一种具有抗缺氧作用的精芪二参组合物

摘要

一种具有抗缺氧作用的药物组合物，其特征在于由黄芪总苷、丹参酮提取物、丹参酚酸提取物、人参总皂苷和黄精甾体皂苷所组成。经过药效学实验证明，本发明组合物较单一人参皂苷、丹参酚酸提取物、丹参酮提取物、黄芪总苷及黄精甾体皂苷提取物具有更强的抗缺氧活性，体现了中药化学成分之间的协同作用。可将其制成颗粒剂、片剂、软糖等口服制剂。

说明书

技术领域

本发明涉及一种具有耐缺氧作用的天然药物组合物及制备方法， 属于医药技术领域。

技术背景

氧是人类及许多生物赖以生存的重要条件。机体生命活动所需的 氧不能得到充足的供给的状态时则称为低氧或缺氧。缺氧将引起机体 代谢、机能、甚至形态结构发生异常改变。严重或长期缺氧会给机体 带来严重危害，最终可导致机体心、脑等重要脏器由于能量供应不足 而死亡。氧和低氧是生命科学基本理论的重要课题。低氧的形成可分 为三类：第一类是外界环境氧含量降低，使正常生理活动过程不能摄 取足够氧，如高原、潜水和航空等特殊环境导致的缺氧；第二类是指 因疾病等导致外界正常氧量不能充分到达机体内，造成心、脑和呼吸 系统等的缺氧；第三类是机体活动所需氧消耗量，超过了生理动员能 力，造成相对氧供给不足，常见于剧烈运动和超限量劳动。长期低氧 是危害人体健康的重要隐患，严重者甚至可危及生命，可出现肺部疾 患(肺炎、肺水肿等)，胸廓疾患(胸腔积液、气胸等)及其他一些 疾病(如甲状腺机能减退、代谢性碱中毒等)所致的肺的通气和(或) 换气功能障碍，因此，研究耐缺氧的药品或保健食品具有广阔的市场 发展前景。

同时，近年来随着青藏铁路的通车，进藏游客的数量不断攀升， 急性高原反应成为旅游业的一大障碍。同时，随着藏区经济建设的不 断推进，越来越多的进藏工作的人群需要高原习服。此外，还有大量 戎边的军人，常年生活在高海拔地区，迫切需要抗缺氧和抗疲劳的功 能性食品，辅助其尽快适应高原恶劣的极端气候。所以，开发优质、 高效的具有抗缺氧作用的功能性食品具有十分广阔的市场前景。

本发明就是将从天然植物中提取的一种具有抗缺氧作用的天然 药物组合物。该组合物是由有效成分创新组合成天然产物组合物，体 现了中药“多靶点、多效应”的特点，具有标本兼治的效果，以期从 疗效和安全性上有显著的突破和提高。

黄芪总苷为豆科黄芪属植物蒙古黄芪(Astragalusmembranaceus (Fisch.)Bge.Var.mongholicus(Bge.)Hsiao)或荚膜黄芪(Astragalus mebranceus(Fisch.))的干燥根经过提取、纯化而得。具有调节体内 血糖，增强肌体免疫力，促进生长，提高肌体抗氧化能力。主要含有 毛蕊异黄酮、3-羟基-9，10-二甲氧基紫檀烷，还含黄芪皂苷Ⅰ、Ⅴ、 Ⅲ。黄芪皂苷具有抗肿瘤,抗病毒、抗氧化、降糖和改善心血管疾病 等广泛的生物活性。

人参皂苷为五加科植物人参PanaxginsengC.A.Mey.的根经提 取、纯化、加工制成的总皂苷。具有提高机体免疫力、抗菌、改善心 脑血管供血不足、调节中枢神经系统、抗疲劳、延缓衰老等作用。江 山报道了人参总皂苷通过抑制高浓度谷氨酸和K⁺引起的钙浓度增高, 增加膜流动性,清除自由基,延长衰老神经细胞的存活时间,抗缺 血后脑水肿,抗细胞凋亡等途径提高神经细胞的抗缺血损伤作用(徐 州医学院学报，2003，23卷第3期，209)。董立魏报道了人参总皂 苷有抗缺氧作用，可明显延长低压或常压缺氧条件下小白鼠的存活时 间，缺氧状态下红细胞及血红蛋白含量的增加，所以可提高机体缺氧 耐受能力(中国公共卫生，2006，22卷第2期，198)。

