6-O-脱甲基侧厚壳桂碱衍生物及其制备和抗病毒活性应用及抗癌活性

摘要

本发明涉及菲并喹喏里西啶生物碱及其6-位衍生化产物的制备、抗植物病毒和抗肿瘤活性，式中各基团的意义见说明书。本发明的菲并喹喏里西啶生物碱及其衍生物具有好的光稳定性和热稳定性，表现出特别优异的抗植物病毒活性和抗肿瘤活性，菲并喹喏里西啶生物碱及其衍生物均能很好地抑制烟草花叶病毒(TMV)，并对人肺腺癌A549细胞和人肝癌BEL-7402细胞均表现出强烈的抑制活性。

说明书

技术领域

本发明涉及6-O-脱甲基侧厚壳桂碱衍生物及其制备、抗植物病毒活性应用和抗癌活性。

背景技术

菲并喹喏里西啶类生物碱是一类主要存在于葡萄科(Vitaceae)，樟科(Lauraceae)和荨麻科(Urticaceae)等植物中的植物源小分子化合物。其母体结构为：

2012年，PloS one 2012，7，e52933.首次报道了菲并喹喏里西啶类生物碱具有抗TMV(烟草花叶病毒)生物活性。本组合成了一系列菲并喹喏里西啶类生物碱A-1～A-24，测试了这些化合物的抗TMV活性，并与(R)-安托芬和商品化品种Ribavirin(病毒唑)、Ningnanmycin(宁南霉素)做了比较。大多数菲并喹喏里西啶类生物碱表现出好的甚至优良的活体抗TMV活性，其中化合物A-1，A-2，A-15和A-16活性较突出，其活性要比(R)-安托芬和宁南霉素还要高。当菲环的6-位引入羟基时(A-16)显著提高了化合物的活性，当化合物15位引入羟基时，如化合物A-19和A-20，A-21和A-22，A-23和A-24，能提高14aS-构象化合物的活性，但却降低了14aR-构象化合物的活性。

2012年，我们课题组对菲环上取代基对菲并喹喏里西啶类化合物的抗癌活性的影响进行了探索，通过对合成出的菲并喹喏里西啶衍生物进行抗癌活性测试发现此类生物碱也有很好的抗癌活性。但是对6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶及其羟基衍生物的抗癌活性没有报道，而且到目前为止6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶的6-位对化合物活性的影响没有进行研究。光学纯的6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶还未被合成出来，光学活性对6-羟基菲并喹喏里西啶类生物碱生物活性的研究也是空白。

发明内容

本发明的目的是提供一条未见报道的、简洁、高效地合成6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶的路线，并应用于光学纯6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶的合成。同时本发明利用前药设计原理，对合成的6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶的菲环上6-位进行衍生，使6-位的羟基衍生为酯基和烷氧基，制备了一系列6-位衍生的类生物碱。菲并喹喏里西啶的菲环 6-位衍生化后，化合物脂溶性得到很好改善，而且其热稳定性和光稳定性大大提高。本发明对合成的6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶及其衍生物进行了抗烟草花叶病毒(TMV)活性研究和抗肿瘤活性研究，发现该类化合物具有优异的抗TMV活性和抗肿瘤活性，并且发现化合物光学活性对生物活性有明显影响，该类化合物可以用于抗烟草花叶病毒药物及抗癌药物的制备。

本发明的6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶及其衍生物是具有如下通式I所示结构的化合物：

R¹代表Bn、R²代表OH；

R¹代表H、R²代表OH；

R¹代表H、R²代表H；

R¹代表R²代表H、R代表

R¹代表R²代表H、R代表

R¹代表R²代表H、R代表H，

以上通式中包括所有14a位和15位的立体异构体。

本发明的菲并喹喏里西啶生物碱可以按如下合成路线制备(路线一)：

路线一：

首先取代醛1和取代羧酸2发生缩合反应并酯化后得3，再经二氧化锰氧化偶联、分子骨架重排和水解反应得到菲甲酸酯4，酯4经酚羟基保护和氢化铝锂还原得菲苄醇5，菲苄醇5与溴素反应得到双溴化产物6，化合物6再与高脯氨酰胺7反应得到化合物8，化合物8经过Paharm环化反应和硼氢化钠还原反应得到化合物菲并喹喏里西啶生物碱I-1，再经过钯碳脱苄基和三乙基硅烷脱羟基反应最终得到I-3。

本发明中6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶的6-位酯基衍生物I可以按如下方法制备(路线二)：6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶与脂肪酸酐在三乙胺催化下反应，生成6-位酯基的衍生物I。

路线二：

本发明中6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶的6-位酯基衍生物I可以按如下方法制备(路线三)：6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶与酰氯在DMAP和三乙胺催化下反应，生成了6-位酯基的衍生物I。

路线三：

本发明中6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶的6-位酯基衍生物I可以按如下方法制备(路线四)：6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶与脂肪酸在EDCI、DMAP和三乙胺催化下反应，生成6-位酯基的衍生物I。

路线四：

本发明中6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶的6-位烷氧基衍生物I可以按如下方法制备(路线五)：利用6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶6-位酚羟基较高的反应活性，在碱性条件下和α-溴代物(溴代乙酰胺溴、炔丙基溴、溴乙腈和α-溴乙酸乙酯)发生亲核取代反应生成醚，从而在6-位引入一个侧链，得目标化合物I。

路线五：

本发明中6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶用1，2-乙二氧基作为连接臂的6-位氨基酸衍生物I可以按如下方法制备(路线六)：首先在6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶的6-位上引入乙氧甲酰氧基后进一步将酯基还原，得到了化合物6-位乙二醇取代的化合物，然后将氨基用Boc保护的氨基酸反应成酯，再用三氟乙酸脱除Boc，得目标化合物I。

路线六：

本发明优选如下化学结构式的6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶生物碱及其6-位衍生化产物(I)：

上述优选化合物与已知菲并喹喏里西啶生物碱相比具有突出优点，具体表现在：(1)化学稳定性和光学稳定性明显增强，同等条件下室温放置或者日光照射 同等时间，变质速度明显比对照样品Cryptopleurine慢很多，这对化合物在农药上的应用具有至关重要的作用；(2)6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶的6-位为羟基，水溶性好，当6-位羟基被修饰后，酯溶解性增强。

上述优选化合物不仅表现出更高的抗TMV离体活性，而且还表现出很好的抗TMV活体活性，其活性明显优于商品化品种宁南霉素。

上述优选化合物同时表现出特别优异的抗癌活性，可以用于抗癌药物的制备。

具体实施方式

下述的实施例和生测试验结果可用来进一步说明本发明，但不意味着限制本发明。

实施例1：15-羟基-2，3-二甲氧基-6-苄氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(I-1)和6，15-二羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(I-2)还有6-羟基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(I-3)的合成：

