α-生育酚在制备治疗血吸虫病药物中的应用

摘要

本发明涉及药物治疗技术领域，具体公开了α-生育酚在制备治疗血吸虫病药物中的应用，通过灌胃α-生育酚给小鼠，其体内的血吸虫尾蚴有不同程度的发育不成熟的现象，因此，其可以抑制血吸虫发育，本发明还利用形态学和超微结构观察揭示α-生育酚对血吸虫发育与生殖的作用，结果发现α-生育酚抑制血吸虫生殖器官发育，从而减少血吸虫在宿主体内的产卵。虫卵是血吸虫的主要致病因子，α-生育酚可明显抑制血吸虫生殖发育及产卵，因此，可用于制备治疗血吸虫病的药物，另外，α-生育酚结构简单，无毒副作用，具有广泛的应用价值。

说明书

技术领域

本发明涉及药物治疗技术领域，更具体地，涉及α-生育酚在制备治疗血吸虫病药物中的应用。

背景技术

血吸虫病是严重危害人类健康的全球第二大热带病，也是热带亚热带流行区国家重点防治的重大传染病之一。血吸虫病是一种免疫性疾病，虫卵是血吸虫病的主要致病因子和关键传播环节。血吸虫造成的病理损伤主要是因虫卵沉积在宿主重要脏器，如肝脏和肠壁（日本血吸虫、曼氏血吸虫、湄公血吸虫和间插血吸虫虫卵）、膀胱（埃及血吸虫虫卵）形成的肉芽肿反应以及持续慢性感染引起的组织损伤修复过度，进而形成的纤维化。

与其他多数的雌雄同体的吸虫不同的是，血吸虫属于雌雄异体，入侵宿主体内的单性血吸虫（单性雌虫或单性雄虫）均不能发育成熟，必需获得对方提供的性激素才能发育成熟，一直以来这一现象让许多研究者认为，血吸虫的发育成熟与生殖决定于其自身因素，但是近期血吸虫基因组测序研究显示：血吸虫表膜具有生长抑素受体、促黄体生成激素释放激素受体、促肾上腺皮质激素受体、β-内啡肽受体、睾酮受体等十余种激素受体，缺乏相应的激素编码基因，强烈提示血吸虫生殖发育还可能受宿主激素水平调控。已有流行病学数据及实验室结果表明，血吸虫感染可影响宿主的的生长发育，降低宿主的生长因子、激素等水平，这也是血吸虫对宿主损害的主要表现之一；另一方面，宿主也会对血吸虫产生作用。

吡喹酮是对多种血吸虫均有显著治疗效果的药物，但吡喹酮的长期反复使用以致出现耐药虫株的潜在风险，且吡喹酮只能杀虫但对沉积宿主组织中的虫卵无效。因此，为消除血吸虫病，除了积极筛查、治疗患者病畜，避免接触疫水外，阻断血吸虫产卵以及虫卵的发育成熟是一种新的有效防治策略。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，提供α-生育酚在制备治疗血吸虫病药物中的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现：

α-生育酚在制备治疗/预防血吸虫病药物中的应用。

申请人通过实验研究发现，经灌胃α-生育酚的小鼠，其体内的血吸虫尾蚴有不同程度的发育不成熟的现象，因此，其可以抑制血吸虫发育，本发明还利用形态学和超微结构观察揭示α-生育酚对血吸虫发育与生殖的作用，结果发现α-生育酚影响血吸虫生殖器官发育，从而抑制血吸虫在体内的扩增。

