一种超高效液相色谱法测定藿香正气滴丸中7种成分含量的方法

摘要

本发明涉及一种超高效液相色谱法测定藿香正气滴丸中7种成分含量的方法。本方法可在20min内完成一次色谱分析，被测定的7种成分色谱峰均有良好的分离度，方法精密度、重复性的RSD均小于2.0％；在室温条件下24h内稳定；各成分均有较宽的线性范围和良好的线性关系(r≥0.9995)；平均加样回收率97.5-101.4％，RSD均小于2.0％。本发明的方法操作简便，测定结果准确可靠，可用于藿香正气滴丸的质量控制。

说明书

技术领域：

本发明涉及一种药物成分的检测方法，特别涉及一种超高效液相色谱法测定藿香正气滴丸中7种成分含量的方法，所述方法包括制备藿香正气滴丸供试品溶液，将其注入超高效液相色谱仪，采用梯度洗脱，得到橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚和苍术素7个种成分的含量。

背景技术

藿香正气滴丸是天津天士力制药股份有限公司生产的独家品种，该制剂包括广藿香油、苍术、陈皮、厚朴等10味药材组成的复方制剂，具有解表化湿，理气和中的功效，用于头痛昏重、脘腹胀痛、呕吐泄泻、胃肠型感冒等。作为天士力研发的现代中药代表剂型，具有药物稳定性高、不易水解氧化、起效快、无异味、口感好、携带方便等特性。

现有藿香正气滴丸的质量标准是采用高效液相色谱法同时测定橙皮苷、厚朴酚及和厚朴酚，作为检测和控制陈皮及厚朴的含量指标，现已申请专利(专利申请号为CN201110269071.8)。为了能够更加严格的控制该制剂的质量并且提高质量检测标准，本发明应用超高效液相色谱法(UPLC)同时测定藿香正气滴丸中橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚和苍术素7种成分含量。本方法可在20min内完成一次色谱分析，被测定的7种成分色谱峰均有良好的分离度，方法精密度、重复性的RSD均小于2.0％；在室温条件下24h内稳定；各成分均有较宽的线性范围和良好的线性关系(r≥0.9995)；平均加样回收率97.5-101.4％，RSD均小于2.0％。本发明的方法操作简便，测定结果准确可靠，可用于藿香正气滴丸的质量控制。

发明内容

本发明涉及一种超高效液相色谱法测定藿香正气滴丸中7种成分含量的方法，该方法包括以下步骤：

步骤1：供试品溶液的制备：将藿香正气滴丸溶解于甲醇，过滤，得到滤液

步骤2：用超高效液相色谱仪测定供试品溶液：将供试品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图；

步骤3：根据色谱图计算供试品溶液中7种成分的含量：以外标法计算供试品溶液中7种成分的含量，其中所述的7种成分为橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、苍术素。

所述超高效液相色谱仪，色谱条件如下：

色谱柱：C18色谱柱(100mm×2.1mm，1.7μm)；

流动相为乙腈-0.1-0.3％甲酸水溶液，

流动相优选乙腈-0.2％甲酸水溶液

梯度洗脱程序如表1所示；

表1梯度洗脱程序

时间(min)乙腈(％)0-610-356-935-509-1450-6014-1660-7516-187518-1975-1019-2010

流速为0.2～0.6mL/min，优选为0.4mL/min；

紫外检测波长：甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素为250nm；橙皮苷为284nm；厚朴酚、厚朴酚为290nm；苍术素为336nm；；

优选双通道紫外检测器，通道A：甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素为250nm；通道B：0-10min，橙皮苷为284nm；10.01-15min，和厚朴酚、厚朴酚为290nm；15.01-20min，苍术素为336nm；

柱温：25℃～35℃，优选为30℃；

进样量：1μL～10μL，优选为2μL。

其中，步骤1：供试品溶液的制备；方法如下：取0.5-1.5g藿香正气滴丸，精密称定，精密加入甲醇10-30mL，称定重量，超声处理15-25min，放至室温后，用甲醇补足减失的重量，用0.2-0.3μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