(E)-2-(4-乙酰基苯基)-3-(3，4-二甲氧基苯基)丙烯酸甲酯(3)的合成

向1L圆底烧瓶中依次加入3，4-二甲氧基苯甲醛(19.6g，0.1mol)、对羟基苯乙酸(12.2g，0.1mol)、乙酸酐(40mL)和三乙胺(20mL)，机械搅拌下加热回流。反应完后冷却至室温，加入水(60mL)，然后加热回流1h，冷却至室温后再搅拌1h，过滤，用水和乙醇洗涤滤饼，干燥得到27.4g黄色固体。将黄色固体加入圆底烧瓶中，再加入无水甲醇(450mL)和浓硫酸(17.8g)。搅拌回流，反应完后冷却至室温，脱溶除去大部分甲醇，加入水稀释，有大量沉淀析出，过滤，滤饼用饱和碳酸氢钠溶液洗涤多次，烘干得到白色产品24.7g，收率78.5％。熔点：127-128℃；¹H>3)：δ7.77(s，1H)，7.11(d，J＝8.4Hz，2H)， 6.83-6.86(m，3H)，6.74(d，J＝8.4Hz，1H)，6.49(d，J＝1.6Hz，1H)，3.85(s，3H)，3.79(s，3H)，3.46(s，3H)；¹³C>3)：δ169.3，155.7，149.9，148.1，140.7，131.1，129.6，128.1，127.4，125.6，115.9，112.5，110.5，55.6，55.1，52.4.HRMS(ESI)：calcd.for>18H₁₈NaO₅[M+Na]⁺：337.1046；found：337.1041

6-羟基-2，3-二甲氧基-9-菲甲酸甲酯的(4)合成

将(E)-2-(4-乙酰基苯基)-3-(3，4-二甲氧基苯基)丙烯酸甲酯(1.20g，3.82mmol)溶于20mL三氟乙酸，加入二氧化锰(0.33g，3.82mmol)，室温反应6h。反应完后，加入20mL乙酸酐，40℃反应4h，冷却至室温，缓慢加入水(50mL)，加热至70℃，反应完全后，加入30mL水，分液，二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和碳酸氢钠洗涤，无水硫酸钠干燥后过滤，脱溶，柱分离(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)，得0.87g浅黄色固体，收率73％。熔点：188-190℃；¹H>6)：δ9.91(s，1H)，8.66(d，J＝9.2Hz，1H)，8.26(s，1H)，8.03(s，1H)，7.94(s，1H)，7.59(s，1H)，7.18(d，J＝8.8Hz，1H)，4.04(s，3H)，3.93(s，3H)，3.92(s，3H)；¹³C>3)：δ168.2，154.2，150.9，149.8，131.9，129.7，128.5，126.6，125.6，123.6，123.2，116.5，109.2，106.3，103.2，55.9，52.2；HRMS(ESI)：calcd.forC₁₈H₁₆NaO₅[M+Na]⁺：335.0890；found：335.0889.

2，3-二甲氧基-6-苄氧基-9-菲甲酸甲酯(5)的合成

向500mL三口圆底烧瓶中加入6-羟基-2，3-二甲氧基-9-菲甲酸甲酯(2.5g，8.02mmol)，无水碳酸钾(1.62g，12.02mmol)，溴化苄(1.65g，9.62mmol)，无水丙酮(50mL)，搅拌回流8h。反应完后冷却至室温，二氯甲烷萃取，干燥后脱溶，粗产品用石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1洗涤后得到2.83g白色固体，收率88％。熔点：156-157℃；¹H>3)：δ8.94(d，J＝9.2Hz，1H)，8.32(s，1H)，7.98(d，J＝2.8Hz，1H)，7.78(s，1H)，7.55(d，J＝7.2Hz，2H)，740-7.45(m，2H)，7.34-7.38(m，2H)，7.26(s，1H)，5.31(s，2H)，4.11(s，3H)，4.02(s，3H)，4.02(s，3H)；¹³C>3)：δ168.2，157.3，150.9，149.7，136.9，131.7，129.6，128.7，128.5，128.1，127.6，126.7，125.6，123.7，123.3，116.3，109.2，106.1，103.1，70.4，56.1，55.9，52.1；HRMS(ESI)：calcd.for>25H₂₂NaO₅[M+Na]⁺425.1359；found425.1352。

2，3-二甲氧基-6-苄氧基-9-菲苄醇(6)的合成

向500mL的三口圆底烧瓶中加入2，3-二甲氧基-6-苄氧基-9-菲甲酸甲酯(2.19g，5.45mmol)和四氢呋喃(250mL)，冰水浴搅拌下缓慢加入四氢铝锂(0.62g，16.34mmol)，加热回流1h。冷却至室温，冰水浴下缓慢加入稀盐酸溶液，调节pH为2左右，加入水稀释，过滤，得到1.94g白色固体，收率95％。熔点：184-186℃；¹H>3)：δ8.10(d，J＝8.8Hz，1H)，7.99(d，J＝2.8Hz，1H)， 7.78(s，1H)，7.53-7.56(m，3H)，7.40-7.45(m，2H)，7.30-7.38(m，2H)，7.19(s，1H)，5.29(s，2H)，5.14(d，J＝6.0Hz，2H)，4.09(s，3H)，4.01(s，3H)，1.76(t，J＝6.0Hz，1H)；¹³C>6)：δ156.7，149.4，148.7，137.3，133.9，131.0，128.5，127.9，127.9，126.7，125.9，123.8，123.5，121.9，115.7，108.6，106.0，104.0，69.5，61.6，55.8，55.4；HRMS(ESI)：calcd.for>24H₂₂NaO₄[M+Na]⁺397.1410；found>

2，3-二甲氧基-6-苄氧基-9-溴-10-菲甲基溴(7)的合成

氩气保护下，在250mL反应瓶中加入2，3-二甲氧基-6-苄氧基-9-菲苄醇(3.19g，8.5mmol)和氯仿(70mL)，加入降温至0℃，搅拌下缓缓滴加含液溴(1.48g，9.25mmol)的20mL氯仿溶液。0℃反应10h，过滤后用石油醚∶乙酸乙酯＝1的混合溶剂洗涤得3.75g白色固体，收率98％。熔点：200-202℃；¹H>3)：δ7.99(d，J＝8.8Hz，1H)，7.77(s>13C>3)：δ157.4，149.9，149.9，136.8，130.7，129.3，128.8，128.2，127.5，126.4，125.7，125.3，123.9，122.8，116.3，109.2，106.2，103.0，70.4，56.0，55.9，32.8.

