一种灵芝孢子中的新成分及其提取分离方法

摘要

本发明公开了一种灵芝孢子油中的新成分及其提取分离方法，其中新成分的化学名称为3β,5α,6β,11-四羟基-(22E,24R)-9,11-裂麦角甾-7,22-二烯-9-酮，提取分离方法包括萃取-脱脂-梯度洗脱-反相柱-梯度洗脱-等度洗脱-重结晶等步骤。本发明提供的灵芝孢子油中的新成分及其提取分离方法成功从灵芝孢子中提取分离了一种新成分，为灵芝孢子油进一步的药理药效提供了物质基础。

说明书

技术领域

本发明涉及提取分离技术领域，尤其涉及一种灵芝孢子中的新成 分及其提取分离方法。

背景技术

灵芝又称林中灵(学名：GanodermaLucidumKarst)，以林中生 长的灵芝最佳。外形呈伞状，菌盖肾形、半圆形或近圆形，为多孔菌 科真菌灵芝的子实体。具有补气安神、止咳平喘的功效，用于眩晕不 眠、心悸气短、虚劳咳喘。

灵芝孢子粉(Ganodermaspore)，是灵芝在生长成熟期，从灵芝 菌褶中弹射出来的极其微小的卵形生殖细胞即灵芝的种子。每个灵芝 孢子只有4－6个微米，是活体生物体，双壁结构，外被坚硬的几丁 质纤维素所包围，人体很难充分吸收。破壁后更适合人体肠胃直接吸 收。它凝聚了是灵芝的精华，具有灵芝的全部遗传物质和保健作用。

灵芝孢子油主要成份是灵芝酸、不饱和脂肪酸、灵芝多糖等。诱 导或促进巨噬细胞的吞噬作用直接和间接毒杀肿瘤细胞。本品能够提 高机体免疫力，减少因放、化疗引起的精神不佳、食欲减退、呕吐、 脱发等情况的发生。

一般认为灵芝孢子油的临床作用与其含量丰富的成分有密切的 关系，但是目前尚未能对灵芝孢子油成分全部鉴定。

发明内容

本发明提供了一种灵芝孢子中的新成分及其提取分离方法。

一种灵芝孢子中的新成分，所述新成分的化学名称为 3β,5α,6β,11-四羟基-(22E,24R)-9,11-裂麦角甾-7,22-二烯-9-酮，化学结 构式为

一种灵芝孢子中的新成分提取分离方法，包括以下步骤：

(1)取灵芝孢子粉，将其装入超临界萃取釜中，经萃取釜萃取 并通过分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ二级分离，收集分离釜II中灵芝孢子油；

(2)灵芝孢子油用体积分数75～85％乙醇萃取三次，乙醇萃取液 用石油醚萃取二次进一步脱脂，减压浓缩稀醇液得乙醇提取物；

(3)乙醇提取物上硅胶柱，用石油醚-丙酮以质量比100:0、98:2、 95:5、9:1、8:2、7:3、0:100梯度洗脱；

(4)合并石油醚-丙酮质量比9:1～7:3洗脱部分得组份样品，该 组份样品上反相柱，用甲醇-甲酸以质量比7:3、8:2、9:1、100:0梯度 洗脱；

(5)甲醇-甲酸质量比100:0洗脱部分得两个组份A、B；

(6)两个组份分别进HPLC，用体积分数65～75％乙腈等度洗脱， 收集t_R＝41-44min的峰，以甲醇重结晶，其中一个组分得新化合物。

优选的，所述步骤(1)中，萃取釜压力为25～35MPa、温度为 55～65℃；分离釜I压力为11～15Mpa、温度为50～60℃；分离釜II压 力为5～7Mpa、温度为40～50℃；夹带剂为95％乙醇；萃取时间为 60～120分钟。

优选的，所述步骤(2)中，灵芝孢子油用体积分数80％乙醇萃 取。

优选的，所述步骤(3)中，硅胶柱为100～200目。

优选的，所述步骤(4)中，反相柱的填料为ODS。

优选的，所述步骤(5)中，甲酸体积分数为1％。

优选的，所述步骤(6)中，乙腈体积分数为70％。

本发明提供的灵芝孢子中的新成分及其提取分离方法成功从灵 芝孢子中提取分离了一种新成分，为灵芝孢子油进一步的药理药效提 供了物质基础。

附图说明

图1是本发明提取分离的新成分分子结构式。

具体实施方式

下面的实施例是对本发明的进一步详细描述。

实施例1

一种灵芝孢子中的新成分提取分离方法，包括以下步骤：

(1)取灵芝孢子粉，将其装入超临界萃取釜中，经萃取釜萃取 并通过分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ二级分离，收集分离釜II中灵芝孢子油； 其中萃取釜压力为25MPa、温度为55℃；分离釜I压力为11Mpa、 温度为50℃；分离釜II压力为5Mpa、温度为40℃；夹带剂为95％ 乙醇；萃取时间为60分钟；

(2)灵芝孢子油用体积分数75％乙醇萃取三次，乙醇萃取液用 石油醚萃取二次进一步脱脂，减压浓缩稀醇液得乙醇提取物；

(3)乙醇提取物上硅胶(100g,100目)柱，用石油醚-丙酮以 质量比100:0、98:2、95:5、9:1、8:2、7:3、0:100梯度洗脱；

(4)合并石油醚-丙酮质量比9:1～7:3洗脱部分得组份样品，该 组份样品上反相柱(ODS，40-75μm)，用甲醇-甲酸以质量比7:3、8:2、 9:1、100:0梯度洗脱；

