利用复合修饰剂负载热解石墨电极电致化学发光行为测定药物中盐酸维拉帕米含量的方法

摘要

本发明涉及利用复合修饰剂负载热解石墨电极电致化学发光行为测定药物中盐酸维拉帕米含量的方法，其是利用TiO2sol与Silicasol辅助成膜性及ZnOAg良好电催化性，制备了TiO2sol/ZnOAg/Silicasol复合修饰剂，并通过传感器修饰技术将联吡啶钌负载在热解石墨电极表面，制备出用于测定盐酸维拉帕米的稳定性好、灵敏度高的电致化学发光传感器，实现了对盐酸维拉帕米的简单、快速测定。最佳试验条件下，盐酸维拉帕米在1.0×10-7～1.0×10-4mol/L范围内与相对发光强度呈线性关系（R2=0.9731），检出限(S/N=3)为7.11×10-9mol/L。本方法用于盐酸维拉帕米的测定具有较高的选择性和灵敏度，且实现了联吡啶钌的重复使用。

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定药物中盐酸维拉帕米含量的方法，特别涉及利用复合修饰剂 负载热解石墨电极电致化学发光行为测定药物中盐酸维拉帕米含量的方法。

背景技术

盐酸维拉帕米（Verapamilhydrochloride）为钙离子桔抗剂，能选择性扩张冠状 动脉，增加冠脉流量；能抑制心肌兴奋性及房室传导，是临床常用的抗心律失常、抗心绞痛 和治疗高血压病的药物。目前，在测定盐酸维拉帕米的方法中，主要以高效液相色谱法为 主，同时还包括反相高效液相-荧光检测色谱法，毛细管电泳法，流动注射化学发光法，电化 学法，表面增强拉曼光谱法，液相色谱-串联质谱法等。但这些方法或操作烦琐或使用贵重 的仪器设备或灵敏度不高，不能完全满足临床痕量分析的要求。因此，建立简单、快速、灵敏 的分析新方法具有重要的意义。

盐酸维拉帕米结构式为：

电致化学发光分析法因其在药物测定中具有灵敏度高、选择性好、线性范围宽、操作简 单等优点，在生物、医药等领域应用广泛。据现有文献可知，李利军，高文燕，李彦青等以金 电极为工作电极，通过于Ru(bpy)₃²⁺-verapamilhydrochloride溶液中添加十二烷基磺酸 钠的方式，实现了对盐酸维拉帕米的测定，其中，该试验以1.0×10^-4mol/LRu(bpy)₃²⁺为发 光试剂，每次测试所需剂量为100μL，线性范围为1.0×10^-7~1.0×10^-4mol/L；朱晓艳利用毛 细管电泳-电致化学发光联用技术，以铂电极为工作电极，采用5.0×10^-3mol/LRu(bpy)₃²⁺为发光试剂，线性范围为7.0×10^-7~5.0×10^-4mol/L,检出限为4.6×10^-8mol/L，该方法同样 采用滴加Ru(bpy)₃²⁺的方式进行测定。综上可知，采用滴加方式对盐酸维拉帕米测定时，存 在Ru(bpy)₃²⁺使用量大，利用效率低，测试成本高，污染环境及操作不方便等不足，且在测定 效果上还有待进一步提高。所以将电致化学发光法与纳米材料技术结合，利用化学修饰电 极技术实现对盐酸维拉帕米的高效测定具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种利用复合修饰剂负载热解石墨电极电致化 学发光行为测定药物中盐酸维拉帕米含量的方法，该方法利用TiO₂sol与Silicasol辅助 成膜性及ZnOAg良好电催化性，制备了TiO₂sol/ZnOAg/Silicasol复合修饰剂，并 通过传感器修饰技术将联吡啶钌（Ru(bpy)₃²⁺）负载在热解石墨电极表面，制备出用于测定 盐酸维拉帕米的稳定性好、灵敏度高的电致化学发光传感器，实现了对盐酸维拉帕米的简 单、快速测定，该方法用于盐酸维拉帕米的测定具有较高的选择性和灵敏度，且实现了联吡 啶钌的重复使用。

