染色体非整倍体（T21、T18、T13）检测试剂盒的质控品及其应用

摘要

本发明公开了一种染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒的质控品。该质控品包括阳性参考品和阴性参考品，所述阳性参考品是由P21溶液、P18溶液和P13溶液组成的成套参考品，所述P21溶液、P18溶液和P13溶液均由溶质和溶剂组成，所述P21溶液、P18溶液和P13溶液的溶剂均为正常溶液，所述正常溶液为染色体核型分析结果为46，XX的正常未孕女性的离体血浆；所述P21溶液的溶质为PL21，所述P18溶液的溶质为PL18，所述P13溶液的溶质为PL13。本发明的质控品经济、简便、有效地解决了染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒的质量检定和性能评价问题。

说明书

技术领域

本发明涉及生物领域中一种染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒的质控 品及其应用。

背景技术

染色体疾病主要指由于染色体数目、结构异常所引起的疾病，临床上以21-三体、 18-三体、13-三体等染色体非整倍体疾病最为常见，患儿多表现为智力障碍、发育迟 缓、多发畸形或成年后生育障碍等，目前尚无有效的治疗手段。产前筛查胎儿染色体 非整倍体疾病对于预防出生缺陷和优生优育具有重要的意义。目前对于胎儿染色体非 整倍体疾病的检测主要基于血清学筛查、超声检查和侵入性产前诊断。传统的基于血 清学和超声的无创产前筛查方法不仅受孕妇的年龄和孕周的限制，而且假阳性率较高， 检出率较低。基于绒毛膜穿刺、羊水穿刺、脐带血穿刺的侵入性产前诊断，准确性高， 但是取样过程中存在流产、宫内感染、致畸等风险，且检测周期较长。

1997年，Lo等人(LoY.M.etal.1997.Lancet)通过用PCR法扩增母体外周 血浆中Y染色体特异的DNA片段，证明在怀有男性胎儿的母血浆中存在胎儿游离DNA (cell-freefetalDNA，cffDNA)。2010年，Lo等人又在ScienceTranslational Medicine杂志发表文章，第一次证明母血外周血浆存在胎儿的全基因组cffDNA序列， 使得从理论上可以利用母体外周血浆进行针对胎儿的几乎全部染色体非整倍体的无创 产前检测。

胎儿游离DNA(cell-freefetalDNA，cffDNA)片段在母体血浆中稳定存在并随 孕周增加含量有所增高，随孕妇分娩而快速消失，是无创产前诊断的理想材料。但是， 由于母体外周血血浆中胎儿游离DNA含量极低且受大量来源于母体背景的游离DNA的 干扰，需要非常灵敏和稳定的检测技术才能对胎儿游离DNA的各种遗传状态做出准确 判断。随着新一代测序技术的出现，其高通量并行化序列分析的技术特点使得通过母 血检测胎儿游离DNA更加简便、快速和稳定，无创产前基因检测技术应运而生。它是 一项安全、准确、简单、快速的新型胎儿染色体疾病检测技术，具有远高于血清学产 前筛查、基本接近产前诊断的准确性，同时具有非侵入性特点，是目前产前诊断技术 体系的补充。

目前,无创产前基因检测技术作为一种产前辅助诊断已在多个国家和地区快速、 广泛的开展。国内的多家厂商均已研制出基于无创产前基因检测技术的染色体非整倍 体(T21、T18、T13)检测试剂盒，由于孕中期孕妇外周血中胎儿DNA的含量(胎儿 游离DNA占外周血中游离DNA总量的质量百分含量)通常在10％的左右，上述检测试 剂盒的检出率均以这一数据为基础。博奥生物集团有限公司已开发出最低检出限为5％ 的检测试剂盒。但是，这些已有的试剂盒均未提供配套的质控品用于试剂盒的质量检 定和性能评价。目前，只有“高通量测序用外周血胎儿染色体非整倍体(T21、T18和 T13)国家参考品”能够用于相关试剂盒的性能评价，但是，它的售价较高(180万/ 套)，使用成本较高。市面上尚无其它相关产品。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测 试剂盒的质控品，该质控品可替代高通量测序用外周血胎儿染色体非整倍体(T21、T18 和T13)国家参考品。

本发明所提供的染色体非整倍体检测试剂盒的质控品，包括阳性参考品和阴性参 考品；

所述阳性参考品是由P21溶液、P18溶液和P13溶液组成的成套参考品，所述P21 溶液、P18溶液和P13溶液均由溶质和溶剂组成，所述P21溶液、P18溶液和P13溶液 的溶剂均为正常溶液，所述正常溶液为染色体核型分析结果为46，XX的正常未孕女 性的离体血浆；所述P21溶液的溶质为PL21，所述P18溶液的溶质为PL18，所述P13 溶液的溶质为PL13；所述PL21由下述方法制备：提取染色体核型分析结果为47，XN， +21的人基因组DNA，对所述人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，对所述扩 增产物采用酶切法进行片段化，用磁珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段， 所述回收的大小为150bp-200bp区间内的DNA片段即为PL21；所述PL18由下述方法 制备：提取染色体核型分析结果为47，XN，+18的人基因组DNA，对所述人基因组DNA 进行全基因组扩增得到扩增产物，对所述扩增产物采用酶切法进行片段化，用磁珠回 收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp-200bp区间内 的DNA片段即为PL18；所述PL13由下述方法制备：提取染色体核型分析结果为47， XN，+13的人基因组DNA，对所述人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，对所 述扩增产物采用酶切法进行片段化，用磁珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA 片段，所述回收的大小为150bp-200bp区间内的DNA片段即为PL13；