1-(2，3-二甲氧基-6-苄氧基-9-溴-10-菲甲基)-N，N-二乙基哌啶-2-甲酰胺(8)的合成

在100mL反应瓶中加入60mL无水四氢呋喃，依次加入2，3-二甲氧基-6-苄氧基-9-溴-10-菲甲基溴(3.0g，6.67mmol)、N，N-二乙胺基哌啶-2-甲酰胺(1.35g，7.33mmol)和无水碳酸钾(4.05g，29.3mmol)，常温搅拌1h，加热回流8h，冷却至室温，二氯甲烷萃取，脱溶，柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)，得3.75g白色固体，收率91％。熔点：131-133℃。¹H>3)：δ9.07(d，J＝8.8Hz，1H)，7.89(s，1H)，7.85(s，1H)，7.80(s，1H)，7.54-7.53(m，2H)，7.42-7.40(m，3H)，7.37-7.35(m，1H)，5.27(s，2H)，4.44(d，J＝12.0Hz，1H)，4.17(d，J＝12.0Hz，1H)，4.08(s，6H)，3.54-3.47(m，3H)，3.42-3.37(m，1H)，3.30(d，J＝9.6Hz，1H)，2.91(d，J＝10.4Hz，1H)，2.34-2.32(m，1H)，1.88-1.86(m，1H)，1.74(s，2H)，1.41-1.29(m，6H)，1.19-1.16(m，2H)；¹³C>3)：δ172.6，157.4，149.6，149.3，137.2，130.9，130.5，130.3，128.7，128.1，127.6，126.5，125.9，125.3，123.1，115.5，109.7，105.8，103.3，70.4，57.8，56.0，50.5，42.1，40.9，29.7，25.3，23.8，15.0，13.15.HRMS(ESI)calcd for>34H₄₀BrN₂O[M+H]⁺：619.2171，found：619.2168.

15-羟基-2，3-二甲氧基-6-苄氧基菲并喹喏里西啶(I-1)的合成

氩气保护下，在1L的反应瓶中加入1-(2，3-二甲氧基-6-苄氧基-9-溴-10-菲甲基)-N，N-二乙基哌啶-2-甲酰胺(10.0g，16.18mmol)、TMEDA(4.31g，37.21mmol)和无水THF(500mL)，温度降至-78℃，电磁搅拌下用缓慢滴加2.4mol/L的正丁基锂的正己烷溶液(14.83mL，35.60mmol)，控制在此温度下避光反应5h，加入203mL甲醇，硼氢化钠(0.33g，70.65mmol)，控温-40℃反应1h，自然升至室温，反应8h，加入水淬灭，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸镁干燥，抽滤，脱溶，快速柱层析得6.0g白色固体，收率80％，熔点223-225℃。¹H>3)：δ8.19(d，J＝2.0Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.81(d，J＝9.0Hz，1H)，7.65(s，1H)，7.60(d，J＝7.3Hz，2H)，7.44(t，J＝7.3Hz，2H)，7.38(d，J＝7.2Hz，1H)，7.28(dd，J＝8.7，1.5Hz，1H)，5.38(s，2H)，4.83(d，J＝9.6Hz，1H)，4.70(d，J＝9.3Hz，1H)，4.32(d，J＝16.6Hz，1H)，4.03(s，3H)，3.94(s，3H)，3.39(d，J＝17.0Hz，1H)，3.17(d，J＝11.0Hz，1H)，2.24(d，J＝10.6Hz，1H)，2.17(t，J＝10.9Hz，1H)，2.02(d，J＝12.3Hz，1H)，1.86(d，J＝10.6Hz，1H)，1.70(d，J＝11.8Hz)，1.59(d，J＝11.9Hz，1H)，1.38(d，J＝12.8Hz，1H)；¹³C>6)：δ156.7，149.1，148.2，137.2，130.3，128.5，128.0，127.9，127.6，126.0，125.7，124.4，123.3，122.4，115.7，105.9，105.5，104.2，69.6，65.6，62.0，55.8，55.7，55.4，26.9，25.0，24.0；HRMS(ESI)calcd for>30H₃₂NO₄[M+H]⁺：470.2287，found：470.2326.

6，15-二羟基-2，3-二甲氧基菲并喹喏里西啶(I-2)的合成

在250mL反应瓶中加入15-羟基-2，3-二甲氧基-6-苄氧基菲并喹喏里西啶(0.9g，1.92mmol)、四氢呋喃(50mL)和甲醇(100mL)，加入钯碳(0.09g)，常压通入氢气，常温搅拌2天，加入二氯甲烷搅拌，过滤，滤液脱溶得0.69g白色固体，收率96％。熔点：234℃变质。¹H>6)：δ9.75(s，1H)，7.96(s，1H)，7.91(s，1H)，7.61(s，1H)，7.55(d，J＝8.8Hz，1H)，7.03(d，J＝8.8Hz，1H)，4.86(d，J＝9.2Hz，1H)，4.58(d，J＝9.2Hz，1H)，4.05(d，J＝16.0Hz，1H)，4.01(s，3H)，3.92(s，2H)，3.24(d，J＝16.0Hz，1H)，3.00(d，J＝10.4Hz，1H)，2.84(s，1H)，2.13-1.98(m，3H)，1.82(d，J＝11.6Hz，1H)，1.61-1.57(m，3H)，1.36-1.27(m，1H)；¹³C>6)：δ156.4，149.4，148.5，131.3，127.3，126.5，126.4，125.1，123.5，121.8，116.8，107.0，106.0，104.2，67.5，66.1，62.7，56.4，56.3，55.94，27.5，25.6，24.6.HRMS(ESI)calcd for>23H₂₆NO₄[M+H]⁺：380.1862，found：380.1862.

6-羟基-2，3-二甲氧基菲并喹喏里西啶(I-3)的合成

100mL圆底烧瓶中，加入6，15-二羟基-2，3-二甲氧基菲并喹喏里西啶(0.69g，1.84mmol)和Et₃SiH(0.48g，4.21mmol)，室温避光搅拌2h，脱溶，加入少量CH₂Cl₂溶解，用10％碳酸钠溶液调节pH值至碱性，有黄绿色固体析出，过滤， 用冷却后的甲醇洗涤得0.65g黄色固体，收率96％，熔点：175℃变质。¹H>6)：δ9.78(s，1H)，7.98(d，J＝1.8Hz，1H)，7.92(s，1H)，7.68(d，J＝8.9Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.11(dd，J＝8.8，1.9Hz，1H)，4.38(d，J＝15.6Hz，1H)，4.00(s，3H)，3.91(s，3H)，3.51(d，J＝14.5Hz，1H)，3.22(d，J＝9.9Hz，1H)，3.00(d，J＝14.7Hz，1H)，2.70(dd，J＝15.7，10.9Hz，1H)，2.43-2.15(m，2H)，1.91(d，J＝10.9Hz，1H)，1.75(t，J＝13.6Hz，2H)，1.60(d，J＝12.1Hz，1H)，1.46-1.27(m，2H)；¹³C>6)：δ155.3，149.0，148.0，129.9，125.6，125.2，123.9，123.3，122.5，121.8，116.2，106.5，104.0，103.9，57.1，55.5，48.6，33.8，33.0，25.4，23.9，6.6，5.9；HRMS(ESI)calcd for>23H₂₆Br₂O₃[M+H]⁺：364.1868，found：364.1907.