解决上述技术问题的技术方案是：一种利用复合修饰剂负载热解石墨电极电致化 学发光行为测定药物中盐酸维拉帕米含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：

A、纳米二氧化钛溶胶的制备：将TiCl₄通入乙醇中配制体积分数为3.5～4.5%的TiCl₄- EtOH溶液，取TiCl₄-EtOH溶液并用氨水调节pH=8.5～9.0，抽滤，滤饼用去离子水洗涤至中 性，用H₂O₂溶解，再加入硅溶胶和水，于92～98℃回流3.5～4.5h得到纳米二氧化钛溶胶； H₂O₂、硅溶胶、水的用量按TiCl₄-EtOH溶液∶H₂O₂∶硅溶胶∶水的体积比为1∶1.4～1.6∶0.2～ 0.3∶3.2～3.4计算；

B、银溶胶的制备：

B-1、按0.1g硝酸银∶28～32mL乙醇计，将硝酸银加入快速搅拌的乙醇溶液中，并在38～ 43℃下分散5～15min，得到硝酸银溶液；

B-2、按1g聚乙烯吡咯烷酮∶48～53mL乙醇计，将聚乙烯吡咯烷酮加入乙醇中并于58～ 63℃溶解5～15min，得到聚乙烯吡咯烷酮溶液；

B-3、将硝酸银溶液逐滴加入到聚乙烯吡咯烷酮溶液中，硝酸银溶液与聚乙烯吡咯烷酮 溶液的体积比为1∶1～1.1，反应1.8～2.2h得银溶胶；

C、纳米氧化锌-银核壳量子点的制备：

C-1、按0.01gNaOH∶22～28mL乙醇计，将NaOH在48～53℃下加入乙醇中分散15～ 25min，得到NaOH溶液；

C-2、按0.1g无水醋酸锌∶20～25mL乙醇计，将无水醋酸锌加入乙醇中，在58～63℃下持 续搅拌15～25min溶解，得到无水醋酸锌溶液；

C-3、将无水醋酸锌溶液和银溶胶混合均匀得混合溶液，无水醋酸锌溶液与银溶胶体积 比为1∶1.9～2.2，混合溶液由最初的黄色逐步变为深灰色，最终稳定在灰色，此时加入混合 溶液体积分数3.0～3.6%的聚乙二醇，在48～53℃条件下搅拌5～15min后，于30s内迅速加 入步骤C-1制备好的NaOH溶液，NaOH溶液的加入量为混合溶液体积分数64～70%，在38～43 ℃下反应0.8～1.2h，得到ZnAg核壳量子点；

D、传感器的制备：

D-1、热解石墨电极经过打磨、抛光、清洗后，室温晾干待用；

D-2、按纳米二氧化钛溶胶∶ZnOAg核壳量子点∶硅溶胶=2∶1∶1，将纳米二氧化钛溶胶、 硅溶胶与0.0025mol/L的ZnOAg核壳量子点振荡混合，得到均一、稳定的TiO₂sol/ZnO Ag/Silicasol复合溶液，按纳米二氧化钛溶胶∶ZnOAg核壳量子点∶硅溶胶∶联吡啶钌溶 液=2∶1∶1∶1，向TiO₂sol/ZnOAg/Silicasol复合溶液中加0.001mol/L联吡啶钌溶 液，超声振荡使其混匀，然后用取1~4μL加入联吡啶钌溶液的TiO₂sol/ZnOAg/ Silicasol复合溶液，滴加在热解石墨电极表面，于23～28℃下晾干，即可得到TiO₂sol/ ZnOAg/Silicasol-Ru(bpy)₃²⁺修饰的热解石墨电极；

E、测定药物中盐酸维拉帕米含量：使用步骤D制备得到的TiO₂sol/ZnOAg/ Silicasol-Ru(bpy)₃²⁺修饰的热解石墨电极，按照常规方法测定药物中盐酸维拉帕米含 量。

