，组合物组(其中，1:1组为43.75mg；1.5:1组为48.13mg；1.5:1组为52.5mg)，玉泉丸组灌服玉泉丸剂量为600mg/Kg(相当于成人用药剂量的7倍)，空白组与模型组大鼠每100g体重灌服1ml的生理盐水，每天给药1次，连续给药8周。

2.3、标本采集及处理

在给药后每隔一周检测每组大鼠的血糖值。用三诺安稳血糖测试仪剪尾取血测空腹血糖。代谢笼准确收集24h尿量，新鲜尿样以3000rpm速度离心15min，去沉渣-20℃冰箱中保存，用以24h尿蛋白和尿微量白蛋白的检测；腹主动脉取血5ml左右，所取血液以3000rpm速度离心10min，放置几分钟取血清-80℃保存备用。另外腹主动脉取血5ml，肝素钠抗凝，供测定空腹血糖、血脂四项、血液流变学等指标；取双肾，去除肾包膜，并测其质量，双肾用4％甲醛溶液固定，进行HE染色做病理切片。

2.4、检测指标和测定方法

2.4.1、一般性指标测定：每周测定一次大鼠空腹血糖、体重，并观察记录动物的饮水、饮食量、尿量、精神状态等、大便性状等一般情况；

2.4.2、体重及肾脏指数测定：每周定时准确称量各组SD大鼠的体重，计算出 各组体重的变化。第八周末，取血后取出左、右肾，冲洗去除肾包膜，并用吸水纸吸干后，运用电子天平准确称重，根据公式肾脏指数(KW/BW)＝[双侧肾脏重量(KW)之和(g)/体重(BW)(g)]×100﹪进行计算；

2.4.3、尿微量白蛋白测定:在给药前即成模后，及给药第4、8周末，取SD大鼠置于代谢笼中，每笼1只适应1天后，禁食不禁水，用锥形瓶收集24h尿液，并记录尿量。将所取尿液，以3000rpm，离心10min后，取上清液稀释若干倍后，运用考马斯亮兰法进行定量检测，严格按说明书进行操作。

2.4.4、血液流变指标检测以及生化指标测定：运用LGR80A血流变仪检测全血黏度、血浆粘度。FBG，PBG，TC，HDL-C、LDL-C、TG、Cr等指标测定。运用酶标仪检测，严格按说明书进行操作。

2.4.5、肾脏组织切片制作步骤：肾组织用多聚甲醛溶液固定后，修整组织块，流水冲洗，梯度酒精脱水，二甲苯I、II各透明30min,浸蜡，最后进行包埋,待组织自然冷却后将其休成梯形。将蜡块固定在切片机上，调好距离，切成5um厚的切片。然后将切好的片子小心的放入摊片机内展片，待片子展开后用载玻片捞起，做好标记，烘片待用。

(1)切片HE染色步骤

①将烘好的切片采用二甲苯、不同浓度的酒精脱蜡至水。

②苏木精染色10分钟。

③第一次流水冲洗2～3分钟，盐酸酒精分化30秒；第二次水洗15～20分钟，再用蒸馏水浸泡5分钟，0.5％的伊红染色25～30分钟；第三次水洗，梯度酒精脱水。

④二甲苯I、II各透明10分钟。

⑤滴适量的中性树胶封片，缓慢盖上盖玻片，尽量避免气泡产生，轻轻檫 去多余的树胶，晾干，待观察。

(2)免疫组化步骤

首先，根据抗体说明书进行预实验确定不同抗体的抗体稀释液的浓度，选择最佳显色浓度，本试剂的最佳浓度为1：200。免疫组化步骤如下：

①切片经二甲苯脱蜡3次，每次10分钟；梯度酒精(50％、70％、95％、100％)各脱水一次，每次5分钟；PBS洗3次，每次5分钟。

②用新鲜蒸馏水配制的3％过氧化氢孵育10分钟，来阻断内源性过氧化物酶活性；PBS洗3次，每次5分钟。

③将切片放入0.01mol/L的柠檬酸钠缓冲液中，采用微波煮沸法进行抗原修复，冷却至室温后用用蒸馏水冲洗3次，再用PBS平衡5分钟。

④滴加BSA封闭液，将切片置于湿盒内放置20分钟；倾去多余血清，滴加各指标的一抗，阴性对照用PBS代替一抗，室温放置20分钟，4℃冰箱冷藏过夜。

⑤将切片从冰箱拿出来放置恢复室温，PBS清洗3次，每次3分钟；用滤纸擦干切片周围遗留液体，滴加二抗，37℃培养箱内孵育30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟。