化合物I-2和化合物I-5～I-6通过重复上述类似的方法制备(其中合成1-(2，3-二甲氧基-6-苄氧基-9-溴-10-菲甲基)-N，N-二乙基哌啶-2-甲酰胺使用相应的光学纯N，N-二乙胺基哌啶-2-甲酰胺)：

(14aS)-15-羟基-2，3-二甲氧基-6-苄氧基菲并喹喏里西啶(14aS-I-1)

收率81％。白色固体，熔点223-225℃；¹H>3)：δ8.19(d，J＝2.0Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.81(d，J＝9.0Hz，1H)，7.65(s，1H)，7.60(d，J＝7.3Hz，2H)，7.44(t，J＝7.3Hz，2H)，7.38(d，J＝7.2Hz，1H)，7.28(dd，J＝8.7，1.5Hz，1H)，5.38(s，2H)，4.83(d，J＝9.6Hz，1H)，4.70(d，J＝9.3Hz，1H)，4.32(d，J＝16.6Hz，1H)，4.03(s，3H)，3.94(s，3H)，3.39(d，J＝17.0Hz，1H)，3.17(d，J＝11.0Hz，1H)，2.24(d，J＝10.6Hz，1H)，2.17(t，J＝10.9Hz，1H)，2.02(d，J＝12.3Hz，1H)，1.86(d，J＝10.6Hz，1H)，1.70(d，J＝11.8Hz)，1.59(d，J＝11.9Hz，1H)，1.38(d，J＝12.8Hz，1H)；¹³C>6)：δ156.7，149.1，148.2，137.2，130.3，128.5，128.0，127.9，127.6，126.0，125.7，124.4，123.3，122.4，115.7，105.9，105.5，104.2，69.6，65.6，62.0，55.8，55.7，55.4，26.9，25.0，24.0；HRMS(ESI)calcd for>30H₃₂NO₄[M+H]⁺：470.2287，found：470.2326.

(14aS)-6-羟基-2，3-二甲氧基菲并喹喏里西啶的(14aS-I-3)

收率94％。黄色固体，熔点175℃后变质；¹H>6)：δ9.78(s，1H)，7.98(d，J＝1.8Hz，1H)，7.92(s，1H)，7.68(d，J＝8.9Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.11(dd，J＝8.8，1.9Hz，1H)，4.38(d，J＝15.6Hz，1H)，4.00(s，3H)，3.91(s，3H)，3.51(d，J＝14.5Hz，1H)，3.22(d，J＝9.9Hz，1H)，3.00(d，J＝14.7Hz，1H)，2.70(dd，J＝15.7，10.9Hz，1H)，2.43-2.15(m，2H)，1.91(d，J＝10.9Hz，1H)，1.75(t，J＝13.6Hz，2H)，1.60(d，J＝12.1Hz，1H)，1.46-1.27(m，2H)；¹³C>6)：δ155.3，149.0，148.0，129.9，125.6，125.2，123.9，123.3，122.5，121.8，116.2，106.5，104.0，103.9，57.1，55.5，48.6，33.8，33.0，25.4，23.9，6.6，5.9；HRMS(ESI)calcd for>23H₂₆Br₂O₃[M+H]⁺：364.1868，found：364.1907.[α]²⁰_D＝ 114°，(c＝1.0，DMSO)，98％ee[flow>R(minor)＝12.43min，t_R(major)＝18.68min].

(14aR)-6-羟基-2，3-二甲氧基菲并喹喏里西啶(14aR-I-3)

收率94％。黄色固体，熔点175℃后变质；¹H>6)：δ9.78(s，1H)，7.98(d，J＝1.8Hz，1H)，7.92(s，1H)，7.68(d，J＝8.9Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.11(dd，J＝8.8，1.9Hz，1H)，4.38(d，J＝15.6Hz，1H)，4.00(s，3H)，3.91(s，3H)，3.51(d，J＝14.5Hz，1H)，3.22(d，J＝9.9Hz，1H)，3.00(d，J＝14.7Hz，1H)，2.70(dd，J＝15.7，10.9Hz，1H)，2.43-2.15(m，2H)，1.91(d，J＝10.9Hz，1H)，1.75(t，J＝13.6Hz，2H)，1.60(d，J＝12.1Hz，1H)，1.46-1.27(m，2H)；¹³C>6)：δ155.3，149.0，148.0，129.9，125.6，125.2，123.9，123.3，122.5，121.8，116.2，106.5，104.0，103.9，57.1，55.5，48.6，33.8，33.0，25.4，23.9，6.6，5.9；HRMS(ESI)calcd for>23H₂₆Br₂O₃[M+H]⁺：364.1868，found：364.1907.[α]²⁰_D＝-112°，(c＝1.0，DMSO)，99％ee[flow>R(major)＝12.36min，t_R(minor)＝18.68min].

实施例2：菲并喹喏里西啶生物碱衍生物(I-4)的合成

6-乙酰氧基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(I-4)的制备：

将化合物6-羟基-2，3-二甲氧基菲并喹喏里西啶(I-3)(0.4g，1.1mmol)溶于50mL无水二氯甲烷中，依次加入乙酸酐(0.22g，2.2mmol)和三乙胺(0.17g，1.65mmol)，室温反应3小时，加入饱和碳酸氢钠溶液搅拌，分液，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥后脱溶，硅胶柱层析分离(二氯甲烷∶甲醇＝40∶1)，得淡黄色固体0.3g，收率67％。熔点：176℃，¹H>3)：δ8.13(s，1H)，7.78(s，2H)，7.27(s，1H)，7.14(s，1H)，4.43(d，J＝15.4Hz，1H)，4.07(s，3H)，4.02(s，3H)，3.55(d，J＝15.4Hz，1H)，3.29(d，J＝9.9Hz，1H)，2.98-2.82(m，2H)，2.39(s，3H)，2.32-2.27(m，2H)，1.97(d，J＝9.9Hz，1H)，1.88-1.78(m，3H)，1.59-1.50(m，1H)，1.41(s，1H)；¹³C>3)：δ175.2，169.9，149.5，148.5，148.4，129.7，126.7，126.5，126.1，124.8，123.9，123.5，120.0，114.4，103.7，57.3，56.0，55.5，34.2，33.2，29.7，25.5，24.1，22.1，21.3.HRMS(ESI)calcd for>25H₂₈NO₄[M+H]⁺：406.2018，found：406.2010.

