水杨酸糖脂衍生物在积累长春花愈伤组织细胞内生物碱中的应用

摘要

本发明公开了一种水杨酸糖脂衍生物在积累长春花愈伤组织细胞内生物碱中的应用，所述生物碱为吲哚总碱、长春质碱或阿玛碱；本发明所述的水杨酸糖脂化合物对长春花愈伤组织细胞中吲哚总碱、长春质碱或阿玛碱具有累积作用，该化合物为新药的研发提供了基础。

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种水杨酸糖脂衍生物的应用，特别涉及水杨酸糖脂衍生 物在积累长春花愈伤组织细胞内生物碱中的应用。

(二)背景技术

长春花原产于非洲东部，目前作为药用植物和观赏植物在我国的不少 地区都有种植。长春花的主要药用成分为吲哚生物碱。其中长春碱 (vinblastine)和长春新碱(vincfistine)是目前应用最广泛的天然植物抗肿瘤 药物，可用于治疗何杰金氏病、恶性淋巴肿瘤、急性白血病、绒毛上皮细 胞癌等疾病，其硫酸盐已广泛应用于临床；另外，阿玛碱(ajmalicine)可用 于治疗高血压、心率不齐等疾病；蛇根碱(serpentine)可作为镇痛药；而长 春质碱(catharanthine)不仅具有抗菌止血、利尿和降血糖等作用，而且还 是长春碱、长春新碱等的合成前体。

长春花植物组织中吲哚生物碱的含量非常低。特别是具有抗肿瘤活性 的长春碱和长春新碱的含量更低[一般为0.005mg/(g,DW)]。长期以来， 人们试图通过采用组织和细胞培养方法，并结合优化培养条件、前体饲喂 或用各种调节因子进行处理等来提高吲哚生物碱的含量，但效果都不甚理 想。

现有技术中，水杨酸糖脂衍生物主要用于植物诱抗剂，本发明提供了 一种水杨酸糖脂衍生物的新应用，即在积累长春花愈伤组织细胞内生物碱 的应用。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种水杨酸糖脂衍生物的新应用，即在积累长春花 愈伤组织细胞内生物碱中的应用。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种式(Ⅰ)所示水杨酸糖脂衍生物在积累长春花愈伤组 织细胞内生物碱的应用，

式(Ⅰ)中R为糖基，优选为下列之一：全乙酰基葡萄糖基、全乙 酰基半乳糖基、全乙酰基乳糖基或全乙酰基麦芽糖基。

进一步，所述的应用是指将式(Ⅰ)所示水杨酸糖脂衍生物作为添加 剂用于长春花愈伤组织细胞的培养，从而富集长春花愈伤组织细胞内生物 碱。

进一步，更优选所述式(Ⅰ)所示水杨酸糖脂衍生物为下列之一：

进一步，所述生物碱为吲哚总碱、长春质碱或阿玛碱。

本发明所述水杨酸糖脂衍生物在积累长春花愈伤组织细胞内生物碱 中的应用方法为：将长春花愈伤组织细胞接种至含水杨酸糖脂衍生物和蔗 糖的MS培养液中，于25℃、80-100r·min^-1、摇床光照培养，获得富集 生物碱的长春花愈伤组织细胞；所述MS培养液中水杨酸糖脂衍生物终浓 度l mg/L，蔗糖终浓度3wt％，pH 6.0(灭菌前)。所述水杨酸糖脂衍生物以 1ppm-10ppm水溶液的形式加入。

本发明所述式(Ⅰ)所示水杨酸糖脂衍生物的制备方法参照臧洪俊； 李正名；倪长春；沈宙；范志金；刘秀峰，水杨酸类糖酯化合物的合成及 其生物活性，高等学校化学学报，2006,27,1877-1880。

与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：本发明所述的水杨 酸糖脂化合物对长春花愈伤组织细胞中吲哚总碱、长春质碱或阿玛碱具有 累积作用，该化合物为新药的研发提供了基础；水杨酸糖脂化合物对长春 质碱和阿玛碱的积累有不同程度的促进作用，特别是化合物(Ⅰ-1)对阿 玛碱积累的促进效果非常明显，最高可达正常细胞的19倍多；对长春质 碱的积累的促进作用也可以达到正常细胞的7.7倍，化合物(Ⅰ-4)对长 春质碱积累的促进作用也可以达到4.4倍。

