基于芝麻油的注射配制品

摘要

披露了包含乙醇、芝麻油、以及免疫应答调节剂化合物的可注射配制品。还提供了制备这些配制品的方法以及使用这些配制品在受试者中治疗疾病例如肿瘤性疾病的方法，这些方法包括将这些配制品注射进入需要治疗的受试者。

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2013年11月5日提交的美国临时专利申请序列号61/900,255的优先权，将其披露通过引用以其全文结合在此。

背景

近年来，在对于免疫系统的了解以及用于修饰免疫应答以治疗或预防疾病的药物化合物的探索方面已经取得了重要的进展。已经在多类化合物中发现了这类免疫应答调节剂(“IRM”)化合物，这些化合物种类包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6,7-稠合环烷基咪唑并吡啶胺、1,2-桥接咪唑并喹啉胺、噻唑并喹啉胺、噁唑并喹啉胺、噻唑并吡啶胺、噁唑并吡啶胺、咪唑并萘啶胺、咪唑并四氢萘啶胺、以及噻唑并萘啶胺。参见，例如美国专利号4,689,338；4,929,624；5,266,575；5,268,376；5,346,905；5,352,784；5,389,640；5,446,153；5,482,936；5,756,747；6,110,929；6,194,425；6,331,539；6,376,669；6,451,810；6,525,064；6,541,485；6,545,016；6,545,017；6,573,273；6,656,938；6,660,735；6,660,747；6,664,260；6,664,264；6,664,265；6,667,312；6,670,372；6,677,347；6,677,348；6,677,349；6,683,088；6,756,382；7,799,800；美国专利公开号2012/040461以及2013/0230578。这些化合物中很多已证实具有强有力的免疫刺激、抗病毒与抗肿瘤(包括抗癌)活性，并且还显示可用作疫苗佐剂以及用于治疗TH2介导的疾病。

然而，此类化合物提供所希望的治疗益处的能力取决于多种因素，这些因素包括以适合于具体疗法的方式，可对此类化合物进行配制和递送的程度。因此，需要从这些重要的免疫改善药物化合物中提供潜在治疗益处的新方法和配制品。

概述

尽管很多疾病可以通过免疫应答调节化合物的全身递送进行治疗，与局部递送相比，全身递送可具有加剧的负面副作用，如全身性TNF诱导，并且还可通过使其扩散到整个身体来限制可供用于有效治疗疾病的IRM化合物的量。尽管在IRM的局部递送方面已取得了一些进步(参见例如美国专利号7,799,800；以及美国专利公开号2004/0265351；2009/0035323；以及2013/0230578)，仍需要提供增加IRM递送局部化的稳定配制品。

已经发现，含有IRM化合物、乙醇以及芝麻油的配制品在较长的时间段里提供局部活性IRM化合物。

本发明提供了包含乙醇、芝麻油、以及免疫应答调节剂(IRM)化合物的可注射配制品。该IRM化合物通常具有化学式(I)：

其中R、R₂、X、Y以及R₁是如下文定义的。

在另一个方面中，本发明提供了一种递送在此所描述的药物配制品的方法，该方法包括将该配制品注射进入受试者。

在另一个方面中，本发明提供了一种治疗疾病的方法，该方法包括将在此所描述的任一种配制品注射进入需要治疗该疾病的受试者。

在另一个方面中，本发明进一步提供了一种制备药物配制品的方法，该药物配制品包括乙醇、芝麻油、以及具有化学式I的IRM化合物。

术语“包含”及其变体，在这些术语在本说明书和权利要求书中出现的情况下，不具有限制性含义。

如此处使用的，“一个/一种(a/an)”、“该”、“至少一个”、与“一个或多个”可互换使用。

另外在本文中，借助端点对数值范围进行的描述包括隶属该范围的全部数字(例如，1至5包括1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等)。

“诱导”及其变体是指细胞活性的任何可测量的增加。例如，免疫应答的诱导可包括例如细胞因子产生方面的、免疫细胞激活、增殖或成熟方面的、和/或其他免疫功能提高的指示方面的的增加。

“治疗性的”及其变体是指改善与病症相关的一种或多种现有症状或临床征象的治疗。

“治疗”及其变体是指使与病症相关的症状或征象在任何程度上降低、限制发展、改善、预防、或消退。

本发明的以上概述不意在描述本发明的每个所披露的实施例或每一个实施方式。以下的描述是更具体地示例说明性实施例。在贯穿本说明书的数个地方，通过实例的列表提供指导，这些实例能以不同的组合形式使用。在每种情况下，该列表仅作为代表性群组发挥作用并且不应当解释为排他性列表。

发明详述

本发明涉及免疫应答调节剂(IRM)的方法与配制品，该方法与配制品在一些实施例中可以经由注射沉积在局部化组织区域内并且可以在较长的时间段里提供局部活性IRM化合物。在此描述的配制品展现出高度的稳定性，尤其是IRM化合物。

通常，本发明的配制品包括乙醇、芝麻油、以及具有以下化学式(I)的IRM化合物：

其中：

X是具有多至8个碳原子的亚烷基，这些碳原子可任选地被-O-间隔或封端；

R₂是氢、烷基、烷氧基烷撑基(alkoxyalkylenyl)、烷氨基烷撑基(alkylaminoalkylenyl)、或羟基烷撑基(hydroxyalkylenyl)；

Y是-C(O)-或-S(O)₂-；

R₁是具有11-23个碳原子的直链或支链脂肪族基团，任选地包括一个或多个不饱和的碳-碳键；并且

R是氢、卤素或羟基；

或其一种药学上可接受的盐。

如本文所用，术语“烷基”、“烯基”和前缀“烷-”包括直链和支链基团以及环状基团，例如环烷基和环烯基。除非另外规定，这些基团包含1至23个碳原子，烯基包含2至23个碳原子。在一些实施例中，这些基团总共具有多至20个碳原子、多至18个碳原子、多至16个碳原子、多至10个碳原子、多至8个碳原子、多至7个碳原子、多至6个碳原子、或多至4个碳原子。环状基团可以是单环的或多环的并优选地具有3-10个环碳原子。示例性的环状基团包括环丙基、环丙基甲基、环戊基、环己基、金刚烷基及取代和未取代的冰片基、降冰片基和降冰片烯基。

除非另外指明，“亚烷基”和“亚烯基”是如上定义“烷基”和“烯基”基团的二价形式。当“亚烷基”和“亚烯基”分别被取代时，使用术语“烷撑基(alkylenyl)”和“烯撑基(alkenylenyl)”。例如，烷氧基烷撑基基团包含与烷氧基基团连接的亚烷基部分。