优选的，步骤1：供试品溶液的制备；方法如下：取约1.0g藿香正气滴丸，精密称定，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声(500W，40kHz)处理20min，放至室温后，用甲醇补足减失的重量，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

其中，步骤3、计算供试品溶液中橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、苍术素的含量，使用事先制备的标准对照图谱；所述标准对照图谱的制备，方法如下：分别精密称取橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、苍术素对照品适量，加甲醇溶解并定容，制得质量浓度分别为橙皮苷0.6000mg/mL、甘草酸0.2024mg/mL、欧前胡素0.0806mg/mL、和厚朴酚0.4032mg/mL、异欧前胡素0.0230mg/mL、厚朴酚0.3016mg/mL、苍术素0.0416mg/mL的混合对照品储备液。精密量取混合对照品储备液1.00mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。将混合对照品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图；即为标准对照图谱。

本发明的核心在于色谱条件的选择，如何解决同时测定7种有效成分的含量的色谱条件，是一大挑战，本发明为此进行了大量的筛选工作，最终得到本发明的色谱条件。另外，本发明对供试品溶液的配制也进行了筛选，结果适用性极好。

本发明所选用的仪器与材料如下：

ACCURICYUPLCHCLASS系统(包括二元超高压溶剂系统、自动进样恒温样本管理器、TUV检测器、Empower2色谱工作站，美国waters公司)；MettlerToledoXS105分析天平(瑞士MettlerToledo公司)；KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；MilliporeSimplicity超纯水系统。

对照品橙皮苷(批号:110721-201115)、欧前胡素(批号:110826-201214)、和厚朴酚(批号:110730-201313)、异欧前胡素(批号:110827-201109)、厚朴酚(批号:110729-200412.)、苍术素(批号:11924-201303)均购于中国食品药品检定研究院，供含量测定用，甘草酸(批号：17239-64，纯度98.0％)购于NACALAITESOUE，INC。甲醇(色谱纯，美国Merck公司)，乙腈(色谱纯，美国Merck公司)，甲酸(色谱纯，瑞士Fluke公司)，冰乙酸(色谱纯，天津康科德有限公司)，磷酸(色谱纯，天津市光复精细化工研究所)。

藿香正气滴丸(天津天士力制药股份有限公司生产11批，批号分别为2014C08、131128、131201、131202、131203、131204、131205、131206、131207、131208、131209)；藿香正气滴丸为市售或应用申请号为CN03145667.7中的方法制备所得。

本发明优选的实验方法、色谱条件和溶剂提取方法，是经过筛选得到的，筛选过程如下：

混合对照品溶液的制备

分别精密称取橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、苍术素对照品适量，加甲醇溶解并定容，制得质量浓度分别为橙皮苷0.6000mg/mL、甘草酸0.2024mg/mL、欧前胡素0.0806mg/mL、和厚朴酚0.4032mg/mL、异欧前胡素0.0230mg/mL、厚朴酚0.3016mg/mL、苍术素0.0416mg/mL的混合对照品储备液。精密量取混合对照品储备液1.00mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。

1、藿香正气滴丸7种成分含量测定方法学考察

(1)系统适用性试验

取供试品溶液，色谱条件为：ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱(100mm×2.1mm，1.7μm)；流动相为乙腈-0.2％甲酸水溶液，梯度洗脱程序如表1所示；流速为0.4mL/min；检测波长：通道A：甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素为250nm；通道B：0-10min，橙皮苷为284nm；10.01-15min，和厚朴酚、厚朴酚为290nm；15.01-20min，苍术素为336nm；柱温：30℃；进样量：2μL。进样，结果7种被测定成分均能达到基线分离，与相邻色谱峰的分离度均大于1.5，以各成分色谱峰计算理论塔板数均超过20000，峰形较好。UPLC色谱图见图1

(2)线性关系考察

精密吸取混合对照品储备液0.25、0.50、1.00、2.50、5.00、10.00mL，分别置10mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，得6个不同质量溶度的混合对照品溶液。按照系统适用性试验项下的色谱条件进样测定，以峰面积(Y)对其浓度(X)建立回归方程，将对照品溶液逐级稀释，以3倍信噪比确定检测限，10倍信噪比确定定量限，结果见表2。