所述聚乙二醇为PEG200的聚乙二醇。

电致化学发光（Electrochemiluminescence，ECL）分析法作为近年来新的药物分 析技术，具有传统测试技术不可比拟的优势，实现了药物测定的灵敏度高、选择性好、线性 范围宽、可控性强等。同时，随着新材料、新电极修饰技术的应用发展，进一步提高了电致化 学发光技术在生物、医药、环境等领域的应用优势。纳米氧化锌（Nano-ZnO）具有宏观物体所 不具备的表面效应、体积效应、量子尺寸效应和宏观隧道效应以及高透明度、高分散性等特 点，在催化、光学、磁学、力学等方面具有特殊功能；而金属纳米银粒子（Nano-Ag）因具有独 特的电子特性和催化特性，可用于催化剂、导电浆料、传感器、高性能电极材料等，所以采用 Nano-ZnO与Nano-Ag复合以制备出高活性的ZnOAg核壳量子点修饰剂。同时，利用硅溶胶 （Silicasol）三维网络结构及-SiO-O-SiO-的成膜性，实现了电极表面涂膜的耐水性和抗 污染能力，并通过与纳米二氧化钛溶胶（Nano-TiO₂sol）复配成膜，制备出新的TiO₂sol/ ZnOAg/Silicasol复合成膜剂，有效克服了Silicasol成膜时易龟裂等缺点，进一步改 善修饰电极的测定效能。

本发明以溶胶-凝胶法将TiO₂sol/ZnOAg/Silicasol复合修饰剂修饰至热 解石墨电极表面，借助不同组分间的协同作用，改善修饰电极的电化学性能，并用于负载联 吡啶钌（Ru(bpy)₃²⁺），进而建立一种新型、高效的电化学发光传感器，实现对盐酸维拉帕米 的测定分析。该方法不仅操作简单、灵敏度高，而且实现了联吡啶聊的固定，有效解决了发 光试剂不断消耗带来的分析成本高、环境污染等问题。

本发明具有的有益效果再分述如下：

（1）本发明为克服硅溶胶成膜易龟裂，以二氧化钛溶胶（Silicasol）代替传统修饰剂 聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚苯乙烯磺酸钠等，利用Silicasol成膜性能好的优点，制备 出了性能稳定、灵敏度高的热解石墨修饰电极，创新了电极修饰技术，有利于电致化学发光 技术应用范围的拓展。

（2）本发明通过固定联吡啶钌测定时，在修饰电极条件相同条件下，可以重复使用 进行样品测定，而如果不修饰固定联吡啶钌，每次测定都要添加联吡啶钌溶液，联吡啶钌的 使用量多。同时，本发明修饰电极用的联吡啶钌的量很少，一般复合溶液使用量为2μL左右， 联吡啶钌浓度为1.0×10^-3mol/L，而不固载联吡啶钌，反应溶液中每次添加浓度为1.0×10 ^-4~1.0×10^-3mol/L的联吡啶钌溶液至少为100μL，可见本发明通过联吡啶钌负载技术，实现 对联吡啶钌的重复利用，减少环境污染，节约测试成本；另外，与非固载相比，固载联吡啶钌 提高了传感器灵敏度。

（3）在增敏材料上，以ZnOAg核壳量子点复合修饰剂代替单一的nano-ZnO和nano- Ag，制备了核壳量子点复合纳米材料修饰电极。

（4）以热解石墨电极代替金电极，拓宽了电极选择的多样性，并利用复合修饰剂负 载联吡啶钌修饰技术，实现了对盐酸维拉帕米的灵敏测定，线性范围为1.0×10^-7~1.0× 10^-4mol/L，检出限为7.11×10^-9mol/L，表明该方法具有更低的检出限。