丹参酮提取物，是从唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBunge的 根中提取的脂溶性菲醌化合物，主要含有丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、丹 参酮ⅡB、隐丹参酮、异隐丹参酮等10余个丹参酮单体。具有抗菌 作用，尚有抗炎、降温作用。总丹参酮有抗菌、消炎、活血化瘀、抗 心肌缺血、促进伤口愈合、保护心肌细胞等多方面作用，长期服用未 有明显副作用。

丹参酚酸提取物是从唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBunge的 根中提取的水溶性酚酸类化合物，主要含有丹酚酸B、丹酚酸A、丹 参素、紫草酸、咖啡酸、原儿茶醛等。具有抗氧化作用；改善微循环； 促进组织恢复；抗动脉粥样硬化作用；缩小心肌梗死面积、降低心肌 耗氧量等作用；抗菌消炎作用；抗肿瘤作用。

黄精甾体皂苷为百合科植物黄精(PolygonatumsibiricumRed.)、 多花黄精(PolygonatumcyrtonemaHua)和滇黄精(Polygonatum kingianumColl.etHemsl)的干燥根茎中提取分离得到。主要为呋喃 甾烷类皂苷和螺旋甾烷类皂苷等甾体皂苷。具有降血糖、抗肿瘤、改 善学习记忆、抗氧化、抗自由基、对缺血心肌的保护、调节免疫作用。

本发明完成前，还未发现从黄芪中提取的黄芪总苷、人参中提 取的人参皂苷、丹参中提取的丹参酮提取物和丹参酚酸提取物、黄精 中提取的黄精甾体皂苷组成的组合物用于提高缺氧耐受力方面的报 道。

发明内容

本发明人从药效物质基础出发、经过反复试验，选用了黄芪、丹 参、人参及黄精等三种卫生部规定的可用于保健食品的原料，利用从 中分别提取的黄芪总苷、人参皂苷、丹参酮提取物、丹参酚酸提取物 和黄精甾体皂苷组方，所以该处方组成非常安全，用于制备有助于提 高缺氧耐受力的保健食品或药品，无任何毒副作用。在选取本发明的 各原料进行组合搭配时，充分发挥了它们各自的功效，并经合理搭配 产生协调效果。本组合物与市场上具有抗缺氧缺血单一靶点的西药具 有明显的不同；同时与目前已有的有助于提高缺氧耐受力中成药相 比，具有活性更确切，化学组成具有明显的特色，这是本发明的突出 贡献。

本发明的另一个贡献在于，经药效学实验证明本发明组合物较单 一黄芪总苷、人参皂苷、丹参酮提取物、丹参酚酸提取物和黄精甾体 皂苷具有更强抗缺氧的活性，体现了中药化学成分的协同作用。黄芪 总苷具有改善心脏功能，减轻心肌损伤，增加冠脉流量，减轻氧自由 基对心肌细胞的损伤，提高机体的抗氧化能力；人参皂苷补气益血， 具有提高免疫力、抗炎、抗过敏、抗休克和调整血液系统的作用；丹 参酮提取物有抗菌、消炎、活血化瘀、抗心肌缺血、促进伤口愈合、 保护心肌细胞作用；丹参酚酸提取物具有抗氧化、改善微循环、促进 组织恢复、降低心肌耗氧量作用；黄精甾体皂苷具有抗氧化、抗自由 基、对缺血心肌的保护、调节免疫作用。这些化学成分相互协同、多 靶点、多途径作用，从根本上全面调节人机体耐缺氧能力，改善身体 健康状况。本发明通过对缺氧状态下神经系统的保护作用、心血管系 统的保护作用、机体能量代谢的影响，通过提高机体抗氧化能力、对 缺氧诱导细胞凋亡的对抗作用，达到有助于提高机体缺氧耐受力。具 有明显的创新性和技术进步。

本发明提供了一种有助于提高缺氧耐受力的天然产物制成的组 合物，该组合物包括黄芪总苷50-270份，人参皂苷10-100份，丹参 酮提取物10-80份，丹参酚酸提取物30-110份，黄精甾体皂苷10-100 份。优选黄芪总苷130份，人参皂苷25份，丹参酮提取物50份，丹 参酚酸提取物70份，黄精甾体皂苷18份。其按照比例混合组成活性 成份与药用辅料制成的。

本发明的另一目的是提供了分别提取黄芪总苷、人参皂苷、丹参 酮提取物、丹参酚酸提取物、黄精甾体皂苷的方法及组合物的制备方 法，该方法包括：

(1)黄芪用50-95％乙醇回流提取2-3次，每次2-3小时，过滤， 滤液回收乙醇，通过预先处理好的D-101大孔吸附树脂柱，先用去离 子水洗脱，弃去洗脱液，继用40-80％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收 乙醇，干燥，得黄芪总苷；

