一种测定人体载脂蛋白A1含量的试剂盒

摘要

本发明公开了一种测定人体载脂蛋白A1含量的试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和载脂蛋白A1校准品；所述R1试剂由缓冲液、电解质、促聚剂、复合型非离子表面活性剂、防腐剂组成，所述复合型非离子表面活性剂是Brij35、Tween20和Pluronic？F-88？Pastille按7:0.5:2的比例混合；所述R2试剂由缓冲液、电解质、蛋白保护剂、抗血清、防腐剂组成；所述载脂蛋白A1校准品是由人源性载脂蛋白A1抗原和缓冲液组成。本发明的测定人体载脂蛋白A1含量的试剂盒，利用Brij35、Tween20和Pluronic？F-88？Pastille按一定比例混合使用，采取复合型非离子表面活性剂，同时兼具三种表面活性剂的优点，性能稳定，能够大大提高反应速率和净吸光度，增强抗干扰能力，能够快速、准确的检测人体载脂蛋白A1含量，同时减少抗体使用量，节约成本。

说明书

技术领域

本发明涉及生物化学技术领域，尤其涉及一种测定人体载脂蛋白A1含量的试剂盒。

背景技术

载脂蛋白A1是高密度脂蛋白的主要载脂蛋白，高密度脂蛋白具有防止动脉粥样硬化 的作用，因此，测定人体中载脂蛋白A1的含量已成为防止脑血管疾病的常规检测项目。 非离子型表面活性剂是一种在水溶液中不产生离子的表面活性剂，区别于阴离子表面活性剂 和阳离子表面活性剂，它在水中的溶度是由于分子中具有强亲水性的官能团。实验表明， 在测定人体载脂蛋白A1含量的试剂盒中加入非离子表面活性剂可提高反应速率和净吸光 度，从而降低抗体用量，但现有测定人体载脂蛋白A1含量的试剂盒虽然通过加入非离子 表面活性剂提高了反应速率和净吸光度，也降低了抗体用量，但抗血清用量仍然达20％以 上。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种测定人体载脂蛋白A1含量的试剂盒， 该试剂盒采用复合型非离子表面活性剂，能够大大提高反应速率和净吸光度，增强抗干扰 能力，使试剂性能达到最佳，能够快速、准确的检测人体载脂蛋白A1含量，同时减少抗 血清使用量，节约成本。

本发明解决技术问题采用如下技术方案：

一种测定人体载脂蛋白A1含量的试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和载脂蛋白A1校准 品；

所述R1试剂由缓冲液、电解质、促聚剂、复合型非离子表面活性剂、防腐剂组成， 每L缓冲液中，各组份的质量如下：

所述复合型非离子表面活性剂由Brij35、Tween20和PluronicF-88Pastille按7:0.5:2的 比例混合而成；

所述R2试剂由缓冲液、电解质、蛋白保护剂、抗血清、防腐剂组成，所述缓冲液为 浓度50-100mmol/L的Tirs溶液，缓冲液的pH值为7.0-8.0，所述的每L缓冲液中，各组份 的质量如下：

所述载脂蛋白A1校准品是由人源性载脂蛋白A1抗原和缓冲液组成，所述的每L缓冲 液中，含防腐剂0.98-1.02g；人源性载脂蛋白A1抗原为牛血清白蛋白，在缓冲液中的浓度 包括：0、0.31、0.62、1.25、2.5g/L五个梯度。

作为优选，所述R1试剂每L缓冲液中，各组份的质量如下：

作为优选，所述R2试剂每L缓冲液中，各组份的质量如下：

作为优选，所述载脂蛋白A1校准品每L缓冲液中，含防腐剂0.98g。

作为优选，所述载脂蛋白A1校准品每L缓冲液中，含防腐剂1.02g。

作为优选，所述缓冲液为浓度50-100mmol/L的Tirs溶液，pH值为7.0-8.0；所述电解 质为氯化钠；所述蛋白保护剂为牛血清白蛋白；所述促聚剂为PEG6000；所述防腐剂为叠 氮化钠。

与已有技术相比，本发明有益效果体现在：

本发明的测定人体载脂蛋白A1含量的试剂盒，采用复合型非离子表面活性剂，利用 Brij35、Tween20和PluronicF-88Pastille按一定比例混合使用，使试剂同时兼具三种表面活 性剂的优点，性能稳定，与传统的单一非离子表面活性剂相比，能够大大提高反应速率和 净吸光度，增强抗干扰能力，使试剂性能达到最佳，能够快速、准确的检测人体载脂蛋白 A1含量，同时减少抗体使用量，节约成本。

附图说明

图1是添加单一表面活性剂试剂盒与本发明复合型型表面活性剂的试剂盒测定高值血 清反应速率与净吸光度试验结果图。图1中横坐标为时间min，纵坐标为吸光度值：Abs。 图2是本添加单一表面活性剂试剂盒与本发明复合型型表面活性剂的试剂盒抗干扰能力试 验结果图。图2中纵坐标为g/L。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步的说明，但本发明不仅限于这些实施例，在未脱离 本发明宗旨的前提下，所作的任何改进均落在本发明的保护范围之内。