表2回归方程，线性范围，检测限和定量限

(3)精密度实验

取混合对照品储备液分别配置低、中、高三个浓度的对照品溶液，按照系统适用性试验项下的色谱条件，连续进样6次，连续测定三天，根据测定结果分别计算日内精密度和日间精密度，结果见表3。

表3精密度测定结果

(4)重复性实验

取样品(批号2014C08)，按照步骤2的方法制备6份供试品溶液，按照系统适用性试验项下的色谱条件进行测定，计算各成分的量，结果橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、苍术素的RSD分别为1.7％、1.4％、1.7％、1.5％、1.3％、1.5％、1.9％，表明方法重复性良好。

(5)稳定性实验

取样品(批号2014C08)的供试品溶液，分别于制备后在0、2、4、8、12h、24h按照系统适用性试验项下的色谱条件进样，结果橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、苍术素峰面积的RSD分别为0.7％、0.8％、0.8％、0.4％、0.9％、0.5％、0.8％，表明供试品溶液在24h内稳定。

(6)回收率实验

精密称取已测定的藿香正气滴丸(批号2014C08)共9份，每份0.5g，分别精密加入低、中、高混合对照品贮备液适量，按步骤2方法平行制备成供试品溶液。按照系统适用性试验项下的色谱条件进样测定，计算各成分的回收率及RSD，结果橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、苍术素的平均回收率分别为100.1％、101.4％、97.5％、101.6％、99.6％、100.5％、98.7％，RSD分别为1.3％、1.4％、1.1％、1.1％、1.2％、1.5％、1.2％。

2、供试品提取条件的筛选

(1)提取溶剂的选择

首先考察的是100％甲醇，50％甲醇水，水，50％乙醇，100％乙醇。取约1.0g藿香正气滴丸，精密称定，精密加入上述溶液20mL，称定重量，超声(500W，40kHz)处理20min，放至室温后，补足重量，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液UPLC分析。根据有效成分是否提取完全，选用甲醇提取，后期考察了80％，60％，40％，20％甲醇的提取效果，相同方法处理，结果发现采用100％甲醇提取时，7个成分峰面积最大，而且基线较平，因此选择甲醇作为提取溶剂。色谱图如图2。

(2)提取方式的优化

在确定了甲醇作为提取溶剂后，考察了回流(30、60、90min)、超声(10、20、30、40、50min)两种方式的提取效果，结果如图3和图4所示。结果表明两者提取效果无显著差异，因超声提取简单易行，且超声能避免高温对不稳定化合物的影响，最终确定超声提取20min。

(3)提取溶剂用量的考察

考察提取溶剂用量(1:5，1:10，1:20和1:40，w/v)，经比较得出，最终确定采用1.0g样品20mL甲醇超声提取20min，7种成分即能提取完全。

3、色谱条件的选择

(1)流动相考察

分别考察了甲醇-水、乙腈-水不同的流动相系统，结果甲醇-水分离情况不如乙腈-水，且采用甲醇-水系统压力较大，选用乙腈-水系统，结果如图5所示；考察甲酸、乙酸和磷酸对峰形的影响，结果如图6所示，结果采用乙腈-0.2％甲酸水时7个成分峰形较好，分离较理想。

