一种适于牙鲆性腺冰冻切片mRNA原位杂交的方法

摘要

本发明涉及mRNA原位杂交技术，具体的说是一种适于牙鲆性腺冰冻切片mRNA原位杂交的方法。将牙鲆性腺依次经过量浓度为4％PFA溶液固定和100％甲醇溶液通透，而后长期保存；固定后保存的样品经复水、20-30％蔗糖沉降后，进行OCT包埋和冰冻切片，55℃干燥2-3h，获得冰冻切片作为原位杂交样品；上述样品经过量DEPC水洗涤3-5min以除去样品切片OCT包埋剂；洗涤、蛋白酶K消化、固定而后经预杂交，预杂交后与含有牙鲆RNA探针的杂交液混合于50-70℃下杂交过夜；杂交处理后洗涤，并经抗体孵育，再洗涤，避光显色，终止显色，再固定，封片，进而实现对牙鲆性腺相关基因在mRNA水平的表达定位。本发明解决了牙鲆性腺组织难于直接进行性腺原位杂交的问题，能够清晰地描述牙鲆相关基因在性腺中的表达定位(mRNA水平)。