富马酸喹硫平在制备治疗胶质瘤药物中的应用

摘要

本发明涉及抗肿瘤药物领域，具体而言，涉及富马酸喹硫平在制备治疗胶质瘤药物中的应用。本发明通过在体和离体实验，对富马酸喹硫平(简称KUI)的抗胶质瘤和胶质瘤干细胞的作用以及联合应用化疗药物替莫唑胺(简称TMZ)的效果进行了考察。富马酸喹硫平能抑制胶质瘤的生长，并促进胶质瘤细胞表达少突胶质细胞的标记物，联合替莫唑胺应用，富马酸喹硫平增加胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感性，抑制效果更佳；替莫唑胺作用后，富马酸喹硫平能延缓复发胶质瘤的生长；富马酸喹硫平能够以胶质瘤干细胞为作用靶点，促进胶质瘤干细胞向少突胶质样细胞分化成熟。因此，富马酸喹硫平可用于制备治疗胶质瘤的药物，对胶质瘤的治疗及预后起到良好的效果。

说明书

技术领域

本发明涉及抗肿瘤药物领域，具体而言，涉及富马酸喹硫平在制备治疗胶质瘤药物中的应用。

背景技术

胶质瘤是临床上常见的恶性肿瘤之一，具有复发率高、病程进展快、死亡率高的特点，目前仍缺乏安全、有效的治疗手段。最近研究发现，胶质瘤复发率高可能与胶质瘤干细胞密切相关，胶质瘤干细胞存在于脑胶质瘤组织中，对放疗和化疗均不敏感，是胶质瘤复发的根源。因此，靶向胶质瘤干细胞的治疗药物的研发，可能提高胶质瘤的治愈率。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供富马酸喹硫平在制备治疗胶质瘤药物中的应用。富马酸喹硫平是一种非经典抗精神病药物，主要用于治疗精神分裂症。申请人意外发现，富马酸喹硫平对胶质瘤具有非常好的治疗效果。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

富马酸喹硫平在制备治疗胶质瘤药物中的应用。

本发明通过在体和离体实验，对富马酸喹硫平(简称KUI)的抗胶质瘤和胶质瘤干细胞的作用以及联合应用化疗药物替莫唑胺(简称TMZ)的效果进行了考察。富马酸喹硫平能抑制胶质瘤的生长，并促进胶质瘤细胞表达少突胶质细胞的标记物，联合替莫唑胺应用，富马酸喹硫平增加胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感性，抑制效果更佳；替莫唑胺作用后，富马酸喹硫平能延缓复发胶质瘤的生长；富马酸喹硫平能够以胶质瘤干细胞为作用靶点，促进胶质瘤干细胞向少突胶质样细胞分化成熟。因此，富马酸喹硫平可用于制备治疗胶质瘤的药物，对胶质瘤的治疗及预后起到良好的效果。

根据临床的要求，富马酸喹硫平可制成各种剂型。优选地，所述药物包括富马酸喹硫平和药学上可接受的载体。

进一步地，所述药学可接受的载体包括稀释剂、赋形剂、崩解剂、填充剂、粘合剂、润滑剂或矫味剂中的一种或多种组合；所述赋形剂优选包括甘露醇、乳糖、淀粉、右旋糖酐或微晶纤维素的一种或多种组合；所述崩解剂优选包括聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或羟丙甲基纤维素的一种或多种组合；所述润滑剂优选包括滑石粉或硬脂酸镁。

进一步地，所述药物的剂型包括注射剂、针剂、片剂、冲剂、颗粒剂、丸剂、胶囊、悬浮剂、乳剂、膏剂、霜剂、透皮贴剂中的任一种。

其中，药物中，所述富马酸喹硫平和替莫唑胺0.1～100份，药学可接受的载体0～2000份。

优选地，所述富马酸喹硫平和替莫唑胺0.5～10份，所述药学可接受的载体为1～120份。

具体地，富马酸喹硫平用于治疗胶质瘤。

胶质瘤的治疗方法，包括给予受试者有效量的富马酸喹硫平。

给药方式可以为口服、静脉注射或者是透皮渗透方式，施加于需要治疗的患者，富马酸喹硫平的有效量一般为10-100mg/天/Kg，具体可根据病人的病情、年龄等，由医师决定。

