泽泻乙酸乙酯萃取物及其制备方法和在制备终末期肾脏病药物中的应用

摘要

本发明涉及泽泻乙酸乙酯萃取物及其制备方法和在制备终末期肾脏病药物中的应用，具体是将泽泻经干燥、粉碎后，用乙醇浸泡，超声提取3‑5次，回收乙醇，浓缩得棕色膏状物；然后用蒸馏水溶解，用乙酸乙酯萃取得到目标产物。泽泻乙酸乙酯萃取物通过改善氮质代谢产物的排泄和脂质代谢而达到对终末期肾脏病的治疗作用，为临床提供了一种既可以促进氮质类代谢物的排泄又可以改善脂质类代谢物的新的治疗终末期肾脏病的药物。

说明书

技术领域

本发明涉及泽泻乙酸乙酯萃取物的制备方法及其在终末期肾脏病药物中的应用，属于医药技术领域。

背景技术

终末期肾脏病是影响人类健康的重大疾病之一。终末期肾脏病是各种肾脏疾病引起的肾功能不可逆丧失的终末阶段。大部分临床患者依赖肾移植、血液透析和腹膜透析等肾替代治疗来维持正常生命活动。1990年，全世界终末期肾脏病维持透析的患者为42.6万，2000年增至106.5万，2008年增至231万，维持透析的患者以每年7%的比例增加，远远超过世界人口增长率。美国肾病数据系统显示1995、1999和2004年新增肾替代治疗的年发生分别为279.5/100万、330.8/100万和339.4/100万；新增透析人数分别约为21.4万、27.5万和33.5万；新增肾移植分别为7.79万、10.2万 和13.6万。1999年我国主要针对血液透析和腹膜透析患者开始统计工作，共有4.1万人，患病率为33.6/100万，新增患者为1.9万，年发病率为15.3/100万。2007年底全国调查报告显示我国透析的终末期肾脏病患者有6.5人，患病率为51.7/100万；2008年底人数增至10.2万，点患病率为79.1/100万，新增ESRD患者为4.5万，年发病率为36.1/100万，年增长率达52.9%。2010、2011和2013年上海市终末期肾脏病患者的统计报告是114.8/100万、135.1/100万和134.1/100万。这些疗法可以改善临床症状，减轻临床患者的痛苦，但血液透析和腹膜透析只能解决肾脏的部分代谢问题，尚不能较好改善肾内分泌功能；肾移植存在严重的免疫排斥现象、肾源有限、费用昂贵等问题。

随着各种疾病发病率的上升，药物的使用越来越多，因药物引起的肾损伤发生率很高（大部分药物及其代谢产物经肾脏排出体外）。研究显示药物导致急性肾小管坏死或急性肾间质肾炎的发生率高达18.3%，目前临床常见的对肾损伤的药物有抗感染类、免疫制剂、抗肿瘤药物、甾体类抗炎药、天然药物及利尿药等，其中抗生素导致的肾损害的发生率达36%。药物性肾损伤位居肾损伤疾病的首位，药物性肾损伤也是新药开发失败和导致药物撤市的重要原因之一。因此，如何有效防治终末期肾脏病一直是全球关注的难点之一，继续坚持不懈地研究和探寻治疗终末期肾脏病的新药物仍是当前医学领域的一项重要任务。

中医药在防病治病方面现实较好的效果，特别是慢性病的显示独特的疗效。虽然肾移植、血液透析和腹膜透析是终末期肾脏病患者生存的治疗手段，但是在终末期肾脏病的早和中期阶段，在治疗原发病的基础上，采用药物干预手段以有效地阻止或延缓终末期肾脏病也是一个行之有效的方法。研究表明中药对早中期终末期肾脏病患者可改善恶化的肾功能，延缓终末期肾脏病的发展。目前使用的猪苓、冬虫夏草、大黄等单味中药和百令胶囊、肾衰宁、尿毒清颗粒等复方中药在治疗终末期肾脏病方面显示一定的疗效，有着广阔的发展前景。因此，从中药中寻找活性强且低毒的能改善终末期肾脏病的药物，对防治终末期肾脏病有着重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种泽泻乙酸乙酯萃取物；

本发明另一目的是提供泽泻乙酸乙酯萃取物的萃取方法；

本发明还有一个目的是克服现有治疗终末期肾脏病药物的缺点，提供泽泻萃取物在制备终末期肾脏病药物中的应用。

本发明的实现过程如下：

泽泻乙酸乙酯萃取物，其采取如下方法得到：泽泻经干燥、粉碎后，用乙醇浸泡，超声提取3-5次，回收乙醇，浓缩得棕色膏状物；膏状物用蒸馏水溶解，乙酸乙酯萃取得到目标产物。