具有可任选地被-O-“间隔”的碳原子的亚烷基基团是指在-O-的任一侧上具有碳原子。实例是-CH₂-CH₂-O-CH₂-CH₂-。

具有可任选地被-O-“封端”的碳原子的亚烷基基团是指在亚烷基基团或碳原子链的任一端上具有-O-。实例包括-O-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-和-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-O-。在本发明中所使用的化合物中，当X是具有多至8个碳原子的亚烷基，而这些碳原子被-O-封端时，-O-可以连接至咪唑环的氮或者酰胺(Y是-C(O)-)或磺酰胺(Y是-S(O)2-)基团的氮。

本发明包括任何其药学上可接受形式的本文描述的IRM化合物(包括中间体)，包括固体、半固体、溶剂化物(例如水合物)、异构体(例如非对映体和对映体)、盐、多晶型物、前药等。特别地，如果化合物是光学活性的，本发明具体地包括该化合物对映体的每一个，以及对映体的外消旋混合物。需理解术语“化合物”包括任何或所有这些形式，无论是否明确说明(虽然有时明确说明了“盐”)。

对于在此提出的任何化合物，包括化学式I，以下变量(例如X、R₂、R等等)中的每一个在其任何实施例中可以与任何一个或多个其他的变量在其任何实施例中结合并且与在此所描述的任一个化学式相关联，如本领域技术人员所能理解的那样。每个所得变量组合都是本发明的实施例。

在一些实施例中，X是具有多至8个碳原子的亚烷基，这些碳原子可任选地被-O-间隔或封端。

在一些实施例中，X是具有多至4个碳原子的亚烷基，这些碳原子可任选地被-O-间隔或封端。

在一些实施例中，X是-O-C_2-8亚烷基(例如-O-C_2-5亚烷基)。在这些实施例中，-O-直接附接至咪唑环的氮。

在一些实施例中，X是-O-C_3-8亚烷基(例如-O-C_3-5亚烷基)。在这些实施例中，-O-直接附接至咪唑环的氮。

在一些实施例中，X是-C_1-8亚烷基(例如-C_2-5亚烷基)。

在一些实施例中，X是被-O-间隔的-C_2-8亚烷基(例如-C_2-5亚烷基)。

在一些实施例中，X是-C_3-8亚烷基(例如-C_3-5亚烷基)。

在一些实施例中，X是-O-亚丁基(例如-O-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-)。在这些实施例中，-O-直接附接至咪唑环的氮。

在一些实施例中，X是-CH₂-CH₂-O-CH₂-CH₂-。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X时，R₂是氢、烷基、烷氧基烷撑基、烷氨基烷撑基、或羟基烷撑基。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X时，R₂是氢、烷基、烷氧基烷撑基、或羟基烷撑基。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X时，R₂是氢、烷基、或烷氧基烷撑基。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X时，R₂是甲基、乙基、丙基、丁基、乙氧基甲基、甲氧基甲基、乙基氨基甲基、或2-甲氧基乙基。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X时，R₂是甲基、乙基、丙基、丁基、乙氧基甲基、甲氧基甲基、或2-甲氧基乙基。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X时，R₂是乙基、丁基、乙氧基甲基、或2-甲氧基乙基。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X时，R₂是C_1-4烷基。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X时，R₂是丁基(例如-CH₂-CH₂-CH₂-CH₃)。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X时，R₂是乙氧基甲基(例如-CH₂-O-CH₂-CH₃)。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X时，R₂是2-甲氧基乙基(例如-CH₂-CH₂-O-CH₃)。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X时，R₂是乙基氨基甲基(例如-CH₂-NH-CH₂-CH₃)。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X或R₂时，R是氢、卤素、羟基、烷基、卤代烷基、或烷氧基。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X或R₂时，R是卤素或羟基。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X或R₂时，R是氢。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X或R₂时，R是卤素。在一些实施例中，R是氟、氯、或溴。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X、R或R₂时，Y是-C(O)-或-S(O)₂-。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X、R或R₂时，Y是-C(O)-。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X、R、R₂或Y时，R₁是具有11-23个碳原子的直链或支链脂肪族基团，任选地包括一个或多个不饱和的碳-碳键(例如-(CH₂)₇-CH＝CH-(CH₂)₇-CH₃、-(CH₂)₇-CH＝CH-(CH₂)₅-CH₃、-(CH₂)₉-CH＝CH-(CH₂)₅-CH₃、-(CH₂)₆-(CH₂-CH＝CH)₂-(CH₂)₄-CH₃、-(CH₂)₆-(CH₂-CH＝CH)₃-CH₂-CH₃、或-(CH₂)₂-(CH₂-CH＝CH)₄-(CH₂)₄-CH₃)。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X、R、R₂或Y时，R₁是C₁₁-C₂₃烷基。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X、R、R₂或Y时，R₁是C₁₅-C₂₃烷基。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X、R、R₂或Y时，R₁是C₁₅-C₁₉烷基。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X、R、R₂或Y时，R₁是C₁₅-C₁₇烷基。

在一些实施例中，包括以上化学式I的实施例的任一项，当定义了X、R、R₂或Y时，R₁是C₁₇烷基。

在化学式I的一些实施例中，X是-O-C_3-5亚烷基，并且R₂是甲基、乙基、丙基、丁基、乙氧基甲基、甲氧基甲基、或2-甲氧基乙基。

在化学式I的一些实施例中，X是-O-亚丁基，并且R₂是丁基。

在化学式I的一些实施例中，R₁是直链或支链烷基基团。

在化学式I的一些实施例中，R₁是直链烷基基团。

在一些实施例中，具有化学式I的化合物是N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺：

或其一种药学上可接受的盐。

本发明配制品中所使用的IRM化合物可以由包括与化学领域众所周知的那些方法类似的方法的合成途径来合成，特别是根据本文所包括的说明来合成。原料一般可从商业来源如Aldrich Chemicals(奥德里奇化学公司)(Milwaukee(密尔沃基)，威斯康辛，美国)获得或使用本领域技术人员公知的方法容易地制备(例如通过下列文献中一般性描述的方法制备：LouisF.Fieser(路易斯F.费塞尔)和Mary Fieser(玛丽费塞尔)，Reagents forOrganic Synthesis(有机合成试剂)，第1-19卷，Wiley(伟利)，纽约(1967-1999版)；Alan R.Katritsky(艾伦R.凯楚斯基)，Otto Meth-Cohn(奥托麦斯科恩)，Charles W.Rees(查尔斯W.瑞茜)，ComprehensiveOrganic Functional Group Transformations(综合有机官能团转化)，第1-6卷，Pergamon Press(帕加蒙出版社)，牛津，英国，(1995)；Barry M.Trost(巴里M.特罗斯特)与Ian Fleming(伊恩弗菜明)，ComprehensiveOrganic Synthesis(综合有机合成)，第1-8卷，Pergamon Press(帕加蒙出版社)，牛津，英国，(1991)；或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie(贝尔斯坦有机化学手册)，第4版，Springer-Verlag，柏林，德国，包括增刊(也可通过贝尔斯坦在线数据库得到))。

