一种日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法

摘要

本发明公开一种日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，包括(1)无菌砧木培育：切取秀丽槭带芽枝段，进行组织培养，得秀丽槭无菌苗，将秀丽槭无菌苗斜切截断，得无菌砧木；(2)无菌接穗培育：切取日本枫橙之梦带芽枝段，进行组织培养，得日本枫橙之梦无菌苗，将日本枫橙之梦无菌苗斜切截断，得无菌接穗；(3)组培苗微嫁接：将无菌砧木的斜截面与无菌接穗的斜截面对齐，并固定，得到微嫁接苗，将所述嫁接苗接种于培养基上培养；(4)炼苗移栽：将步骤(3)所得微嫁接苗转入温室初期炼苗，再转入苗床中炼苗，喷雾处理和杀菌处理，炼苗结束后即可移栽；所述方法能提高嫁接效率，提高繁殖数量，成活率高，可进行大规模培育小规格日本枫橙之梦苗。

说明书

技术领域

本发明涉及嫁接繁殖技术领域，具体涉及一种日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方 法。

背景技术

日本枫橙之梦(Acerpalmatum"OrangeDream")的观赏价值高，品种独特，春 天叶色黄中带绿，越受日光照射，叶色越变为黄色，叶边泛红，渐渐为橙黄，到夏 天变为非常漂亮的橙色，叶脉黄色，秋天为金黄色，三季叶色变化明显，而且烈日 下无日焦现象，很受市场欢迎。

目前，日本枫橙之梦主要通过传统嫁接方式，受季节限制，繁殖数量少，成活 率低，人工成本较高的缺陷，且砧木规格最小为1cm左右，不能生产小规格嫁接苗， 不能满足微盆栽需要。

发明内容

有鉴于此，本申请提供一种日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，所述方法能提 高嫁接的效率，提高繁殖数量，环境可控，成活率高，嫁接苗培育周期短，可以不 受季节限制，克服了传统嫁接方式受季节限制，繁殖数量少，成活率低，人工成本 较高的缺陷，可进行大规模的工业化育苗及深加工。

为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是一种日本枫橙之梦的组培苗微 嫁接方法，所述方法包括以下步骤：

(1)无菌砧木培育：切取秀丽槭带芽枝段，进行组织培养，得秀丽槭无菌苗， 将秀丽槭无菌苗斜切截断，得无菌砧木；

(2)无菌接穗培育：切取日本枫橙之梦带芽枝段，进行组织培养，得日本枫橙 之梦无菌苗，将日本枫橙之梦无菌苗斜切截断，得无菌接穗；

(3)组培苗微嫁接：将步骤(1)所述的无菌砧木的斜截面与步骤(2)所述无 菌接穗的斜截面对齐，并固定，得到微嫁接苗，将所述嫁接苗接种于培养基上培养 4—5周，所述培养基的组成为：MS基本培养基，补充0.25—1.50mg/L6-BA、0.02 —0.10mg/LNAA、5—30g/L蔗糖；

(4)炼苗移栽：将步骤(3)所得微嫁接苗转入温室初期炼苗5—8天，再转入 苗床中炼苗4—5周，在所述苗床中炼苗期间，进行喷雾处理和杀菌处理，炼苗结束 后即可移栽。

优选的，所述组培苗微嫁接中，微嫁接苗在培养基中培养的条件为：温度为23 —27℃，光照强度为2300—2600Lx，光照时间为12h/d。

优选的，所述组培苗微嫁接中，所述培养基的组成为：MS基本培养基，补充 0.5—1.25mg/L6-BA、0.03—0.07mg/LNAA、10—25g/L蔗糖。

更为优选的，所述组培苗微嫁接中，所述培养基的组成为：MS基本培养基， 补充1.0mg/L6-BA、0.05mg/LNAA、20g/L蔗糖。

优选的，所述组培苗微嫁接中，所述培养基中还补充3—7g/L琼脂，所述琼脂 的pH值为6.5。

优选的，所述无菌砧木的茎粗为1.5mm以上，所述无菌接穗的茎粗为1mm以 上。

优选的，所述炼苗移栽中，所述苗床的基质为体积比为2：(2—4)的珍珠岩 和腐殖质的混合物。

优选的，所述炼苗移栽中，所述喷雾处理的方法为：晴天时，每间隔10—15min 喷雾3—4s；雨天或阴天时，每间隔18—25min喷雾3—4s，喷雾处理的时间为6— 12天。