所述阴性参考品为选自下述二十四种溶液中的N种溶液，N为小于等于24且大于 等于1的一个自然数：所述正常溶液、T1溶液、T2溶液、T3溶液、T4溶液、T5溶液、 T6溶液、T7溶液、T8溶液、T9溶液、T10溶液、T11溶液、T12溶液、T14溶液、T15 溶液、T16溶液、T17溶液、T19溶液、T20溶液、T22溶液、XXY溶液、XO溶液、XXX 溶液和XYY溶液；所述二十四种溶液中，除所述正常溶液外的其它23种溶液的溶剂均 为所述正常溶液；所述T1溶液的溶质为NT1，所述T2溶液的溶质为NT2，所述T3溶 液的溶质为NT3，所述T4溶液的溶质为NT4，所述T5溶液的溶质为NT5，所述T6溶 液的溶质为NT6，所述T7溶液的溶质为NT7，所述T8溶液的溶质为NT8，所述T9溶 液的溶质为NT9，所述T10溶液的溶质为NT10，所述T11溶液的溶质为NT11，所述T12 溶液的溶质为NT12，所述T14溶液的溶质为NT14，所述T15溶液的溶质为NT15，所 述T16溶液的溶质为NT16，所述T17溶液的溶质为NT17，所述T19溶液的溶质为NT19， 所述T20溶液的溶质为NT20，所述T22溶液的溶质为NT22，所述XXY溶液的溶质是 NXXY，所述XO溶液的溶质是NXO，所述XXX溶液的溶质是NXXX，所述XYY溶液的溶质 是NXYY；

所述NT1由方法1制备，所述方法1为：提取染色体核型分析结果为47，XN，+1 的人基因组DNA，对所述人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，对所述扩增 产物采用酶切法进行片段化，用磁珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段，所 述回收的大小为150bp-200bp区间内的DNA片段即为NT1；

所述NT2、NT3、NT4、NT5、NT6、NT7、NT8、NT9、NT10、NT11、NT12、NT14、NT15、 NT16、NT17、NT19、NT20、NT22、NXXY、NXO、NXXX、NXYY的制备方法与所述方法1 的区别仅在于将所述方法1中的染色体核型分析结果为47，XN，+1的人基因组DNA 分别替换为染色体核型分析结果为47，XN，+2的人基因组DNA、染色体核型分析结果 为47，XN，+3的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+4的人基因组DNA、 染色体核型分析结果为47，XN，+5的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN， +6的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+7的人基因组DNA、染色体核型 分析结果为47，XN，+8的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+9的人基 因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+10的人基因组DNA、染色体核型分析结果 为47，XN，+11的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+12的人基因组DNA、、 染色体核型分析结果为47，XN，+14的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN， +15的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+16的人基因组DNA、染色体核 型分析结果为47，XN，+17的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+19的 人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+20的人基因组DNA、染色体核型分析 结果为47，XN，+22的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XXY的人基因组DNA、 染色体核型分析结果为45，XO的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47,XXX的人 基因组DNA、染色体核型分析结果为47,XYY的人基因组DNA；

所述染色体非整倍体检测试剂盒为检测21-三体综合征、18-三体综合征和13-三 体综合征的试剂盒。

上述染色体非整倍体检测试剂盒的质控品中，所述阳性参考品用于质控所述染色 体非整倍体检测试剂盒(简称待质控试剂盒)的阳性检出率。所述阳性参考品的浓度 可以根据所述待质控试剂盒的检测限选择，阳性质控品的浓度应高于试剂盒检测限的 要求，如所述P21溶液的浓度可为10％(质量百分含量)；所述P18溶液的浓度可为10％ (质量百分含量)；所述P13溶液的浓度可为10％(质量百分含量)。

上述染色体非整倍体检测试剂盒的质控品还可包括检测限参考品；所述检测限参 考品由L21溶液、L18溶液和L13溶液组成，所述L21溶液为L21-1溶液和/或L21-2 溶液，所述L18溶液为L18-1溶液和/或L18-2溶液，所述L13溶液为L13-1溶液和/ 或L13-2溶液；所述L21-1溶液、L21-2溶液、L18-1溶液、L18-2溶液、L13-1溶液 和L13-2溶液的溶剂均为所述正常溶液；所述L21-1溶液和所述L21-2溶液的溶质均 为所述PL21，所述L21-1溶液的浓度为3.5％(质量百分含量)，所述L21-2溶液的浓 度为5.0％(质量百分含量)；所述L18-1溶液和所述L18-2溶液的溶质均为所述PL18， 所述L18-1溶液的浓度为3.5％(质量百分含量)，所述L18-2溶液的浓度为5.0％(质 量百分含量)；所述L13-1溶液和所述L13-2溶液的溶质均为所述PL13，所述L13-1 溶液的浓度为3.5％(质量百分含量)，所述L13-2溶液的浓度为5.0％(质量百分含量)。

上述染色体非整倍体检测试剂盒的质控品中，所述质控品还含有下述三种参考品 中的至少一种：重复性参考品、微缺失微重复参考品和嵌合体参考品；

所述重复性参考品由所述正常溶液、RT21溶液、RT18溶液和RT13溶液组成，所 述RT21溶液、RT18溶液和RT13溶液的溶剂均是所述正常溶液，所述RT21溶液的溶 质是所述PL21，所述RT18溶液的溶质是所述PL18，所述RT13溶液的溶质是所述PL13， 所述RT21溶液、RT18溶液和RT13溶液的浓度均为7.0％(质量百分含量)；

所述微缺失微重复参考品为18号染色体微重复参考品和/或5号染色体微缺失参 考品；所述18号染色体微重复参考品为D18溶液，所述D18溶液由溶质和溶剂组成， 所述D18溶液的溶剂为所述正常溶液，所述D18溶液的溶质为D18，所述D18由下述 方法制备：提取存在18号染色体微重复的人基因组DNA，对所述人基因组DNA进行全 基因组扩增得到扩增产物，对所述扩增产物采用酶切法进行片段化，用磁珠回收大小 为150bp-200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp-200bp区间内的DNA 片段即为D18；所述18号染色体微重复的微重复片段大小≥20Mb；所述5号染色体微 缺失参考品为D5溶液，所述D5溶液由溶质和溶剂组成，所述D5溶液的溶剂为所述正 常溶液，所述D5溶液的溶质为D5，所述D5由下述方法制备：提取存在5号染色体微 缺失的人基因组DNA，对所述人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，对所述 扩增产物采用酶切法进行片段化，用磁珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段， 所述回收的大小为150bp-200bp区间内的DNA片段即为D5；

