梨小食心虫初孵幼虫毒力测定方法

摘要

本发明公开了一种梨小食心虫初孵幼虫毒力测定方法，包括:配制供试农药各处理浓度；处理供试果实；接种梨小食心虫；试验条件；调查时间及指标；计算出半致死浓度。本发明方法填补了梨小食心虫幼虫室内毒力测定方法的空白，采用的试验方法与田间实际情况吻合度高，且简单易行，易于操作，成本低，便于多种农药对梨小食心虫的室内毒力测定、抗性研究等研究工作的开展和实施，为科学、合理使用化学农药提供技术和方法保障。

说明书

技术领域

本发明涉及害虫防治领域，具体涉及梨小食心虫初孵幼虫毒力测定方法。背景技 术

梨小食心虫是危害梨、桃、苹果等多种果树的一种重要害虫，发生世代多，不同类果园 中和不同管理条件下的发生和危害规律差异较大。目前生产上最常用的防治技术仍是化学 药剂防治。大量生产和室内实验表明，生产上常用的防治梨小食心虫药剂的杀卵效果均较 差，无法达到有效防治梨小食心虫目的。而成虫羽化期持续时间较长，且飞行能力较强，因 而药剂对其防治效果有限。目前生产上制定的化学农药的防治技术一般要求在成虫羽化盛 期后5-7天进行化学农药的防治，针对的防治主体是梨小食心虫的初孵幼虫。但农药防治梨 小食心虫幼虫和初孵幼虫的室内试验尚无报道，尤其是最基本的农药对梨小食心虫的毒力 测定方法也未见报道。主要原因一是梨小食心虫的规模化饲养技术不成熟，不能提供足够 数量的、发育期一致的个体；二是梨小食心虫为蛀果类害虫，在卵孵化后的数小时后即蛀入 果实内，在田间无法采集到发育一致、且足够数量的卵或初孵幼虫来进行相关实验，采用其 他发育时期进行试验，不能有效反应农药的真实效果；三是测定方法不易确定，目前鳞翅目 食叶类害虫的室内毒力试验常用叶碟法、叶片浸泡法等方法，不适合梨小食心虫毒力的测 定，也没有其他类似的害虫可供参考。因此,亟待开展针对梨小食心虫幼虫的毒力测定方法 的研究,为提高化学防治效果作技术支撑。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种梨小食心虫初孵幼虫毒力测 定方法，本发明方法简便易操作，试验中果实需求量有限，试验结果数据稳定，重复性强，可 满足科研工作者、农药企业的研究技术需求。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种梨小食心虫初孵幼虫毒力测定方法，包括以下步骤:

(1)配制供试农药各处理浓度；

(2)处理供试果实采用直径3-4厘米的同一品种苹果的幼果,每个处理的供试果实数 量4-6个,洗净晾干后剪除果柄，将供试果实在供试农药溶液中浸泡5秒后拿出，用滤纸吸干 多余的药液，将果实果柄朝下，平稳放置在干净的200-300毫升具盖的容器中,每个容器放 2-3个苹果；

(3)接种梨小食心虫将已变黑梨小食心虫卵,按每张卵纸上保留10-15粒卵，轻放在 幼果上，盖上容器盖；

(4)试验条件将经(2)、(3)处理后的容器放置在25-26℃、相对湿度70%-80%的条件下 观察；

（5）调查时间及指标调查时间为接卵后54小时,调查指标包括:总虫数（根据卵孵化率 确定害虫总虫数）、蛀果虫数（即为活虫数）（根据虫道数确定蛀果虫数）、死虫数、害虫死亡 标准及对照处理的蛀果率；

(6)计算出半致死浓度根据处理与对照的总虫数、农药处理的蛀果数，计算出供试农 药处理梨小食心虫死虫数和死亡率，计算回归方程、半致死浓度。

本发明梨小食心虫初孵幼虫毒力测定方法的依据

（1）供试果实的选择苹果处于幼果时，在较高湿度下（饲养梨小食心虫需要长期保持 相对湿度60%以上），能保持10-15天不腐烂，可满足梨小食心虫整个幼虫期的营养需求；梨 小食心虫幼虫在幼果中蛀果率高且稳定，可稳定70%以上，且重复性好；同时使用幼果果实 需求量较小，一种药剂6个浓度梯度的试验所需幼果量仅为2.0-2.5公斤，幼果可以结合苹 果套袋过程中的疏果措施，进行大量收集和冷藏，试验成本低。如使用成熟苹果果实，梨小 食心虫蛀果率低，一般要低于60%，且重复性差；成熟果实被害虫钻蛀后，在较高的相对湿度 环境中容易腐烂，无法观察害虫的发育情况和数量；使用成熟果实所需的成本较高，一种药 剂6个浓度梯度试验所需的成熟果实一般为3.0-3.5公斤，一种农药要获得最终的毒力测定 结果需要大量的成熟果实。

（2）供试果实数量试验每个处理的供试果实数量4-6个,每个果实上接种卵10-13 粒，蛀果数为7-10个，可保证幼虫在果实表皮钻蛀后能分辨出蛀果的害虫数，也可确定有足 够的统计分析幼虫样本数量。

（3）供试方法和虫态采用浸果法，接种已变黑的卵6-8小时内即孵化为初孵幼虫， 可使孵化后的初孵幼虫通过在浸过农药的果实上爬行、钻蛀或食用，来产生一定的毒害效 果，与田间实际状态相同，同时试验操作简单，便于不同农药的毒力测定试验的开展；再者 用变黑的卵接种，可保证幼虫的蛀果率达到70%以上。如使用初孵幼虫进行试验，虽可确保 试虫确切数量，但由于虫体太小（长度不足0.1厘米）,操作过程虫子易因受伤而死亡，无法 确定是否为农药作用的结果。再者，试验中需要大量试虫，如采用初孵幼虫需要小心操作， 工作量大。