另外，经试验发现，替莫唑胺与富马酸喹硫平一起使用，具有更好的治疗效果。优选地，所述药物还包括替莫唑胺。

优选地，所述富马酸喹硫平与所述替莫唑胺的用量比例为0.1-100：1。

更优选地，所述富马酸喹硫平与所述替莫唑胺的用量比例为0.5-10：1。

更优选地，所述富马酸喹硫平与所述替莫唑胺的用量比例为1-3：1。

替莫唑胺与富马酸喹硫平可制成各种剂型。进一步地，所述药物还包括药学上可接受的载体。

优选地，所述药学可接受的载体包括稀释剂、赋形剂、崩解剂、填充剂、粘合剂、润滑剂或矫味剂中的一种或多种组合。

进一步地，所述赋形剂包括甘露醇、乳糖、淀粉、右旋糖酐或微晶纤维素的一种或多种组合；所述崩解剂优选包括聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或羟丙甲基纤维素的一种或多种组合；所述润滑剂优选包括滑石粉或硬脂酸镁。

进一步地，所述药物的剂型包括注射剂、针剂、片剂、冲剂、颗粒剂、丸剂、胶囊、悬浮剂、乳剂、膏剂、霜剂、透皮贴剂中的任一种。

其中，药物中，所述富马酸喹硫平和替莫唑胺0.1～100份，药学可接受的载体0～2000份。

优选地，所述富马酸喹硫平和替莫唑胺0.5～10份，所述药学可接受的载体为1～120份。

具体地，富马酸喹硫平和替莫唑胺联合应用于治疗胶质瘤。

胶质瘤的治疗方法，包括给予受试者有效量的富马酸喹硫平和替莫唑胺。

给药方式可以为口服、静脉注射或者是透皮渗透方式，施加于需要治疗的患者，具体可根据病人的病情、年龄等，由医师决定。

经试验发现，富马酸喹硫平单独使用时，能增加胶质瘤对替莫唑胺的敏感性；富马酸喹硫平对经替莫唑胺作用后的胶质瘤具有阻止其复发的作用。

本发明提供的药物能够抑制胶质瘤的生长；促进胶质瘤干细胞向少突胶质样细胞分化。

另外，本发明中涉及的稀释剂如水等；填充剂，如淀粉、蔗糖等；粘合剂，如淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等。

本发明提供的药物的剂型按照本领域的常规方法制备即可。如为了将本发明的有效成分制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。

还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

如：为了将给药单元制成胶囊剂，可以将本发明的有效成分与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。

又如：为将本发明的有效成分制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1为本发明实施例1中的KUI抑制胶质瘤生长图，其中，图1A为不同组别的药物在裸鼠皮下接种胶质瘤干细胞2周、3周后的活体成像图；图1B为各组的胶质瘤形成时间和比例图；图1C为各组的胶质瘤生长曲线；图1D为各组在21天取材时胶质瘤大小对比图；图1E为各组在21天取材时胶质瘤的重量；

图2为本发明实施例2中的KUI能够促进胶质瘤细胞向少突胶质样细胞分化图，其中，图2A不同组别不同标记物的免疫组织化学检测图，图2B为不同组别对不同阶段星形胶质细胞标记物的Westernblotting图；图2C为图2B的蛋白含量的分析图；

图3为本发明实施例3中关于KUI抑制脑内胶质瘤的生长图，其中，图3A为不同组别的脑内胶质瘤干细胞在脑内2周、3周后的活体成像图；图3B为各组动物的生存率图；图3C为各组动物在胶质瘤干细胞21天时进行的开场实验结果比较图；

