一种犊牛、羔羊用的饲料添加剂及其在代乳品和开食料中的应用

摘要

本发明涉及一种犊牛、羔羊用的饲料添加剂及其在代乳品和开食料中的应用，所述饲料添加剂的活性成分含有以下成分中的一种或两种：桑叶提取物、热带假丝酵母菌。经过试验显示，本发明提供的饲料添加剂，配合在代乳品和开食料中饲喂动物后，可提高幼畜免疫力，降低腹泻率，提高生长性能。

说明书

技术领域

本发明涉及饲料领域，涉及一种饲料添加剂，具体涉及一种提高犊牛、羔羊免疫力和生长性能的饲料添加剂及其在犊牛、羔羊代乳品和开食料中的应用。

背景技术

新生犊牛和羔羊，从出生到适应外界环境，再经历断奶，在短时间内遭受免疫学和代谢学等巨大的改变。同时，由于幼龄动物尚未发育的免疫和消化系统引起的腹泻、呼吸道疾病以及高水平氧化应激所造成的高发病率和死亡率，一直是幼畜培育面临的最大挑战。

抗生素从20世纪中期首次合成至今，已被广泛应用于人类与动物生活和生产中。研究者发现，在饲料中添加抗生素不仅可以降低动物腹泻，还可以促进动物生长，提高饲料利用率。然而，近年来大量兽用抗生素使用，所产生的抗生素耐受菌降低其使用效果；抗生素在动物产品中的残留以及人类病原体交叉耐药性导致的人用抗生素敏感性降低等问题，不仅对动物生产造成了影响，还使得人类疾病的治疗更具有挑战性。

随着动物营养学研究的不断深入，益生菌与天然植物提取物作为新型无公害、无残留、无污染饲料资源替代抗生素，已被众多学者和饲料行业所关注。2001年联合国粮食与农业组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)将益生菌定义为：给与一定数量的、能够对宿主健康产生有益作用的活的微生物制剂。定植在胃肠道的益生菌通过自身活性以及产生的代谢产物不仅为宿主提供营养物质、帮助有机物质的消化，还可以竞争性的抑制有害菌的生长，稳定胃肠道微生态系统。酵母菌属多种菌株作为益生菌在生产中替代抗生素已经进行了大量研究。

Marrero等(MarreroY,CastilloY,RuizO,etal.Feedingofyeast(Candidaspp.)improvesinvitroruminalfermentationoffibroussubstrates.JournalofIntegrativeAgriculture.2015,14(3):514-519)研究发现，热带假丝酵母作为反刍动物饲料添加剂在降解日粮纤维方面具有巨大的潜力。进一步研究证实：假丝酵母菌属在瘤胃通过激活纤维分解菌，增加乙酸、丙酸、丁酸、戊酸和异戊酸等挥发性脂肪酸浓度，为反刍动物提供能量代谢前体物质，并且还可提高日粮的体外干物质消化率。

然而，Timmerman等(Monostrain,multistrainandmultispeciesprobiotics-acomparisonoffunctionalityandefficacy，Internationaljournaloffoodmicrobiology，2004,96(3):219-233)和Dunne等(Probiotics:frommythtoreality.Demonstrationoffunctionalityinanimalmodelsofdiseaseandinhumanclinicaltrials//LacticAcidBacteria:Genetics,MetabolismandApplications.SpringerNetherlands,1999:279-292)研究发现，微生物及其产生的代谢产物间具有潜在的协同作用，不同菌属益生菌或益生菌与天然植物提取物联合使用比单一菌株益生菌更有效。但是关于热带假丝酵母菌(或酵母菌)与桑叶提取物联合使用的试验或研究未见报道。黄酮类化合物作为植物次级代谢产物，广泛存在于大多数高等植物茎叶中。黄酮类化合物通过清除体内自由基和活性氧，防止幼畜因氧化应激造成的细胞膜静电荷迁移与渗透压改变所导致的机体组织和细胞损伤，从而提高机体免疫力和缓解炎症反应(NijveldtRJ,vanNoodE,vanHoornDE,etal.,Flavonoids:areviewofprobablemechanismsofactionandpotentialapplications，AmericanJournalofClinicalNutrition.2001,74(4):418-425)。