因此，本发明还提供α-生育酚在制备抑制血吸虫发育成熟的药物中的应用。

另外，本发明还提供α-生育酚在制备抑制血吸虫产卵的药物中的应用。

同时，本发明还提供α-生育酚在制备减少血吸虫虫卵数量的药物中的应用。

本发明还提供一种具有抑制血吸虫发育成熟的药物，该药物含有α-生育酚，或其衍生物，或其与酸或碱形成的可药用的盐。

或者，本发明提供一种用于预防或/和治疗血吸虫病的药物，该药物含有α-生育酚，或其衍生物，或其与酸或碱形成的可药用的盐。

优选地，本发明所述药物还包括药学上可接受的载体和/或赋形剂。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明提供了α-生育酚在制备治疗血吸虫病药物中的应用，通过灌胃α-生育酚给小鼠，其体内的血吸虫尾蚴有不同程度的发育不成熟的现象，因此，其可以抑制血吸虫发育，本发明还利用形态学和超微结构观察揭示α-生育酚对血吸虫发育与生殖的作用，结果发现α-生育酚抑制血吸虫生殖器官发育，从而减少血吸虫在宿主体内的产卵。虫卵是血吸虫的主要致病因子，α-生育酚可明显抑制血吸虫生殖发育及产卵，因此，可用于制备治疗血吸虫病的药物，另外，α-生育酚结构简单，无毒副作用，具有广泛的应用价值。

附图说明

图1为血吸虫成熟虫体和α-生育酚作用后未成熟虫体电镜照片与体长数据图；其中，图1a为解剖镜下图，左侧为雌性血吸虫，较长的为发育成熟虫体，短的为α-生育酚作用后未发育成熟虫体；右侧为雄性血吸虫，较长的为发育成熟虫体，短的为α-生育酚作用后未发育成熟虫体；图1b为体长数据图，其中，MF：成熟雌虫，IF：未成熟雌虫；MM：成熟雄虫，IM：未成熟雄虫，***：与成熟雌虫相比，P<0.001；###：与成熟雄虫相比，P<0.001。

图2为ɑ-生育酚对血吸虫成熟虫体产卵的作用（体外实验）；其中，图2a为成虫产卵显微镜下图，图2b为不同处理条件下成虫产卵数量图。

图3为ɑ-生育酚对血吸虫雌虫生殖器官发育的影响。

图4为ɑ-生育酚对血吸虫雄虫生殖器官发育的影响。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进一步具体描述。下述所使用的实验方法若无特殊说明，均为本技术领域现有常规的方法，所使用的配料或材料，如无特殊说明，均为通过商业途径可得到的配料或材料；本发明不应限制于实施例范围。

实施例1ɑ-生育酚抑制血吸虫生长发育的剂量依赖性

ɑ-生育酚和豆甾醇（对照药物）均购自sigma公司，六周龄Balb/c小鼠购于中山大学实验动物中心（中国，广州），小鼠感染日本血吸虫（中国大陆株）尾蚴用以检测ɑ-生育酚对血吸虫生长发育的影响。

实验过程为：60只小鼠（雌雄各半）经裸露腹部皮肤感染尾蚴（30±1条/鼠）并随机分为6组（每组10只，5只雄，5只雌），对照组1：小鼠经口灌胃100ul生理盐水；对照组2小鼠灌胃100μl溶剂（不含ɑ-生育酚的花生油）；对照组3小鼠灌胃口服100μl溶剂（不含ɑ-生育酚的花生油）+20mg/kg/d豆甾醇；处理组1：小鼠灌胃喂食100μl溶剂（不含ɑ-生育酚的花生油）+1mg/kg/dɑ-生育酚；处理组2：小鼠灌胃喂食100μl溶剂（不含ɑ-生育酚的花生油）+15mg/kg/dɑ-生育酚；助理组3：小鼠灌胃喂食100μl溶剂（不含ɑ-生育酚的花生油）+20mg/kg/dɑ-生育酚。所有组动物的喂食都从尾蚴感染那天起，每天喂食直到感染小鼠被处死，感染尾蚴42d后经麻醉法处死，虫体及组织采样按照我们已发表研究的程序进行（YangF,LongE,WenJ,etal.Linalool,derivedfromCinnamomumcamphora(L.)Preslleafextracts,possessesmolluscicidalactivityagainstOncomelaniahupensisandinhibitsinfectionofSchistosomajaponicum.ParasitVectors.2014,7:407.）。每组虫体减少率计算公式如下：虫体减少率（%）=（1-实验组小鼠体内平均虫体数/对照组小鼠体内平均虫体数）×100%。