下面结合附图和实施例对本发明之利用复合修饰剂负载热解石墨电极电致化学 发光行为测定药物中盐酸维拉帕米含量的方法的技术特征作进一步的说明。

附图说明

图1：纳米银透射电镜（TEM）图。

图2：纳米氧化锌透射电镜（TEM）图。

图3：ZnOAg核壳量子点透射电镜（TEM）图。

图4：本发明修饰电极表面盐酸维拉帕米对Ru(bpy)₃²⁺体系ECL的增敏作用曲线图， 其中，a为TiO₂sol/ZnOAg/Silicasol-Ru(bpy)₃²⁺修饰热解石墨电极上的Ru (bpy)₃²⁺通过湮灭反应产生的ECL强度曲线，b为测定体系加入1.0×10^-5mol/L的盐酸维拉 帕米的ECL强度曲线。

图5：盐酸维拉帕米-Ru(bpy)₃²⁺体系的电致化学发光行为曲线图，其中，a为盐酸维 拉帕米-Ru(bpy)₃²⁺体系在裸电极上的ECL强度曲线，b为盐酸维拉帕米-Ru(bpy)₃²⁺体系在 TiO₂sol/ZnOAg/Silicasol-Ru(bpy)₃²⁺修饰电极上的ECL强度曲线。

图6：缓冲溶液pH对电化学发光强度的影响曲线图。

图7：ZnOAg掺量对电致化学发光强度的影响曲线图。

图8：盐酸维拉帕米-Ru(bpy)₃²⁺体系在不同修饰电极上的电致化学发光行为曲线 图，其中，a为盐酸维拉帕米-Ru(bpy)₃²⁺体系在TiO₂sol/Nano-Ag/Silicasol-Ru (bpy)₃²⁺修饰电极上的ECL强度曲线，b为盐酸维拉帕米-Ru(bpy)₃²⁺体系在TiO₂sol/ Nano-ZnO/Silicasol-Ru(bpy)₃²⁺修饰电极上的ECL强度曲线，c为盐酸维拉帕米-Ru (bpy)₃²⁺体系在TiO₂sol/ZnOAg/Silicasol-Ru(bpy)₃²⁺修饰电极的ECL强度曲线。

图9：不同浓度盐酸维拉帕米的电化学发光曲线和盐酸维拉帕米的校正曲线图；其 中（A）为不同浓度盐酸维拉帕米的电化学发光曲线；a.0.5×10^-6mol/L盐酸维拉帕米，b. 1.0×10^-6mol/L盐酸维拉帕米，c.5.0×10^-6mol/L盐酸维拉帕米，d.10.0×10^-6mol/L 盐酸维拉帕米，e.50.0×10^-6mol/L盐酸维拉帕米，f.100.0×10^-6mol/L盐酸维拉帕米； （B）为盐酸维拉帕米的校正曲线。

图10：连续测定10次的重现性及稳定性示意图。

具体实施方式

实施例1：一种利用复合修饰剂负载热解石墨电极电致化学发光行为测定药物中 盐酸维拉帕米含量的方法，包括以下步骤：

（1）纳米二氧化钛溶胶的制备

将4mLTiCl₄通入100mL乙醇溶液，取20mLTiCl₄-EtOH溶液并用37mL2.5%的氨水 调节pH=8.8，抽滤，滤饼用去离子水洗涤至中性，用30mLH₂O₂溶解，再加入5mL硅溶胶和65 mL水，于95℃回流4h。

（2）Nano-Ag的制备

以硝酸银为前驱体，采用PVP为稳定剂和还原剂，即取0.169g硝酸银于快速搅拌的50 mL乙醇溶液中，并在40℃下分散10min；同时，将1gPVP加入50mL乙醇中并于60℃溶解 10min，随后将硝酸银溶液逐滴加入到PVP溶液，反应2h得银溶胶，其粒径透射电镜（TEM）表 征图谱如图1所示。

（3）ZnOAg核壳量子点的制备

首先，银溶胶参照（2）制备；其次，取0.04gNaOH，并于50℃下于100mL乙醇中分散20 min；再者，将0.2195g无水醋酸锌于60℃下持续搅拌20min溶于50mL乙醇，并将无水醋 酸锌溶液和银溶胶混合均匀，可观察到混合溶液由最初的黄色逐步变为深灰色，最终稳定 在灰色，此时加入5.0mLPEG200，待50℃下搅拌10min后，于30s内迅速加入前期制备 好的NaOH溶液，在40℃下反应1h，既可得到ZnOAg核壳量子点（图3）。