另外，黄酮类化合物还通过调节一些代谢关键酶的活性和表达，进而调节脂类和碳水化合物的代谢(KobayashiY,MiyazawaM,KameiA,etal.,Ameliorativeeffectsofmulberry(MorusalbaL.)leavesonhyperlipidemiainratsfedahigh-fatdiet:inductionoffattyacidoxidation,inhibitionoflipogenesis,andsuppressionofoxidativestress，Bioscience,biotechnology,andbiochemistry，2010,74(12):2385-2395)。

断奶前后的犊牛羔羊免疫系统不完善，并且处于高应激状态，易产生腹泻、生长速度减缓等问题。发明人基于以上需要，开展了系列研究，最终得到本发明的技术方案。

发明内容

本发明提供一种提高犊牛、羔羊免疫力和生长性能的饲料添加剂。

本发明提供了一种犊牛、羔羊用的饲料添加剂，其活性成分含有以下成分：桑叶提取物。

本发明的另一目的是提供犊牛、羔羊用的饲料添加剂，其活性成分含有以下成分：桑叶提取物和热带假丝酵母菌。

具体的，所述饲料添加剂的活性成分含有以下成分：桑叶提取物1-6g，热带假丝酵母菌0-10ml，每ml热带假丝酵母菌中含菌1×10⁹CFU。

优选地，所述饲料添加剂的活性成分含有以下成分：桑叶提取物1-6g，热带假丝酵母菌1-10ml。

进一步优选，所述饲料添加剂的活性成分含有以下成分：桑叶提取物1-6g，热带假丝酵母菌2-8ml。

更进一步优选，所述饲料添加剂的活性成分含有以下成分：桑叶提取物3-6g，热带假丝酵母菌2-5ml。

最优选进一步优选，所述饲料添加剂的活性成分含有以下成分：桑叶提取物3g，热带假丝酵母菌5ml。

上述饲料添加剂中：

所述热带假丝酵母菌(Candidatropicalis)，可以市售购买，或由以下方法制备：将热带假丝酵母活化后接种到麦芽汁培养基中，28℃培养进行扩大繁殖至菌液浓度达到10⁹CFU/ml。

优选地，所述热带假丝酵母由以下方法制备：

热带假丝酵母的活化：将菌种接入到无菌的麦芽汁斜面培养基上，在培养箱中28℃条件下培养48-72h，麦芽汁斜面培养基是新鲜麦芽汁100mL，琼脂2g，pH值自然，115℃灭菌20min；

将热带假丝酵母活化后接种到麦芽汁培养基中，28℃进行扩大培养，至菌液浓度达到10⁹CFU/ml，所述麦芽汁培养基是麦芽汁70mL，121℃0.1MPa的压力下灭菌30min，pH值约为6.5。

所述桑叶提取物，可以市售购买，或由春蚕后期或霜降前桑树枝条上第1～3位新叶加工的桑叶粉为原料，阴干，粉碎，依次用正丁醇、90％乙醇和水加温浸提，再喷雾干燥而得，桑叶黄酮的含量不低于5％。

本发明提供的饲料添加剂中还包含载体，载体的用量为1-50g，优选为5-30g，进一步优选为9-20g，更进一步优选为9-12g。

所述载体优选为大米糊精，购买自饲料市场。

需要注意的是，本发明提供的饲料添加剂中使用的单位是g与ml，该单位是重量、体积单位，本领域技术人员也可以理解为国际上的其他单位，比如kg和L，也可以是它们的倍数，如10倍、100倍、1/10倍、1/100倍，不应该用g和ml作为对本发明的限定。

本发明还提供了上述饲料添加剂的制备方法，该方法包括以下步骤：

按照配比称取大米糊精和热带假丝酵母菌液，混合后搅拌均匀，晾干制成粉剂，然后加入配方量的桑叶提取物，与上述粉剂混合均匀即可。

本发明还提供了上述饲料添加剂在制备犊牛、羔羊的代乳品或开食料中的应用，添加量为每头犊牛18-25g/d或每只羔羊3-6g/d。

上述应用中：

在代乳品中，每天晨饲前，按每头犊牛18-25g/d或每只羔羊3-6g/d，称取上述饲料添加剂，混合在38-40℃的代乳品乳液中，搅拌均匀后饲喂给犊牛或羔羊。

在开食料中，每次饲喂前，按每头犊牛18-25g/d或每只羔羊3-6g/d，称取上述饲料添加剂，搅拌在100-1000g/(头或只)开食料中，一次性饲喂给犊牛或羔羊。