所述嵌合体参考品为T21嵌合体参考品、T18嵌合体参考品和T13嵌合体参考品， 所述T21嵌合体参考品为T21溶液，所述T21溶液由溶质和溶剂组成，所述T21溶液 的溶剂为所述正常溶液，所述T21溶液的溶质由所述PL21和NB组成；所述NB由下述 方法制备：提取染色体核型分析结果为46，XX的正常未孕女性的人基因组DNA，对所 述基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，对所述扩增产物采用酶切法进行片段 化，用磁珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp-200 bp区间内的DNA片段即为NB；所述T18嵌合体参考品为T18溶液，所述T18溶液由溶 质和溶剂组成，所述T18溶液的溶剂为所述正常溶液，所述T18溶液的溶质由所述PL18 和所述NB组成；所述T13嵌合体参考品为T13溶液，所述T13溶液由溶质和溶剂组成， 所述T13溶液的溶剂为所述正常溶液，所述T13溶液的溶质由所述PL13和所述NB组 成。

上述染色体非整倍体检测试剂盒的质控品中，所述T1溶液、T2溶液、T3溶液、 T4溶液、T5溶液、T6溶液、T7溶液、T8溶液、T9溶液、T10溶液、T11溶液、T12 溶液、T13溶液、T14溶液、T15溶液、T16溶液、T17溶液、T18溶液、T19溶液、T20 溶液、T21溶液、T22溶液、XXY溶液、XO溶液、XXX溶液和XYY溶液的浓度均为10％ (质量百分含量)；

所述T21溶液的溶质中所述PL21和所述NB的质量比为3:7或7:3；所述T18溶 液的溶质中所述PL18和所述NB的质量比为3:7或7:3；所述T13溶液的溶质中所述 PL13和所述NB的质量比为3:7或7:3。

上述染色体非整倍体检测试剂盒的质控品具体可为由所述阳性参考品、所述阴性 参考品、所述检测限参考品、所述重复性参考品、所述微缺失微重复参考品和所述嵌 合体参考品组成的成套产品。

上述染色体非整倍体检测的质控品中，上述六种参考品均单独包装。

含有上述染色体非整倍体检测试剂盒的质控品的试剂盒，以及上述染色体非整倍 体检测试剂盒的质控品中的所述阳性参考品均属于本发明的保护范围。

本发明还提供了制备上述阳性参考品的方法。

该制备上述阳性参考品的方法包括：

1)制备PL21、PL18和PL13；

按照包括如下步骤的方法制备PL21：提取染色体核型分析结果为47，XN，+21的 人基因组DNA，对所述人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，对所述扩增产 物采用酶切法进行片段化，用磁珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段，所述 回收的大小为150bp-200bp区间内的DNA片段即为PL21；

按照包括如下步骤的方法制备PL18：提取染色体核型分析结果为47，XN，+18的 人基因组DNA，对所述人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，对所述扩增产 物采用酶切法进行片段化，用磁珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段，所述 回收的大小为150bp-200bp区间内的DNA片段即为PL18；

按照包括如下步骤的方法制备PL13：提取染色体核型分析结果为47，XN，+13的 人基因组DNA，对所述人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，对所述扩增产 物采用酶切法进行片段化，用磁珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段，所述 回收的大小为150bp-200bp区间内的DNA片段即为PL13；

2)将所述PL21和溶剂混合得到所述P21溶液；所述溶剂为染色体核型分析结果 为46，XX的正常未孕女性的离体血浆；将所述PL18和所述溶剂混合得到所述P18溶 液；将所述PL13和所述溶剂混合得到所述P13溶液；所述P21溶液、所述P18溶液和 所述P13溶液为所述阳性参考品。

上述染色体非整倍体检测试剂盒的质控品在染色体非整倍体检测试剂盒的质量 检定中的应用也属于本发明的保护范围。

上文中，对所述扩增产物采用酶切法进行片段化均采用NEBDNAFragmentase进 行酶切。

本发明的染色体非整倍体检测试剂盒的质控品降低了制备和使用成本，提高了制 备效率，在组成方面具有以下特点：(1)设置了染色体非整倍体(T21、T18、T13)检 测试剂盒检测所覆盖的三种三体综合症(21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体 综合征)的阳性质控品，并根据三种综合征的发病率设置各阳性质控品的数量，阳性 质控品可满足市场上大多检测试剂盒的检测需求；(2)阴性参考品不仅设置阴性样本， 同时设置其他常染色体非整倍体异常样品，保证性染色体和其他常染色体非整倍体异 常不会对检测结果造成影响；(3)设置了检测限参考品可满足最低检出限为5％的检测 试剂盒的检测需求；(4)设置了微重复微缺失参考品和嵌合体参考品用以质控试剂盒 对微重复微缺失样本和嵌合体样本的检出准确率，微重复微缺失参考品中设置了一种 试剂盒检测范围内的微重复微缺失参考品且控制微重复微缺失片段大小，可提高本参 考品对试剂盒质控的精密度，设置一种非试剂盒检测范围内的微重复微缺失参考品， 可保证待检试剂盒检测范围外的微重复微缺失不会影响检测结果；嵌合体参考品中设 置30％和70％两种嵌合比例，全面反映试剂盒对一定比例的嵌合体样本的检出能力。

本发明提供的一种染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒的质控品及其制 备方法，经济、简便、有效地解决了染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒的 质量检定和性能评价问题。该质控品的基本成分为血浆与DNA的混合物，与孕妇外周 血浆接近程度高，可以更准确的反应胎儿外周血浆状态，且具有保存时间更长的特点。 该质控品全程监控染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒的质量情况，不仅与 “高通量测序用外周血胎儿染色体非整倍体(T21、T18和T13)国家参考品”在产品 的质量检定和性能评价方面具有同等效果，且具有配置简便，制造和使用成本低的优 点。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述基因组DNA均为corriel研究院(CoriellInstituteforMedicalResearch) 的产品：染色体核型分析结果为47，XY，+21的人基因组DNA(21-三体综合征患者的 基因组DNA)(商品目录号为NG05397)；染色体核型分析结果为47，XY，+13的人基因 组DNA(13-三体综合征患者的基因组DNA)(商品目录号为NA02948)；染色体核型分 析结果为47，XX，+18的人基因组DNA(18-三体综合征患者的基因组DNA)(商品目录 号为NG12614)；染色体核型分析结果为47，XY，+15的人基因组DNA(15-三体综合征 患者的基因组DNA)(商品目录号为NA03184)；染色体核型分析结果为47，XXY的人基 因组DNA(克林菲尔特综合征患者的基因组DNA)(商品目录号为NA03102)；染色体核 型分析结果为45，XO的人基因组DNA(商品目录号为NG08006)；存在18号染色体微 重复的人基因组DNA(商品目录号为NA20087)，该18号染色体微重复的微重复片段大 小≥20Mb；存在5号染色体微缺失的人基因组DNA(商品目录号为NA16595)；染色体 核型分析结果为46，XX的正常未孕女性的B淋巴细胞(商品目录号为GM14440)。

