一种新型糖尿病并发症神经病变大鼠模型的创建

摘要

本发明公开了一种新型糖尿病并发症神经病变的大鼠模型的创建方法，神经毒剂丙烯酰胺在制作糖尿病神经病变模型的用途，属于病理动物模型的药理用途领域。本发明通过动物实验发现，小剂量神经毒剂丙烯酰胺合并高脂高糖糖尿病大鼠模型，可以建立糖尿病合并神经病变的大鼠模型，与单纯糖尿病大鼠和单纯神经毒剂大鼠比较，小剂量神经毒剂丙烯酰胺合并高脂高糖糖尿病大鼠的坐骨神经传导速度明显降低，表明神经毒剂可用于建立糖尿病并发症神经病变的大鼠模型。

说明书

技术领域

本发明涉及一种糖尿病并发症神经病变大鼠模型的创建，并涉及神经毒剂丙烯酰胺的一种药理用途，尤其涉及丙烯酰胺在制作糖尿病合并神经病变大鼠模型的用途，属于病理模型的药理用途领域。

背景技术

丙烯酰胺(acrylamide，ACR)是一个具有神经毒性的化学试剂，广泛地使用于各种工业生产(如废水净化、矿石处理等)和分子实验研究，人或动物反复暴露在丙烯酰胺中可导致周围神经病，主要表现为肌力减弱、共济失调甚至肢体瘫痪以及轴突变性。丙烯酰胺也可导致认知功能障碍，浦肯野氏细胞也可能受累。

随着饮食结构和生活方式的改变，糖尿病发生率逐年增加，已成为倍受关注的公共卫生问题。糖尿病并发症是影响人类生活质量、致残致死的重要原因。糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy，DPN)是糖尿病最常见且较严重的并发症之一，DPN在老年人发病率高达90％以上。其发病机制复杂，与血流动力学异常、微血管受损、血管性缺血缺氧、代谢障碍、神经营养因子减少等多因素有关，最终神经细胞缺氧、神经纤维退行性变和节段性脱髓鞘、神经传导障碍而发病。

而目前由于糖尿病周围神经病变并发症的发生与糖尿病病程呈正相关，所以采用糖尿病大鼠研究周围神经病变并发症存在着发病率不稳定、损伤程度不一等问题，药效评价急需发病比较稳定且程度均一的糖尿病并发症神经病变的动物模型的建立，本发明解决了该问题。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种新的糖尿病并发症-周围神经病变的大鼠模型。

本发明的主要目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明首先设计了三种丙烯酰胺剂量的实验方案，累积剂量分别为280、320、400mg/kg，具体造模方式为先以丙烯酰胺(40mg/kg)连续造模4天，隔两天后连续造模2天，隔两天后再分别连续造模1、2、4天，观察大鼠的死亡率。结果发现400mg/kg组大鼠死亡率最高(60％)，280、320mg/kg均为10％。表明丙烯酰胺的剂量为320mg/kg以下死亡率较低。

此外，本发明还设计了高糖高脂单因素糖尿病大鼠、丙烯酰胺神经损伤大鼠及高糖高脂糖 尿病合并丙烯酰胺损伤大鼠，并采用检测坐骨神经传导速度来反映神经受损程度。结果表明高糖高脂糖尿病合并丙烯酰胺损伤大鼠具有糖脂代谢紊乱和神经受损双重特点，能够很好的模拟糖尿病并发周围神经损伤的病理特点，可以应用于相关药物的药效评价。

附图说明

图1高糖高脂糖尿病合并丙烯酰胺损伤大鼠空腹血糖含量试验结果

图2高糖高脂糖尿病合并丙烯酰胺损伤大鼠坐骨神经传导速度试验结果

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下，可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改和替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实验例

1、主要试剂和实验动物

丙烯酰胺(分析纯)购自AMRESCO，血清葡萄糖TG、CHO、LDL和HDL试剂盒，由北京中生北控生物科技股份有限公司提供。高脂饲料(含10％猪油、1.2％胆固醇、0.2％胆酸钠的基础饲料等)由华阜康生物科技股份有限公司提供。

实验中所使用的动物为SPF级雄性Wistar大鼠，购自北京维通利华有限公司，合格证号：SCXK(京)2007-0001，饲养于中国医学科学院药用植物研究所SPF级动物房，许可证号：SYXK(京)2013-0023，室温22±2℃，相对湿度60％RH。

2、实验方法

2.1大鼠模型制备及分组

Wistar大鼠20只，高糖高脂饲料诱导经筛选空腹血糖大于120mg/dl的糖尿病大鼠20只，分成正常组、高脂高糖糖尿病、丙烯酰胺(320mg/kg)和高脂高糖糖尿病复合丙烯酰胺(320mg/kg)大鼠四组。

2.2实验方法

采用葡萄糖试剂盒检测大鼠血清葡萄糖含量。大鼠禁食不禁水6小时，尾静脉采血后离心 分离血清，按照试剂盒说明书，检测大鼠空腹血糖含量。

采用电生理方法测定大鼠坐骨神经传导速度。剪开坐骨结节处和踝关节坐骨神经经过部位的皮肤，小心分离坐骨神经，将电极对分别置于坐骨神经干上，闭合手术部位皮肤。以坐骨结节部位电极对为刺激电极，远端电极为负极；踝关节部位电极作为记录电极。计算机记录神经冲动传导时间。重复测定3次，计算平均值。然后分离坐骨神经，测定刺激电极到记录电极之间的坐骨神经长度。代入公式：MNCV(m·s^-1)＝刺激电极与记录电极间的坐骨神经长度/神经传导时间，计算刺激电极与记录电极间的MNCV。

3实验结果

3.1采用高糖高脂和小剂量神经毒剂合并诱导建立糖尿病神经损伤大鼠，与单独高脂高糖因素和单独神经毒剂造模大鼠比较，空腹血糖含量明显增高，具有明显的糖尿病神经损伤并发症的特点(图1)。

3.2采用高糖高脂和小剂量神经毒剂合并诱导建立糖尿病神经损伤大鼠，与单独高脂高糖因素和单独神经毒剂造模大鼠比较，坐骨神经传导速度明显降低，具有明显的糖尿病神经损伤并发症的特点(图2)。