本发明提供的犊牛、羔羊用的饲料添加剂具有以下特点：

1、本发明提供的饲料添加剂中：

采用由热带假丝酵母、桑叶提取物和大米糊精组成的饲料添加剂。其中：

桑叶提取物中含有桑叶黄酮，植物黄酮类化合物通过清除体内自由基和活性氧，防止幼龄动物因氧化应激造成的细胞膜静电荷迁移与渗透压改变，从而导致的机体组织和细胞损伤，从而提高机体免疫力和缓解炎症反应；黄酮类化合物还通过调节一些代谢关键酶的活性和表达，进而调节脂类和碳水化合物的代谢。

而假丝酵母菌属在瘤胃通过激活纤维分解菌，增加乙酸、丙酸、丁酸、戊酸和异戊酸等挥发性脂肪酸浓度，为反刍动物提供能量代谢前体物质，并且提高日粮干物质的消化率。

两者的组合，从降低氧化反应，提高营养物质消化等几个角度共同作用。特别是有报道显示，由于微生物及其产生的代谢产物间具有潜在的协同作用，益生菌与天然植物提取物联合使用比单一菌株益生菌更有效。

大米糊精作为填充和稀释的载体，也可提高营养价值，易消化吸收，同时可降低桑叶提取物气味和味道对幼畜带来的不适，提高产品适口性。

现有代乳品生产技术中尚未见添加上述饲料添加剂的报道。

2、本发明与已有技术的区别：

现有技术CN201310484129.X中公开了一种增加鸡禽免疫力的饲料，其中，包括如下重量单位的组分：豆粉18-23份，玉米60-65份，滑石粉5-8份，米糠2-5份，磷酸氢钙12-15份，酵母菌0.5-1份，栀子1-3份，血粉3-5份，桑叶5-8份，石膏1-3份，丹皮1-3份，虎杖1-3份，海藻粉5-10份，植物油3-5份。

与上述文件相比，本发明用的饲料添加剂简单、方便，针对的是反刍动物幼畜，而非单胃动物。并且所采用的桑叶提取物和热带假丝酵母在犊牛及羔羊日粮中的添加量如何尚无研究报道。

3、经过试验显示，本发明提供的饲料添加剂，配合在代乳品和开食料中饲喂动物后，可提高幼畜免疫力，降低腹泻率，提高生长性能，效果优于现有技术。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

所述热带假丝酵母菌购自北京华农生物工程有限公司；

所述桑叶提取物购自西安飞达生物技术有限公司，由春蚕后期或霜降前桑树枝条上第1～3位新叶加工的桑叶粉为原料，阴干，粉碎，依次用正丁醇、90％乙醇和水加温浸提，再喷雾干燥而得，桑叶黄酮的含量含量为5％；