图4为本发明实施例4中KUI延缓TMZ治疗后复发胶质瘤的生长图，其中，图4A为TMZ作用21天后，KUI治疗组和对照组1周、2周后的皮下肿瘤的活体成像图；图4B为TMZ作用21天后，KUI治疗组和对照组1周、2周后的脑内肿瘤的活体成像图；图4C为TMZ作用21天后，KUI治疗组和对照组腹腔胶质瘤生长大小的曲线图；图4D为TMZ作用21天后，各组14天取材时腹腔内的肿瘤大小对比图；

图5为本发明实施例5中离体实验图，其中，图5A为胶质瘤干细胞的相差显微镜图；图5B为CCK-8比色法检测KUI作用三天后细胞的数目柱形图；图5C为免疫荧光检测对照组和KUI处理组胶质瘤干细胞分化3天后，MBP、CC1和GFAP阳性细胞数图；图5D为WesternBlotting检测两组细胞分化后SOX2、Olig2、Olig1和MBP的表达图；

另外，图1-5中，CTL表示对照组，KUI表示KUI治疗组或KUI处理组，TMZ表示替莫唑胺治疗组，KUI+TMZ表示KUI和替莫唑胺联合治疗组。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售获得的常规产品。

一、实验材料及仪器

1.实验动物和生物材料

6-8周成年裸鼠(雄性)60只，体重18-22克，由中国人民解放军第三军医大学实验动物中心提供。8周成年C57小鼠(雄性)60只，体重20-25克，由中国人民解放军第三军医大学实验动物中心提供。荧光素酶标记的小鼠成胶质瘤细胞株GL261由中国人民解放军第三军医大学附属第一医院神经外科提供。

2.实验试剂

富马酸喹硫平(简称KUI)为市售产品，替莫唑胺(Temozolomide)市售产品，RIPA裂解液和PMSF(申能博彩生物科技有限公司)，小鼠抗PCNA、小鼠抗Nestin、小鼠抗Vimentin、小鼠抗CD133、小鼠抗CC1(Dako公司)，兔抗Olig2、兔抗S-100、兔抗GFAP、兔抗Sox2、山羊抗MBP(博士德公司)，DMEM/F12、胎牛血清、青霉素、链霉素和B27(Gibcol公司)，多聚甲醛、重组人EGF(rhEGF)和Accutase溶液(Sigma公司)，bFGF(Upstate公司)，CCK-8试剂盒(碧云天生物技术有限公司)。

3.实验仪器

冰冻切片机(Leica公司)、共聚焦激光扫描显微镜(Olympus公司)、酶标仪(Bio-rad公司)、IVISSpectrum活体成像系统(PerkinElmer公司)。

实施例1

将小鼠成胶质瘤细胞株GL261应用干细胞培养方法培养出胶质瘤干细胞。取6-8周成年雄性裸鼠40只，每只腹股沟皮下接种10⁵个胶质瘤干细胞，随机分为对照组、KUI组、TMZ组与KUI+TMZ联合组，每组10只。对照组同法腹腔内注射等体积生理盐水；KUI组给予腹腔内注射KUI的生理盐水溶液治疗，剂量为20mg/kg体重，每日给药1次，连续给药21天；TMZ组给予腹腔内注射TMZ的生理盐水溶液治疗，剂量为20mg/kg体重，每2天给药1次，连续给药至21天；KUI+TMZ组同时给予腹腔内注射KUI和TMZ的生理盐水溶液治疗，KUI的剂量为20mg/kg体重，每天给药1次，连续给药21天，TMZ的剂量为20mg/kg体重，每2天给药1次，连续给药至21天。各组每天称量一次小鼠体重，并观察小鼠皮下肿瘤生长情况。植瘤后2周、3周应用活体成像系统检测肿瘤大小。治疗结束后(植瘤第21天)，将各组小鼠用1％戊巴比妥钠溶液麻醉，每组5只用0.01MPBS进行心脏灌注冲洗，取出皮下肿瘤，测量大小和重量。结果如图1所示。