(2)梯度条件的选择

以乙腈-0.2％甲酸水为流动相设置不同的梯度洗脱程序，方法1如表4所示，方法2如表5所示，方法3如表6所示，方法4如表7所示，方法5如表8所示。

表4方法1

时间(min)乙腈(％)0-610-356-1035-6010-1760-7517-187518-1975-1019-2010

表5方法2

时间(min)乙腈(％)0-55-305-1030-6010-1560-7015-1770-7517-187518-1975-519-205

表6方法3：

时间(min)乙腈(％)0-515-35

5-835-508-1250-6012-146014-2060-7520-217521-2275-1522-2315

表7方法4：

时间(min)乙腈(％)0-610-356-935-509-1450-6014-1660-7516-187518-1975-1019-2010

表8方法5：

时间(min)乙腈(％)0-810-358-1135-5011-125012-1850-6018-2260-7522-237523-2475-1024-2510

比较不同方法7个成分的峰形及峰的分离情况，结果如图7所示。实验表明采用方法4的梯度洗脱程序，7个成分色谱峰分离度好、峰形对称、分析时间较短。

(3)检测波长的考察

对7种成分进行紫外全波长扫描，确定了各成分的最大吸收波长，橙皮苷284nm、甘草酸251nm、欧前胡素249nm、和厚朴酚292nm、异欧前胡素250nm、厚朴酚290nm、苍术素336nm。本研究采用的是双通道TUV检测器，为保证各成分能在最大吸收波长检测，采用以下波长程序：通道A：甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素250nm；通道B：0-10min，橙皮苷284nm；10.01-15min，和厚朴酚、厚朴酚290nm；15.01-20min，苍术素336nm。

甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素、橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚和苍术素的紫外图谱分别如图8、图9、图10、图11、图12、图13和图14所示。

(4)不同色谱柱的比较

分别考察了AcquityUPLCBEHC18柱(100mm×2.1mm,1.7μm)，AcquityUPLCHSSC18柱(100mm×2.1mm,1.8μm)和AcquityUPLCHSST3柱(100mm×2.1mm,1.8μm)在同一色谱条件的分离效果，结果如图15所示。在同一色谱条件下使用BEHC18柱7个成分的分离效果最佳，峰形对称，且基线平稳。最终确定使用BEHC18柱。色谱图如图15

(5)柱温的选择

考察了柱温为25℃、30℃、35℃对色谱分离的影响，三个温度下，色谱柱对峰的分离效果相似，随温度升高，出峰保留时间稍微提前，为方便常规实验条件，选用30℃作为最终优化的色谱柱柱温。结果如图16所示。

四、有益效果

1、本发明采用超高效液相色谱法同时测定7种成分，与之前的质量标准相比较降低了试验用仪器的资源占用率，大大节约了人力及时间成本。

2、本发明建立的藿香正气滴丸的检测方法是通过大量科学实验筛选后得到的，通过对供试品处理时的提取溶剂、提取方法的筛选，以及色谱条件的筛选，使得本发明的方法专属性更好、经济实用、快速有效。

3、本发明的测定方法分析时间短(可以在20分钟内完成一次色谱分析)，灵敏度、精密度高，重现性好，可用于藿香正气滴丸产品稳定性和质量控制的日常分析，全面评价藿香正气滴丸的质量。

4、为了与现有技术相比较，应用对比文件(刘永利，赵振霞，李冬梅等.超高效液相色谱法同时测定藿香正气水中7种成分含量[J].中国药科大学学报，2013,44(3)：249-252)中的色谱条件检测藿香正气滴丸中的7种成分。实验结果如下：图17为对比文件色谱条件下藿香正气滴丸色谱图，图18为本发明色谱条件下藿香正气滴丸色谱图与本发明的方法进行比较，藿香正气滴丸中7种成分在对比文件和本发明条件下分离度如表9所示。

表9对比文件和本发明条件下藿香正气滴丸中7种成分分离度

编号组分对比文件条件下的本发明条件下的

分离度分离度1橙皮苷5.093.242甘草酸1.091.533欧前胡素2.663.804和厚朴酚2.601.905异欧前胡素3.002.016厚朴酚3.432.007苍术素4.844.80

通过以上实验结果对比两种方法，可以得到如下结论：

对比文件方法7种成分中甘草酸分离度为1.09，小于1.5，峰未完全分开；且样品的基线不是很平稳；本发明的方法7种成分分离度均大于1.5，都能完全分开，且基线平稳。所以本发明采用的色谱条件和梯度洗脱程序与对比文件相比较提高了分离能力、峰形不拖尾，而且灵敏度也随着提高。