实验结果：Balb/c小鼠感染日本血吸虫42天后，所以处理组间体内虫体总数未有显著差异；对照组1、对照组2、对照组3和处理组1的小鼠体内血吸虫虫体均发育成熟，处理组2和处理组3这两组雌、雄未成熟虫体数目均未有统计学差异；另外，该两组小鼠体内发育成熟的雄性虫体体长为9.70mm，雌性成虫体长为12.35mm；而未发育成熟的雄虫长为4.36mm，未发育成熟雌虫体长为7.18mm（图1）。未发育成熟雌虫、雄虫体长均显著短于正常发育的雌虫和雄虫，具体见表1。

实施例2ɑ-生育酚组对血吸虫生长发育的时间依赖性

实验材料同实施例1，实验过程为：60只小鼠（雌雄各半）感染尾蚴（30±1条/鼠）并随机分为6组（每组10只，5只雄，5只雌），对照组1：小鼠灌胃喂100μl生理盐水；对照组2：小鼠灌胃100μl溶剂（不含ɑ-生育酚的花生油）；处理组1：于小鼠感染第1d（皮肤童虫期）开始灌胃喂食100ul溶剂+20mg/kg/dɑ-生育酚；处理组2：于小鼠感染第3d（肺部童虫期）开始灌胃喂食100μl溶剂+20mg/kg/dɑ-生育酚；处理组3：于小鼠感染第11d（肝门-肠静脉童虫期）开始灌胃喂食100μl溶剂+20mg/kg/dɑ-生育酚；处理组4：于小鼠感染第21d（成虫期）开始灌胃喂食100μl溶剂+20mg/kg/dɑ-生育酚；感染尾蚴42d后经麻醉法处死，虫体及组织采样按照我们已发表研究的程序进行（YangF,LongE,WenJ,etal.Linalool,derivedfromCinnamomumcamphora(L.)Preslleafextracts,possessesmolluscicidalactivityagainstOncomelaniahupensisandinhibitsinfectionofSchistosomajaponicum.ParasitVectors.2014,7:407.）。每组虫体减少率计算公式如下：虫体减少率（%）=（1-实验组小鼠体内平均虫体数/对照组小鼠体内平均虫体数）×100%，实验结果如表2。

实施例3分析ɑ-生育酚对成虫产卵的影响

一、虫卵计数

从来自正常感染组小鼠收集了成虫，如前人报道描述进行体外培养（MannVH,MoralesME,RinaldiG,etal.CultureforgeneticmanipulationofdevelopmentalstagesofSchistosomamansoni.Parasitology.2010,137(3):451-462.）。60对合抱的雌雄成虫随机分布6组（每组10对），分别放入加有2ml培养液的12孔细胞培养板中（1对/孔），于37度，5%CO₂下进行培养。

分组如下：对照组1：在培养基（含10%胎牛血清的DMEM培养基）中加入100μl培养基；对照组2：培养基中加入100μl溶剂（Tween80）；对照组3：培养基中加入100μlTween80+20mg/ml豆甾醇，处理组1：100μlTween80+1mg/mlɑ-生育酚；处理组2：100μlTween80+5mg/mlɑ-生育酚；处理组3：100μlTween80+20mg/mlɑ-生育酚；每6h换一次培养液，将每天换取的所有培养液进行离心（5000rpm，10min），沉淀用100μlPBS重悬后，涂载玻片，镜下计数虫卵，连续计数每对虫3d的产卵量，结果如图2。

二、虫体回收及组织取样

醋酸洋红法染色20条成熟虫体和20条未成熟虫体，解剖镜下测定体长并观察虫体生殖器官的发育情况（雄虫：睾丸和抱雌沟；雌虫：子宫、卵巢和卵黄腺）。此外，将虫体连续横向切片后，显微镜下检测成熟和未成熟雌虫、雄虫生殖器官的显微结构，进一步利用扫描电镜检测了虫体体表结构。

结果如图3、4，虫体染色和生殖器官切片染色结果显示：与正常雄性血吸虫成虫相比，未发育成熟雄性成虫不仅睾丸数目减少，睾丸萎缩，且抱雌沟明显变小，变浅；与正常雌性血吸虫成虫相比，未发育成熟的雌性成虫卵巢、子宫和卵黄腺均显著变小，子宫内虫卵稀疏或没有虫卵。