结果发现，整个实验过程中四组小鼠的体重变化无明显差异；从图1B可知，治疗第7天，对照组小鼠皮下开始出现肿瘤生长，而KUI组则在治疗第10天开始出现，TMZ组和KUI+TMZ组在治疗第11天开始出现。肉眼测量和活体成像检测(图1A)，显示，在皮下肿瘤生长过程中，对照组的体积明显较其他三组的大，其中以KUI+TMZ组最小。从图1C可知，植瘤后20天，对照组肿瘤大小为1144±42.5mm³，KUI组肿瘤大小为316±30.4mm³，TMZ组肿瘤大小为175±17.6mm³，KUI+TMZ组肿瘤大小为16.4±8.4mm³。对照组与其它三组差异非常显著(P<0.001)，KUI组、TMZ组和KUI+TMZ组之间差异也非常显著(P<0.001)。植瘤后21天取材，结果如图1D，可见，对照组的肿瘤明显较其他三组的大，肿瘤明显较其他三组的重，各组肿瘤的重量如图1E所示，对照组肿瘤重量为0.977±0.302g，KUI组肿瘤大小为0.275±0.098g，TMZ组肿瘤大小为0.239±0.137g，KUI+TMZ组肿瘤大小为0.054±0.034g，对照组与其它三组差异非常显著(P<0.001)，KUI组与TMZ组之间无显著性差异，而KUI组、TMZ组和KUI+TMZ组之间差异非常显著(P<0.001)。

可见，KUI具有抑制裸鼠皮下胶质瘤生长的作用，并且，与TMZ联合应用，效果更为显著。

实施例2

将实施例1中的皮下肿瘤取出，切成两个部分：一部分用RIPA裂解液加上新鲜的1％PMSF提取肿瘤组织蛋白，然后Westernblotting检测少突胶质细胞相关蛋白(MBP)和星形胶质细胞标志物(Vimentin、GFAP)的表达；另一部分用4％多聚甲醛溶液固定后进行常规石蜡包埋和切片(厚5μm)，切片进行HE染色和免疫组织化学染色，免疫组织化学染色的组织用牛血清白蛋白溶液封闭后，分别用小鼠抗PCNA、小鼠抗Nestin、兔抗Olig2、山羊抗MBP、兔抗GFAP孵育过夜，再用相应的生物素标记第二抗体室温孵育2小时，DAB显色封片，显微镜下观察并拍照，用图像分析软件Image-ProPlus5.0进行分析。结果如图2所示。

图2中，PCNA为胶质瘤中增殖细胞核抗原，Nestin为胶质瘤干细胞标记物，Olig2为胶质瘤标记物，MBP为少突胶质细胞标记物，Vimentin和GFAP为不同阶段星形胶质细胞标记物。

图2A免疫组织化学检测结果显示，与对照组比较，KUI组、TMZ组和KUI+TMZ组肿瘤中PCNA和Nestin阳性细胞数明显减少，其中KUI+TMZ组PCNA和Nestin阳性细胞数目最少，KUI组Nestin阳性细胞数较TMZ组少；KUI组和KUI+TMZ组的MBP阳性细胞数较对照组和TMZ组多，KUI组和KUI+TMZ组的GFAP阳性细胞数较对照组和TMZ组少。

图2B和2CWesternblotting检测结果显示，与对照组比较，KUI组和KUI+TMZ组MBP的表达明显上升，而Vimentin和GFAP的表达明显下降。