晶芯染色体异常检测基因芯片(G4884A)和染色体非整倍体(T21、T18、T13)检 测试剂盒(半导体测序法)(国械注准20153400300)均为博奥生物集团有限公司产品。

下述实施例中溶液的浓度为溶质(待掺入的片段化DNA)的质量占溶液中DNA质量 的百分数。

实施例1、检测21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征的试剂盒的成 套质控品。

本实施例以博奥生物集团有限公司的染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂 盒(半导体测序法)作为待质控试剂盒，阐明检测21-三体综合征、18-三体综合征和 13-三体综合征的试剂盒的成套质控品。

本实施例所提供的检测21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征的试剂 盒的成套质控品，简称为T21、T18和T13检测试剂盒的成套质控品。T21、T18和T13 检测试剂盒的成套质控品，由阳性参考品、检测限参考品、阴性参考品、重复性参考 品、微缺失微重复参考品和嵌合体参考品这六种参考品组成。这六种参考品均为溶液， 这六种参考品溶液的溶剂均为正常溶液，该正常溶液为染色体核型分析结果为46，XX 的正常未孕女性的离体血浆。这六种参考品的制备方法如下。

1、阳性参考品的制备

阳性参考品用于质控待质控试剂盒的阳性检出率。阳性参考品是由P21溶液、P18 溶液和P13溶液组成的成套参考品，所述P21溶液、P18溶液和P13溶液的溶剂均为 上述正常溶液，P21溶液的溶质为PL21(制备方法见1.1)，P18溶液的溶质为PL18(制 备方法见1.2)，P13溶液的溶质为PL13(制备方法见1.3)。阳性参考品的浓度根据待 质控试剂盒的阳性标准设定，本实施例的待质控试剂盒(博奥生物集团有限公司的染 色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒(半导体测序法))的阳性标准是5％。

1.1、制备PL21

提取上述染色体核型分析结果为47，XY，+21的人基因组DNA，采用sigmaWGA4 试剂盒对人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，将所述扩增产物用NEBDNA Fragmentase进行酶切使扩增产物片段化，用AgencountAmpureXP磁珠回收大小为 150bp-200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp-200bp区间内的DNA片 段即为PL21；

1.2、制备PL18

提取染色体核型分析结果为47，XX，+18的人基因组DNA，采用sigmaWGA4试 剂盒对人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，将所述扩增产物用NEBDNA Fragmentase进行酶切使扩增产物片段化，用AgencountAmpureXP磁珠回收大小为 150bp-200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp-200bp区间内的DNA片 段即为PL18；

1.3、制备PL13

提取染色体核型分析结果为47，XY，+13的人基因组DNA，采用sigmaWGA4试 剂盒对人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，将所述扩增产物用NEBDNA Fragmentase进行酶切使扩增产物片段化，用AgencountAmpureXP磁珠回收大小为 150bp-200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp-200bp区间内的DNA片 段即为PL13。

其中，采用sigmaWGA4试剂盒对人基因组DNA进行全基因组扩增的方法如下：

(1)裂解和片段化：根据试剂盒说明书，将人基因组DNA稀释至1-10pg/μL， 取上述稀释后的DNA9μL与预先配置的Lysis&FragmentationBuffer(Proteinase K与10xSingleCellLysis&FragmentationBuffer按照1:16配置)1μL混合， 按照下述反应条件进行细胞裂解和片段化：50℃，1h；99℃，4min。

(2)文库准备：将1xSingleCellLibraryPreparationBuffer与Library StabilizationSolution按照2:1的比例混合，取上述混合液3μL和步骤(1)反应 产物10μL进行下述反应：95℃，2min；反应后立刻将反应液置于冰上，Library PreparationEnzyme1μL进行混合，按照下述反应条件进行文库准备：16℃，20min； 24℃，20min；37℃，20min；75℃，5min。

(3)PCR扩增：按照下表中所示进行体系配置：

总体系75μL/管 单个使用量(μL) DNA 14 10x Amplification Master Mix 7.5 Water 48.5 WGA DNA Polymerase 5

配置完成后，按照下述反应条件进行扩增：95℃，3min；94℃，30s，65℃， 5min，25个循环。得到全基因组扩增产物(简称WGA产物)。

扩增产物用NEBDNAFragmentase进行酶切的方法如下：取上述WGA产物1μg， 10XFragmentaseReactionBufferV22μL振荡混匀，37℃温浴30min；反应结束 后，加入5μLEDTA溶液终止反应，得到酶切产物。

用AgencountAmpureXP磁珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段的方法 如下：使用25μLAgencountAmpureXP磁珠进行酶切产物回收，加入磁珠后室温静 置3min，将Ep管放到磁力架上静置3min，弃废液，加入500μL70％无水乙醇洗涤磁 珠两次，弃废液，室温静置至磁珠干燥，在管内加入25μLddH₂O，室温静置5min， 将Ep管放到磁力架上静置3min，吸出管内液体即为纯化产物150bp-200bp区间内的 DNA片段。

1.4、正常溶液的制备

分离染色体核型分析结果为46，XX的正常未孕女性的外周血血浆，该外周血血 浆为正常溶液，是质控品的溶剂。提取该外周血血浆中游离的DNA，使用Qubit仪测 定该外周血血浆中游离的DNA浓度。上述外周血经晶芯染色体异常检测基因芯片验证 无异常。