对于可以用于制备具有化学式I的化合物的各个反应步骤的更详细的描述，参见例如美国专利号7,799,800；以及美国专利公开号2013/0230578。

具有化学式I的化合物还可以制备自描述于现有技术中的高级中间化合物。具有化学式I的化合物可以制备自分别描述于国际专利申请号WO2012/167081的反应方案II、III与IV中具有化学式XIV、XXIV以及XXXVI的高级中间化合物。具有化学式I的化合物还可以制备自均描述于美国专利号6451810中的反应方案I中具有化学式VII的高级中间化合物或反应方案II中具有化学式VIII的高级中间化合物。用于制备上述高级中间化合物的合成程序还描述于国际专利申请号WO 2012/167081以及美国专利号6451810中。

使用描述于美国专利号6451810的反应方案II-III中的程序，可以通过将上述高级中间化合物与适当的羧酸或羧酰氯化合物进行反应制备具有化学式I的化合物，其中X是-C(O)-。可以使用以下羧酸(或对应的羧酰氯衍生物)制备优选的化学式I化合物，其中X是-C(O)-：月桂酸、豆蔻酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、花生酸、山萮酸、以及木蜡酸。可以从不饱和脂肪酸(如油酸、棕榈油酸、异油酸、亚油酸、亚麻酸(linoleneic acid)或花生油酸)制备化学式I化合物，其中X是–C(O)-并且R1是不饱和脂肪族基团(即具有一个或多个不饱和的碳-碳键的脂肪族基团)。

使用描述于美国专利号6331539的反应方案II中的程序，可以通过将上述高级中间化合物与适当的磺酰氯进行反应制备具有化学式I的化合物，其中X是-S(O)₂-。

本领域技术人员将理解其他合成路径可用于合成本发明的化合物。

在本发明配制品中所使用的IRM化合物的制备中，有时可能需要保护特定的官能度，而使中间体上的其他官能团进行反应。对这种保护的需求可以根据特定官能团的性质和反应步骤条件的不同而改变。适合的氨基保护基团包括乙酰基、三氟乙酰基、叔-丁氧基羰基(Boc)、苄氧基羰基、以及9-芴甲氧羰基(Fmoc)。适合的羟基保护基团包括乙酰基和甲硅烷基，如叔丁基二甲基甲硅烷基基团。关于保护基和其用途的一般说明，参看T.W.Greene(T.W.格林)与P.G.M.Wuts(P.G.M.伍兹)，Protective Groups in OrganicSynthesis(《有机合成中的保护基》)，John Wiley&Sons(约翰威利父子公司)，纽约，美国，1991。

可以将常规的分离与纯化方法和技术用于分离本发明配制品中所使用的IRM化合物。这类技术可以包括例如所有类型的色谱法(高效液相色谱法(HPLC)、使用常用吸收剂(如硅胶)的柱色谱法、以及薄层色谱法)、重结晶、微分(即液-液)萃取技术。

在此描述的可注射配制品中所使用的乙醇典型地是以约1wt-％至约9wt-％的量存在。在一些实施例中，乙醇是以约3wt-％至约8wt-％的量存在。在一些实施例中，乙醇是以约5wt-％至约7.5wt-％的量存在。在一些实施例中，乙醇是以约1wt-％至约3wt-％的量存在。在一些实施例中，乙醇是以约3wt-％至约4wt-％的量存在。在一些实施例中，乙醇是以约4wt-％至约5wt-％的量存在。在一些实施例中，乙醇是以约5wt-％至约6wt-％的量存在。在一些实施例中，乙醇是以约6wt-％至约7wt-％的量存在。在一些实施例中，乙醇是以约6.5wt-％至约7.5wt-％的量存在。在一些实施例中，乙醇是以约8wt-％至约9wt-％的量存在。在一些实施例中，如以下方法中所描述，将过量的乙醇(即大于可溶于芝麻油中的量)，例如在一些实施例中至少10wt-％乙醇，在一些实施例中至少12wt-％乙醇，在一些实施例中至少14wt-％乙醇，用于溶解更大量的IRM化合物。当将IRM-乙醇溶液添加至芝麻油中时，相比于简单地将IRM添加至预混合的芝麻油-乙醇溶液，IRM溶解地更加迅速；然后将过量的乙醇(即以超出芝麻油中的溶解极限存在)蒸发，以产生最终配制品(包含9wt-％乙醇或更少)。在一些实施例中，适合用于在此描述的可注射配制品中的乙醇包括不包含任何水和变性剂的乙醇。可用于本发明所述配制品中的示例性乙醇包括200普如弗(proof)乙醇，例如无水乙醇，USP级。

在此描述的可注射配制品还包括芝麻油。在此描述的配制品中所使用的芝麻油为药物级，如芝麻油(Sesame Oil)，NF。在一些实施例中，可将芝麻油进行精制，这样使得一种或多种极性化合物基本上从芝麻油中去除或在基本上不改变芝麻油的脂肪酸谱的情况下使其含量降低。例如，芝麻油可具有包括棕榈酸、硬脂酸、油酸、与亚油酸的脂肪酸谱。其他脂肪酸也可以较低水平存在，典型地低于1wt-％。存在于芝麻油中的极性化合物包括但不限于如下化合物：甘油单酯、甘油二酯、游离脂肪酸、植物固醇、色素(叶绿素、胡萝卜素)、芝麻素、芝麻酚林、产生自氧化的产品、以及环境化学物质。可以使用标准试验，如酸值试验、羟值试验、过氧化值试验、以及微量氮值试验，定量地测量芝麻油中的极性化合物。可将标准色谱法用于从芝麻油中去除或实质性地降低至少一种极性化合物的含量，以提供精制的芝麻油。本领域熟知的适合的色谱法包括基于重力的柱色谱法、快速柱色谱法、中压液相层析、或高压色谱法。