所述的乙醇质量百分浓度为60~85%；所述的泽泻与乙醇的质量比为1：5-10。

泽泻乙酸乙酯萃取物的提取方法：泽泻经干燥、粉碎后，用乙醇浸泡，超声提取3-5次，回收乙醇，浓缩得棕色膏状物；膏状物用蒸馏水溶解，乙酸乙酯萃取得到目标产物。

所述的乙醇质量百分浓度为60~85%，所述泽泻与乙醇的质量比为1：5-10。

本发明泽泻乙酸乙酯萃取物与赋形剂结合制成口服剂型或注射剂型，其中可以含有辅助物质、稳定剂、润湿剂和其它常用的添加剂，如柠檬酸、乳糖、硬脂酸、酒石酸、硬脂酸镁、蔗糖、玉米淀粉、明胶、花生油、橄榄油或抗坏血酸。

泽泻是利水渗湿类中药，其味甘、淡，性寒。归肾、膀胱经。利水渗湿，泄热，化浊降脂是其主要功效，临床上主要用于小便不利，水肿胀满，泄泻尿少，痰饮眩晕，热淋涩痛，高脂血症。

本发明所述泽泻乙酸乙酯萃取物可应用于制备治疗终末期肾脏病药物。

本发明的积极效果：实验结果表明，泽泻乙酸乙酯萃取物通过改善氮质代谢产物的排泄和脂质代谢而达到对终末期肾脏病的治疗作用，可为临床提供一种既可以促进氮质类代谢物的排泄又可以改善脂质类代谢物的新的治疗终末期肾脏病的药物。

具体实施方式

实施例1泽泻乙酸乙酯萃取物的制备

目前提取药材的方法有超声提取法、加热回流法、索式提取法、渗漉法等。发明人采用简单快速的超声提取方法，考察泽泻经干燥、粉碎后，用5-10倍的75%乙醇浸泡24小时左右，超声时间（30、45、60分钟）和超声次数（3、4、5次）对提取率（提取浸膏/生药量）的影响。结果显示在超声提取3次的前提下，超声时间为30、45、60分钟时的提取率分别为3.8%、4.5%、5.2%；在超声提取4次的前提下，超声时间为30、45、60分钟时的提取率分别为4.5%、5.5%、5.7%；在超声提取5次的前提下，超声时间为30、45、60分钟时的提取率分别为4.7%、5.4%、5.8%。最终超声提取的条件是：超声提取4次，每次45分钟。超声提取液回收乙醇，浓缩得棕色膏状物即为泽泻乙醇提取物。膏状物用蒸馏水溶解，用乙酸乙酯萃取5次，浓缩乙酸乙酯萃取物得膏状物即得泽泻乙酸乙酯萃取物。

实施例2

为了验证泽泻乙酸乙酯萃取物对终末期肾脏病治疗的效果，发明人采用腺嘌呤诱导的终末期肾脏病大鼠模型进行了药效学试验，试验如下：

（1） 实验药物和实验动物

泽泻乙酸乙酯萃取物悬浊液，含2%的阿拉伯树胶粉的自来水配制。健康雄性SD大鼠，体重210-220g，购买于第四军医大学动物中心。

（2）实验仪器和试剂

安徽淮北正华生物仪器有限公司ZH-B6型大鼠代谢笼；美特列-托利多十万分之一分析天平；腺嘌呤购于sigma公司（批号：A8626-5g，纯度≥99%）。

（3）实验方法

1）腺嘌呤诱导终末期肾脏病模型建立及泽泻乙酸乙酯萃取物治疗效果评价

健康雄性SD大鼠购买后1周适应环境，然后根据体重随机分为正常组、腺嘌呤组和腺嘌呤+泽泻乙酸乙酯萃取物组，每组均为8只。实验期间大鼠自由摄食和饮水。实验开始后，正常对照组大鼠以自来水10ml/kg/d灌胃；腺嘌呤组和腺嘌呤+泽泻乙酸乙酯萃取物组每天灌胃200mg/kg腺嘌呤，持续3周；腺嘌呤+泽泻乙酸乙酯萃取物组3个小时后再给1g/kg生药灌胃泽泻乙酸乙酯萃取物进行治疗，泽泻乙酸乙酯萃取物治疗组再给予另外的3周进行治疗。大鼠第6周末置于代谢笼留取24小时的尿液，然后大鼠麻醉后颈动脉取血，解刨取心、肝、肾等组织。分析泽泻乙酸乙酯萃取物对终末期肾脏病大鼠的脏器指数、血清生化指标及血液学指标，并作统计学分析，结果见表1、2；