1.5、P21溶液、P18溶液和P13溶液的制备

以上述正常溶液为溶剂，以上述PL21为溶质，将溶剂和溶质混合，得到PL21溶 液，PL21溶液的浓度为10％(质量百分含量)。将PL21溶液按照600μL/管进行分装， 分装后取两管，分别命名为P1、P2和P3。

以上述正常溶液为溶剂，以上述PL18为溶质，将溶剂和溶质混合，得到PL18溶 液，PL18溶液的浓度为10％(质量百分含量)。将PL18溶液按照600μL/管进行分装， 分装后取两管，分别命名为P4和P5。

以上述正常溶液为溶剂，以上述PL13为溶质，将溶剂和溶质混合，得到PL13溶 液，PL13溶液的浓度为10％(质量百分含量)。将PL13溶液按照600μL/管进行分装， 分装后取两管，分别命名为P6和P7。

2、检测限参考品的制备

检测限参考品用于质控待质控试剂盒的检测限。该检测限参考品由L21溶液、L18 溶液和L13溶液组成，L21溶液分为L21-1溶液和L21-2溶液，L18溶液分为L18-1 溶液和L18-2溶液，L13溶液分为L13-1溶液和L13-2溶液；L21-1溶液、L21-2溶液、 L18-1溶液、L18-2溶液、L13-1溶液和L13-2溶液的溶剂均为上述正常溶液；L21-1 溶液和L21-2溶液的溶质均为上述PL21，L21-1溶液的浓度为3.5％(质量百分含量)， L21-2溶液的浓度为5.0％(质量百分含量)；L18-1溶液和L18-2溶液的溶质均为上述 PL18，L18-1溶液的浓度为3.5％(质量百分含量)，L18-2溶液的浓度为5.0％(质量百 分含量)；L13-1溶液和L13-2溶液的溶质均为上述PL13，L13-1溶液的浓度为3.5％ (质量百分含量)，L13-2溶液的浓度为5.0％(质量百分含量)。将L21-1溶液、L21-2 溶液、L18-1溶液、L18-2溶液、L13-1溶液和L13-2溶液按照600μL/管进行分装，分 装后取1管，分别命名为L1、L2、L3、L4、L5和L6。该检测限参考品的浓度根据待 质控试剂盒的检测限标准设定，本实施例的待质控试剂盒(博奥生物集团有限公司的 染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒(半导体测序法))的检测限是5％。

3、阴性参考品的制备

阴性参考品用于质控待质控试剂盒的阴性检出率。本步骤提供了两种阴性参考品， 名称分别为阴性参考品A和阴性参考品B。

该阴性参考品A为上述正常溶液、T15溶液、T16溶液、XXY溶液和XO溶液。T15 溶液、T16溶液、XXY溶液和XO溶液的溶剂均为上述正常溶液。T15溶液的溶质是NT15 (见3.1)，T16溶液的溶质NT16(见3.2)，XXY溶液的溶质是NXXY(见3.3)，XO溶 液的溶质是NXO(见3.4)。T15溶液、T16溶液、XXY溶液和XO溶液的浓度均为10.0％ (质量百分含量)。将正常溶液按照600μL/管进行分装，分装后取3管，分别命名为 N1、N2和N3。将T15溶液、T16溶液、XXY溶液和XO溶液按照600μL/管进行分装， 分装后各取1管，分别命名N4、N5、N6和N7。

3.1、NT15的制备

NT15由下述方法制备：提取染色体核型分析结果为47，XY，+15的人基因组DNA， 采用sigmaWGA4试剂盒对人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，将所述扩 增产物用NEBDNAFragmentase进行酶切使扩增产物片段化，用AgencountAmpureXP 磁珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp-200bp 区间内的DNA片段即为NT15。其具体制备方法除将1.1的染色体核型分析结果为47， XY，+21的人基因组DNA替换为上述染色体核型分析结果为47，XY，+15的人基因组 DNA外，其它操作完全同1.1。

3.2、NT16的制备

NT16由下述方法制备：提取染色体核型分析结果为47，XN，+16的人基因组DNA， 采用sigmaWGA4试剂盒对人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，将所述扩 增产物用NEBDNAFragmentase进行酶切使扩增产物片段化，用AgencountAmpureXP 磁珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp-200bp 区间内的DNA片段即为NT16。其具体制备方法除将1.1的染色体核型分析结果为47， XY，+21的人基因组DNA替换为上述染色体核型分析结果为47，XN，+16的人基因组 DNA外，其它操作完全同1.1。

3.3、NXXY的制备

NXXY由下述方法制备：提取染色体核型分析结果为47，XXY的人基因组DNA，采 用sigmaWGA4试剂盒对人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，将所述扩增 产物用NEBDNAFragmentase进行酶切使扩增产物片段化，用AgencountAmpureXP 磁珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp-200bp 区间内的DNA片段即为NXXY。其具体制备方法除将1.1的染色体核型分析结果为47， XY，+21的人基因组DNA替换为上述染色体核型分析结果为47，XXY的人基因组DNA 外，其它操作完全同1.1。

3.4、NXO的制备

NXO由下述方法制备：提取染色体核型分析结果为45，XO的人基因组DNA，采用 sigmaWGA4试剂盒对人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，将所述扩增产 物用NEBDNAFragmentase进行酶切使扩增产物片段化，用AgencountAmpureXP磁 珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp-200bp区 间内的DNA片段即为NXO。其具体制备方法除将1.1的染色体核型分析结果为47，XY， +21的人基因组DNA替换为上述染色体核型分析结果为45，XO的人基因组DNA外，其 它操作完全同1.1。

该阴性参考品的浓度根据待质控试剂盒的阴性标准设定，本实施例的待质控试剂 盒(博奥生物集团有限公司的染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒(半导体 测序法))的阴性标准是5％。