可见，KUI能够促进胶质瘤细胞向少突胶质样细胞分化。

实施例3

取8周成年雄性C57小鼠40只，每只于脑定位系统下用微量注射器脑内接种10⁴个胶质瘤干细胞，随机分为对照组、KUI组、TMZ组与KUI+TMZ联合组，每组10只。对照组同法腹腔内注射等体积生理盐水；KUI组给予腹腔内注射KUI生理盐水溶液治疗，剂量为20mg/kg体重，每日给药1次，连续给药21天；TMZ组给予腹腔内注射TMZ的生理盐水溶液治疗，剂量为20mg/kg体重，每2天给药1次，连续给药至21天；KUI+TMZ组同时给予腹腔内注射KUI和TMZ的生理盐水溶液治疗，KUI的剂量为20mg/kg体重，每天给药1次，连续给药21天，TMZ的剂量为20mg/kg体重，每2天给药1次，连续给药至21天。每天称量一次小鼠体重。植瘤后2周、3周应用活体成像系统检测肿瘤大小。植瘤第18天时，进行开场实验检测动物运动能力。植瘤第28天时，取各组5只小鼠，用1％戊巴比妥钠溶液麻醉，取出脑组织，观察肿瘤大小。另各组5只小鼠一直饲养，观察小鼠生存情况。结果如图3所示。

结果发现，整个实验过程中四组小鼠的体重变化无明显差异；图3A活体成像检测显示，在脑内肿瘤生长过程中，对照组的肿瘤明显较其他三组的大，其中以KUI+TMZ组最小。图3B显示，对照组小鼠在植瘤后18天出现死亡，第23天全部死亡；KUI组小鼠在植瘤后第18天出现死亡，第45天全部死亡；TMZ组小鼠在植瘤后第21天出现死亡，第36天全部死亡；KUI+TMZ组小鼠第29天出现死亡，一直至第60天仍有80％小鼠存活。植瘤第18天开场实验，总路程比较如图3C所示，对照组小鼠较其他几组动物出现了运动能力下降，总路程与其它三组差异显著(P<0.05)。

可见，KUI能够抑制裸鼠脑内的胶质瘤生长，并且与TMZ合用，效果更为显著。

实施例4

取6-8周成年雄性裸鼠20只，每只腹股沟皮下接种10⁵个胶质瘤干细胞，先用TMZ治疗21天后(给予腹腔内注射TMZ的生理盐水溶液治疗，剂量为20mg/kg体重，每2天给药1次，连续给药至21天)，随机分为对照组和KUI组，每组10只，对照组腹腔内注射等体积生理盐水；KUI组给予腹腔内注射KUI生理盐水溶液治疗，剂量为20mg/kg体重，每日给药1次，连续给药14天。每天称量一次小鼠体重，并观察小鼠皮下肿瘤生长情况。分组后1周、2周应用活体成像系统检测肿瘤大小。治疗结束后取出皮下肿瘤，测量大小和重量。

取8周成年雄性C57小鼠20只，每只于脑定位系统下用微量注射器脑内接种10⁴个胶质瘤干细胞，先用TMZ治疗21天后(给予腹腔内注射TMZ的生理盐水溶液治疗，剂量为20mg/kg体重，每2天给药1次，连续给药至21天)，随机分为对照组和KUI组，每组10只，对照组腹腔内注射等体积生理盐水；KUI组给予腹腔内注射KUI生理盐水溶液治疗，剂量为20mg/kg体重，每日给药1次，连续给药14天。每天称量一次小鼠体重。分组后1周、2周应用活体成像系统检测肿瘤大小。结果如图4所示。

结果发现，整个实验过程中各组小鼠的体重变化无明显差异；肉眼观察和活体成像检测裸鼠(图4A)显示，KUI组皮下肿瘤的体积明显较对照组的小。图4B活体成像检测小鼠脑内肿瘤显示，KUI组肿瘤明显较对照组小。分组后14天取材，如图4C和4D显示，KUI组的肿瘤明显较对照组的小。图4C中箭头表示动物应用TMZ处理21天后分组，分别开始注射生理盐水和KUI生理盐水溶液。

实施例5

1.成胶质瘤细胞株诱导形成胶质瘤干细胞

将小鼠成胶质瘤细胞株GL261在含有10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM/F12培养液中培养扩增后，种植于无血清干细胞培养液(即含有1×B27、10ng/mlEGF和10ng/mlbFGF的DMEM/F12培养液)中，2-3天后在相差显微镜下可见有胶质瘤干细胞球形成；然后每4天离心收集传代1次，以维持胶质瘤干细胞的生长，细胞呈CD133、Sox2和Nestin阳性(图5A)。