（4）调查时间梨小食心虫卵变黑后，一般在6-8小时孵化为初孵幼虫。初孵幼虫在 2-3小时内开始寻找合适的蛀果点并开始蛀果；8-10小时，80%以上害虫已蛀入果实中；12- 14小时害虫全部蛀入果实内。由于初孵幼虫个体极小，蛀果后不太容易观察到蛀果孔,24小 时时，可观察到很小的蛀果孔和少量虫粪；48小时观察时，虫道明显，每个孔道中均有1头梨 小食心虫；72小时时，虫道明显加长，并相互交错，不易对应蛀果孔和虫道。因而在试验中， 卵接种后54小时根据害虫的虫道数确定蛀果数，调查易于观察，数据准确。

（5）试验有效性的确定因梨小食心虫初孵幼虫蛀果后才能造成危害，同时在蛀果 过程中，也会有部分幼虫死亡，蛀果并形成虫道的梨小食心虫才能造成实际危害，因而才能 计算为活虫数。因而试验中规定梨小食心虫死亡标准为：没有蛀果或蛀果后没有形成虫道 的即为死亡。试验中根据蛀果虫道来统计蛀果虫数。再者，梨小食心虫在不同果实上的蛀果 率很难达到90%，其它生测方法，如药膜法、浸渍法等生测要求的对照死亡率不能高于10%， 不符合梨小食心虫的实际情况。经过反复试验，梨小食心虫初孵幼虫在苹果幼果上蛀果率 可以稳定在70%以上，因而对照幼虫蛀果率不低于70%为有效试验。

本发明的有益效果

本发明的梨小食心虫初孵幼虫毒力测定方法填补了梨小食心虫幼虫室内毒力测定方 法的空白，采用的试验方法与田间实际情况吻合度高，且简单易行，易于操作，成本低，便于 多种农药对梨小食心虫的室内毒力测定、抗性研究等研究工作的开展和实施，为科学、合理 使用化学农药提供技术和方法保障。

实施例1

采用本发明方法测定氯虫苯甲酰胺对梨小食心虫的毒力,其步骤如下:

(1)将200g/L氯虫苯甲酰胺悬浮剂用清水稀释成5个处理,分别是:10mg/L、20mg/L、 40mg/L、60mg/L、80mg/L和清水对照，每处理300毫升。

(2)用直径3-4厘米的红富士苹果幼果,每个处理的供试果实数量4个,洗净晾干 后剪除果柄，将各处理苹果分别在各处理浓度的供试农药溶液中完全浸泡5秒后，立即拿 出，用滤纸吸干多余的药液，果柄朝下，平稳放置在干净的200毫升塑料容器中,每个容器放 3个苹果。

(3)将已变黑梨小食心虫卵,按每张小卵纸上保留15粒卵，轻放在幼果上，盖上容 器盖，将容器放置在25-26°、相对湿度70-80%的条件下观察。

(4)调查时间为接卵后54小时,调查指标包括:各处理的卵孵化率、蛀果虫数和 死虫数。

(5)根据处理与对照的总虫数、农药处理的蛀果虫数和死虫数，初步确定200g/L 氯虫苯甲酰胺悬浮剂半致死浓度在10mg/L以内，为获得更为精确的试验结果,在此基础 上，继续设置200g/l氯虫苯甲酰胺悬浮剂的处理浓度为2.67mg/L、4.00mg/L、6.67mg/L、 13.33mg/L、20mg/L，重复上述试验过程，获得不同浓度下，害虫的死亡率。据此计算出梨 小食心虫的回归方程为y=2.1484x+1.3678，R²=0.9371，半致死浓度为：Lc50=4.91ppm。

实施例2

采用本发明方法测定10%高效氯氰菊酯微乳剂对梨小食心虫的毒力,其步骤如下:

(1)将10%高效氯氰菊酯微乳剂用自来水稀释成5个处理,分别是:10mg/L、20mg/L、 40mg/L、60mg/L、80mg/L和清水对照，每处理200毫升。

(2)用直径3-4厘米的红富士苹果幼果,每个处理的供试果实数量5个,洗净晾干 后剪除果柄，将各处理苹果分别在各处理浓度的供试农药溶液中完全浸泡5秒后，立即拿 出，用滤纸吸干多余的药液，果柄朝下，平稳放置在干净的200毫升塑料容器中,每个容器放 2个苹果。

(3)将已变黑梨小食心虫卵,按每张小卵纸上保留10粒卵，轻放在幼果上，盖上容 器盖，将容器放置在25-26°、相对湿度70-80%的条件下观察。

(4)调查时间为接卵后54小时,调查指标包括:卵孵化率、蛀果虫数和死虫数。

(5)根据处理与对照的总虫数、农药处理的蛀果虫数和死虫数，初步确定10%高效 氯氰菊酯微乳剂半致死浓度在10mg/L以内，为获得更为精确的试验结果,在此基础上，继 续设置高效氯氰菊酯微乳剂的处理浓度为3.33mg/L、4.00mg/L、5.00mg/L、6.67mg/L、 8.00mg/L和10mg/L，重复上述试验过程，获得不同浓度下，害虫的死亡率。据此计算出梨小 食心虫的回归方程为y=4.8071x-3.2722，R²=0.9431，半致死浓度为：Lc50=5.26mg/L。