实施例中，除了另有指明，其他所述的成份和百分比均以按重量计算。

实施例中所使用的试剂均为现有产品，通过市场购买获得，其中PluronicF-88Pastille， 购自美BASF公司，商品名称为：PluronicF-88Pastille

实施例1：

一种测定人体载脂蛋白A1含量的试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和载脂蛋白A1校准 品；

所述R1试剂由缓冲液、电解质、促聚剂、复合型非离子表面活性剂、防腐剂组成， 每L缓冲液中，各组份的质量如下：

所述复合型非离子表面活性剂由Brij35、Tween20和PluronicF-88Pastille按质量比7: 0.5:2的比例混合而成；

所述R2试剂由缓冲液、电解质、蛋白保护剂、抗血清、防腐剂组成，所述缓冲液为 浓度50-100mmol/L的Tirs溶液，缓冲液的pH值为7.0-8.0，所述的每L缓冲液中，各组份 的质量如下：

所述载脂蛋白A1校准品是由人源性载脂蛋白A1抗原和缓冲液组成，所述的每L缓冲 液中，含有叠氮化钠1.02g；人源性载脂蛋白A1抗原为牛血清白蛋白，在缓冲液中的浓度 包括：0、0.31、0.62、1.25、2.5g/L五个梯度。

该实施例中，缓冲液为浓度100mmol/L的Tirs溶液，pH值为8.0；电解质为氯化钠； 蛋白保护剂为牛血清白蛋白；促聚剂为PEG6000；防腐剂为叠氮化钠。

实施例2

一种测定人体载脂蛋白A1含量的试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和载脂蛋白A1校准 品；

所述R1试剂由缓冲液、电解质、促聚剂、复合型非离子表面活性剂、防腐剂组成， 每L缓冲液中，各组份的质量如下：

所述复合型非离子表面活性剂由Brij35(十二烷基聚乙二醇醚)、Tween20和Pluronic F-88Pastille按质量比7:0.5:2的比例混合而成；

所述R2试剂由缓冲液、电解质、蛋白保护剂、抗血清、防腐剂组成，所述缓冲液为 浓度50-100mmol/L的Tirs溶液，缓冲液的pH值为7.0-8.0，所述的每L缓冲液中，各组份 的质量如下：

所述载脂蛋白A1校准品是由人源性载脂蛋白A1抗原和缓冲液组成，所述的每L缓冲 液中，含有叠氮化钠0.98g；人源性载脂蛋白A1抗原为牛血清白蛋白，在缓冲液中的浓度 包括：0、0.31、0.62、1.25、2.5g/L五个梯度。

该实施例中，缓冲液为浓度50mmol/L的Tirs溶液，pH值为7.4；电解质为氯化钠； 蛋白保护剂为牛血清白蛋白；促聚剂为PEG6000；防腐剂为叠氮化钠。

下面结合附图对通过对比试验检测本发明试剂盒吸光度值变化、反应速率与净吸光 度、抗干扰能力等性能。

吸光度试验结果，参见表1，表1中A1、A2、A3试剂分别代表单一的Brij35、Tween20、 PluronicF-88Pastille表面活性剂的试剂盒，其表面活性剂含量与实施例2一致，均为R1试 剂中，每L缓冲液中含量4.0g，其它组份同实施例2；A4试剂为本发明实施例2试剂盒。 B1为抗血清含量12％的R2试剂，B1为抗血清含量25％的R2试剂。

表1

表1中：A1、A2及A3试剂与B1试剂(抗血清含量12％)反应吸光度变化值较A4试 剂反应吸光度变化值低。说明抗原抗体在反应过程中结合率低，形成的复合物较少，相对 加入复合型表面活性剂A4而言，单一表面活性剂的试剂盒的吸光度变化值低，灵敏度差。

如表1所示，当B2试剂抗血清含量为25％时，A1、A2及A3试剂的反应吸光度变化 值正常。而本采用本发明A4试剂，B1试剂抗血清含量为12％时，反应吸光度变化值即达 到正常。因此能够起到减少抗血清用量的效果。

反应速率、净吸光度、抗干扰能力试验

1.反应速率、净吸光度：把分别含复合型表面活性剂、Brij35、Tween20和PluronicF-88 Pastille的R1试剂同时测定一份浓度在2.5g/L的高值血清，其中表面活性剂在R1试剂中 的质量相同，其它组份同上述实施例，实验结果如图1所示，采用复合型表面活性剂的产 品组合，试剂反应的进程、反应吸光度净值明显好于单一表面活性剂。

2.增强抗干扰能力：把分别含复合型表面活性剂、Brij35、Tween20和PluronicF-88 Pastille的R1试剂(同上)同时测定靶值为2.46g/L，并加入20mmol/L的TG(甘油三酯)， 试验结果见图2所示，含有复合型表面活性剂的产品组合对高甘油三酯的抗干扰能力明显 增强。

3.本发明载脂蛋白A1测定方法如表2所示：

表2

1.基本参数

2.双试剂操作

混匀置37℃孵育3-5min，在主波长340nm/辅助波长700nm下，读取各管的吸光度A1

表2中校准液为载脂蛋白A1校准品。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背 离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从 哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权 利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同组分的含义和范围内的所有 变化囊括在本发明内。