实施例3：6-特戊酰氧基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(I-5)的合成

100mL圆底烧瓶中加入化合物6-羟基-2.3-二甲氧基菲并喹喏里西啶(I-3)(0.5g，1.38mmol)，加入50mL无水二氯甲烷，依次加入三乙胺(0.28g，2.75mmol)、DMAP(0.025g，0.21mmol)和特戊酰氯(0.2g，1.65mmol)，室温搅拌4小时，加入饱和氯化铵溶液淬灭，分液，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥有机相，脱溶，硅胶柱层析分离(二氯甲烷∶甲醇＝40∶1)，得淡黄色固体0.47g，收率77％。熔点：92-94℃，¹H>3)：δ8.14(d，J＝2.1Hz，1H)，7.87-7.85(m，2H)，7.27(s，1H)，7.25-7.23(m，1H)，4.46(d，J＝15.5Hz，1H)，4.12(s，3H)，4.07(s，3H)，3.67(d，J＝15.5Hz，1H)，3.30(d，J＝11.2Hz，1H)，3.13(dd，J＝3.1Hz，J＝16.5Hz，1H)，2.96-2.89(m，1H)，2.46-2.41(m，1H)，2.33(td，J＝3.6Hz，J＝11.2Hz，1H)，2.06(dd，J＝2.0Hz，J＝11.2Hz，1H)，1.89(d，J＝11.8Hz，1H)，1.81-1.77(m，2H)，1.61-1.50(m，2H)，1.45(s，9H)；¹³C>3)：δ177.5，149.6，148.9，148.6，129.8，126.7，126.5，126.2，125.1，123.9，123.6，120.0，114.3，103.9，103.8，57.4，56.1，55.9，55.8，39.2，34.5，33.4，27.3(3C)，27.2，25.7，24.2；HRMS(ESI)calcd for>28H₃₄NO₄[M+H]⁺：448.2488，found：406.2483.

实施例4：菲并喹喏里西啶生物碱衍生物I-6～I-11的合成

6-环己基甲酰氧基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(I-6)的制备：

将6-羟基-2，3-二甲氧基菲并喹喏里西啶(I-3)(0.4g，1.1mmol)加入到100mL圆底烧瓶中，然后加入50mL无水二氯甲烷，依次加入环己基甲酸(0.177g，1.38mmol)、EDCI(0.43g，2.2mmol)、Et₃N(0.22g，2.2mmol)和DMAP(0.27g，2.2mmol)，避光室温搅拌过夜。加入饱和氯化铵溶液淬灭，二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无数硫酸钠干燥后脱溶，硅胶柱层析分离(二氯甲烷∶甲醇＝80∶1)，得浅黄色固体0.41g，收率79％。熔点：199-200℃，¹H>3)：δ8.14(s，1H)，7.84-7.82(m，2H)，7.26-7.25(m，1H)，7.24(s，1H)，4.49(d，J＝15.7Hz，1H)，4.10(s，3H)，4.06(s，3H)，3.71(d，J＝14.6Hz，1H)，3.33(d，J＝11.2Hz，1H)，3.13(d，J＝16.0Hz，1H)，3.00-2.94(m，1H)，2.70-2.62(m，1H)，2.49(s，1H)，2.40-2.34(m，1H)，2.18(s，1H)，2.15(s，1H)，1.92-1.86(m，6H)，1.75-1.60(m，4H)，1.52-1.31(m，4H)；¹³C>3)：δ174.9，149.6，148.7，148.6，129.8，126.6，126.4，126.1，123.8，123.6，120.1，114.3，103.8，103.7，57.5，56.0，55.9，55.8，43.4(2C)，34.3，33.3，29.1，29.1，25.8，25.6，25.5，24.1(2C)；HRMS(ESI)calcd for>30H₃₆NO₄[M+H]⁺：474.2644，found：474.2625.

化合物I-10～I-14通过重复上述方法制备：

6-环丙基甲酰氧基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(I-7)

收率73％。浅黄色固体，熔点：224-226℃；¹H>3)：δ8.18(d，J＝2.2Hz，1H)，7.86-7.84(m，2H)，7.29(dd，J＝8.8Hz，J＝2.2Hz，1H)，7.24(s，1H)，4.45(d，J＝15.5Hz，1H)，4.10(s，3H)，4.06(s，3H)，3.65(d，J＝15.0Hz，1H)，3.29(d，J＝11.0Hz，1H)，3.10(dd，J＝16.4Hz，J＝3.2Hz，1H)，2.94-2.87(m，1H)，2.43-2.38(m，1H)，2.35-2.29(m，1H)，2.05(d，J＝12.4Hz，1H)，1.98-1.93(m，1H)，1.92-1.88(m，1H)，1.81-1.77(m，1H)，1.57-1.46(m，2H)，1.27-1.24(m，2H)，1.11-1.06(m，2H)；¹³C>3)：δ173.9，149.6，148.6，148.6，129.8，126.8，126.6，126.3，125.3，123.9，123.6，120.1，114.4，103.9，103.8，57.5，56.2，56.0，56.0(2C)，34.7，33.6，25.8，24.3，13.2，9.4(2C)；HRMS(ESI) calcd for>27H₃₀NO₄[M+H]⁺：432.2175，found：432.2169.

6-(呋喃-2-甲酰氧基)-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(I-8)

收率82％。浅黄色固体，熔点：239-242℃；¹H>3)：δ8.28(s，1H)，7.84(d，J＝8.7Hz，1H)，7.79(s，1H)，7.69(s，1H)，7.45(s，1H)，7.38(d，J＝8.3Hz，1H)，7.17(s，1H)，6.61(s，1H)，4.38(d，J＝15.2Hz，1H)，4.06(s，3H)，4.04(s，3H)，3.55(d，J＝15.2Hz，1H)，3.24(d，J＝12.0Hz，1H)，2.99(d，J＝15.7Hz，1H)，2.85-2.79(m，1H)，2.28-2.23(m，1H)，1.99(d，J＝10.6Hz，1H)，1.87(d，J＝11.0Hz，1H)，1.79(s，2H)，1.54-1.40(m，2H)；¹³C>3)：δ156.3，148.4，147.4，146.8，146.2，143.1，128.7，125.9，125.8，125.2，124.3，123.0，122.4，118.7，118.5，113.5，111.2，102.7，102.6，56.3，55.2，55.0，54.9，54.0，33.8，32.7，24.9，23.3；HRMS(ESI)calcd for>28H₂₈NO₅[M+H]⁺：458.1967，found：458.1963.

6-(噻吩-2-甲酰氧基)-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(I-9)

收率87％。浅黄色固体，熔点：247-249℃；¹H>3)：δ8.28(s，1H)，8.04(s，1H)，7.86-7.81(m，2H)，7.69(s，1H)，7.39(d，J＝8.0Hz，1H)，7.19(s，2H)，4.41(d，J＝15.2Hz，1H)，4.07(s，3H)，4.05(s，3H)，3.58(d，J＝15.1Hz，1H)， 3.25(d，J＝15.1Hz，1H)，3.03(d，J＝15.8Hz，1H)，2.88-2.81(s，1H)，2.32-2.25(s，2H)，2.01(d，J＝9.8Hz，1H)，1.87(d，J＝11.8Hz，1H)，1.80(s，2H)，1.56-1.41(m，2H)；¹³C>3)：δ161.0，149.6，148.6，148.3，134.8，133.6，133.0，129.8，128.1，127.0，126.9，126.3，125.5，124.0，123.6，120.0，114.6，103.9，103.8，57.5，56.3，56.1，56.0，56.0，34.9，33.8，25.9，24.8，24.3；HRMS(ESI)calcd>28H₂₈NO₄S[M+H]⁺：474.1739，found：474.1732.