2）泽泻乙酸乙酯萃取物治疗终末期肾脏病大鼠的生化指标和血常规指标测定

各种脏器用分析天平称量重量，生化指标和血常规指标的测定由西安医学院附属医院采用全自动生化分析仪和血常规分析仪测定；

3）泽泻乙酸乙酯萃取物治疗终末期肾脏病的药效评价与统计分析

结果用平均值±标准偏差表示，采用t检验，计算p值，将腺嘌呤组与正常对照组、泽泻乙酸乙酯萃取物组与腺嘌呤组进行组间差异性比较，t检验，p<0.05为判断统计学上存在显著性差异，p<0.05为判断统计学上存在非常显著性差异，了解泽泻乙酸乙酯萃取物对终末期肾脏病的治疗效果。

（4）腺嘌呤诱导终末期肾脏病模型及泽泻乙酸乙酯萃取物对该模型治疗的结果

1）泽泻乙酸乙酯萃取物治疗组对终末期肾脏病大鼠的形态学和肾脏指数的影响

正常组的大鼠肾脏表面光滑且颜色鲜红，腺嘌呤模型组的大鼠肾体积增大、表现明显肿大、颜色苍白且肾脏表面出现凹凸不平现象，与人的大白肾类似，部分肾脏体积较正常组增大2倍以上。泽泻乙酸乙酯萃取物的治疗结果显示，泽泻乙酸乙酯萃取物对终末期肾脏病模型有较好的防治作用，主要表现为肾脏体积减小，颜色苍白度减轻、肾重指数、肾脏长度和宽度减小及尿量减少（表1）。虽然治疗组的脏器指数与腺嘌呤模型组比较的有降低趋势，但它们没有达到统计学上的显著差异。此外，治疗组尿量与腺嘌呤模型组比较的有降低趋势且达到统计学上的显著差异。这些结果证明泽泻乙酸乙酯萃取物对腺嘌呤诱导的终末期肾脏病有一定的治疗作用；

2）泽泻乙酸乙酯萃取物治疗组对终末期肾脏病大鼠的病理学的影响

腺嘌呤模型组肾脏出现明显的炎细胞浸润，近曲小管明显扩张，上皮细胞严重的脱落，肾小管坏死，细胞外基质在肾间质大量的堆积，最终导致肾间质纤维化。在肾小管出现大小不一、数量不等的棕褐色结晶或异物肉芽肿形成及粉染匀质的管型。腺嘌呤大鼠经过泽泻乙酸乙酯萃取物治疗后，上述病理学的损失明显改善，证明泽泻乙酸乙酯萃取物对腺嘌呤诱导的终末期肾脏病有一定的治疗作用；

3）泽泻乙酸乙酯萃取物治疗组肾功能和脂质代谢生化指标的影响

模型组血中尿素和肌酐与正常对照组比较，模型组显著升高且存在统计学上的显著差异。总蛋白、总胆固醇、甘油三酯和尿酸均出现升高且存在统计学上的非常显著差异（表2）。泽泻乙酸乙酯萃取物治疗组与模型组比较，泽泻乙酸乙酯萃取物治疗组能降低腺嘌呤导致的血清尿素、肌酐和尿酸增加并存在统计学上的显著差异（表2）。泽泻乙酸乙酯萃取物治疗组也同时降低脂质代谢的生化指标总胆固醇和甘油三酯增加（表2）。但泽泻乙酸乙酯萃取物治疗组对腺嘌呤导致的总蛋白增加没有显著的影响。该研究结果表明泽泻乙酸乙酯萃取物不仅能促进体内的氮质化合物的排出，且对脂质代谢紊乱有纠正作用，表明泽泻乙酸乙酯萃取物对腺嘌呤诱导的终末期肾脏病有较好治疗和改善作用。

综上所述，泽泻乙酸乙酯萃取物在腺嘌呤诱导终末期肾脏病的大鼠体内进行治疗实验结果表明，泽泻乙酸乙酯萃取物可以降低血清尿素和肌酐且存在统计学上非常显著差异。泽泻乙酸乙酯萃取物通过减少腺嘌呤代谢产物对肾脏的病理性损害，改善肾脏功能、表现出较好治疗作用。泽泻乙酸乙酯萃取物对终末期肾脏病的紊乱的总胆固醇和甘油三酯等脂质代谢的成分也有较好的改善作用，说明泽泻乙酸乙酯萃取物不仅可以改善影响氮质代谢产物的排泄，且对内源性的脂质类代谢物有较好的改善作用，表明泽泻乙酸乙酯萃取物通过改善氮质代谢产物的排泄和脂质代谢而达到对终末期肾脏病的治疗作用，为临床提供了一种既可以促进氮质类代谢物的排泄又可以改善脂质类代谢物的新的治疗终末期肾脏病的药物。