在一些实施例中，芝麻油具有小于或等于2的羟值。可以根据USP 36<401>Fats and Fixed Oils,Hydroxyl Value(《USP 36<401>脂肪与脂肪油，羟值》)中所描述的公布的程序来测定芝麻油的羟值。在一些实施例中，芝麻油的酸值小于或等于0.1。可以根据USP 36<401>Fats and Fixed Oils,AcidValue(《USP 36<401>脂肪与脂肪油，酸值》)中所描述的公布的程序来测定芝麻油的酸值。在一些实施例中，芝麻油的过氧化值小于或等于1。可以根据USP 36<401>Fats and Fixed Oils,Peroxide Value(《USP 36<401>脂肪与脂肪油，过氧化值》)中所描述的公布的程序来测定芝麻油的过氧化值。在一些实施例中，芝麻油的总氮含量小于或等于1ppm。可以根据ASTMD5762-12中所描述的公布的方法来测定芝麻油的微量氮值。在一些实施例中，芝麻油包含不大于0.05wt-％的芝麻素。在一些实施例中，芝麻油包含不大于0.05wt-％的芝麻酚林。可以根据由T.Tashiro(田代)，Y.Fukuda(福田)，T.Osawa(大泽)和M.Namiki(并木)在Journal of the American OilChemists’Society(美国油化学协会杂志)，67，508(1990)中所描述的公布的芝麻素/芝麻酚林测定来确定芝麻素与芝麻酚林的水平。

出人意料地，已经发现包含IRM化合物、乙醇、以及精制的芝麻油的配制品(精制的芝麻油如以上描述使得一种或多种极性化合物基本上从芝麻油中去除)具有增强的稳定性，不仅是配制品的总体稳定性，而且还有IRM化合物自身的稳定性。在此描述的配制品展现出高度的化学和物理稳定性，尤其是IRM化合物。例如，在此所描述的一些实施例中，如当使用精制的芝麻油时，配制品展现出可接受的用于商业用途的货架期，例如6个月的货架期、1年的货架期等。

在一些实施例中，本发明所述的可注射药物配制品包含芝麻油、乙醇(7.5wt-％)、BHA(300ppm)、以及N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(0.15mg/mL)。在一些实施例中，本发明所述的可注射药物配制品包含芝麻油、乙醇(7.5wt-％)、BHA(300ppm)、以及N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(0.3mg/mL)。在一些实施例中，本发明所述的可注射药物配制品包含芝麻油、乙醇(7.5wt-％)、BHA(300ppm)、以及N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(0.6mg/mL)。在一些实施例中，本发明所述的可注射药物配制品包含芝麻油、乙醇(7.5wt-％)、BHA(300ppm)、以及N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(1.2mg/mL)。在一些实施例中，本发明所述的可注射药物配制品包含芝麻油、乙醇(7.5wt-％)、BHA(300ppm)、以及N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(2.4mg/mL)。

在一些实施例中，本发明所述的可注射药物配制品包含芝麻油、乙醇(7.5wt-％)、BHA(300ppm)、以及N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(0.1mg/mL至约2.5mg/mL)。

可注射制剂的选择中所涉及的因素包括IRM化合物在该制剂中的溶解度、IRM化合物在该制剂中的稳定性、该制剂的物理稳定性。当设计可以长时间(>6个月)并且在5℃至40℃范围的温度下储存的配制品时，这些因素尤其重要。

可以通过该配制品的化学组成和贮存条件影响IRM化合物在该配制品中的化学稳定性。可以通过使用标准分析方法(如HPLC)分析随时间的推移该配制品中IRM化合物的含量来确定IRM化合物在该配制品中的化学稳定性。

在一些实施例中，药物配制品可以进一步包括一种或多种添加剂，该添加剂包括但不限于抗氧化剂、抗微生物剂、佐剂、增稠剂、助悬剂、表面活性剂、以及分散剂。在一些实施例中，该配制品可以包括添加的抗氧化剂，如丁羟茴醚(BHA)或丁羟甲苯(BHT)。该配制品中添加的抗氧化剂浓度可以为至少10ppm、50ppm、100ppm、200ppm、以及高达300ppm。

在一些实施例中，本披露的这些药物配制品与方法可以包括其他另外活性剂，例如混合或分别投放。此类添加剂可以包括抗原(例如疫苗)、化学治疗剂、细胞毒性剂、抗体、抗病毒剂、细胞因子、肿瘤坏死因子受体(TNFR)激动剂、或另外的免疫应答调节剂。可以与本发明所述配制品结合递送的TNFR激动剂包括CD40受体激动剂，如披露于申请美国专利申请公开号2004/0141950(Noelle(诺勒)等人)中。其他与本发明所述IRM配制品组合使用的活性成分包括披露于例如美国专利申请公开号2003/0139364(Krieg(克里格)等人)中的那些。

具有化学式I的IRM化合物已经显示出诱导产生细胞因子，如TNF-α(参见例如美国专利号7,799,800；以及美国专利公开号2013/0230578)。用于诱导细胞因子产生的能力表明，本发明所述配制品中所使用的IRM化合物可以多种不同方式调节免疫应答，从而使得IRM化合物可以用于治疗多种障碍。可以通过施用在此披露的配制品诱导产生的其他细胞因子通常包括I型干扰素(例如INF-α)、IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、MIP-1、MCP-1以及多种其他细胞因子。在其他效应中，这些和其他细胞因子抑制病毒产生和肿瘤细胞生长，使得本发明所述配制品可用于病毒性疾病和肿瘤性疾病的治疗。例如，肿瘤坏死因子、干扰素、或白细胞介素已经显示出刺激某些单核细胞/巨噬细胞衍生的细胞因子的快速释放并且还能够刺激B细胞分泌在抗病毒与抗肿瘤活性中起重要作用的抗体。

在一些实施例中，本发明所述配制品可用于治疗实体瘤，如头颈部肿瘤、乳腺肿瘤、淋巴瘤、黑色素瘤、以及膀胱肿瘤。在一些实施例中，本发明所述配制品可用于治疗皮肤T细胞淋巴瘤。

在一些实施例中，本发明所述配制品可用于治疗病毒性疣以及肥厚性、或瘢痕疙瘩性瘢痕。

本发明进一步提供了一种递送在此所描述的药物配制品的方法，该方法包括将该配制品注射进入受试者。注射可以通过例如皮下、肌内、或进入选定的组织部位，如肿瘤块。在一些实施例中，将该配制品注射进入肿瘤块、疣、或肥厚性瘢痕组织中。