（4）传感器的制备

将热解石墨电极分别用金相砂纸打磨，A1₂O₃粉抛光至镜面，冲洗掉多余的抛光粉后依 次用水、无水乙醇和水、水超声清洗，室温晾干待用。

将TiO₂sol、0.0025mol/LZnOAg核壳量子点、Silicasol按体积比2:1:1，振荡混 合得到均一、稳定的TiO₂sol/ZnOAg/Silicasol复合溶液。向该溶液中加入体积比 TiO₂sol:ZnOAg核壳量子点:Silicasol:Ru(bpy)₃²⁺=2:1:1:1的0.001mol/L联吡啶 钌溶液，超声振荡使其混匀。然后用微量移液枪取1μL复合溶液，滴加在热解石墨电极表面， 于25℃下晾干，即可得到TiO₂sol/ZnOAg/Silicasol-Ru(bpy)₃²⁺修饰的热解石 墨电极。同样方法，通过改变修饰剂用量，分别制得不同性质的修饰电极。

（6）测定药物中盐酸维拉帕米含量

使用步骤（4）制备得到的TiO2sol/ZnOAg/Silicasol-Ru(bpy)32+修饰的热 解石墨电极，以MPI-E型电致化学发光工作站为试验平台，在三电极系统下，于25℃采用循 环伏安法（CV）于扫描电压0.2V~1.25V、扫描速度100mV/S、负高压800V、0.2mol/L硼酸 盐缓冲液（BBS，pH=9.0）条件下实现对盐酸维拉帕米的定量测定，通过测定不同盐酸维拉帕 米浓度对应的电化学发光强度值，建立起盐酸维拉帕米浓度C与电化学发光强度值I的对应 关系，并通过线性回归分析，得出一定合理区间内的线性回归方程，同时利用校正曲线，对 盐酸维拉帕米片进行含量测定。

在最佳试验条件下，盐酸维拉帕米在1.0×10-7～1.0×10-4mol/L范围内与相对 发光强度呈线性关系（R2=0.9731），检出限(S/N=3)为7.11×10-9mol/L。连续平行测定1.0 ×10-5mol/L的盐酸维拉帕米溶液10次，发光强度的相对标准偏差（RSDs）为2.07%。对样品 进行回收率试验，回收率在97.90～106.17%之间。

采用本发明如实施例1所述方法进行样品分析：取10片盐酸维拉帕米片（40mg/ 片，天津市中央药业有限公司）研磨粉碎均匀后，称取相当于1片盐酸维拉帕米含量的样品 量，加20mL二次蒸馏水超声、溶解、过滤，溶液定溶至100mL容量瓶中，得8.15×10^-4mol/L 盐酸维拉帕米样品溶液，并取部分样品溶液稀释至8.15×10^-6mol/L后于25℃进行标准品 回收分析和样品测定，试验结果见表1。

表1　样品测定及回收率试验(n=5)

本发明以TiO₂sol、Silicasol为复合成膜剂，改善了以TiO₂sol/ZnOAg/ Silicasol为复合物修饰剂在热解石墨电极表面的成膜性，通过固定联吡啶钌制备出灵敏 度高、稳定性好的固体电化学发光传感器。与Nano-Ag、Nano-ZnO相比，ZnOAg核壳量子点对 ECL传感器具有更好的电催化活性。同时，通过化学修饰电极负载技术，提高了联吡啶钌利 用效率，并在降低分析成本的同时提高ECL传感器灵敏度。该传感器用于电化学发光法测定 盐酸维拉帕米具有方法灵敏度高、线性范围宽和检出限低等优点。

本发明的研究过程如下：

1、盐酸维拉帕米的电化学发光行为

用循环伏安法考察了1.0×10^-5mol/L的盐酸维拉帕米在支持电解质pH=9.0的0.2 mol/L硼酸盐（BBS）缓冲溶液中的电化学发光行为。当电位从0.2V扫向1.25V时，电化学发 光图上没有观察到发光信号，因此盐酸维拉帕米在TiO₂sol/ZnOAg/Silicasol修饰 热解石墨电极上不产生电化学发光。