6-(吡啶-3-甲酰氧基)-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(I-10)

收率80％。浅黄色固体，熔点：183℃变质；¹H>3)：δ¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ9.49(s，1H)，8.89(dd，J＝4.8Hz，J＝1.4Hz，1H)，8.55-8.52(m，1H)，8.32(d，J＝2.0Hz，1H)，7.92(d，J＝9.0Hz，1H)，7.86(s，1H)，7.52-7.49(m，1H)，7.41(dd，J＝8.0Hz，J＝2.0Hz，1H)，5.30(s，1H)，4.48(d，J＝15.4Hz，1H)，4.09(s，3H)，4.07(s，3H)，3.68(d，J＝15.4Hz，1H)，3.31(d，J＝11.1Hz，1H)，3.14(dd，J＝16.8Hz，J＝3.2Hz，1H)，3.10-2.90(m，1H)，2.44(t，J＝10.6Hz，1H)，2.34(td，J＝10.8Hz，J＝3.9Hz，1H)，2.07(s，1H)，1.91(d，J＝12.8Hz，1H)，1.84-1.79(m，2H)，1.62-1.53(m，1H)，1.51-1.42(m，1H)；¹³C>3)：δ164.3，154.1，151.5，149.7，148.7，148.3，137.7，129.9，127.0，126.9，126.3，125.7，125.0，124.1，123.5，119.8，114.5，106.5，103.8，103.8，57.5，56.1，56.0，56.0，55.9，34.6，33.5，25.7，24.2；HRMS(ESI)calcd for>29H₂₉N₂O₄[M+H]⁺：469.2127，found：469.2120.

6-(苯并噻二唑-3-甲酰氧基)-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(I-11)

收率83％。黄绿色固体，熔点：159-161℃；¹H>3)δ8.77(d，J＝8.0Hz，1H)，8.49(d，J＝8.0Hz，1H)，8.29(s，1H)，7.80(d，J＝9.2Hz，1H)，7.67(s，2H)，7.36(d，J＝8.8Hz，1H)，7.11(s，1H)，4.31(d，J＝15.6Hz，1H)，4.05(s，3H)，4.01(s，3H)，3.48(d，J＝15.6Hz，1H)，3.24(d，J＝10.8Hz，1H)，2.96(d，J＝16.0Hz，1H)，2.79(t，J＝16.0Hz，1H)，2.29-2.23(m，2H)，2.01(d，J＝11.6Hz，1H)，1.90(d，J＝11.6Hz，1H)，1.80-1.75(m，2H)，1.55-1.42(m，2H)；¹³C>3)：δ164.2，158.7，149.4，148.3，148.0，140.7，131.1，129.7，129.1，127.2，127.1，126.9，126.1，125.2，124.1，123.3，122.3，119.2，114.6，103.7，103.5，77.4，77.1，76.8，57.3，56.3，55.9，53.5，34.9，33.8，29.7，26.0，24.4；HRMS(ESI)calcd>30H₂₈N₃O₄S[M+H]⁺：526.1801，found：526.1788.

实施例5：菲并喹喏里西啶生物碱衍生物I-12～I-16的合成

6-O-炔丙基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(I-12)的制备

将6-羟基-2，3-二甲氧基菲并喹喏里西啶(I-3)(0.5g，1.38mmol)溶于9mLN，N-二甲基甲酰胺中，加入Cs₂CO₃(0.54g，1.66mmol)，室温搅拌0.5h，冰浴条件下缓慢滴加α-炔丙基溴(0.19g，1.65mmol)的6mL>1H>3)：δ8.03(d，J＝2.5Hz，1H)，7.90(s，1H)，7.80(d，J＝9.0Hz，1H)，7.24(dd，J＝8.5，J＝3.0Hz，2H)，4.89(s，2H)，4.42(d，J＝15.5Hz，1H)，4.10(s，3H)，4.06(s，3H)，3.62(d，J＝15.4Hz，1H)，3.26(d，J＝11.3Hz，1H)，3.09(dd，J＝16.3，J＝3.1Hz，1H)，2.60(s，1H)，2.40-2.34(m，1H)，2.29(td，J＝11.2，J＝3.9Hz，1H)，2.03(d，J＝13.1Hz，1H)，1.89(d，J＝12.4Hz，1H)，1.79-1.72(m，3H)，1.57-1.42(m，2H)；¹³C>6)：δ155.2，149.3，148.3，129.6，125.8，125.4，124.8，124.1，123.3，122.8，115.6，106.5，104.6，104.0，79.4，78.2，57.2，55.9，55.4，34.0，33.2，25.5，24.0.HRMS(ESI)calcdfor>26H₂₈NO₃[M+H]⁺；402.2024，found：402.2604.

化合物I-13～I-15，I-20～I-21通过重复上述方法制备：

6-O-乙氧基甲酰基甲基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(I-13)

收率81％。棕黄色固体，熔点：84-86℃；¹H>3)：δ7.96(d，J＝2.5Hz，1H)，7.87(s，1H)，7.77(d，J＝9.0Hz，1H)，7.23(s，1H)，7.19(dd，J＝9.0，J＝2.5Hz，1H)，4.81(s，2H)，4.53(d，J＝15.4Hz，1H)，4.32(q，J＝7.1Hz，2H)，4.10(s，3H)，4.06(s，3H)，3.71(d，J＝16.5Hz，1H)，3.37(d，J＝10.0Hz，1H)，3.09(d，J＝3.6Hz，1H)，3.01(d，J＝10.1Hz，1H)，2.55(s，1H)，2.38(s，1H)，2.06(d，J＝12.8Hz，1H)，1.92(s，1H)，1.84(s，2H)，1.66(d，J＝12.4Hz，1H)，1.48(s，1H)，1.32(t，J＝7.1Hz，3H)，1.25(s，1H)；¹³C>3)：δ169.1，155.6，149.5，148.4，130.1，126.5，125.4，125.1，124.3，124.3，123.4，114.5，106.7，103.8，103.8，65.9，61.5，57.5，56.2，56.0，56.0，34.7，33.7，25.9，24.3，14.26；HRMS(ESI)calcd for>27H₃₂NO₅[M+H]⁺：450.2236，found：450.2275.