本发明进一步提供了一种治疗疾病的方法，该方法包括将在此所描述的任一种配制品注射进入需要治疗该疾病的受试者。

本发明所述方法可以在任何合适的受试者上进行。合适的受试者包括动物，如人类、非人类灵长动物、啮齿类、狗、猫、马、猪、绵羊、山羊、或奶牛。

用于治疗的配制品所施用至的动物可患有疾病(例如病毒性或肿瘤性疾病)，并且施用该化合物可提供治疗性治疗。可以通过施用本发明所述配制品进行治疗的示例性病症包括：

(a)肿瘤性疾病，如黑色素瘤、白血病(例如骨髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、皮肤T淋巴细胞瘤、B细胞淋巴瘤、以及毛细胞白血病)、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、结肠癌、头或颈部癌、膀胱癌及其他癌症；

(b)病毒性疾病，如由痘病毒(例如正痘病毒，如天花或牛痘、或触染性软疣)或乳多孔病毒(例如乳头瘤病毒，如引起生殖器疣、普通疣或跖疣的那些)感染导致的疾病；

(c)与伤口修复相关联的疾病，如抑制瘢痕疙瘩及其他类型瘢痕的形成(例如促进伤口愈合，包括慢性伤口)。

在一些实施例中，所治疗的疾病是肿瘤性疾病。在一些实施例中，将该配制品注射进入肿瘤块中。在一些实施例中，所治疗的疾病选自头或颈部癌、乳腺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、以及膀胱癌。

在一些实施例中，所治疗的疾病是导致疣的病毒性疾病。在一些实施例中，将该配制品注射进入疣中。

应当理解的是，在上述疾病的治疗中，例如，也可以将在此披露的配制品与其他治疗组合使用，如其他活性剂及其他程序(例如放射、化学治疗、化学消融术、激光消融、冷冻疗法、以及手术切除)。

对于根据本发明所述方法治疗有效的配制品中IRM化合物的精确量、以及剂量方案，例如根据本领域已知的因素而变化，包括载体的性质、受试者免疫系统的能力与状态(例如受抑的、受损的、受激的)、配制品所施用至的物种、所选择的剂量方案、应用位点、具体的配制品、以及所治疗的病情。因此，概括地给出配制品的组合物是不实际的，该配制品包括乙醇、芝麻油、以及具有化学式I的IRM化合物或构成有效量或对于所有可能应用有效的剂量方案的量的IRM化合物。然而，本领域的普通技术人员可以容易地确定适当的配制品、治疗有效量的IRM化合物、以及基于在此提供的指导的剂量方案、在本领域中可获得的关于IRM化合物的信息、以及常规试验。因此，术语“治疗有效量”意指足够诱导治疗或预防效果的IRM化合物的量，如细胞因子诱导、TH2免疫应答的抑制、抗病毒或抗肿瘤活性、瘢痕的缩小、或促进伤口愈合。

有效诱导细胞因子生物合成的配制品或配制品中IRM化合物的量是以下量，该量足够引起一种或多种细胞类型(如单核细胞、巨噬细胞、树突细胞以及B细胞)产生一种或多种细胞因子(如IFN-α、TNF-α、IL-l、IL-6、IL-l0以及IL-12)的量增加超过此类细胞因子的自然背景值。精确量根据本领域已知的因素而变化但预期剂量为约100纳克每千克(ng/kg)至约50毫克每千克(mg/kg)，在一些实施例中约10微克每千克(μg/kg)至约5mg/kg，约100μg/kg至约1mg/kg、或约0.01mg/m²至约10mg/m²。可替代地，可以使用疗程即将开始之前获得的实际体重来计算剂量。对于以此方式计算的剂量，在疗程开始之前使用Dubois法：m²＝(wt>0_.⁴²⁵x身高cm⁰_.⁷²⁵)x>2)。有效治疗或抑制病毒感染的量，例如，是引起病毒感染的一种或多种表现例如病毒病损、病毒载量、病毒产生速度和死亡率与未治疗的对照动物相比降低的量并且可包括上述剂量的任一个。化合物或药物组合物能有效治疗瘤形成性病症的量是将导致肿瘤尺寸或肿瘤病灶数减少的量并且可包括上述剂量的任一个。

本发明所述配制品可诱导某些细胞因子的产生并且可用作免疫应答调节剂，其能够以大量不同的方式调节免疫应答，使它们可用于各种不同疾病的治疗。在其他效应中，这些和其他细胞因子可抑制病毒生产和肿瘤细胞生长，使得配制品可用于例如病毒性以及肿瘤性疾病的治疗。还应指出的是，可以在患病之前施用该配制品，这样使得该配制品的施用可提供预防性治疗。

除引起细胞因子诱导的能力之外，本发明所述配制品可对先天免疫应答的其他方面产生作用。例如，可以刺激自然杀伤细胞的活性，这种效应可能是由于细胞因子诱导所导致。该配制品也可以引起巨噬细胞的激活，它反过来刺激一氧化氮的分泌和其他细胞因子的产生。此外，该配制品可以引起B-淋巴细胞的增殖和分化。

本发明所述配制品还可能对获得性免疫应答产生影响。例如，当施用该配制品时，可间接诱导T辅助细胞1型(T_Hl)细胞因子IFN-γ的产生以及抑制T辅助细胞2型(T_H2)细胞因子IL-4、IL-5与IL-13的产生。

本发明所述配制品可以对具有受损的免疫功能的个体特别有用。例如，化合物或盐可以用于治疗在例如移植患者、癌症患者以及HIV患者中在抑制细胞介导免疫之后发生的机会性感染与肿瘤。

本发明因此还提供了例如一种在动物中治疗病毒感染的方法以及一种在动物中治疗肿瘤性疾病的方法，该方法包括经由注射给予该动物有效量的本发明所述配制品。有效治疗或抑制病毒感染的量是引起病毒感染的一种或多种表现例如病毒病损、病毒载量、病毒产生速度和死亡率与未治疗的对照动物相比降低的量。对于此类治疗有效的精确量根据本领域已知的因素而变化，但预期为这样一个量使得能够递送剂量为约100ng/kg至约50mg/kg，优选地约1μg/kg至约5mg/kg的IRM化合物。配制品能有效治疗瘤形成性病症的量是将导致肿瘤尺寸或肿瘤病灶数减少的量。同样，精确量根据本领域已知的因素而变化，但预期为这样一个量使得在给定的药物浓度下能够经由注射递送剂量为约100ng/kg至约50mg/kg，例如约1μg/kg至约5mg/kg的IRM化合物。