⑥拭干切片周围遗留液体，滴加辣根酶标记，37℃培养箱内孵育30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟。

⑦DAB显色，滴加后显微镜下观察染色效果，自来水反复冲洗。

⑧用苏木素染液复染2分钟，自来水充分冲洗；盐酸酒精化，自来水充分冲洗。

⑨梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

⑩采用光学显微镜拍摄照片，免疫组化图像IPP7.0分析图片，比较切片的 的积分光密度。

(二)、统计学处理

采用SPSS12.0for windows统计软件进行数据分析，使用均数±标准差表示结果，计量资料组间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVE)，等级资料采用Ridit分析。

(三)、结果：

1、对大鼠体重的影响

从图1所示空白组动物体重有显著性的增加，但模型组SD大鼠的体重逐渐下降，从图2所示与模型组大鼠体重相比较，第6周玉泉丸组、虎杖总蒽醌组、虎杖总蒽醌与三七总皂苷配比(1.5:1/1:1.5)组能够显著增加SD大鼠的体重，玉泉丸组及虎杖总蒽醌组、三七总皂苷组及虎杖总蒽醌与三七总皂苷配比各组均能显著增长SD大鼠体重。结果如表1所示：

表1对大鼠体重的影响

2、对大鼠尿蛋白和尿微量白蛋白的影响

2.1、对大鼠尿蛋白影响

从图3、表2所示：模型组大鼠较正常组的大鼠24小时尿微量白蛋白含量显著升高。与模型组相比，各给药组能显著减少糖尿病肾病大鼠24小时尿微量白蛋白含量，具有统计学意义(p﹤0.05)；1:1.5组下降较虎杖组、三七组更为明显，具有统计学意义(p﹤0.05)；

表2对大鼠尿蛋白和尿微量白蛋白的影响

注：#表示与正常组比较P﹤0.05，*表示与模型组比较P﹤0.05

△表示与虎杖组比较P﹤0.05，▲表示与三七组比较P﹤0.05

2.2对大鼠尿蛋白影响

从图4、表3所示：模型组大鼠较正常组的大鼠24小时尿蛋白含量显著升高。与模型组相比，各给药组能显著减少糖尿病肾病大鼠24小时尿蛋白含量，具有统计学意义(p﹤0.05)；1:1.5组和1.5:1组下降较虎杖组、三七组更为明显，具有统计学意义(p﹤0.05)。

表3对大鼠尿蛋白和尿白蛋白的影响

注：#表示与正常组比较P﹤0.05，*表示与模型组比较P﹤0.05

△表示与虎杖组比较P﹤0.05，▲表示与三七组比较P﹤0.05

3、对大鼠肾功能的影响

从图5、表4所示：模型组大鼠较正常组的大鼠尿素氮、血肌酐含量显著升高。与模型组相比，各给药组能显著减少糖尿病肾病大鼠尿素氮、血肌酐含量，具有统计学意义(p﹤0.05)；配伍组血肌酐含量下降较虎杖组、三七组更为明显，具有统计学意义(p﹤0.05)；配伍组尿素氮含量下降较三七组更为明显，具有统计学意义(p﹤0.05)。

表4对大鼠肾功能的影响

注：#表示与正常组比较P﹤0.05，*表示与模型组比较P﹤0.05

△表示与虎杖组比较P﹤0.05，▲表示与三七组比较P﹤0.05

4、对大鼠肾脏指数的影响

从图6、表5所示：模型组大鼠较正常组的肾脏指数显著升高。与模型组相比，各给药组能显著减小糖尿病肾病大鼠肾脏指数，具有统计学意义(p﹤0.05)；配伍组尿素氮含量下降较三七组更为明显，具有统计学意义(p﹤0.05)。

表5对大鼠肾脏的影响

注：#表示与正常组比较P﹤0.05，*表示与模型组比较P﹤0.05

△表示与虎杖组比较P﹤0.05，▲表示与三七组比较P﹤0.05

5、对脂代谢影响

从图7、表6所示：模型组大鼠较正常组的TC、TG、HDL-C、LDL-C含量显著升高，有统计学意义(p﹤0.05)。与模型组相比，各给药组能显著减小糖尿病肾病大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C含量，具有统计学意义(p﹤0.05)；配伍组TC、TG、HDL-C、LDL-C含量较虎杖、三七单用组有不同程度的降低趋势。