(2)人参用60-90％乙醇回流提取2-3次，每次2-3小时，过滤， 滤液回收乙醇，通过预先处理好的D-101大孔吸附树脂柱，先用去离 子水洗脱，弃去洗脱液，再用10％乙醇洗脱，弃去洗脱液，继用50-80％ 乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得人参总皂苷；

(3)丹参用95％的乙醇提取2-3次，每次2-3小时，过滤，滤 液回收乙醇，浓缩，干燥，得丹参酮提取物；

(4)将95％乙醇提取过的丹参药渣用去离子水提取两次，每次 1-2小时，合并提取液，浓缩至在50℃条件下相对密度为1.15-1.20 的浸膏，加入1-3倍量乙醇，搅拌，放置，取上清液回收乙醇，浓缩， 干燥，得丹参酚酸提取物；

(5)黄精用50-80％乙醇回流提取2-3次，每次2-3小时，过滤， 滤液回收乙醇，通过预先处理好的D-101大孔吸附树脂柱，先用去离 子水洗脱，弃去洗脱液，继用50-85％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收 乙醇，干燥，得黄精甾体皂苷；

(6)将黄芪总苷、人参皂苷、丹参酮提取物、丹参酚酸提取物、 黄精甾体皂苷按照比例混合均匀后，加入辅料均匀，即得。

本发明又一个目的是提供了上述提取的黄芪总苷、人参皂苷、丹 参酮提取物、丹参酚酸提取物及黄精甾体皂苷组成的组合物在制备有 助于提高缺氧耐受力的药物和保健食品中的应用。

由于本发明首次公开了由黄芪总苷、人参皂苷、丹参酮提取物、 丹参酚酸提取物、黄精甾体皂苷组成的组合物具有有助于提高缺氧耐 受力的作用，因此，将本组合物单独或与其它活性组份或辅料配合制 成药剂，只要是该药剂用于有助于提高缺氧耐受力，均属于本发明的 保护范围。本发明的组合物在制成任何一种剂型时，均具有耐缺氧的 作用。

由黄芪总苷、人参皂苷、丹参酮提取物、丹参酚酸提取物、黄精 甾体皂苷组成的组合物(简称组合物，实例6制备而得)具有耐缺氧 作用，通过以下药效学实验得到证实。

本发明组合物由实例4制备得到，黄芪总苷由实例1制备得到， 人参皂苷由实例2制备得到，丹参酮提取物由实例3制备得到，丹参 酚酸提取物由实例4制备得到，黄精甾体皂苷由实例5制备得到。亚 硝酸钠分析纯、钠石灰，乳酸测定试剂盒由南京建成生物工程研究所 生产，批号为20140502。阳性对照品药红景天参杞胶囊(批号： 20140802，四川麦力若科技发展有限责任公司)。

ICR小鼠160只，体重18～22g，长春高新实验动物中心提供， 实验动物生产许可证号为2015-0008。

每个实验取小鼠100只，分成10组，每组10只。设8个试验组、 1个空白对照组和1个阳性对照组。本发明组合物试验组的剂量分别 为100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg；黄芪总苷、人参总皂苷、丹参 酮提取物、丹参酚酸提取物及黄精甾体皂苷的剂量均为400mg/kg； 空白对照组给予蒸馏水；阳性对照组剂量为400mg/kg。实验各组灌 胃给样品，每天1次，连续30d，灌胃容积为0.1ml/10g体重。

1、本组合物对小鼠常压耐缺氧存活时间的影响

于末次给予样品后1h，将各组小鼠分别放入盛有5g钠石灰的 250ml磨口瓶内(每瓶1只)，加盖密封，以呼吸停止为死亡指征，观 察小鼠存活时间。实验结果见表1。

表1本组合物对小鼠常压耐缺氧存活时间的影响

与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

由表1可知，本发明组合物低、中、高三剂量组均可以延长小鼠 的存活时间，常压耐缺氧存活时间和空白对照组相比，高、中剂量组 具有显著性差异。并且高剂量组小鼠存活时间长于低剂量和中剂量组 小鼠。同时实验数据表明，本发明组合物高、中剂量组较单一黄芪总 苷、人参总皂苷、丹参酮提取物、丹参酚酸提取物及黄精甾体皂苷具 有更强的活性。

2、本发明组合物对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响

于末次给予样品后1h，各组动物按240mg/kg体重剂量腹腔注射 亚硝酸钠，观察动物存活时间。实验结果见表2。

表2本发明组合物对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响

与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

由表2可知，与空白对照组相比，本发明组合物3个剂量组均可 明显延长小鼠亚硝酸钠中毒存活时间，具有显著性差异。本发明组合 物高、中剂量组较单一黄芪总苷、人参总皂苷、丹参酮提取物、丹参 酚酸提取物及黄精甾体皂苷具有更强的活性。