经由注射递送的本发明所述配制品的用途的具体实例包括但不限于头颈癌以及乳腺癌的治疗。

在此描述的可注射制剂可包括一系列的IRM化合物浓度，其下限基于IRM化合物的最低治疗潜能而上限主要基于药物的溶解度。通常，IRM化合物的浓度为约0.1mg/ml至约10mg/ml(大约按重量计0.01％至约1％)。在一些实施例中，IRM化合物是以约0.1mg/ml至约6mg/ml的量存在。在一些实施例中，IRM化合物是以约0.5mg/ml至约3mg/ml的量存在。

在此处所披露的方法的一些实施例中，可以例如每周单剂量至多剂量施用该配制品，尽管在一些实施例中，可以通过以超出此范围的频度施用该配制品进行本发明所述的方法。在一些实施例中，可以按约每月一次至约每周五次施用该配制品。在一些实施例中，按每周一次施用该配制品。

本发明进一步提供了一种制备药物配制品的方法，该药物配制品包括乙醇、芝麻油、以及具有化学式I的IRM化合物。在一些实施例中，该制备方法包括将该IRM化合物溶解于乙醇中，以产生乙醇-IRM化合物溶液。在一些实施例中，该IRM化合物完全溶解于乙醇中，而在一些实施例中，少量的IRM化合物保持不溶，但大部分的IRM化合物溶解。然后将该乙醇-IRM化合物溶液与芝麻油进行混合，以制备芝麻油-乙醇-IRM化合物配制品。在一些实施例中，该IRM化合物完全溶解于该芝麻油-乙醇-IRM化合物配制品中，而在一些实施例中，少量的IRM化合物在该芝麻油-乙醇-IRM化合物配制品中保持不溶，但大部分的IRM化合物溶解。

在一些实施例中，该制备方法包括将该IRM化合物与乙醇以及芝麻油同时混合，以制备该芝麻油-乙醇-IRM化合物配制品。在一些实施例中，该IRM化合物完全溶解于该芝麻油-乙醇-IRM化合物配制品中，而在一些实施例中，少量的IRM化合物在该芝麻油-乙醇-IRM化合物配制品中保持不溶，但大部分的IRM化合物溶解。

在一些实施例中，该制备方法可进一步包括从该芝麻油-乙醇-IRM化合物配制品中蒸发一部分乙醇的步骤。通过在混合步骤过程中允许使用过量乙醇(乙醇以超出芝麻油中的溶解极限存在)，此类方法允许IRM在该芝麻油-乙醇溶液中更快速的溶解。在一些实施例中，在蒸发掉一部分乙醇之后，乙醇在最终配制品中残余例如1wt-％至9wt-％。

应认识到，可以在上述任何混合步骤过程中添加任何上述的添加剂。

通过下文的非限制性实例来进一步阐明本发明的实施例，但是这些实例中引述的具体材料及其量以及其他条件和细节不应当解释为不适当地限制本发明。

实例

注射配制品组分

根据美国专利公开号2013/0230578(怀特曼)的实例1中描述的合成程序制备N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺。

乙醇(200普如弗(proof)，USP级)获得自Pharmaco-AAPER(Brookfield(布鲁克菲尔德)，CT)或Columbus Chemical Industries(哥伦布化学工业)(Columbus(哥伦布)，WI)。对于含有BHA的最终配制品，通过使温和干燥氮气流通过乙醇(喷射)持续约5至10分钟制备脱氧乙醇的新鲜储样品。然后立即将瓶子盖上。

芝麻油获得自Croda Inc.(克罗达公司)(Edison(爱迪生)，NJ)的SUPER芝麻油NF/NP等级产品(产品序号SR40280)。“NP”标志表明，芝麻油不含BHT(丁羟甲苯)作为添加的抗氧化剂。根据生产厂商，具有SUPER标志的芝麻油是使用快速层析以去除芝麻油中存在的极性杂质而进行纯化的。对于含有添加的BHA的最终配制品，通过使温和干燥氮气流通过芝麻油(喷射)持续约10至20分钟制备脱氧芝麻油的新鲜储样品。然后立即将瓶子盖上。

丁羟茴醚，NF级(BHA)获得自Spectrum Chemical Company(光谱化学公司)(New Brunswick(新不伦瑞克)，NJ)。使用浓度为300ppm的BHA制备含有BHA的配制品。

分析方法

使用反相高效液相层析(配备有设置在321nm处的紫外光检测器安捷伦1100HPLC仪器，Agilent Technologies(安捷伦科技)，圣克拉拉，CA)来确定注射配制品中N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺的含量。所使用的分析柱是长150mm、内径4.6mm、以及粒度3.5微米的Zorbax Bonus RP柱(安捷伦科技)。将柱维持在45℃。用由在水中的0.1％三氟乙酸、甲醇、以及异丙醇组成的流动相进行梯度洗脱。初始流动相由0.1％三氟乙酸与甲醇以85:15的比例组成。最终流动相由0.1％三氟乙酸、甲醇与异丙醇以5:40:55的比例组成。流速是1.0mL/分钟。

实例1。注射配制品：芝麻油中的乙醇(7.5重量百分比)

将N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(0.21g)与乙醇(26.79g)添加至琥珀玻璃瓶中。将瓶子盖上并且置于超声波浴中(Branson型号8510-DTH，Branson Ultrasonics(必能信超声公司)，Danbury(丹伯里)，CT)。将该样品超声处理直至所有N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺溶解(约10分钟)。所得乙醇溶液含有0.78重量百分比的N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺瓶。然后，将21.59g的含有0.78重量百分比的N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺的乙醇溶液转移至含有277.5g芝麻油的琥珀玻璃瓶中。再添加另外1.08g的乙醇添加至该瓶中。将瓶子盖上并且置于实验室滚轴混合器上。搅拌该配制品直至目测其变得透明(搅拌持续约15分钟)。在最后一步中，使该配制品穿过0.2微米聚醚砜(PSA)膜滤器(EMD Millipore(EMD密理博公司)，Billerica(比勒利卡)，MA)并且将6mL的配制品收集在透明玻璃血清瓶(MillerAnalytical Company(米勒分析公司)，Bristol(布里斯托尔)，PA)中。用干燥氮气流吹扫小瓶中的顶部空间并且将小瓶用含有灰色氯丁基-异戊二烯隔片(Miller Analytical Company(米勒分析公司))的铝卷曲盖加帽。N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺在最终配制品中的浓度是约0.5mg/mL。