所述大米糊精购买自饲料市场。

实施例1：一种犊牛、羔羊用的饲料添加剂

1、组成：桑叶提取物3g，大米糊精17g。

2、制备方法：

按照配比称取大米糊精和桑叶提取物，混合后搅拌均匀，晾干制成粉剂。

实施例2：一种犊牛、羔羊用的饲料添加剂

1、组成：桑叶提取物3g，热带假丝酵母菌5ml(1×10⁹CFU/ml)，大米糊精12g。

2、制备方法：

麦芽汁培养基是麦芽汁70mL，121℃0.1MPa灭菌30min，pH值约为6.5；

麦芽汁斜面培养基是麦芽汁100mL，加入琼脂2g，115℃灭菌20min。

(1)菌种的制备：

热带假丝酵母活化：将菌种按1％接种量接入到无菌的麦芽汁斜面培养基上，在培养箱中28℃条件下培养48-72h。

将热带假丝酵母活化后按2％接种量接种到麦芽汁培养基中，28℃进行扩大培养至菌液浓度达到10⁹CFU/ml，备用；

(2)按照重量比称取大米糊精、热带假丝酵母菌液混合后搅拌均匀，晾干制成粉剂；

(3)按照重量比称取桑叶提取物，加入到上述粉剂混合即可。

实施例3：一种犊牛、羔羊用的饲料添加剂

1、组成：桑叶提取物6g，热带假丝酵母菌2ml(1×10⁹CFU/ml)，大米糊精12g。

2、制备方法：

(1)菌种的制备：同实施例2；

(2)按照重量比称取大米糊精、热带假丝酵母菌液，混合后搅拌均匀，晾干制成粉剂；

(3)按照重量比称取桑叶提取物，加入到上述粉剂混合即可。

实施例4：一种犊牛、羔羊用的饲料添加剂

1、组成：桑叶提取物1g，热带假丝酵母菌10ml(1×10⁹CFU/ml)，大米糊精9g。

2、制备方法：

(1)菌种的制备：同实施例2；

(2)按照重量比称取大米糊精、热带假丝酵母菌液，混合后搅拌均匀，晾干制成粉剂；

(3)按照重量比称取桑叶提取物，加入到上述粉剂混合即可。

实施例5：一种犊牛、羔羊用的饲料添加剂

1、组成：桑叶提取物3g，热带假丝酵母菌40ml(1×10⁹CFU/ml)，大米糊精40g。

2、制备方法：

(1)菌种的制备：同实施例2；

(2)按照重量比称取大米糊精、热带假丝酵母菌液，混合后搅拌均匀，晾干制成粉剂；

(3)按照重量比称取桑叶提取物，加入到上述粉剂混合即可。

实验例1：代乳品饲养效果验证

1.试验设计与日粮

本试验采用单因素随机设计，共计7组：

A组：对照组，饲喂基础日粮，为代乳品和开食料；

B组：在基础日粮中添加热带假丝酵母粉剂5g/d；

C组：在基础日粮中添加实施例1的饲料添加剂；

D组：在基础日粮中添加实施例2的饲料添加剂；

E组：在基础日粮中添加实施例3的饲料添加剂；

F组：在基础日粮中添加实施例4的饲料添加剂；

G组：在基础日粮中添加实施例5的饲料添加剂。

2.试验动物与饲养管理

选用自然分娩、出生胎次为1～3胎、初生重40kg左右、饲喂足量初乳及鲜乳的(20±1.2)日龄中国荷斯坦公犊牛70头。随机分为7个处理组，每组10头。犊牛21～27日龄为试验预饲期，进行代乳品过渡，每天分2次饲喂(08:00和15:00)，每餐过渡1/12，27日龄时全部换成代乳品。代乳品每天饲喂量为体重的12％(每两周调整一次)。50～56日龄进行断奶过渡，每餐过渡1/12，56日龄时完全断奶。断奶前后将所需添加的饲料添加剂在每日晨饲时分别添加到代乳品乳液或开食料中，尽量保证全部采食。

试验期60天，期间开食料自由采食，并保证干净、充足水源。

犊牛采用犊牛岛单独培养，每个犊牛岛占地面积约为1.6m×3.6m。犊牛按规程进行免疫和驱虫。

3.测定指标与方法

(1)生长性能与粪便评分

分别于犊牛28、42、56和80日龄晨饲前称重，测定体高、体斜长和胸围，并计算平均日增重(ADG)、体躯指数和体长指数。

试验期间每天记录每头犊牛饲粮采食量，每隔一周采集代乳品和开食料样品，混合均匀后-20℃保存。测定样品中干物质(DM)、有机物(OM)、总能(GE)、粗蛋白质(CP)、粗脂肪(EE)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、钙(Ca)、磷(P)含量。

每天观察犊牛粪便情况并进行评分，其中1分为粪便干燥，4分为粪便稀软。当粪便评分>3时即为腹泻，对犊牛灌服电解液，如有必要进行抗生素治疗。

(2)血清指标

每组选取接近平均体重的4头犊牛，分别于28、42、56和80日龄晨饲前颈静脉采血5mL，3000r/min离心20min，收集血清分装于1.5mL离心管中，-20℃下保存。采用免疫比浊法(日立7600生化仪)测定样品的免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)浓度。

(3)营养物质表观消化率

每组选取接近平均体重4头健康犊牛，于35日龄和63日龄利用消化代谢笼采取全收粪尿法分别进行犊牛断奶前与断奶后消化代谢试验。试验期均为7天，其中预饲期3天，正试期4天，记录每头犊牛每天实际采食量、排粪量和排尿量。正试期连续采集日粪便总量的10％作为混合样品，每100g鲜粪加入10％的稀盐酸10ml固氮；连续收集每头犊牛日排尿量的1％作为混合样品，用10％稀盐酸调整尿样使pH≦3。粪样和尿样收集后-20℃冷冻保存。测定粪便中干物质(DM)、有机物(OM)、粗蛋白质(CP)、粗脂肪(EE)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)和尿中氮含量。