表6对大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C的影响

注：#表示与正常组比较P﹤0.05，*表示与模型组比较P﹤0.05

△表示与虎杖组比较P﹤0.05，▲表示与三七组比较P﹤0.05

6、对血液流变学的影响

从图8、表7所示分析：模型组大鼠较正常组的全血高切、低切粘度降低效果显著(p＜0.05)。与模型组相比，各给药组能显著减小糖尿病肾病大鼠全血高切、低切粘度，具有统计学意义(p﹤0.05)；配伍组全血高切、低切粘度较虎杖、三七单用组均有降低趋势。

在血小板黏附率方面，模型组大鼠较正常组的血浆粘度、血小板黏附率降低效果显著(p＜0.05)。与模型组相比，各给药组能显著减小糖尿病肾病大鼠血浆粘度、血小板黏附率，具有统计学意义(p﹤0.05)；除1：1组外其余各配伍组血浆粘度、血小板黏附率较虎杖、三七单用组低效果显著(p＜0.05)。

表7对大鼠血流变学的影响

7、免疫组化结果

7.1肾组织中TGF-β1的表达情况

从图9、表8所示：模型组大鼠较正常组的大鼠肾组织TGF-β1的含量表达显著升高。与模型组相比，各给药组能显著减少糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1的含量，具有统计学意义(p﹤0.05)；1:1组和1.5:1组含量较虎杖组、三七组减少显著，具有统计学意义(p﹤0.05)。

表8大鼠肾组织TGF-β1的含量表达

注：#表示与正常组比较P﹤0.05，*表示与模型组比较P﹤0.05

△表示与虎杖组比较P﹤0.05，▲表示与三七组比较P﹤0.05

7.2肾组织中AGEs的表达情况

从图10、表9所示：模型组大鼠较正常组的大鼠肾组织AGEs的含量表达显著升高。与模型组相比，各给药组能显著减少糖尿病肾病大鼠肾组织AGEs的含量，具有统计学意义(p﹤0.05)；1:1组和1.5:1组含量较虎杖组、三七组减少更为显著，具有统计学意义(p﹤0.05)。

表9大鼠肾组织中AGEs的表达情况

注：#表示与正常组比较P﹤0.05，*表示与模型组比较P﹤0.05

△表示与虎杖组比较P﹤0.05，▲表示与三七组比较P﹤0.05

7.3肾组织中RAGE的表达情况

有表10、图11可以看出，模型组大鼠较正常组的大鼠肾组织RAGE的含量表达显著升高。与模型组相比，各给药组能显著减少糖尿病肾病大鼠肾组织RAGE的含量，具有统计学意义(p﹤0.05)；配伍组含量较虎杖、三七单用组减少更为显著，且具有统计学意义(p﹤0.05)。

表10大鼠肾组织中RAGE的表达情况

注：#表示与正常组比较P﹤0.05，*表示与模型组比较P﹤0.05

△表示与虎杖组比较P﹤0.05，▲表示与三七组比较P﹤0.05

7.4肾组织中FN的表达情况

由表11、图12可以看出，模型组大鼠较正常组的大鼠肾组织FN的含量表达显著升高。与模型组相比，各给药组能显著减少糖尿病肾病大鼠肾组织FN的含量，具有统计学意义(p﹤0.05)；配伍组1：1和1：1.5含量较虎杖、三七单用组更为减少，具有统计学意义(p﹤0.05)。

表11大鼠肾组织中FN的表达情况

注：#表示与正常组比较P﹤0.05，*表示与模型组比较P﹤0.05

△表示与虎杖组比较P﹤0.05，▲表示与三七组比较P﹤0.05

7.5肾组织中Smad3的表达情况

由表12、图13可以看出，与模型组相比，各给药组Smad3表达情况均有所降低，联合组效果优于三七组，联合组1.5:1组优于其他联合组，玉泉丸组效果最好，且具有显著性，P﹤0.01。

表12大鼠肾组织中Smad3的表达情况

注：#表示与正常组比较P﹤0.05，*表示与模型组比较P﹤0.05

△表示与虎杖组比较P﹤0.05，▲表示与三七组比较P﹤0.05

8、肾组织病理性改变

HE染色显示：正常组大鼠肾小球、肾小管结构完整，皮、髓质分界明显， 肾小球基底膜完整，系膜基质正常。模型组皮、髓质分界不清晰，可见明显肾小球增生，基底膜增厚，肾小囊腔狭窄，可见明显的炎症细胞浸润。给药组情况不同程度的改善，但仍可见不同程度的肾损伤。(见附录图)