(四)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围 并不仅限于此：

本发明实施例所述化合物(Ⅰ-1)-化合物(Ⅰ-4)的制备方法参照臧 洪俊；李正名；倪长春；沈宙；范志金；刘秀峰，水杨酸类糖酯化合物的合 成及其生物活性，高等学校化学学报，2006,27,1877-1880。

实施例1

将化合物(Ⅰ-1)-化合物(Ⅰ-4)分别溶于去离子水，制成1ppm和 10ppm的水溶液。

长春花愈伤组织细胞置于含有50mL培养液的250mL三角瓶中，接 种量为1.5～2g/瓶。培养液为含化合物(Ⅰ-1)-化合物(Ⅰ-4)各l mg/L (以水溶液的形式加入)，3wt％蔗糖，pH 6.0(灭菌前)的MS培养液，于 25℃、摇床(100r·min^-1)、光照12h培养。培养后的长春花愈伤组织细胞 (即培养液过滤后的培养物)用体积浓度80％甲醇水溶液匀浆，抽提过 夜，减压蒸干甲醇，水相pH值调至3。再以石油醚萃取，调水相pH值 至8.5，以二氯甲烷萃取，有机层于280mm测OD值，减压蒸干二氯甲 烷后可得长春花各类吲哚生物碱混合物即为总碱，称重，以丙酮为对照(即 表1中CK)。

将所得吲哚总碱用甲醇定容至l mL，过0.22μm滤膜，采用RP-HPLC 法对其中的长春质碱和阿玛碱进行色谱分析，以峰面积外标法定量。所有 数据均为3次平行重复测定的结果，标准偏差不超过10％。

C18硅胶柱(250mm×4.6mm，7μm)；测定波长280nm；流动相是甲 醇：0.005mol·L^-1NH₄H₂PO₄＝7：3(V/V，pH 7.0)；柱温28℃，流速1.0 mL·min^-1。所有数据均为3次平行重复的平均值。

表1化合物(Ⅰ-1)-化合物(Ⅰ-4)对长春花愈伤组织中吲哚总碱 的积累(g)

化合物 1ppm 10ppm (Ⅰ-1) 3.325 3.33 (Ⅰ-2) 4.125 9.37 (Ⅰ-3) 2.875 3.45 (Ⅰ-4) 3.875 2.7 CK 3.575 4.15

与对照相比，化合物(Ⅰ-1)和(Ⅰ-3)均抑制了愈伤组织吲哚总碱 的积累，但在两种测试浓度下，它们抑制率的变化趋势不同，化合物(Ⅰ -1)在高浓度时对吲哚总碱积累的抑制程度也高(1ppm时抑制了7％， 10ppm时抑制了21％，百分率均是与对照比较得出，下同)，而化合物(Ⅰ -3)对吲哚总碱积累的抑制程度在这两种浓度下变化不大(1ppm时抑制 了20％，10ppm时抑制了17％)；可以看出化合物(Ⅰ-2)明显促进吲哚 总碱的积累，而且浓度增加，促进程度也明显增加(1ppm时促进了15％， 10ppm时促进了107％)；化合物(Ⅰ-4)在浓度为1ppm是可以促进吲哚 总碱的积累，而浓度为10ppm时则表现为抑制作用。

表2化合物(Ⅰ-1)-化合物(Ⅰ-4)对长春花愈伤组织中长春质碱 的积累(g)

注：A：大部分长春花已经变黄，无棕色；B：1/3的长春花变成棕色

表3化合物(Ⅰ-1)-化合物(Ⅰ-4)对长春花愈伤组织中阿玛碱的 积累(g)

注：A：大部分长春花已经变黄，无棕色；B：1/3的长春花变成棕色

由表可知，化合物(Ⅰ-1)-(Ⅰ-4)系列对长春质碱和阿玛碱的积累 有不同程度的促进作用，特别是化合物(Ⅰ-1)对阿玛碱积累的促进效果 非常明显，最高可达正常细胞的19倍多；对长春质碱的积累的促进作用 也可以达到正常细胞的7.7倍。化合物(Ⅰ-4)对长春质碱积累的促进作 用也可以达到4.4倍。