优选的，所述炼苗移栽中，所述杀菌处理方法为：每隔5—8天使用杀菌剂溶液 全面喷施嫁接苗。

更为优选的，所述杀菌剂溶液为任意一种选自70％甲基托布津800倍溶液、50％ 多菌灵800倍溶液、75％百菌清800倍溶液。

其中，所述无菌砧木培育中，所述组织培养的方法为：将秀丽槭带芽枝段消毒 灭菌后接种至腋芽诱导培养基上培养；将萌发的腋芽切下，接种至丛生芽诱导培养 基上培养；将分化出的丛生芽切成单株，接种生根培养基培养，即得秀丽槭无菌苗。

所述无菌接穗培育中，所述组织培养的方法为：将日本枫橙之梦带芽枝段消毒 灭菌后接种至腋芽诱导培养基上培养；将萌发的腋芽切下，接种至丛生芽诱导培养 基上培养；将分化出的丛生芽切成单株，接种生根培养基培养，即得日本枫橙之梦 无菌苗。

本申请所述的MS基本培养基具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需 的矿质营养，还能加速愈伤组织的生长，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含 量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范 围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。

所述6-BA为6-苄氨基腺嘌呤，是一种植物生长激素，其主要作用是促进芽的 形成，也可以诱导愈伤组织发生，促进细胞分裂，促进非分化组织分化，促进生物 体内物质的积累，促进侧芽发生，防止老化，是植物组织和细胞培养中的细胞分裂 素。

所述NAA为萘乙酸，是一种植物生长激素，在植物使用扦插法繁殖时使用， 也可用于植物组织培养，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根增加座果，防止 落果，改变雌、雄花比率等，可经叶片、树枝的嫩表皮，种子进入到植株内，随营 养流输导到全株。

本申请与现有技术相比，其详细说明如下：本申请技术方案提供了一种日本枫 橙之梦的组培苗微嫁接方法，包括无菌砧木培育、无菌接穗培育、组培苗微嫁接、 炼苗移栽的步骤，通过对组培苗微嫁接步骤中，培养基的筛选，得到最佳的培养基 组分和配比，采用前述植物生长激素配比形成的培养基，配方简单，培养基成本低， 能加快微嫁接伤口的愈合，保证微嫁接的成活率在90％以上，因而提高了嫁接的效 率，提高繁殖数量，由于其环境可控，成活率高，嫁接苗培育周期短，可以不受季 节限制，因此克服了传统嫁接方式受季节限制，繁殖数量少，成活率低，人工成本 较高的缺陷，可生产规格更小的嫁接苗用于微盆景、微盆栽，解决组培生根难问题， 可进行大规模的工业化育苗及深加工，具有很好的应用前景。

具体实施方式

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例 对本发明作进一步的详细说明。

实施例1

本实施例所述的日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，包括以下步骤：

(1)无菌砧木培育：切取秀丽槭带芽枝段，消毒灭菌后接种至腋芽诱导培养基 上培养；将萌发的腋芽切下，接种至丛生芽诱导培养基上培养；将分化出的丛生芽 切成单株，接种生根培养基培养，得秀丽槭无菌苗，将秀丽槭无菌苗斜切截断，得 无菌砧木，茎粗为1.5mm以上；

(2)无菌接穗培育：切取日本枫橙之梦带芽枝段，消毒灭菌后接种至腋芽诱导 培养基上培养；将萌发的腋芽切下，接种至丛生芽诱导培养基上培养；将分化出的 丛生芽切成单株，接种生根培养基培养，得日本枫橙之梦无菌苗，将日本枫橙之梦 无菌苗斜切截断，得无菌接穗，茎粗为1mm以上；

(3)组培苗微嫁接：将步骤(1)所述的无菌砧木的斜截面与步骤(2)所述无 菌接穗的斜截面对齐，并采用无菌乳胶管固定，得到微嫁接苗，将所述嫁接苗接种 于培养基上培养4—5周，培养温度为23—27℃，光照强度为2300—2600Lx，光照 时间为12h/d。所述培养基的组成为：MS基本培养基，补充1.0mg/L6-BA、0.05mg/L NAA、20g/L蔗糖、5g/L琼脂，其中琼脂的pH值为6.5；

