一种土茯苓药材及其水提取物的快速多信息薄层鉴别方法

摘要

本发明涉及一种土茯苓药材及其水提取物的快速多信息薄层鉴别方法。其特征在于：用简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，在同一块薄层板上，3种不同的检视条件下检视了土茯苓药材及其提取物的多信息薄层鉴别图，各斑点清晰，相互交错，但又互不干扰。不同检视条件下的多信息薄层色谱图，不但提高了土茯苓药材及其水提取物的质量可控性，还为有干扰的复方制剂中土茯苓的低成本、高效率快速薄层鉴别，提供了排除干扰的多信息条件选择。且方法简便、快捷，高效率、成本低、无环境污染。

说明书

技术领域

本发明涉及一种土茯苓药材及其水提取物的快速多信息薄层鉴别方法。

背景技术

中药土茯苓目前在中国药典2010年版收载的药材项下有薄层鉴别方法，但在其复方制剂以及水提取物中，还没有对其进行薄层鉴别的报道，查阅文献^【1、2】虽然在制剂中有薄层鉴别的报道，但样品和对照药材的前处理都比较繁琐复杂，需要用有机溶剂反复纯化处理，仅样品的前处理就要花费数小时，数百ml的有机试剂，效率低、环境污染严重、危害操作人员的身体健康。现将查阅到得土茯苓薄层鉴别方法，列举分析如下：

中国药典2010年版一部土茯苓药材的薄层鉴别方法 取本品粉末1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取落新妇苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(13∶32∶9)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，放置5分钟后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

该鉴别方法是采用落新妇苷对照品为指标，进行土茯苓薄层鉴别的，虽然样品前处理不复杂，但信息量单一，仅是检视喷雾三氯化铝试液，放置5分钟后的荧光斑点，鉴别一批样品，样品前处理花费0.5小时、有机溶剂20ml。

文献^【1】报道的解毒泄浊I号颗粒中土茯苓的薄层鉴别方法取解毒泄浊I号颗粒适量，研细，称取2g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加3mol·L^-1盐酸20ml，分次溶解，并转移至锥形瓶中，水浴加热水解30分钟，取出放冷，加氯仿60ml，分三次萃取，合并氯仿层，滤过，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(20∶0.2)为展开剂，预饱和20分钟后，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

该鉴别方法是采用薯蓣皂苷元为指标，进行土茯苓薄层鉴别的，鉴别一批样品，仅样品前处理要花费时间3小时、有机溶剂230ml。

文献^【2】报道的银屑胶囊中土茯苓的薄层鉴别取银屑胶囊内容物3g，加水60ml，超声处理30分钟，放冷，转移至分液漏斗中，加盐酸调pH至2，再加入乙酸乙酯震摇提取2次，每次20ml，合并提取液，通过铺有无水硫酸钠的漏斗后，将滤液蒸干，加入甲醇1ml使残渣溶解，溶解液作为供试品溶液。另取土茯苓对照药材5g，加水100ml，加热回流4小时，滤过，滤液浓缩至约10ml，加乙醇15ml，搅拌，静置，滤过，滤液蒸干，按供试品溶液的制备方法，制备对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(15∶5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

该鉴别方法是以土茯苓对照药材为对照薄层鉴别的，鉴别一批样品，仅样品与对照药材的前处理要花费时间7-8小时、有机溶剂97ml。

由上述土茯苓在制剂中的薄层鉴别实例，说明了目前为止，其鉴别的繁琐性、复杂性、费时性、信息量的单一性、对周围环境的污染性以及高成本、低效率。所以提高检测效率、降低检测成本、减少环境污染，创建土茯苓药材及其水提取物的快速多信息薄层鉴别方法，成了检测人员刻不容缓的奋斗目标，我们就是在该背景条件下，发明了土茯苓药材及其水提取物的快速多信息薄层鉴别方法。

土茯苓药材水提取物或配方颗粒的制备方法 土茯苓饮片7000-8000g，分别加水8倍量，煎煮提取二次，每次1-2小时，滤过，滤液70℃减压浓缩，浓缩液喷雾干燥或70℃减压干燥，得土茯苓水提取物干膏粉；或加糊精适量，混匀，制粒，分别制成1000g，分装，得土茯苓水提取配方颗粒。