2.KUI在高浓度时具有抑制胶质瘤干细胞增殖

将上述胶质瘤干细胞球用Accutase溶液消化成单细胞，以2×10⁵/ml的密度分别接种于96孔板(100μl/孔)，随机分为对照组和KUI处理组。KUI处理组在细胞接种3小时后给予不同终浓度(1、5、10、25、50μM)的KUI处理2天，对照组不给予任何物质。然后采用CCK-8试剂盒检测KUI对细胞活性的影响：每孔加入10μlCCK-8试剂，继续培养4小时，酶标仪于波长450nm检测吸光值。结果如图5B所示。

图5B可以看出，用不同浓度的KUI处理胶质瘤干细胞2天，50μM浓度组的细胞数目较对照组和其他浓度组的明显下降，而对照组与其他浓度组之间无显著性差异(P<0.01)。

3.KUI促进胶质瘤干细胞向少突胶质样细胞分化成熟

将胶质瘤干细胞以2×10⁵/ml的密度分别接种于直径100mm培养皿和底部预设多聚赖氨酸包被盖玻片的24孔培养板中(1ml/孔)，随机分为对照组和KUI处理组，对照组在培养基中加入终浓度为1％的胎牛血清，KUI处理组在培养基中加入终浓度为1％的胎牛血清和终浓度为1、5、10、25、50μmol的KUI，培养3天后收集细胞。直径100mm培养皿中培养的细胞用RIPA裂解液加上新鲜的1％PMSF提取细胞蛋白，再采用Westernblotting检测SOX2、Olig1、Olig2和MBP的表达水平。多聚赖氨酸包被盖玻片上培养的细胞用4％多聚甲醛溶液固定后进行免疫荧光染色，检测CC1、MBP和GFAP的表达水平。

图5C免疫荧光染色结果显示，胶质瘤干细胞在分化培养3天，KUI处理后MBP和CC1阳性细胞明显较对照组多；图5DWesternblotting结果显示，各浓度KUI处理组的SOX2和Olig2表达水平较对照组明显下降，而Olig1和MBP的表达水平较对照组明显上升，并且这种效应有浓度依赖。

以上在体实验结果显示，KUI能抑制胶质瘤的生长，并促进胶质瘤细胞表达少突胶质细胞的标记物，联合TMZ应用，KUI增加胶质瘤细胞对TMZ的敏感性，抑制效果更佳；TMZ作用后，KUI能延缓复发胶质瘤的生长；离体实验结果显示，KUI能够以胶质瘤干细胞为作用靶点，促进胶质瘤干细胞向少突胶质样细胞分化成熟。从而证实了KUI具有抗胶质瘤作用并能够以胶质瘤干细胞为作用靶点发挥抗胶质瘤作用，可用于制备治疗胶质瘤的药物。

另外，本发明还对其他剂量的富马酸喹硫平和/或替莫唑胺进行试验，如富马酸喹硫平与替莫唑胺的重量比例为0.1:1、0.5:1、1:1、5:1、10:1、50:1、100:1等等，均与上述实施例结果一致。

实施例6

本发明提供的药物包括富马酸喹硫平和药学上可接受的载体，制成注射剂、针剂、片剂、冲剂、颗粒剂、丸剂、胶囊、悬浮剂、乳剂、膏剂、霜剂、透皮贴剂等。各剂型的制备进行以下举例说明：

1、制备注射剂

称取0.50g富马酸喹硫平，加入50gPEG-400，使皂苷溶解；配制50gpH5.5的磷酸盐缓冲液，称取0.02g亚硫酸氢钠加入到上述磷酸盐缓冲液中；将缓冲液加入到皂苷的PEG溶液中，混合均匀，加入0.01％针用活性炭100℃保温30分钟，G3垂熔玻璃漏斗过滤、0.22um的微孔滤膜过滤，过滤后的药液分装成2ml/支的针剂50支，分装好的注射剂可以直接压塞、压铝盖成针剂。