6-O-氨基甲酰基甲基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(I-14)

收率69％。棕色固体，熔点：205-207℃；¹H>6)：δ8.11(s，1H)，8.04(s，1H)，7.80(d，J＝8.8Hz，1H)，7.69(s，1H)，7.53(s，1H)，7.28-7.24(m， 2H)，4.68(s，2H)，4.31(d，J＝16.0Hz，1H)，4.02(s，3H)，3.93(s，3H)，3.40(d，J＝16.0Hz，1H)，3.37(s，6H)，3.14(d，J＝10.0Hz，1H)，3.06(d，J＝14.0Hz，1H)，2.73-2.66(m，1H)，2.21-2.10(m，2H)，1.93(d，J＝9.2Hz，1H)，1.78(d，J＝8.8Hz，1H)，1.71(d，J＝11.6Hz，1H)，1.63-1.54(m，1H)，1.39-1.32(m，1H)；¹³C>6)：δ170.2，155.6，149.3，148.2，129.5，125.7，125.3，124.7，124.1，123.2，122.8，115.8，105.9，104.4，103.9，67.1，57.1，55.7，55.4，33.9，33.1，25.5，24.00；HRMS(ESI)calcd for>25H₂₉N₂O₄[M+H]⁺：421.2083，found：421.2127.

6-O-氰基甲基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(I-15)

收率87％。棕色固体，熔点：199-201℃；¹H>3)：δ7.94(s，1H)，7.79-7.75(m，2H)，7.20-7.16(m，2H)，4.92(s，2H)，4.39(d，J＝16.0Hz，1H)，4.08(s，3H)，4.04(s，3H)，3.57(d，J＝16.0Hz，1H)，3.27(d，J＝8.0Hz，1H)，3.00(d，J＝16.0Hz，1H)，2.87-2.81(m，1H)，2.35-2.26(m，2H)，2.04-1.99(m，1H)，1.88(d，J＝16.0Hz，1H)，1.80-1.75(m，2H)，1.58-1.52(m，1H)，1.44-1.41(m，1H)；¹³C>6)：δ162.3，154.2，149.4，148.4，129.5，125.8，125.3，124.4，123.9，122.8，116.8，115.3，106.7，104.7，103.9，57.0，55.9，55.4，53.9，35.7，33.8，33.0，30.7，25.4，23.9.HRMS(ESI)calcd for>25H₂₇N₂O₃[M+H]⁺：403.1977，found：403.2016.

(14aS)-6-O-氰基甲基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(14aS-I-15)

收率88％。棕色固体，熔点：199-201℃；¹H>3)：δ7.94(s，1H)，7.79-7.75(m，2H)，7.20-7.16(m，2H)，4.92(s，2H)，4.39(d，J＝16.0Hz，1H)，4.08(s，3H)，4.04(s，3H)，3.57(d，J＝16.0Hz，1H)，3.27(d，J＝8.0Hz，1H)，3.00(d，J＝16.0Hz，1H)，2.87-2.81(m，1H)，2.35-2.26(m，2H)，2.04-1.99(m，1H)，1.88(d，J＝16.0Hz，1H)，1.80-1.75(m，2H)，1.58-1.52(m，1H)，1.44-1.41(m，1H)；¹³C>6)：δ162.3，154.2，149.4，148.4，129.5，125.8，125.3，124.4，123.9，122.8，116.8，115.3，106.7，104.7，103.9，57.0，55.9，55.4，53.9，35.7，33.8，33.0，30.7，25.4，23.9.HRMS(ESI)calcd for>25H₂₇N₂O₃[M+H]⁺：403.1977，found：403.2016.85％ee[flow>

(14aR)-6-O-氰基甲基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(14aR-I-15)

收率90％。棕色固体，熔点：199-201℃；¹H>3)：δ7.94(s，1H)，7.79-7.75(m，2H)，7.20-7.16(m，2H)，4.92(s，2H)，4.39(d，J＝16.0Hz， 1H)，4.08(s，3H)，4.04(s，3H)，3.57(d，J＝16.0Hz，1H)，3.27(d，J＝8.0Hz，1H)，3.00(d，J＝16.0Hz，1H)，2.87-2.81(m，1H)，2.35-2.26(m，2H)，2.04-1.99(m，1H)，1.88(d，J＝16.0Hz，1H)，1.80-1.75(m，2H)，1.58-1.52(m，1H)，1.44-1.41(m，1H)；¹³C>6)：δ162.3，154.2，149.4，148.4，129.5，125.8，125.3，124.4，123.9，122.8，116.8，115.3，106.7，104.7，103.9，57.0，55.9，55.4，53.9，35.7，33.8，33.0，30.7，25.4，23.9.HRMS(ESI)calcd for>25H₂₇N₂O₃[M+H]⁺：403.1977，found：403.2016.96％ee[flow>

实施例6：6-O-(2-丙氨酸酯基乙基)-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶的合成(I-16)

6-O-(2-羟基乙基)-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶的制备

100mL圆底烧瓶中加入6-O-乙氧基甲酰基甲基-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(0.3g，0.67mmol)，加入20mL无水四氢呋喃，冰水浴下分批加入四氢铝锂(0.06g，1.34mmol)，室温反应8小时，冰水浴下缓慢加水淬灭，二氯甲烷萃取，饱和氯化钠溶液洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后柱分离(二氯甲烷：甲醇＝30：1)，得黄绿色固体0.23g。熔点：223-225℃，¹H>6)：δ8.07-8.04(m，2H)，7.74(d，J＝9.2Hz，1H)，7.22-7.18(m，2H)，4.98(s，1H)，4.30-4.22(m，3H)，4.01(s，3H)，3.91(s，3H)，3.84-3.82(m，2H)，3.37(d，J＝16.0Hz，1H)，3.12(d，J＝10.8Hz，1H)，2.96(d，J＝14.4Hz，1H)，2.68-2.62(m，1H)，2.19-2.08(m，1H)，1.87(d，J＝10.0Hz，1H)，1.76-1.67(m，2H)，1.61-1.56(m，1H)，1.38-1.31(m，3H)，1.20(s，2H)；¹³C>6)：δ156.6，149.2，148.2，129.7，125.7，125.1，124.9，124.2，124.0，122.8，115.5，105.6，104.7，103.8，69.8，59.8，57.1，55.8，55.3，40.1，39.9，39.7，39.5，39.3，39.1，38.8，33.8，33.0，30.4，29.1，25.4，23.9.