发明内容

本发明就是针对土茯苓水提取物还没有薄层鉴别方法以及其在复方制剂中薄层鉴别繁琐、费时、信息量单一、方法污染环境和高成本的弊端，发明了一种土茯苓药材及其水提取物的快速多信息薄层鉴别方法。即，用最简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，在同一块薄层板上，获得土茯苓与其水提取物在紫外光灯365nm和254nm，以及喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后，日光，3种检视条件下的多信息薄层鉴别图，斑点清晰，相互交错，但又互不干扰(见图1、2、3)。与常规的单信息薄层相比，不但大幅度提高了土茯苓药材及其提取物的质量可控性，有利于质量监督，而且还提高了检测效率、节约了成本，减少了环境污染。并为提取的复方制剂中土茯苓的快速薄层鉴别，提供了三种检视条件下的薄层色谱图选择参考，用以排除干扰成分。

本发明解决其技术问题所采用的方案为：

(1)土茯苓药材的薄层鉴别 取土茯苓药材与其对照药材适量，研细，分别称取0.3g，加70％甲醇各2ml，超声处理20分钟，上清液分别作为供试品溶液与对照药材溶液；吸取上述对照药材溶液与供试品溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比为8∶2∶3∶0.3的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

(2)土茯苓水提取物的薄层鉴别取本品适量，研细，称取0.2g，加70％甲醇5ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取土茯苓对照药材0.3g，加70％甲醇2ml，超声处理20分钟，取上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述对照药材溶液与供试品溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比为8∶2∶3∶0.3的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

本发明的原理如下：

依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再通过展开剂的移动，各成分在薄层板上的吸附、解吸附能力的不同，使其斑点得以分离。又借助各成分极性大小，选取极性近似的有效成分，在不同的检视条件下，呈现不同的斑点颜色，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，获得多信息的薄层色谱图。

本发明的创新点及有益效果如下：

1.土茯苓药材与对照药材的前处理方法是：分别称取0.3g土茯苓药材与其对照药材，加甲醇2ml，超声处理后，上清液直接作为供试品和对照药材溶液；简便、快捷，只花费前处理时间约20分钟、有机溶剂4ml。与药典方法相比，虽然仅节约处理时间10分钟、提取溶剂16ml，但信息量是报道方法的三倍。

2.土茯苓水提取物的前处理方法也是：取少量土茯苓水提取物与对照药材，加少量70％甲醇，超声处理后，滤液和上清液直接作为供试品和对照药材溶液；共花费前处理时间20分钟、有机溶剂7ml。与报道方法相比，每检测一批药材，节约时间2.5-7小时、有机溶剂90-223ml。

3.检测的信息量是紫外光灯(365nm)下的亮兰色荧光主斑点、紫外光灯(254nm)下的2个荧光熄灭斑点和显色后日光下的3个颜色斑点。三种不同检视条件下的多信息图谱，提供了复方制剂中排除干扰成分时的检视条件选择。

4.本鉴别方法与已报道方法的不同之处还在于：本鉴别的展开剂由三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、甲酸4种不同极性的有机溶剂组成，而已报道方法是由2种或3种不同极性的有机溶剂组成，从相似相容的分离结果考虑，展开剂的分离效果与溶剂的种类呈正相关，但获得最佳展开剂组分配比的难度也与溶剂的种类呈正相关，所以经过多种展开剂的组分与比例探讨研究，获得展开剂最佳组合，得到三种检视条件下多信息图谱，且每一种信息斑点的分离效果都比较理想。

5.土茯苓水提取物与报道的制剂中土茯苓的薄层鉴别方法相比，检测效率高，检测成本低，无环境污染，为提取复方制剂中土茯苓的快速薄层鉴别提供了三种检视条件下的图谱参考。

附图说明

图1为土茯苓药材及其提取物在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。

图2为土茯苓药材及其提取物在紫外光灯254nm下的薄层TLC图。

图3为土茯苓药材及其提取物显色后，日光下的薄层TLC图。

图1、2、3为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.2.3为土茯苓水提取物；5.6.7为土茯苓药材；4.为土茯苓对照药材

本发明具体实施方式如下：

(1)土茯苓药材的薄层鉴别取土茯苓药材与其对照药材适量，研细，分别称取0.3g，加70％甲醇各2ml，超声处理20分钟，上清液分别作为供试品溶液与对照药材溶液；吸取上述对照药材溶液与供试品溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比为8∶2∶3∶0.3的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

(2)土茯苓水提取物的薄层鉴别取本品适量，研细，称取0.2g，加70％甲醇5ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取土茯苓对照药材0.3g，加70％甲醇2ml，超声处理20分钟，取上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述对照药材溶液与供试品溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比为8∶2∶3∶0.3的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

参考文献

【1】张明生，高家荣，魏良兵“解毒泄浊I号颗粒的薄层色谱鉴别研究”安徽医药，2007，11(4)350-351

【2】陈秀瑗，李红岩，赵华“银屑胶囊的薄层色谱定性鉴别”中国医药科学，2013，3(1)111-112