2、冻干粉针的制备

称取0.50g富马酸喹硫平，加入50gPEG-400，使皂苷溶解。配制50gpH5.5的磷酸盐缓冲液，称取0.02g亚硫酸氢钠加入到上述磷酸盐缓冲液中；将缓冲液加入到皂苷的PEG溶液中，混合均匀，加入0.01％针用活性炭100℃保温30分钟，G3垂熔玻璃漏斗过滤、0.22um的微孔滤膜过滤；过滤后的药液分装成2ml/支的西林瓶中，经冻干机冻干制成冻干粉针。

3、片剂的制备

称取富马酸喹硫平50g、淀粉950g、滑石粉50g，混合均匀，压成500片。

4、胶囊的制备

称取富马酸喹硫平10g、淀粉50g、羧甲基纤维素钠50g、聚乙烯吡咯烷酮15g、滑石粉5g，混合均匀，装成100个胶囊。

实施例7

本发明提供的药物包括富马酸喹硫平、替莫唑胺和药学上可接受的载体，制成注射剂、针剂、片剂、冲剂、颗粒剂、丸剂、胶囊、悬浮剂、乳剂、膏剂、霜剂、透皮贴剂等。各剂型的制备进行以下举例说明：

1、制备注射剂

称取0.5g富马酸喹硫平和0.5g替莫唑胺，加入50gPEG-400，使皂苷溶解；配制50gpH5.5的磷酸盐缓冲液，称取0.02g亚硫酸氢钠加入到上述磷酸盐缓冲液中；将缓冲液加入到皂苷的PEG溶液中，混合均匀，加入0.01％针用活性炭100℃保温30分钟，G3垂熔玻璃漏斗过滤、0.22um的微孔滤膜过滤，过滤后的药液分装成2ml/支的针剂50支，分装好的注射剂可以直接压塞、压铝盖成针剂。

称取0.1g富马酸喹硫平和1g替莫唑胺，加入50gPEG-400，使皂苷溶解；配制50gpH5.5的磷酸盐缓冲液，称取0.02g亚硫酸氢钠加入到上述磷酸盐缓冲液中；将缓冲液加入到皂苷的PEG溶液中，混合均匀，加入0.01％针用活性炭100℃保温30分钟，G3垂熔玻璃漏斗过滤、0.22um的微孔滤膜过滤，过滤后的药液分装成2ml/支的针剂50支，分装好的注射剂可以直接压塞、压铝盖成针剂。

2、冻干粉针的制备

称取1.5g富马酸喹硫平和0.5g替莫唑胺，加入50gPEG-400，使皂苷溶解。配制50gpH5.5的磷酸盐缓冲液，称取0.02g亚硫酸氢钠加入到上述磷酸盐缓冲液中；将缓冲液加入到皂苷的PEG溶液中，混合均匀，加入0.01％针用活性炭100℃保温30分钟，G3垂熔玻璃漏斗过滤、0.22um的微孔滤膜过滤；过滤后的药液分装成2ml/支的西林瓶中，经冻干机冻干制成冻干粉针。

称取1.0g富马酸喹硫平和0.01g替莫唑胺，加入50gPEG-400，使皂苷溶解。配制50gpH5.5的磷酸盐缓冲液，称取0.02g亚硫酸氢钠加入到上述磷酸盐缓冲液中；将缓冲液加入到皂苷的PEG溶液中，混合均匀，加入0.01％针用活性炭100℃保温30分钟，G3垂熔玻璃漏斗过滤、0.22um的微孔滤膜过滤；过滤后的药液分装成2ml/支的西林瓶中，经冻干机冻干制成冻干粉针。

3、片剂的制备

称取富马酸喹硫平100g、替莫唑胺10g、淀粉950g、滑石粉50g，混合均匀，压成500片。

4、胶囊的制备

称取富马酸喹硫平100g、替莫唑胺1g、淀粉50g、羧甲基纤维素钠50g、聚乙烯吡咯烷酮15g、滑石粉5g，混合均匀，装成100个胶囊。

尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。