阴性参考品B为下述二十四种溶液：所述正常溶液、T1溶液、T2溶液、T3溶液、 T4溶液、T5溶液、T6溶液、T7溶液、T8溶液、T9溶液、T10溶液、T11溶液、T12 溶液、T14溶液、T15溶液、T16溶液、T17溶液、T19溶液、T20溶液、T22溶液、XXY 溶液、XO溶液、XXX溶液和XYY溶液；所述二十四种溶液中，除所述正常溶液外的其 它23种溶液的的溶剂均为所述正常溶液；所述T1溶液的溶质为NT1，所述T2溶液的 溶质为NT2，所述T3溶液的溶质为NT3，所述T4溶液的溶质为NT4，所述T5溶液的 溶质为NT5，所述T6溶液的溶质为NT6，所述T7溶液的溶质为NT7，所述T8溶液的 溶质为NT8，所述T9溶液的溶质为NT9，所述T10溶液的溶质为NT10，所述T11溶液 的溶质为NT11，所述T12溶液的溶质为NT12，所述T14溶液的溶质为NT14，所述T15 溶液的溶质为NT15，所述T16溶液的溶质为NT16，所述T17溶液的溶质为NT17，所 述T19溶液的溶质为NT19，所述T20溶液的溶质为NT20，所述T22溶液的溶质为NT22， 所述XXY溶液的溶质是NXXY，所述XO溶液的溶质是NXO，所述XXX溶液的溶质是NXXX， 所述XYY溶液的溶质是NXYY；

所述NT1、NT2、NT3、NT4、NT5、NT6、NT7、NT8、NT9、NT10、NT11、NT12、NT14、 NT16、NT17、NT19、NT20、NT22、NXXY、NXO、NXXX、NXYY的制备方法与所述NT15制 备方法的区别仅在于将3.1的NT15制备方法中的染色体核型分析结果为47，XY，+15、 的人基因组DNA分别替换为染色体核型分析结果为47，XN，+1的人基因组DNA、染色 体核型分析结果为47，XN，+2的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+3 的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+4的人基因组DNA、染色体核型分 析结果为47，XN，+5的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+6的人基因 组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+7的人基因组DNA、染色体核型分析结果为 47，XN，+8的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+9的人基因组DNA、染 色体核型分析结果为47，XN，+10的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN， +11的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+12的人基因组DNA、、染色体 核型分析结果为47，XN，+14的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+16 的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+17的人基因组DNA、染色体核型分 析结果为47，XN，+19的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+20的人基 因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+22的人基因组DNA、染色体核型分析结果 为47，XXY的人基因组DNA、染色体核型分析结果为45，XO的人基因组DNA、染色体 核型分析结果为47，XXX的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XYY的人基因 组DNA。

4、重复性参考品的制备

重复性参考品用于质控待质控试剂盒的重复性。

该重复性参考品由上述正常溶液、RT21溶液、RT18溶液和RT13溶液组成，所述 RT21溶液、RT18溶液和RT13溶液的溶剂均是所述正常溶液，所述RT21溶液的溶质是 所述PL21，所述RT18溶液的溶质是所述PL18，所述RT13溶液的溶质是所述PL13， 所述RT21溶液、RT18溶液和RT13溶液的浓度均为7.0％(质量百分含量)。将上述正 常溶液、RT21溶液、RT18溶液和RT13溶液按照6000μL/管进行分装，分装后各取1 管，分别命名为R4、R1、R2和R3。

该重复性参考品的浓度根据待质控试剂盒的重复性标准设定，本实施例的待质控 试剂盒(博奥生物集团有限公司的染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒(半 导体测序法))的重复性标准是10次。

5、微缺失微重复参考品的制备

微缺失微重复参考品用于质控待质控试剂盒对微重复微缺失样本的检出准确率。

微缺失微重复参考品为18号染色体微重复参考品和5号染色体微缺失参考品；18 号染色体微重复参考品为D18溶液，D18溶液由溶质和溶剂组成，D18溶液的溶剂为 上述正常溶液，D18溶液的溶质为D18(见5.1)。5号染色体微缺失参考品为D5溶液， D5溶液由溶质和溶剂组成，D5溶液的溶剂为上述正常溶液，D5溶液的溶质为D5(见 5.2)。D18溶液和D5溶液的浓度均为10.0％(质量百分含量)。将D18溶液和D5溶液 按照6000μL/管进行分装，分装后各取1管，分别命名为D1和D2。

5.1、D18的制备

D18由下述方法制备：提取上述存在18号染色体微重复的人基因组DNA，采用 sigmaWGA4试剂盒对人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，将所述扩增产 物用NEBDNAFragmentase进行酶切使扩增产物片段化，用AgencountAmpureXP磁 珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp-200bp区 间内的DNA片段即为D18；所述18号染色体微重复的微重复片段大小≥20Mb。其具体 制备方法除将1.1的染色体核型分析结果为47，XY，+21的人基因组DNA替换为上述 存在18号染色体微重复的人基因组DNA外，其它操作完全同1.1。

5.2、D5的制备

D5由下述方法制备：提取上述存在5号染色体微缺失的人基因组DNA，采用sigma WGA4试剂盒对人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，将所述扩增产物用NEB DNAFragmentase进行酶切使扩增产物片段化，用AgencountAmpureXP磁珠回收大 小为150bp-200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp-200bp区间内的DNA 片段即为D5。其具体制备方法除将1.1的染色体核型分析结果为47，XY，+21的人基 因组DNA替换为上述存在5号染色体微缺失的人基因组DNA外，其它操作完全同1.1。

6、嵌合体参考品的制备

嵌合体参考品用于质控待质控试剂盒的嵌合体样本的检出准确率。嵌合体参考品 为T21嵌合体参考品、T18嵌合体参考品和T13嵌合体参考品，T21嵌合体参考品为 T21溶液，T21溶液分为T21-3溶液和T21-7溶液，T21-3溶液和T21-7溶液由溶质和 溶剂组成，T21-3溶液和T21-7溶液的溶剂均为上述正常溶液，T21-3溶液和T21-7 溶液的溶质均由上述PL21和NB(见6.1)组成。T21-3溶液的溶质中，PL21和NB的 质量比为3:7；T21-7溶液的溶质中，PL21和NB的质量比为7:3。T21-3溶液和T21-7 溶液的浓度均为10.0％(质量百分含量)。将T21-3溶液和T21-7溶液按照6000μL/管 进行分装，分装后各取1管，分别命名为M1和M4。