(5)甲醇-1％甲酸质量比100:0洗脱部分得两个组份A、B；

(6)两个组份分别进HPLC，用体积分数65％乙腈等度洗脱， 收集t_R＝41-44min的峰，以甲醇重结晶，其中一个组分得新化合物。

实施例2

一种灵芝孢子中的新成分提取分离方法，包括以下步骤：

(1)取灵芝孢子粉，将其装入超临界萃取釜中，经萃取釜萃取 并通过分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ二级分离，收集分离釜II中灵芝孢子油； 其中萃取釜压力为35MPa、温度为65℃；分离釜I压力为15Mpa、 温度为60℃；分离釜II压力为7Mpa、温度为50℃；夹带剂为95％ 乙醇；萃取时间为120分钟；

(2)灵芝孢子油用体积分数85％乙醇萃取三次，乙醇萃取液用 石油醚萃取二次进一步脱脂，减压浓缩稀醇液得乙醇提取物；

(3)乙醇提取物上硅胶(100g,150目)柱，用石油醚-丙酮以 质量比100:0、98:2、95:5、9:1、8:2、7:3、0:100梯度洗脱；

(4)合并石油醚-丙酮质量比9:1～7:3洗脱部分得组份样品，该 组份样品上反相柱(ODS，40-75μm)，用甲醇-甲酸以质量比7:3、8:2、 9:1、100:0梯度洗脱；

(5)甲醇-1％甲酸质量比100:0洗脱部分得两个组份A、B；

(6)两个组份分别进HPLC，用体积分数75％乙腈等度洗脱， 收集t_R＝41-44min的峰，以甲醇重结晶，其中一个组分得新化合物。

实施例3

一种灵芝孢子中的新成分提取分离方法，包括以下步骤：

(1)取灵芝孢子粉，将其装入超临界萃取釜中，经萃取釜萃取 并通过分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ二级分离，收集分离釜II中灵芝孢子油； 其中萃取釜压力为30MPa、温度为60℃；分离釜I压力为13Mpa、 温度为55℃；分离釜II压力为6Mpa、温度为45℃；夹带剂为95％ 乙醇；萃取时间为60分钟；

(2)灵芝孢子油用体积分数80％乙醇萃取三次，乙醇萃取液用 石油醚萃取二次进一步脱脂，减压浓缩稀醇液得乙醇提取物；

(3)乙醇提取物上硅胶(100g,200目)柱，用石油醚-丙酮以 质量比100:0、98:2、95:5、9:1、8:2、7:3、0:100梯度洗脱；

(4)合并石油醚-丙酮质量比9:1～7:3洗脱部分得组份样品，该 组份样品上反相柱(ODS，40-75μm)，用甲醇-甲酸以质量比7:3、8:2、 9:1、100:0梯度洗脱；

(5)甲醇-1％甲酸质量比100:0洗脱部分得两个组份A、B；

(6)两个组份分别进HPLC，用体积分数70％乙腈等度洗脱， 收集t_R＝41-44min的峰，以甲醇重结晶，其中一个组分得新化合物。 新成分鉴定如下：

3β,5α,6β,11-四羟基-(22E,24R)-9,11-裂麦角甾-7,22-二烯-9-酮 [3β,5α,6β,11-tetrahydroxy-(22E,24R)-9,11-secoergosta-7,22-dien-6-one, BZY-16]：白色固体；[α]_D²⁵–5.5(c0.18,MeOH)；UV(MeOH)λ_maxnm (1ogε)：203(3.98),230(sh.)；1HNMR(600MHz,C₅D₅N)δ:6.90(1H, brs,H-7),5.29(1H,dd,J＝15.3,8.2Hz,H-22),5.20(1H,dd,J＝15.3,7.8 Hz,H-23),4.76(1H,m,H-3),4.71(1H,brs,H-6),4.33(1H,dd,J＝14.0, 9.0Hz,H-11a),4.13(1H,dd,J＝14.0,9.0Hz,H-11b),3.78(1H,dd,J＝9.0, 6.0Hz,H-14),2.93(1H,brt,J＝12.2Hz,H-4b),2.77(1H,brt,J＝13.6, H-1a),2.46(1H,brd,J＝12.2,H-4a),2.31(1H,m,H-2),2.28(1H,m, H-20),1.95-2.03(3H,overlapped,H-1b,H-2b,H-12a),1.83-1.90(3H, overlapped,H-12b,H-17,H-24),1.82(1H,s,H-19),1.74(1H,m,H-16b), 1.60(1H,m,H-15a),1.58(1H,m,H-16a),1.47(1H,m,H-15b),1.41(1H, m,H-25),1.10(1H,d,J＝6.8,H-21),1.00(1H,s,H-18),0.92(1H,s, J＝6.8,H-28),0.83(1H,s,J＝6.8,H-27),0.81(1H,s,J＝6.8,H-26).¹³C NMR(150MHz,C₅D₅N)δ:29(C-1),32.2(C-2),67(C-3),41.4(C-4), 77(C-5),72.9(C-6),141.5(C-7),136.6(C-8),205.4(C-9),49.1(C-10), 58.5(C-11),42.4(C-12),46.8(C-13),43.3(C-14),26.1(C-15),27.6 (C-16),50.5(C-17)，18.1(C-18),22.2(C-19),49.1(C-20),21.9(C-21), 135.9(C-22),132.7(C-23),43.2(C-24),33.5(C-25),29.9(C-26),20.3 (C-27),17.8(C-28)；ESIMSm/z:947[2M+Na]⁺,485[M+Na]⁺,959 [2M+Cl]^–,497[M+Cl]^–,461[M–H]^–.；ESI(+)MSm/z:947[2M+ Na]⁺,485[M+Na]⁺；ESI(-)MSm/z:959[2M+Cl]^–,497[M+Cl]^–,461 [M–H]^–。

表1.¹H(600MHz)and¹³C(150MHz)NMRdata

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术 人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这 些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权 利要求及其等同物限定。