(4)炼苗移栽：将步骤(3)所得微嫁接苗转入温室初期炼苗7天，再转入苗 床中炼苗4—5周，提前7天对苗床进行消毒，苗床的基质为体积比为2：3的珍珠 岩和腐殖质的混合物，在所述苗床中炼苗期间，进行喷雾处理和杀菌处理，炼苗结 束后即可移栽，其中所述喷雾处理的方法为：晴天时，每间隔10min喷雾3s；雨天 或阴天时，每间隔20min喷雾3s，喷雾处理的时间为10天，所述杀菌处理方法为： 每隔7天使用杀菌剂溶液全面喷施嫁接苗，所述杀菌剂溶液为70％甲基托布津800 倍溶液。

实施例2

本实施例所述的日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，与实施例1的区别在于：

步骤(3)组培苗微嫁接中，所述培养基的组成为：MS基本培养基，补充1.0mg/L 6-BA、0.05mg/LNAA、20g/L蔗糖、4g/L琼脂。

实施例3

本实施例所述的日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，与实施例1的区别在于：

步骤(3)组培苗微嫁接中，所述培养基的组成为：MS基本培养基，补充0.5mg/L 6-BA、0.03mg/LNAA、10g/L蔗糖、4g/L琼脂。

实施例4

本实施例所述的日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，与实施例1的区别在于：

步骤(3)组培苗微嫁接中，所述培养基的组成为：MS基本培养基，补充1.25mg/L 6-BA、0.07mg/LNAA、25g/L蔗糖、5g/L琼脂。

实施例5

本实施例所述的日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，与实施例1的区别在于：

步骤(3)组培苗微嫁接中，所述培养基的组成为：MS基本培养基，补充0.25mg/L 6-BA、0.02mg/LNAA、5g/L蔗糖、4g/L琼脂。

实施例6

本实施例所述的日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，与实施例1的区别在于：

步骤(3)组培苗微嫁接中，所述培养基的组成为：MS基本培养基，补充1.50mg/L 6-BA、0.10mg/LNAA、30g/L蔗糖、5g/L琼脂。

实施例7

本实施例所述的日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，与实施例1的区别在于：

步骤(3)组培苗微嫁接中，MS基本培养基，补充0.1mg/L6-BA、0.08mg/LNAA、 20g/L蔗糖、5g/L琼脂。

实施例8

本实施例所述的日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，与实施例1的区别在于：

步骤(3)组培苗微嫁接中，MS基本培养基，补充0.1mg/L6-BA、0.1mg/LNAA、 15g/L蔗糖、5g/L琼脂。

实施例9

本实施例所述的日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，与实施例1的区别在于：

步骤(3)组培苗微嫁接中，MS基本培养基，补充MS基本培养基，补充0.6mg/L 6-BA、0.06mg/LNAA、20g/L蔗糖、5g/L琼脂。

实施例10

本实施例所述的日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，与实施例1的区别在于：

步骤(3)组培苗微嫁接中，MS基本培养基，补充MS基本培养基，补充0.6mg/L 6-BA、0.05mg/LNAA、15g/L蔗糖、5g/L琼脂。

实施例11

本实施例所述的日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，与实施例1的区别在于：

步骤(4)炼苗移栽中，将步骤(3)所得微嫁接苗转入温室初期炼苗6天，再 转入苗床中炼苗4—5周，提前7天对苗床进行消毒，苗床的基质为体积比为2：2 的珍珠岩和腐殖质的混合物，在所述苗床中炼苗期间，进行喷雾处理和杀菌处理， 炼苗结束后即可移栽，其中所述喷雾处理的方法为：晴天时，每间隔10min喷雾4s； 雨天或阴天时，每间隔18min喷雾3s，喷雾处理的时间为9天，所述杀菌处理方法 为：每隔6天使用杀菌剂溶液全面喷施嫁接苗，所述杀菌剂溶液为70％甲基托布津 800倍溶液。

实施例12

本实施例所述的日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，与实施例1的区别在于：

步骤(4)炼苗移栽中，将步骤(3)所得微嫁接苗转入温室初期炼苗8天，再 转入苗床中炼苗4—5周，提前7天对苗床进行消毒，苗床的基质为体积比为1：2 的珍珠岩和腐殖质的混合物，在所述苗床中炼苗期间，进行喷雾处理和杀菌处理， 炼苗结束后即可移栽，其中所述喷雾处理的方法为：晴天时，每间隔15min喷雾3s； 雨天或阴天时，每间隔25min喷雾4s，喷雾处理的时间为8天，所述杀菌处理方法 为：每隔8天使用杀菌剂溶液全面喷施嫁接苗，所述杀菌剂溶液为70％甲基托布津 800倍溶液。