3、本发明组合物对小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间的影响

于末次给予样品后1h，各组动物自颈部逐只断头，立即按秒表 记录小鼠断头后至张口喘气停止时间。实验结果见表3。

表3本发明组合物对小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间的影响

与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

由表3可知，本发明组合物可以明显延长小鼠急性脑缺血性缺氧 存活时间。本发明组合物高、中剂量组较单一黄芪总苷、人参总皂苷、 丹参酮提取物、丹参酚酸提取物及黄精甾体皂苷具有更强的活性。

4、本发明组合物对小鼠运动后血乳酸的影响

于小鼠末次给予样品30min后采血，然后不负重在温度为30℃ 的水中游泳10min后取出立即再次采血，最后休息20min第3次采血。 按试剂盒测定3个时间点的血乳酸含量，并按下式计算乳酸曲线下面 积。实验结果见表4。

血乳酸曲线下面积＝5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血 乳酸值+2×游泳后休息20min的血乳酸值)

表4本发明组合物对小鼠运动后血乳酸的影响

与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

由表4可知，本发明组合物高、中剂量组可明显降低小鼠运动后 血乳酸曲线下面积含量。从而提高机体糖代谢系统的供能水平，减少 蛋白质代谢供能的比例，从而提高抗缺氧能力。同时，试验数据表明 本发明组合物较单一黄芪总苷、人参总皂苷、丹参酮提取物、丹参酚 酸提取物及黄精甾体皂苷具有更强的活性。

本发明是通过下面的实施例进行详细的说明，但不意味着本发明 仅限于此，具体实施方案如下：

实施例1、黄芪总苷的制备

黄芪5kg，用70％乙醇回流提取2次，每次2小时，过滤，滤液 回收乙醇，加水至每1ml含1.0g药材，通过预先处理好的D-101大 孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱5倍柱体积，弃去洗脱液，继用 80％乙醇洗脱4倍柱体积，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得黄芪总 苷。

实施例2、人参总皂苷的制备

人参5kg，用70％乙醇回流提取3次，每次2小时，过滤，滤液 回收乙醇，加水至每1ml含1.0g药材，通过预先处理好的D-101大 孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱4倍柱体积，弃去洗脱液，再用 10％乙醇洗脱3倍柱体积，弃去洗脱液，继用70％乙醇洗脱4倍柱体 积，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得人参总皂苷。

实施例3、丹参酮提取物的制备

丹参8kg，用95％的乙醇提取3次，每次2小时，过滤，滤液回 收乙醇，浓缩，干燥，得丹参酮提取物。

实施例4、丹参酚酸提取物的制备

将95％乙醇提取过的丹参药渣用去离子水提取两次，每次2小 时，合并提取液，浓缩至在50℃条件下相对密度为1.15-1.20的浸膏， 加入2倍量乙醇，搅拌，放置，取上清液回收乙醇，浓缩，干燥，得 丹参酚酸提取物。

实施例5、黄精甾体皂苷的制备

黄精5kg，用75％乙醇回流提取3次，每次2小时，过滤，滤液 回收乙醇，加水至每1ml含1.0g药材，通过预先处理好的D-101大 孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱4倍柱体积，弃去洗脱液，继用 70％乙醇洗脱4倍柱体积，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得黄精甾 体皂苷。

实施例6、胶囊剂的制备

称取黄芪总苷130g，人参皂苷25g，丹参酮提取物50g，丹参酚 酸提取物70g，黄精甾体皂苷18g，药用淀粉适量，混合均匀，制粒， 干燥，整粒，装入胶囊，制成1000粒，即得。每次2粒、每日2次。

或称取黄芪总苷50g，人参皂苷100g，丹参酮提取物10g，丹参 酚酸提取物110g，黄精甾体皂苷10g，药用淀粉适量，混合均匀，制 粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成1000粒，即得。每次2粒、每日 2次。

或称取黄芪总苷270g，人参皂苷10g，丹参酮提取物80g，丹参 酚酸提取物30g，黄精甾体皂苷100g，药用淀粉适量，混合均匀，制 粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成1000粒，即得。每次2粒、每日 2次。

实施例7、片剂的制备

称取黄芪总苷130g，人参皂苷25g，丹参酮提取物50g，丹参酚 酸提取物70g，黄精甾体皂苷18g，药用淀粉适量，混合均匀，制粒， 干燥，整粒，压片，制成1000片，即得。每次2片、每日2次。