附图说明

图1混合对照品的色谱图：通道A(A)，通道B(B)；

藿香正气滴丸的色谱图：通道A(C)，通道B(D)。

1橙皮苷，2甘草酸，3欧前胡素，4和厚朴酚,

5异欧前胡素，6厚朴酚，7苍术素

图2供试品提取溶剂的选择

S1:100％甲醇提取；S2:50％甲醇提取；S3:水提取；S4:50％乙醇提取；

S5:100％乙醇提取；S6:80％甲醇水提取；S7:60％甲醇水提取；

S8：40％甲醇水提取；S9：20％甲醇水提取

图3不同回流时间提取色谱图

图4不同超声时间色谱图

图5甲醇水、乙腈水系统色谱图

图6添加不同酸之后的色谱图

图7五种不同洗脱程序7个成分分离的色谱图

图8甘草酸的紫外图谱

图9欧前胡素的紫外图谱

图10异欧前胡素的紫外图谱

图11橙皮苷的紫外图谱

图12厚朴酚的紫外图谱

图13和厚朴酚的紫外图谱

图14苍术素的紫外图谱

图15不同色谱柱条件的色谱图

图16不同柱温条件下的色谱图

图17对比文件色谱条件下藿香正气滴丸色谱图

图18本发明色谱条件下藿香正气滴丸色谱图：通道A(C)，通道B(D)

1橙皮苷，2甘草酸，3欧前胡素，4和厚朴酚,

5异欧前胡素，6厚朴酚，7苍术素

具体实施方式

1、实施例1

步骤1：供试品溶液的制备

取约1.0g藿香正气滴丸，精密称定，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声(500W，40kHz)处理20min，放至室温后，用甲醇补足减失的重量，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

步骤2：色谱条件

色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱(100mm×2.1mm，1.7μm)；流动相为乙腈-0.2％甲酸水溶液，梯度洗脱程序如表1所示；流速为0.4mL/min；检测波长：通道A：甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素为250nm；通道B：0-10min，橙皮苷为284nm；10.01-15min，和厚朴酚、厚朴酚为290nm；15.01-20min，苍术素为336nm；柱温：30℃；进样量：2μL。

步骤3：藿香正气滴丸中7种成分含量的测定

取11个不同批次的藿香正气滴丸，按照步骤1的方法制备供试品溶液，按照步骤2项下色谱条件进样分析，以外标法计算，测定结果见表9。

表9藿香正气滴丸中7种成分测定结果

实施例2

步骤1：供试品溶液的制备；方法如下：取0.5g藿香正气滴丸，精密加入甲醇10mL，称定重量，超声处理15min，放至室温后，用甲醇补足减失的重量，用0.2μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

步骤2：用超高效液相色谱仪测定供试品溶液：将供试品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图；

步骤3：根据色谱图计算供试品溶液中7种成分的含量：以外标法计算供试品溶液中7种成分的含量，其中所述的7种成分为橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、苍术素。

色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱(100mm×2.1mm，1.7μm)；

流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液，

梯度洗脱程序

流速为0.2mL/min；

紫外检测波长：甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素为250nm；橙皮苷为284nm；厚朴酚、厚朴酚为290nm；苍术素为336nm；；

优选双通道紫外检测器，通道A：甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素为250nm；通道B：0-10min，橙皮苷为284nm；10.01-15min，和厚朴酚、厚朴酚为290nm；15.01-20min，苍术素为336nm；

柱温：25℃；

进样量：1μL。

实施例3

步骤1：供试品溶液的制备；方法如下：取1.5g藿香正气滴丸，精密称定，精密加入甲醇30mL，称定重量，超声处理25min，放至室温后，用甲醇补足减失的重量，用0.3μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

步骤2：用超高效液相色谱仪测定供试品溶液：将供试品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图；

步骤3：根据色谱图计算供试品溶液中7种成分的含量：以外标法计算供试品溶液中7种成分的含量，其中所述的7种成分为橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、苍术素。

色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱(100mm×2.1mm，1.7μm)；

流动相为乙腈-0.3％甲酸水溶液，

梯度洗脱程序

流速为0.6mL/min；

紫外检测波长：甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素为250nm；橙皮苷为284nm；厚朴酚、厚朴酚为290nm；苍术素为336nm；；