2、盐酸维拉帕米对Ru(bpy)₃²⁺的增敏作用

试验分别研究了在修饰电极表面盐酸维拉帕米对Ru(bpy)₃²⁺体系ECL的增敏作用（图4） 和盐酸维拉帕米-Ru(bpy)₃²⁺体系在不同电极上的ECL行为（图5）。图4中a为TiO₂sol/ ZnOAg/Silicasol-Ru(bpy)₃²⁺修饰热解石墨电极上的Ru(bpy)₃²⁺通过湮灭反应产生 的ECL强度曲线；当测定体系加入1.0×10^-5mol/L的盐酸维拉帕米时，盐酸维拉帕米与Ru (bpy)₃²⁺构成共反应体系，ECL峰值由951a.u增加至2694a.u（曲线b），表明盐酸维拉帕米 对Ru(bpy)₃²⁺具有明显的增敏效果。

图5为盐酸维拉帕米-Ru(bpy)₃²⁺体系分别在裸电极（曲线a）和TiO₂sol/ZnOAg /Silicasol-Ru(bpy)₃²⁺修饰电极（曲线b）上的ECL行为。由图5可知，盐酸维拉帕米在不 同电极上对Ru(bpy)₃²⁺具有较好的增敏作用，与裸电极ECL峰值1578a.u相比，盐酸维拉帕 米-Ru(bpy)₃²⁺体系在修饰电极表面有更强的发光信号，不但提高Ru(bpy)₃²⁺的利用效率，同 时节约研究成本及降低环境污染。

3、缓冲体系及pH值的选择

在检测体系中，缓冲溶液不但提供酸碱环境，不同体系的pH值对叔胺类-Ru(bpy)₃²⁺体 系电化学发光效果也有影响。通过考察0.2mol/LH₃BO₃-0.05mol/LNa₂B₄O₇·10H₂O （BBS）缓冲体系和0.2mol/LNa₂HPO₄-0.3mol/LNaH₂PO₄（PBS）缓冲体系，发现盐酸维拉 帕米-Ru(bpy)₃²⁺体系的ECL强度受pH影响显著，且在硼酸盐缓冲溶液pH=9.0时体系ECL峰 值达到最大值（图6）。综合分析，试验选取pH=9.0的硼酸盐缓冲溶液为支持电解质。

4、ZnOAg浓度优化

ZnOAg因具有良好的电学、磁学、光学、催化等性能，修饰剂中ZnOAg用量对修饰电极 的稳定性及盐酸维拉帕米在该修饰电极表面上对Ru(bpy)₃²⁺的增敏作用有重要影响。通过 固定TiO₂sol/EtOH或ZnOAg/Silicasol-Ru(bpy)₃²⁺体积比2:1:1:1，考察了ZnO Ag不同摩尔浓度下盐酸维拉帕米-Ru(bpy)₃²⁺体系的ECL强度（图7）。

图7表明，当ZnOAg摩尔浓度为0.0025mol/L时，体系ECL强度达最大值。这可能是 因为适量的引入ZnOAg，有利于增加修饰膜上的反应位点，在电化学上表现为电极的氧化 电流增加，电化学发光则表现为ECL增强；而过多的ZnOAg容易发生团聚现象，影响修饰膜 中电子传递速率，从而引起ECL峰值降低。

5、ZnOAg、Nano-Ag及Nano-ZnO的性能对比分析

Nano-ZnO的制备：将0.2195g无水醋酸锌于60℃下持续搅拌20min溶于50mL乙醇； 取0.04gNaOH，并于50℃下于100mL乙醇中分散20min；将无水醋酸锌溶液加热至50℃，加 入5mL聚乙二醇200，均匀搅拌10min，然后迅速加入前期制备好的NaOH溶液，在50℃下反 应10min，得nano-ZnO溶液（图2）。