6-O-(2-丙氨酸酯基乙基)-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(I-16)

100mL圆底烧瓶中加入6-O-(2-羟基乙基)-2，3-二甲氧基-菲-[9，10-b]-喹喏里西啶(0.39g，0.96mmol)，加入50mL无水二氯甲烷，加入N-Boc-丙氨酸(0.2g，1.1mmol)、EDCI(0.37g，1.92mmol)、Et₃N(0.19g，1.92mmol)和DMAP(0.23g，1.92mmol)，室温搅拌8小时，加入饱和氯化铵溶液淬灭，二氯甲烷萃取，合并 有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40：1)得黄绿色固体。将其加入到30mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌2小时，加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥得黄绿色固体0.33g，收率72％。熔点：204-206℃。¹H>3)：δ7.93(d，J＝2.0Hz，1H)，7.90(s，1H)，7.79(d，J＝8.8Hz，1H)，7.25(s，1H)，7.19(dd，J＝8.8Hz，J＝2.0Hz，1H)，4.58(d，J＝4.4Hz，1H)，4.47(d，J＝15.6Hz，1H)，4.41(d，J＝15.6Hz，1H)，4.12(s，3H)，4.06(s，3H)，3.70-3.60(m，2H)，3.31(d，J＝11.2Hz，1H)，3.14-3.09(m，1H)，2.97-2.90(m，1H)，2.47(s，1H)，2.38-2.31(m，1H)，2.07-2.05(m，1H)，1.92-1.88(m，1H)，1.63-1.53(m，2H)，1.48-1.43(m，1H)，1.36(d，J＝6.8Hz，3H)；¹³C>3)：δ176.7，156.3，149.5，148.5，130.2，126.4，124.7，124.2，123.9，123.4，115.2，105.8，103.8，66.1，63.3，57.6，56.1，56.0，50.1，34.5，33.5，29.7，25.7，24.2，20.8.HRMS(ESI)calcd for>28H₃₅N₂O₅[M+H]⁺：479.2546，found：479.2532.

实施例7：抗烟草花叶病毒活性的测定，测定程序如下：

1、病毒提纯及浓度测定：

病毒提纯及浓度测定参照南开大学元素所生测室编制烟草花叶病毒SOP规范执行。病毒粗提液经2次聚乙二醇离心处理后，测定浓度，4℃冷藏备用。

2、化合物溶液配制：

称量后，原药加入DMF溶解，制得1×10⁵μg/mL母液，后用含1％吐温80水溶液稀释至所需浓度；宁南霉素制剂直接兑水稀释。

3、离体作用：

摩擦接种珊西烟适龄叶片，用流水冲洗，病毒浓度10μg/mL。收干后剪下，沿叶中脉对剖，左右半叶分别浸于1‰吐温水及药剂中，30min后取出，于适宜光照温度下保湿培养，每3片叶为1次重复，重复3次。3d后记录病斑数，计算防效。

4、活体保护作用：

选长势均匀一致的3-5叶期珊西烟，全株喷雾施药，每处理3次重复，并设1％吐温80水溶液对照。24h后，叶面撒布金刚砂(500目)，用毛笔蘸取病毒液，在全叶面沿支脉方向轻擦2次，叶片下方用手掌支撑，病毒浓度10μg/mL，接种后用流水冲洗。3d后记录病斑数，计算防效。

5、活体治疗作用：

选长势均匀一致的3-5叶期珊西烟，用毛笔全叶接种病毒，病毒浓度为10μg/mL，接种后用流水冲洗。叶面收干后，全株喷雾施药，每处理3次重复，并设1％吐温80水溶液对照。3d后记录病斑数，计算防效。

6、活体钝化作用：

选长势均匀一致的3-5叶期珊西烟，将药剂与等体积的病毒汁液混合钝化30min后，摩擦接种，病毒浓度20μg/mL，接种后即用流水冲洗，重复3次，设1‰吐温80水溶液对照。3d后数病斑数，计算结果。

抑制率(％)＝[(对照枯斑数-处理枯斑数)/对照枯斑数]×100％

表1部分菲并喹喏里西啶生物碱及其6-位衍生物的抗TMV活性测试结果：

从表1中可见，通过改进化合物的理化性质，化合物的离体抗TMV活性都得到明显的提高，而且所有化合物均表现出很好的抗烟草花叶病毒(TMV)活体活性，大部分化合物抗烟草花叶病毒活体活性明显优于商品化品种宁南霉素以及我们前期开发的高效候选品种NK-007，尤其是化合物I-3，I-4，I-7和I-14在100μg/mL浓度下抗烟草花叶病毒活性与商品化品种宁南霉素在500μg/mL浓度下的活性相当或更好，具备极大的开发价值。

实施例8：抗癌活性的测定，测定程序如下：

肿瘤细胞体外增殖抑制试验

肿瘤细胞的生长抑制用磺酰罗单明B(sulforhodamine B，SRB)法检测：将一定数量处于对数生长期的不同肿瘤细胞接种于96孔培养板，培养24h细胞贴壁后，加入不同浓度的受试化合物，每个浓度设三复孔，并设定相应溶媒对照及无细胞调零孔。继续培养细胞72h后，倾去培养液，加入冰预冷的10％的三氯乙酸溶液固定细胞，4℃放置1h后用蒸馏水洗涤5次，空气中自然干燥。然后加入4mg/mL的SRB(Sigma，St Louis，MO，USA)溶液，室温中染色15min，去染色液，用1％冰醋酸洗涤5次，空气干燥。最后加入Tris溶液(pH＝10.5)，可调波长式微孔板酶标仪(VERSAmax^TM，Molecular>对照-OD_加药)/OD_对照×100％，IC₅₀值采用Logit法计算。

四氮唑盐(microculture tetrozolium，MTT)还原法：在培养板上加一定密度的细胞悬液，90μL/孔；如需给药，则再于同时(悬浮细胞)或4h后(贴壁细胞)加入不同浓度之化疗药物，10μL/孔，均设三复孔。另外，每块板上另设一个调零孔(只加培液，不含细胞和药物)。培养(37℃，5％CO₂)2d后，加入MTT溶液20μL/孔；继续培养4h后，加入上述三联液100μL/孔，于37℃放置过夜后，以DG-3022型酶标仪(华东电子管厂产品)测各孔的IC₅₀值。

表2部分菲并喹喏里西啶及其6-位衍生物对人肺腺癌A549的体外抗肿瘤作用^a：

^a筛选方法：磺酰罗丹明B(sulforhodamine>-5mol/L抑制率＜50％；有效：10^-5mol/L抑制率≥50％。

表3部分菲并喹喏里西啶及其6-位衍生物对人肝癌BEL-7402的体外抗肿瘤作用^a：

^a筛选方法：磺酰罗丹明B(sulforhodamine>-5mol/L抑制率＜50％；有效：10^-5mol/L抑制率≥50％。

从表2和表3的抗癌活性数据可以看出所有测试的菲并喹喏里西啶及其6-位衍生物对两种癌细胞均表现出强烈的抑制活性，大部分化合物在0.1μM浓度下仍具有＞50％的抑制活性，化合物I-6在0.003μM下对两种细胞的抑制率仍超过60％。化合物I-3，14aR-I-3，I-15和14aR-I-15的IC₅₀值都达到了纳摩尔级，甚至好于传统抗癌药物紫杉醇。通过对化合物14aS-I-3和14aR-I-3，14aS-I-15和14aR-I-15的抗癌活性数据对比发现手性对化合物的抗癌活性有影响，14R构型的抗癌活性要比14S构型的高。