4.统计分析

试验中数据利用SAS9.2统计软件中ANOVA模型分析。差异显著(P<0.05)时采用LSD法进行多重比较。

5.结果

(1)犊牛生产性能：见表1

由表1可知，随着犊牛日龄增加，体重和ADG均显著增加。日粮中添加本发明的饲料添加剂对犊牛56～80日龄ADG和42～80日龄饲料转化率(FCE)造成显著影响(P<0.05)。其中ADG56～80日龄依次是D、E、F、C组略高于B、G组，且显著高于A组(P＝0.048)；FCE42～56日龄时E、C、D、F、组高于B、G、A组(P＝0.032)，56～80日龄依次是D、E、F组略高于C、B组，且显著高于G、A组(P＝0.046)。

表1饲料添加剂对断奶前后犊牛生长性能的影响

同行数据所标字母不同，表示差异显著(P<0.05)，字母相同表示差异不显著(P>0.05)，下同。

(2)犊牛粪便评分：见表2

表2饲料添加剂对断奶前后犊牛粪便评分的影响

由表2可知，犊牛粪便评分随着周龄的增加呈现下降的趋势，在8周龄由于断奶而出现波动。试验全期犊牛粪便评分A组高于其他处理组，其中9周龄时，A组显著高于C、D、E、F组，略高于B、G组(P＝0.022)；6、7周龄时该现象也存在，但差异不显著(P＝0.067；P＝0.051)。

结果表明：本发明的饲料添加剂在降低犊牛腹泻方面具有效果，且优于单独使用热带假丝酵母和桑叶提取物，具有协同效果。

(3)犊牛血清生化指标：见表3

表3饲料添加剂对断奶前后犊牛血清生化指标的影响

由表3可知：

IgG含量：28日龄时血清IgG含量D、E、C、F组显著高于A、B、G组(P＝0.039)，42日龄时不同处理组对血清IgG含量造成显著影响，其中D、E、F组显著高于A、G组(P＝0.048)。56日龄时各处理组间无显著差异(P＝0.124)。

IgM含量：28日龄时，IgM含量D、E、F组显著高于A、B、G组(P＝0.037)，80日龄时血清IgM含量D、C、F、E组显著高于A组(P＝0.003)；

IgA含量：80日龄时，IgA含量D、F、E组显著高于其他各组(P＝0.003)。同时，试验全期也出现显著差异(P＝0.008)。

(4)犊牛营养物质表观消化率：见表4

由表4可知，饲料添加剂对断奶前后犊牛DM和OM表观消化率无明显差异(P>0.05)，却对断奶前NDF和断奶后EE、NDF和ADF表观消化率造成显著影响(P<0.05)。断奶前D、E、F、C组犊牛NDF表观消化率显著高于其他处理组(P＝0.033)；断奶后D、E、F、C、B组EE表观消化率显著高于A组(P＝0.018)，D、F、E组NDF和ADF表观消化率均略好于C组、显著高于A、B、G组(P＝0.029；P＝0.025)。

犊牛日粮添加饲料添加剂提高了氮的生物学价值，D、E和F组较A、B、G组显著提高。

表4断奶前后犊牛营养物质消化的变化(％)

从以上指标可以看出，总体效果以D组(实施例2)最佳，E(实施例3)和F(实施例4)组较好，C组(实施例1)次之，B、A、G(实施例5)组相对较差。这说明，以适当比例组合的桑叶提取物、热带假丝酵母，对犊牛生长和免疫、消化能力有利，而比例失衡的桑叶提取物、热带假丝酵母组合，反而会使饲养效果降低。

综上所述，本发明的饲料添加剂，在代乳品和开食料中添加后，可提高犊牛的免疫指标，改善粪便形态，降低腹泻发生的可能，提高纤维性物质的消化率和氮利用效率，从而促进增重，改善饲料转化率，明显优于单独使用热带假丝酵母和桑叶提取物，具有协同效果。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。