为研究Nano-Ag与Nano-ZnO结合为ZnOAg核壳量子点时所具有的特异性优势，进 一步对比分析了三者作为膜修饰剂时对盐酸维拉帕米-Ru(bpy)₃²⁺体系在修饰电极上ECL 强度的影响。图8表明此三种修饰电极均在1.0V左右产生发光现象，其中TiO₂sol/ Nano-Ag/Silicasol-Ru(bpy)₃²⁺修饰电极（曲线a）的ECL强度相对较弱，当采用Nnano- ZnO时，TiO₂sol/Nano-ZnO/Silicasol-Ru(bpy)₃²⁺修饰电极（曲线b）的ECL强度可 增强至1581a.u，表明在该测定体系中Nano-ZnO较Nano-Ag更有助于改善电极表面微结构， 提高电子传递速率。依据Nano-Ag与Nano-ZnO协同作用，ZnOAg核壳量子点具有特殊的电催 化性能，提升了电极的电子转移能力，从而使其制备的TiO₂sol/ZnOAg/Silicasol -Ru(bpy)₃²⁺修饰电极在盐酸维拉帕米-Ru(bpy)₃²⁺测试体系中ECL强度最强（曲线c）。

6、联吡啶钌浓度的选择

试验分别考察了Ru(bpy)₃²⁺浓度1.0×10^-4mol·L^-1，1.0×10^-3mol·L^-1及1.0×10^-2mol·L^-1条件下对ECL强度的影响。结果表明，随着Ru(bpy)₃²⁺浓度的增加，盐酸维拉帕米- Ru(bpy)₃²⁺体系在TiO₂sol/ZnOAg/Silicasol-Ru(bpy)₃²⁺修饰热解石墨电极上的 ECL强度增大，同时噪音也增加，在保证最佳信噪比、提高Ru(bpy)₃²⁺利用效率和减少环境污 染的前提下，试验选取Ru(bpy)₃²⁺浓度为1.0×10^-3mol·L^-1。

7、仪器参数的优化选择

试验考察了盐酸维拉帕米-Ru(bpy)₃²⁺体系分别在不同负高压（-600V、-700V、-800 V、-900V）及扫描速率（20mV/s~120mV/s）下对仪器检测灵敏度和稳定性的影响。试验结 果表明信噪比随负高压增加先增大后减小；ECL强度随扫描速率的加快而增强，并于100 mV/s后趋于稳定，兼顾到减小仪器损耗，所以最佳仪器参数为-800V的负高压及100mV/s 的扫描速率。

8、方法评价

在最佳试验条件下，考察了不同浓度盐酸维拉帕米溶液在TiO₂sol/ZnOAg/ Silicasol-Ru(bpy)₃²⁺修饰热解石墨电极上的电化学发光强度响应曲线（图9），盐酸维 拉帕米浓度在1.0×10^-7~1.0×10^-4mol/L范围内与相对峰高呈良好线性关系（R²=0.9827）， 其线性回归方程为：I（counts）=31.672×10⁶C+1834.2，检出限(S/N=3)为7.11×10^-9mol/ L。

9、ECL传感器的重现性及抗干扰性

在最优条件下，以TiO₂sol/ZnOAg/Silicasol-Ru(bpy)₃²⁺修饰热解石墨电极 连续平行测定1.0×10^-5mol/L盐酸维拉帕米10次，相对标准偏差为2.07%，表明该ECL传感 器用于电致化学发光测定盐酸维拉帕米具有很好的稳定性和重现性（图10）。

另外，对1.0×10^-5mol/L盐酸维拉帕米体系进行干扰试验，结果表明，以相对测量 误差≤±0.5%为标准，共存物质的允许量（以倍数计）：Cl^-、K⁺、Zn²⁺、Na⁺、NH⁴⁺、CO₃^2-、SO₄^2-（1000）；L-丝氨酸、L-谷氨酸、蔗糖、乳糖、D-果糖、麦芽糖（100）；Fe²⁺、Mg²⁺、Ca²⁺、Cu²⁺（25）；L- 半胱氨酸（5）对盐酸维拉帕米的测定均不产生干扰。