T18嵌合体参考品为T18溶液，T18溶液分为T18-3溶液和T18-7溶液，T18-3 溶液和T18-7溶液由溶质和溶剂组成，T18-3溶液和T18-7溶液的溶剂均为上述正常 溶液，T18-3溶液和T18-7溶液的溶质均由上述PL18和NB(见6.1)组成。T18-3溶 液的溶质中，PL18和NB的质量比为3:7；T18-7溶液的溶质中，PL18和NB的质量比 为7:3。T18-3溶液和T18-7溶液的浓度均为10.0％(质量百分含量)。将T18-3溶液 和T18-7溶液按照600μL/管进行分装，分装后各取1管，分别命名为M2和M5。

T13嵌合体参考品为T13溶液，T13溶液分为T13-3溶液和T13-7溶液，T13-3溶 液和T13-7溶液由溶质和溶剂组成，T13-3溶液和T13-7溶液的溶剂均为上述正常溶 液，T13-3溶液和T13-7溶液的溶质均由上述PL13和NB(见6.1)组成。T13-3溶液 的溶质中，PL13和NB的质量比为3:7；T13-7溶液的溶质中，PL13和NB的质量比为 7:3。T13-3溶液和T13-7溶液的浓度均为10.0％(质量百分含量)。将T13-3溶液和 T13-7溶液按照600μL/管进行分装，分装后各取1管，分别命名为M3和M6。

6.1、NB的制备

所述NB由下述方法制备：提取染色体核型分析结果为46，XX的正常未孕女性的 人基因组DNA，采用sigmaWGA4试剂盒对人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增 产物，将所述扩增产物用NEBDNAFragmentase进行酶切使扩增产物片段化，用 AgencountAmpureXP磁珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段，所述回收的 大小为150bp-200bp区间内的DNA片段即为NB。其具体制备方法除将1.1的染色体 核型分析结果为47，XY，+21的人基因组DNA替换为上述染色体核型分析结果为46， XX的正常未孕女性的人基因组DNA外，其它操作完全同1.1。

下面将本实施例所提供的检测21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征 的试剂盒的阳性质控品列于表1。

该检测21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征的试剂盒的成套质控品 的外观：液体黄色、透明，无明显可见杂质。该检测21-三体综合征、18-三体综合征 和13-三体综合征的试剂盒的成套质控品于-70℃至-80℃保存。

表1、检测21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征的试剂盒的成套质 控品

实施例2、实施例1的检测21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征的 试剂盒的成套质控品的性能

使用高通量测序用外周血胎儿染色体非整倍体(T21、T18和T13)国家参考品(中 国食品药品检定研究院)验证染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒(半导体 测序法)(博奥生物集团有限公司产品，国械注准20153400300)的质量，结果表明该 染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒(半导体测序法)质量合格，用该染色 体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒(半导体测序法)验证实施例1的检测21- 三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征的试剂盒的成套质控品。

1、实施例1的检测21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征的试剂盒 的成套质控品的准确性

结果如表2所示，P1-P7、N1-N7、L2、L4、L6、R1-R4、D1-D2、M1-M6经测序分 析，Z值(Z-score)符合对应的阳性和阴性结果；溶液浓度为3.5％的L1、L3、L5， 以及溶液浓度为10％的M1-M3的检测结果为其对应核型的三体阳性灰区或三体阳性。

如表3-4所示：R1-R4重复检测10次的Z值结果一致，均为对应的染色体阳性和 阴性；且每个样本的％chrN值的CV＜5％。

其中，Z值(Z-score)：％chrN值与参考数据库中正常样本的测序Readsnumber 的百分比之间的偏差；％chrN值：每条染色体上检测到的测序Readsnumber占所有检 测到的测序Readsnumber的百分比。

企业参考品的检测结果与要求相符，因此此企业参考品的制备方法可行。

表2、参考品验证结果

检测样本 基因型 溶液浓度 Z21 Z18 Z13 是否符合 P1 T21 10.0％ 6.551 0.673 0.253 符合 P2 T21 10.0％ 7.002 1.182 0.212 符合 P3 T21 10.0％ 6.349 0.26 0.831 符合 P4 T18 10.0％ 0.324 9.213 0.587 符合 P5 T18 10.0％ 0.477 8.879 0.813 符合 P6 T13 10.0％ 0.575 0.933 9.031 符合 P7 T13 10.0％ 0.026 0.617 9.342 符合 N1 正常 0.0％ 1.176 1.068 0.179 符合 N2 正常 0.0％ 0.443 1.314 0.922 符合 N3 正常 0.0％ 1.473 1.277 1.491 符合 N4 T15 10.0％ 0.128 0.191 0.136 符合 N5 T16 10.0％ 0.871 0.336 0.134 符合 N6 XXY 10.0％ 0.689 0.277 0.184 符合 N7 XO 10.0％ 1.176 1.413 0.178 符合 L1 T21 3.5％ 2.892 0.643 0.393 符合 L2 T21 5.0％ 3.421 0.738 0.255 符合 L3 T18 3.5％ 1.252 3.095 0.728 符合 L4 T18 5.0％ 0.116 4.783 0.678 符合 L5 T13 3.5％ 1.093 0.946 3.213 符合 L6 T13 5.0％ 1.341 0.662 4.671 符合 D1 18号染色体微重复 10.0％ 0.472 4.191 0.111 符合 D2 5号染色体微缺失 10.0％ 0.442 1.474 0.551 符合 M1 T2130％嵌合体 10.0％ 2.789 0.842 0.742 符合 M2 T1830％嵌合体 10.0％ 0.473 3.012 0.284 符合 M3 T1330％嵌合体 10.0％ 0.638 0.634 2.987 符合 M4 T2170％嵌合体 10.0％ 4.631 0.274 0.639 符合 M5 T1870％嵌合体 10.0％ 0.739 5.786 0.963 符合 M6 T1370％嵌合体 10.0％ 0.361 0.428 6.031 符合