实例2。注射配制品：含有BHA的芝麻油中的乙醇(7.5重量百分比)

将N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(0.21g)与脱氧乙醇(26.79g)添加至琥珀玻璃瓶中。将瓶子盖上并且置于超声波浴中(Branson型号8510-DTH)。将该样品超声处理直至所有N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺溶解(约10分钟)。所得乙醇溶液含有0.78重量百分比的N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺瓶。然后，将21.59g的含有0.78重量百分比的N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺以及BHA(90mg)的乙醇溶液转移至含有277.5g脱氧芝麻油的琥珀玻璃瓶中。再将添加另外1.08g的脱氧乙醇添加至该瓶中。然后使温和干燥氮气流通过该配制品持续约10秒。将瓶子盖上并且置于实验室滚轴混合器上。搅拌该配制品直至目测其变得透明(搅拌持续约15分钟)。在最后一步中，使该配制品穿过0.2微米聚醚砜(PSA)膜滤器(EMD Millipore(EMD密理博公司)，Billerica(比勒利卡)，MA)并且将6mL的配制品收集在透明玻璃血清瓶(Miller Analytical Company(米勒分析公司)，Bristol(布里斯托尔)，PA)中。用干燥氮气流吹扫小瓶中的顶部空间并且将小瓶用含有灰色氯丁基-异戊二烯隔片(Miller Analytical Company(米勒分析公司))的铝卷曲盖加帽。N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺在最终配制品中的浓度是约0.5mg/mL。

实例3。注射配制品：芝麻油中的乙醇(5重量百分比)

将N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(0.30g)与乙醇(15.0g)添加至琥珀玻璃瓶中。将瓶子盖上并且置于超声波浴中(Branson型号8510-DTH)。将该样品超声处理直至所有N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺溶解(约10分钟)。所得乙醇溶液含有2.0重量百分比的N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺瓶。然后，将0.29g的含有2.0重量百分比的N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺的乙醇溶液转移至含有10.5g芝麻油的琥珀玻璃瓶中。再将添加另外0.23g的乙醇添加至该瓶中。将瓶子盖上并且置于实验室滚轴混合器上。搅拌该配制品直至目测其变得透明(搅拌持续约15分钟)。在最后一步中，使该配制品穿过0.2微米聚醚砜(PSA)膜滤器(EMD Millipore(EMD密理博公司)，Billerica(比勒利卡)，MA)并且将6mL的配制品收集在透明玻璃血清瓶(Miller Analytical Company(米勒分析公司)，Bristol(布里斯托尔)，PA)中。用干燥氮气流吹扫小瓶中的顶部空间并且将小瓶用含有灰色氯丁基-异戊二烯隔片(Miller Analytical Company(米勒分析公司))的铝卷曲盖加帽。N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺在最终配制品中的浓度是约0.5mg/mL。

实例4。注射配制品：芝麻油中的乙醇(9重量百分比)

将N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(0.30g)与乙醇(15.0g)添加至琥珀玻璃瓶中。将瓶子盖上并且置于超声波浴中(Branson型号8510-DTH)。将该样品超声处理直至所有N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺溶解(约10分钟)。所得乙醇溶液含有2.0重量百分比的N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺瓶。然后，将3.0g的含有2.0重量百分比的N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺的乙醇溶液转移至含有54.5g芝麻油的琥珀玻璃瓶中。再将添加另外2.4g的乙醇添加至该瓶中。将瓶子盖上并且置于实验室滚轴混合器上。搅拌该配制品直至目测其变得透明(搅拌持续约15分钟)。在最后一步中，使该配制品穿过0.2微米聚醚砜(PSA)膜滤器(EMD Millipore(EMD密理博公司)，Billerica(比勒利卡)，MA)并且将6mL的配制品收集在透明玻璃血清瓶(Miller Analytical Company(米勒分析公司)，Bristol(布里斯托尔)，PA)中。用干燥氮气流吹扫小瓶中的顶部空间并且将小瓶用含有灰色氯丁基-异戊二烯隔片(Miller Analytical Company(米勒分析公司))的铝卷曲盖加帽。N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺在最终配制品中的浓度是约1mg/mL。

实例5。注射配制品：芝麻油中的乙醇(8.5重量百分比)

将N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(1.22g)与乙醇(60.0g)添加至琥珀玻璃瓶中。将瓶子盖上并且置于超声波浴中(Branson型号8510-DTH)。将该样品超声处理直至所有N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺溶解(约30分钟)。所得乙醇溶液含有2.0重量百分比的N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺瓶。然后，将9.0g的含有2.0重量百分比的N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺的乙醇溶液转移至含有60.0g芝麻油的琥珀玻璃瓶中。将瓶子盖上并且置于实验室滚轴混合器上。搅拌该配制品直至目测其变得透明(搅拌持续约15分钟)。使干燥氮气流通过搅拌的配制品上方，以蒸发3.4g的乙醇。在最后一步中，使该配制品穿过0.2微米聚醚砜(PSA)膜滤器(EMD Millipore(EMD密理博公司)，Billerica(比勒利卡)，MA)并且将6mL的配制品收集在透明玻璃血清瓶(Miller Analytical Company(米勒分析公司)，Bristol(布里斯托尔)，PA)中。用干燥氮气流吹扫小瓶中的顶部空间并且将小瓶用含有灰色氯丁基-异戊二烯隔片(Miller Analytical Company(米勒分析公司))的铝卷曲盖加帽。N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺在最终配制品中的浓度是约3mg/mL。

实例6。注射配制品：芝麻油中的乙醇(9重量百分比)

将N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(1.22g)与乙醇(60.0g)添加至琥珀玻璃瓶中。将瓶子盖上并且置于超声波浴中(Branson型号8510-DTH)。将该样品超声处理直至所有N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺溶解(约30分钟)。所得乙醇溶液含有2.0重量百分比的N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺瓶。然后，将25.0g的含有2.0重量百分比的N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺的乙醇溶液转移至含有90.5g芝麻油的琥珀玻璃瓶中。将瓶子盖上并且置于实验室滚轴混合器上。搅拌该配制品直至目测其变得透明(搅拌持续约15分钟)。使干燥氮气流通过搅拌的配制品上方，以蒸发15.5g的乙醇。在最后一步中，使该配制品穿过0.2微米聚醚砜(PSA)膜滤器(EMD Millipore(EMD密理博公司)，Billerica(比勒利卡)，MA)并且将6mL的配制品收集在透明玻璃血清瓶(Miller Analytical Company(米勒分析公司)，Bristol(布里斯托尔)，PA)中。用干燥氮气流吹扫小瓶中的顶部空间并且将小瓶用含有灰色氯丁基-异戊二烯隔片(Miller Analytical Company(米勒分析公司))的铝卷曲盖加帽。N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺在最终配制品中的浓度是约5mg/mL。

