马立克氏病病毒弱毒疫苗814株的反向遗传操作系统及其在病毒拯救中的应用

摘要

本发明公开了一种马立克氏病病毒弱毒疫苗814株的反向遗传操作系统及其在病毒拯救中的应用。本发明通过将马立克氏病病毒弱毒疫苗814株的基因组剪切后分段克隆入Fosmid粘粒载体pCC1Fos，构建了814疫苗株基因组Fosmid文库。在对该文库进行基因组测序的基础上，从中挑选出5个克隆有814疫苗株基因组片段，且相互含有重叠区域，并可以拼接覆盖814株全基因组的重组粘粒。用这5个粘粒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)，成功拯救出与原MDV疫苗株生物学特性相同的病毒。应用本发明建立的反向遗传操作系统，一是可以拯救出该弱毒疫苗株，作为疫苗用于MDV的预防；更重要的是，利用该反向遗传操作系统可以实现在细菌中进行病毒改造，从而用于MDV活载体疫苗的研制。