表3、重复性参考品Z值验证结果

注：Z₁₃为13号染色体的Z值，Z₁₈为18号染色体的Z值，Z₂₁为21号染色体的Z值。

表4、重复性参考品％chrN值验证结果

2、实施例1的检测21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征的试剂盒的 成套质控品的稳定性

为确定实施例1的检测21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征的试剂 盒的成套质控品的稳定性，随机抽取3套实施例1的检测21-三体综合征、18-三体综 合征和13-三体综合征的试剂盒的成套质控品，按照染色体非整倍体(T21、T18、T13) 检测试剂盒(半导体测序法)(博奥生物集团有限公司产品，国械注准20153400300) 说明书使用实施例1的检测21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征的试剂 盒的成套质控品。结果如下：

如表5-13所示：三套成套质控品的P1-P7、N1-N7、L2、L4、L6、R1-R4、D1-D2、 M1-M6经测序分析，Z值符合对应的阳性和阴性结果；溶液浓度为3.5％样本L1、L3、 L5，以及溶液浓度为10％的30％嵌合体M1-M3的检测结果为其对应核型的三体阳性灰区 或三体阳性。

如表6-7、9-10和12-13所示：三套成套质控品的R1-R4重复检测10次的Z值结 果一致，均为对应的染色体阳性和阴性；且每个样本的％chrN值的CV＜5％。

表5、第1套成套质控品检测数据

编号 基因型 溶液浓度 Z₂₁Z₁₈Z₁₃是否符合 P1 T21 10％ 6.739 0.955 0.824 符合 P2 T21 10％ 7.294 0.998 0.458 符合 P3 T21 10％ 6.583 0.151 1.424 符合 P4 T18 10％ 0.184 9.483 0.735 符合 P5 T18 10％ 0.428 9.048 0.425 符合 P6 T13 10％ 0.041 1.227 9.163 符合 P7 T13 10％ 1.327 1.061 9.473 符合 N1 正常 0％ 0.312 0.655 0.722 符合 N2 正常 0％ 0.316 0.935 1.119 符合 N3 正常 0％ 0.842 0.725 0.597 符合 N4 T15 10％ 0.555 1.057 0.435 符合 N5 T16 10％ 0.664 0.198 0.262 符合 N6 XXY 10％ 0.294 0.458 0.062 符合 N7 XO 10％ 0.882 0.266 0.748 符合 L1 T21 3.5％ 2.703 0.484 0.771 符合 L2 T21 5.0％ 3.283 1.078 0.164 符合 L3 T18 3.5％ 1.492 3.692 1.345 符合 L4 T18 5.0％ 1.573 4.769 0.154 符合 L5 T13 3.5％ 0.996 0.972 3.483 符合 L6 T13 5.0％ 0.715 0.284 4.724 符合 D1 18号染色体微重复 10％ 1.177 4.038 0.293 符合 D2 5号染色体微缺失 10％ 0.881 0.495 0.627 符合 M1 T2130％嵌合体 10％ 2.839 1.171 0.015 符合 M2 T1830％嵌合体 10％ 1.326 3.183 0.194 符合 M3 T1330％嵌合体 10％ 1.378 1.372 2.936 符合 M4 T2170％嵌合体 10％ 4.963 0.374 0.936 符合 M5 T1870％嵌合体 10％ 0.638 5.963 1.036 符合 M6 T1370％嵌合体 10％ 0.265 0.372 6.142 符合

表6、第1套重复性参考品Z值检测结果

表7、第1套重复性参考品％chrN值检测结果

表8、第2套成套质控品检测数据

检测样本 基因型 溶液浓度 Z₂₁Z₁₈Z₁₃是否符合 P1 T21 10％ 6.698 0.466 1.396 符合 P2 T21 10％ 7.658 0.121 1.082 符合 P3 T21 10％ 7.364 1.291 0.494 符合 P4 T18 10％ 1.551 9.392 0.283 符合 P5 T18 10％ 0.563 8.925 1.411 符合 P6 T13 10％ 1.079 1.071 9.638 符合 P7 T13 10％ 0.195 0.128 9.263 符合 N1 正常 0.0％ 0.161 1.246 0.825 符合 N2 正常 0.0％ 0.113 1.602 0.496 符合 N3 正常 0.0％ 0.381 0.745 0.274 符合 N4 T15 10％ 1.426 0.044 0.657 符合 N5 T16 10％ 1.471 0.405 1.638 符合 N6 XXY 10％ 0.472 1.038 1.511 符合 N7 XO 10％ 0.393 0.474 0.763 符合 L1 T21 3.5％ 2.883 0.022 1.001 符合 L2 T21 5.0％ 3.495 0.095 0.253 符合 L3 T18 3.5％ 0.161 3.462 0.328 符合 L4 T18 5.0％ 0.113 4.639 0.869 符合

L5 T13 3.5％ 0.381 0.393 3.593 符合 L6 T13 5.0％ 1.426 0.827 4.428 符合 D1 18号染色体微重复 10％ 1.476 3.798 0.707 符合 D2 5号染色体微缺失 10％ 0.472 0.376 0.322 符合 M1 T2130％嵌合体 10％ 2.794 0.414 0.423 符合 M2 T1830％嵌合体 10％ 0.043 2.926 1.133 符合 M3 T1330％嵌合体 10％ 0.185 0.488 2.954 符合 M4 T2170％嵌合体 10％ 4.792 0.415 0.855 符合 M5 T1870％嵌合体 10％ 1.097 5.835 0.522 符合 M6 T1370％嵌合体 10％ 0.156 0.801 6.025 符合

表9、第2套重复性参考品Z值检测结果

表10、第2套重复性参考品％chrN值检测结果

表11、第3套成套质控品检测数据

表12、第3套重复性参考品Z值检测结果

表13、第3套重复性参考品％chrN值检测结果

从实施例1的检测21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征的试剂盒 的成套质控品的检测结果可知，随机抽取的成套质控品中编号相同的样品，检测结果 相同，说明三套成套质控品之间的检测结果无差异，且检测结果完全正确。由于检测 的这三套成套质控品是随机抽取，根据检测结果可推知其它各套成套质控品之间的检 测结果也是一致的，表明各批次制备分装的成套质控品性能稳定。本申请的检测21- 三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征的试剂盒的成套质控品可以用于试剂盒 的质量鉴定和性能评价。

3、实施例1的检测21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征的试剂盒的 成套质控品的检验标准

实施例1的检测21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征的试剂盒的成 套质控品的检验标准如表14：

表14、