实例7。注射配制品：芝麻油中的乙醇(6.5重量百分比)

将N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(0.30g)与乙醇(15.3g)添加至琥珀玻璃瓶中。将瓶子盖上并且置于超声波浴中(Branson型号8510-DTH)。将该样品超声处理直至所有N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺溶解(约10分钟)。所得乙醇溶液含有1.9重量百分比的N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺瓶。然后，将0.18g的含有1.9重量百分比的N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺的乙醇溶液转移至含有31.7g芝麻油的琥珀玻璃瓶中。再将添加另外2.0g的乙醇添加至该瓶中。将瓶子盖上并且置于实验室滚轴混合器上。搅拌该配制品直至目测其变得透明(搅拌持续约15分钟)。在最后一步中，使该配制品穿过0.2微米聚醚砜(PSA)膜滤器(EMD Millipore(EMD密理博公司)，Billerica(比勒利卡)，MA)并且将6mL的配制品收集在透明玻璃血清瓶(Miller Analytical Company(米勒分析公司)，Bristol(布里斯托尔)，PA)中。用干燥氮气流吹扫小瓶中的顶部空间并且将小瓶用含有灰色氯丁基-异戊二烯隔片(Miller Analytical Company(米勒分析公司))的铝卷曲盖加帽。N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺在最终配制品中的浓度是约0.1mg/mL。

实例8。注射配制品：芝麻油中的乙醇(7.2重量百分比)

通过将3.9g的乙醇与50.0g的芝麻油添加至琥珀瓶中，随后轻轻搅拌来制备在芝麻油中的乙醇(7.2重量百分比)溶液。然后，将N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺(53.9mg)添加至乙醇/芝麻油溶液中。将瓶子盖上并且置于超声波浴中(Branson型号8510-DTH)。将该样品超声处理30分钟，并且然后使用振动台(Erbach Corporation(尔巴旭公司)，Ann Arbor(安阿伯)，MI)进一步振荡，直至所有N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺全部溶解(约20小时)。使所得溶液穿过0.2微米聚醚砜(PSA)膜滤器(EMD Millipore(EMD密理博公司)，Billerica(比勒利卡)，MA)并且收集在玻璃瓶中。用干燥氮气流吹扫瓶中的顶部空间并且给瓶加帽。N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺在最终配制品中的浓度是约1mg/g。

实例9。另外的注射配制品

使用实例1-7的通用程序来制备具有不同水平的乙醇浓度(乙醇在该配制品中的重量百分比)、N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺浓度(配制品的mg/mL)、以及BHA浓度(ppm)的多种配制品。对于配制品9-H到9-J，使用脱氧乙醇和芝麻油。配制品记录于表1中。

通过在最终过滤步骤之前立即进行乙醇蒸发步骤降低配制品的乙醇含量来制备配制品。通过使干燥氮气流通过搅拌的配制品上方来完成配制品中的乙醇的蒸发。

表1.

实例10。瘤内(IT)注射

所有的程序都是依照经过批准的研究机构动物护理和使用委员会(IACUC)方案进行的。将动物饲养在设施中，该设施得到实验动物养护评价认定协会(Association for Assessment and Accreditation of Laboratory AnimalCare)(AAALAC，Frederick，MD)的认可，C57BL/6J-Tyr阿博诺小鼠(Albino mice)，雌性，15-20克获得自Jackson Labs(杰克森实验室)，巴尔港，缅因州。同系B16.OVA黑色素瘤细胞系获得自Wynette Dietz(温尼特迪茨)博士，明尼苏达大学。将细胞系在3M进行表征并且确定表达OVA。

在形成荷瘤小鼠之前，在密封盒中用1％异氟烷麻醉动物，并且然后经由面罩给予1％异氟烷而保持在麻醉状态下。给予每只小鼠独特的描述信息(在尾上带有独特的刺青数字)。对右胁进行剃毛，并且将0.1mL DPBS中的5x 10⁵B16.OVA黑色素瘤细胞经皮下植入。

肿瘤植入7天后，将小鼠随机分成3组(组A-C)，每组20只小鼠。在此时，小鼠平均的肿瘤尺寸大约为20mm²。基于由GraphPad软件公司(拉荷亚，CA)开发的ROUT统计法，将基于肿瘤尺寸为离群值的动物鉴定出并且排除出研究。组A动物接受瘤内注射0.05mL实例3的配制品。组B动物接受注射0.05mL实例3的配制品，该配制品经皮下(SC)给予至与植入的肿瘤相对胁部区域(即左胁)。组C动物接受瘤内注射0.05mL运载体对照配制品。运载体对照配制品与实例3的配制品相同，除了在该配制品中不包括N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺。对于组A-C的所有配制品，使用具有26计量规格注射针的0.5mL注射器进行给药。在肿瘤植入7天和14天后，向所有三组注射对应的配制品。对于组A和C，瘤内注射给药至肿瘤中央。在注射之前，经由面罩用1％异氟烷将动物麻醉。对于每只动物，使用校准的数显卡尺测量肿瘤尺寸。所有肿瘤都是可触知而且可见的。如果肿瘤尺寸测定为200mm²或更大，将动物安乐死。在肿瘤植入后监视动物90天。对于每只动物，肿瘤尺寸数据报告于表2A-C中，而百分比存活数据报告于表3中。组A以天数计的中位存活期为34天，组B为22天，而组C为21.5天。使用Prism>

实例11

使用实例1-7的通用程序来制备具有固定水平的乙醇浓度(在该配制品中7.5wt-％的乙醇)、在0.1mg/mL至2.5mg/mL范围内不同水平的N-(4-{[4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]氧基}丁基)十八酰胺浓度、以及BHA浓度(300ppm)的多种配制品。对于配制品11-A到11-E，使用脱氧乙醇和芝麻油。配制品记录于表4中。

通过在最终过滤步骤之前立即进行乙醇蒸发步骤降低配制品的乙醇含量来制备配制品。通过使干燥氮气流通过搅拌的配制品上方来完成配制品中的乙醇的蒸发。

表4.

表3.