优选双通道紫外检测器，通道A：甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素为250nm；通道B：0-10min，橙皮苷为284nm；10.01-15min，和厚朴酚、厚朴酚为290nm；15.01-20min，苍术素为336nm；

柱温：35℃；

进样量：10μL。

实施例4

步骤1：供试品溶液的制备；方法如下：取1.0g藿香正气滴丸，精密称定，精密加入甲醇30mL，称定重量，超声处理20min，放至室温后，用甲醇补足减失的重量，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

步骤2：用超高效液相色谱仪测定供试品溶液：将供试品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图；

色谱条件：色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱(100mm×2.1mm，1.7μm)；

流动相为乙腈-0.2％甲酸水溶液，

梯度洗脱程序

流速为0.4mL/min；

紫外检测波长：甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素为250nm；橙皮苷为284nm；厚朴酚、厚朴酚为290nm；苍术素为336nm；；

柱温：30℃；

进样量：2μL。

步骤3：根据色谱图计算供试品溶液中7种成分的含量：以外标法计算供试品溶液中7种成分的含量，其中所述的7种成分为橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、苍术素。

实施例5

步骤1：供试品溶液的制备；方法如下：取1.0g藿香正气滴丸，精密称定，精密加入甲醇30mL，称定重量，超声处理20min，放至室温后，用甲醇补足减失的重量，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

步骤2：用超高效液相色谱仪测定供试品溶液：将供试品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图；

色谱条件：色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱(100mm×2.1mm，1.7μm)；

流动相为乙腈-0.2％甲酸水溶液，

梯度洗脱程序

流速为0.4mL/min；

双通道紫外检测器，通道A：甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素为250nm；通道B：0-10min，橙皮苷为284nm；10.01-15min，和厚朴酚、厚朴酚为290nm；15.01-20min，苍术素为336nm；

柱温：30℃；

进样量：4μL。

步骤3：根据色谱图计算供试品溶液中7种成分的含量：以外标法计算供试品溶液中7种成分的含量，其中所述的7种成分为橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、苍术素。

实施例6

步骤1：供试品溶液的制备；方法如下：取1.0g藿香正气滴丸，精密称定，精密加入甲醇30mL，称定重量，超声处理15min，放至室温后，用甲醇补足减失的重量，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

步骤2：用超高效液相色谱仪测定供试品溶液：将供试品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图；

色谱条件：色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱(100mm×2.1mm，1.7μm)；

流动相为乙腈-0.2％甲酸水溶液，

梯度洗脱程序

流速为0.2mL/min；

双通道紫外检测器，通道A：甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素为250nm；通道B：0-10min，橙皮苷为284nm；10.01-15min，和厚朴酚、厚朴酚为290nm；15.01-20min，苍术素为336nm；

柱温：25℃；

进样量：4μL。

步骤3：根据色谱图计算供试品溶液中7种成分的含量：以外标法计算供试品溶液中7种成分的含量，其中所述的7种成分为橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、苍术素。

实施例7

步骤1：供试品溶液的制备；方法如下：取1.0g藿香正气滴丸，精密加入甲醇30mL，称定重量，甲醇定容至刻度，超声处理25min，放至室温，用甲醇补足减失的重量，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

步骤2：用超高效液相色谱仪测定供试品溶液：将供试品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图；

色谱条件：色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱(100mm×2.1mm，1.7μm)；

流动相为乙腈-0.2％甲酸水溶液，

梯度洗脱程序

流速为0.6mL/min；

双通道紫外检测器，通道A：甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素为250nm；通道B：0-10min，橙皮苷为284nm；10.01-15min，和厚朴酚、厚朴酚为290nm；15.01-20min，苍术素为336nm；

柱温：35℃；

进样量：10μL。

步骤3：根据色谱图计算供试品溶液中7种成分的含量：以外标法计算供试品溶液中7种成分的含量，其中所述的7种成分为橙皮苷、甘草酸、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、苍术素。