(四)、结论

本发明根据对因治疗的中医基本理论,通过整体动物实验,本实验中运用活血化瘀药虎杖总蒽醌与三七总皂苷配伍来对糖尿病肾病进行干预，可以证明是十分正确的，且效果显著。

本发明从肾功能、尿蛋白、血液流变等方面对虎杖总蒽醌与三七总皂苷在糖尿病肾病的治疗作用机制进行了实验，实验中，模型组大鼠出现了尿微量白蛋白、肌酐、尿素氮含量过高，可以判断模型大鼠出现了早期糖尿病肾病病变，而应用虎杖总蒽醌与三七总皂苷配比组分后，该病理现象得到了改善，验证本实验药物对糖尿病肾病肾脏具有保护作用，而且能改善肾功能。由结果数据可看出二者合用配伍组分时在改善肾功能和血液循环、降低尿蛋白含量、降低血脂粘稠方面有比单用虎杖总蒽醌、三七总皂苷有更为明显的作用效果，二者联合应用效果更显著：

1、虎杖总蒽醌与三七总皂苷配伍组分对糖尿病肾病肾脏功能有明显的改善作用

虎杖总蒽醌与三七总皂苷配伍组分对糖尿病肾病大鼠的肾脏功能有明显的改善作用,能够减少尿微量白蛋白、尿素氮、肌酐的排泄,从而减轻糖尿病肾病的症状。

2、虎杖总蒽醌与三七总皂苷及其配伍组分血液流变学具有一定的改善作用

虎杖总蒽醌与三七总皂苷配伍组分对糖尿病肾病大鼠的血液流变学具明显的改善作用,能够减少显著降低全血粘度、血糖粘度和抑制血小板聚集，抑制糖 尿病肾病大鼠血栓的生成。在某些方面可以改善患者血液循环障碍,组织灌注不足、缺血、缺氧以及代谢障碍等症状。

3.虎杖总蒽醌与三七总皂苷配伍组分对糖尿病肾病尿蛋白的影响

虎杖总蒽醌与三七总皂苷配伍组分对糖尿病肾病大鼠的尿蛋白具明显的改善作用，显著减少糖尿病肾病大鼠24h尿蛋白、尿微量白蛋白含量。

4.虎杖总蒽醌与三七总皂苷配伍组分优于单用虎杖总蒽醌、三七总皂苷，其配伍组分更适合用于糖尿病肾病的预防与治疗作用。

本发明提供了虎杖总蒽醌与三七总皂苷组合物在制备治疗糖尿病肾病的药物中的应用。其中所述虎杖总蒽醌与三七总皂苷组合物包括重量比为(1：1),(1:1.5)，(1.5:1)的虎杖总蒽醌与三七总皂苷比例。

本发明的虎杖总蒽醌与三七总皂苷的重量比最优选1:1.5。

本发明所述的应用,其中所述组合物是通过降低血脂、降低血液粘稠度、改善肾功能来治疗糖尿病肾病的。

本发明所述的应用,其中所述组合物是通过减少尿蛋白的排出来治疗糖尿病肾病的。

本发明所述的应用,其中所述组合物是通过下调转化生长因子TGF-β1的表达来治疗糖尿病肾病的。

本发明所述的应用,其中所述组合物是通过下调Smad3蛋白的表达来治疗糖尿病肾病的。

本发明所述的应用,其中所述组合物是通过下调层粘连蛋白的表达来治疗糖尿病肾病的。

本发明所述的应用,其中所述组合物是通过下调糖基化终末产物、糖基化终末产物受体的表达来治疗糖尿病肾病的。

本发明表明虎杖总蒽醌与三七总皂苷组合物可减轻糖尿病肾脏损害,且其作用优于单用虎杖总蒽醌与三七总皂苷,提示虎杖总蒽醌与配伍三七总皂苷可以产生增效作用,延缓糖尿病肾病的发生。因此，二者配伍使用能显著增加疗效，减轻毒副反应，减少药量。

为临床上早期肾功能不全患者提供更好的药物选择，是治疗早期糖尿病肾病药物上的创新，经济和社会效益显著。