HPLC测定银马解毒颗粒中绿原酸和甘草酸铵含量的方法

摘要

本发明提供了一种HPLC测定银马解毒颗粒中绿原酸和甘草酸铵含量的方法，旨在提供一种测量更准确，检测灵敏度更高的HPLC测定银马解毒颗粒中绿原酸和甘草酸铵含量的方法；该方法是称取样品1g置于10mL萃取池中，用甲醇对样品在温度60℃，静态提取3min，重复提取2次，提取完成后将提取液定容用甲醇至20mL，吸取1mL于离心管中，漩涡离心2min，取上清液进行注入高效液相色谱仪；属于化学检测技术领域。

说明书

技术领域

本发明提供一种测定银马解毒颗粒中绿原酸和甘草酸铵含量的方法，具体地说，是一种HPLC测定银马解毒颗粒中绿原酸和甘草酸铵含量的方法；属于化学检测技术领域。

背景技术

银马解毒颗粒是由金银花、马齿苋、车前草、大黄、甘草等组成的纯中药制剂。具有清热解毒，止咳祛痰的功效，用于热邪犯肺所致的肺热咳嗽等证，现代医学的急性支气管炎或慢性支气管炎急性发作期出现上述症候者亦适用。该药用于临床已多年，疗效较好。

发明内容

针对上述不足，本发明的目的是提供一种测量更准确，检测灵敏度更高的HPLC测定银马解毒颗粒中绿原酸和甘草酸铵含量的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案如下：

一种HPLC测定银马解毒颗粒中绿原酸和甘草酸铵含量的方法，该方法依次包括下述步骤：准确称取样品1g置于10mL萃取池中，用甲醇对样品在温度60℃，静态提取3min，重复提取2次，提取完成后将提取液定容用甲醇至20mL，吸取1mL于离心管中，漩涡离心2min，取上清液进行注入高效液相色谱仪；

所述的色谱条件如下：

色谱柱：StableBondSB-苯基柱；

流动相：甲醇A－0.5％甲酸水溶液B；

流动相A为甲醇，流动相B为0.5％甲酸水溶液；

进样量为6μl；

梯度洗脱程序：0～5min，80％A、20％B；5～15min，85％～15％A、15％～85％B；15～25min，50％A、50％B；在50％A、50％B下平衡10min。

流速1.0mL/min；

波长为300nm；

柱温：30℃。

进一步的，上述的HPLC测定银马解毒颗粒中绿原酸和甘草酸铵含量的方法，所述的萃取仪为ASE350。

进一步的，上述的HPLC测定银马解毒颗粒中绿原酸和甘草酸铵含量的方法，所述的高效液相色谱仪为安捷伦Agilent-1200。

进一步的，上述的HPLC测定银马解毒颗粒中绿原酸和甘草酸铵含量的方法，所述的色谱柱规格：250mm×4.6mm，5μm。

与现有技术相比，本发明提供的技术方案采用反相HPLC法梯度洗脱，测定银马解毒颗粒中的绿原酸、甘草酸铵的含量，方法简便、快捷、检测结果可靠，可以作为该产品质量控制的方法。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。

本发明所涉及的到百分含量浓度，除特殊说明外，溶质为液体的均为体积浓度，溶质为固体的均为质量浓度。

实施例1

一种HPLC测定银马解毒颗粒中绿原酸和甘草酸铵含量的方法，该方法依次包括下述步骤：准确称取样品1g置于10mLASE350萃取池中，用甲醇对样品在温度60℃，静态提取3min，重复提取2次，提取完成后将提取液定容用甲醇至20mL，吸取1mL于离心管中，漩涡离心2min，取上清液进行注入安捷伦Agilent-1200高效液相色谱仪；

所述的色谱条件如下：

色谱柱：StableBondSB-苯基柱(250mm×4.6mm，5μm)；检测波长220nm；

流动相：甲醇A－0.5％甲酸水溶液B；

流动相A为甲醇，流动相B为0.5％甲酸水溶液；梯度洗脱程序：0～5min，80％A、20％B；5～15min，85％～15％A、15％～85％B；15～25min，50％A、50％B；在50％A、50％B下平衡10min。

流速1.0mL/min；

波长为300nm；

柱温：30℃。

为了验证本法明提供的技术方案，分别取缺金银花、甘草样品按供试品溶液制备缺金银花阴性对照溶液及缺甘草阴性对照溶液，在同样的色谱条件下进行检测，发现阴性对照试验无干扰。

分别精密称取绿原酸16.64mg、甘草酸铵5.05mg置同一100ml容量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

绿原酸浓度为166.4μg/ml、甘草酸铵浓度为50.5μg/ml的对照品溶液按拟订的色谱条件分别进样分别吸取上述对照品溶液3μl、5μl、10μl、20μl、30μl，注入色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标(Y)，对照品进样量(ng)为横坐标(X)绘制标准曲线，得绿原酸的回归方程为：Y＝2665.1X+185.6(r＝0.9996)；甘草酸铵的回归方程为：Y＝626.1X+0.6(r＝0.9999)。

结果表明：绿原酸在499.2～4992ng范围内，进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系；甘草酸铵在151.5～1515ng范围内，进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

按照上述方法对3批样品中的绿原酸、甘草酸铵含量进行了检测，其结果如下表所示：

样品测定结果(n＝3)

从上表中可以看出本发明提供的技术方案检测结果重复性好，为银马解毒颗粒中绿原酸和甘草酸铵含量的提供新的方法。