实施例13

本实施例所述的日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，与实施例1的区别在于：

步骤(4)炼苗移栽中，将步骤(3)所得微嫁接苗转入温室初期炼苗5天，再 转入苗床中炼苗4—5周，提前7天对苗床进行消毒，苗床的基质为体积比为2：3 的珍珠岩和腐殖质的混合物，在所述苗床中炼苗期间，进行喷雾处理和杀菌处理， 炼苗结束后即可移栽，其中所述喷雾处理的方法为：晴天时，每间隔15min喷雾3s； 雨天或阴天时，每间隔18min喷雾4s，喷雾处理的时间为12天，所述杀菌处理方 法为：每隔5天使用杀菌剂溶液全面喷施嫁接苗，所述杀菌剂溶液为70％甲基托布 津800倍溶液。

实施例14

本实施例所述的日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，与实施例1的区别在于：

步骤(4)炼苗移栽中，将步骤(3)所得微嫁接苗转入温室初期炼苗7天，再 转入苗床中炼苗4—5周，提前7天对苗床进行消毒，苗床的基质为体积比为2：3 的珍珠岩和腐殖质的混合物，在所述苗床中炼苗期间，进行喷雾处理和杀菌处理， 炼苗结束后即可移栽，其中所述喷雾处理的方法为：晴天时，每间隔10min喷雾3s； 雨天或阴天时，每间隔20min喷雾3s，喷雾处理的时间为10天，所述杀菌处理方 法为：每隔7天使用杀菌剂溶液全面喷施嫁接苗，所述杀菌剂溶液为50％多菌灵800 倍溶液。

实施例15

本实施例所述的日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法，与实施例1的区别在于：

步骤(4)炼苗移栽中，将步骤(3)所得微嫁接苗转入温室初期炼苗7天，再 转入苗床中炼苗4—5周，提前7天对苗床进行消毒，苗床的基质为体积比为2：3 的珍珠岩和腐殖质的混合物，在所述苗床中炼苗期间，进行喷雾处理和杀菌处理， 炼苗结束后即可移栽，其中所述喷雾处理的方法为：晴天时，每间隔10min喷雾3s； 雨天或阴天时，每间隔20min喷雾3s，喷雾处理的时间为6天，所述杀菌处理方法 为：每隔7天使用杀菌剂溶液全面喷施嫁接苗，所述杀菌剂溶液为75％百菌清800 倍溶液。

实施例16

分别统计实施例1—15组培微嫁接方法的嫁接苗的嫁接伤口愈伤组织生长时 间、嫁接伤口愈合活时间、成活率、可嫁接时间、长势，结果见表1。

表1实施例1—15组培微嫁接方法结果统计

注：表中“+”代表嫁接苗长势，“+”越多代表长势越好。

从上表可以看出，实施例1—15的组培苗微嫁接的方法，其嫁接伤口愈合快， 且成活率较高，长势也较好，提高了嫁接的质量，且本申请的组培苗微嫁接方法在 全年均可以进行，不受环境和季节限制，可嫁接时间大大延长，因而也提高了嫁接 的产量，组培苗培养时间短，微嫁接苗培养时间短，大大提高了繁殖的效率，克服 了传统嫁接方法受季节和环境限制，嫁接时间较短，操作技术要求高，嫁接效率低， 繁殖数量少的缺陷。从实施例1—10可以看出，组培苗微嫁接步骤中，培养基的组 成为植物生长激素、蔗糖、琼脂的组合条件时，其伤口愈合更快，而在MS基本培 养基中补充1.0mg/L6-BA、0.05mg/LNAA、20g/L蔗糖，5g/L琼脂时，其嫁接伤口 愈合时间和伤口愈伤组织生长时间为最短，为最佳培养基条件。对比实施例1—15， 可以看出，实施例1的技术方案得到的嫁接苗的嫁接伤口愈合时间和伤口愈伤组织 生长时间更快，成活率最高，且长势较好，为本申请优选的方案。相比于传统嫁接 方法，本申请技术方案可以生产规格更小的嫁接苗用于微盆景、微盆栽，解决组培 生根难问题，其繁殖速度比传统快，受季节影响小。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为 对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技 术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改 进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。