用于人体血清免疫球蛋白溶液制剂的储存稳定剂

摘要

本发明公开一种可减少或避免人体血清免疫球蛋白溶液制剂在储存过程发生聚合的稳定剂，免疫球蛋白溶液制剂中含有L-半胱氨酸或其盐酸盐、谷胱甘肽的一种或以上的巯基保护剂，其浓度为3-20mmol/L；含有麦芽糖或海藻糖的一种或以上的糖稳定剂，其浓度为150-600mmol/L；以及含有脯氨酸或其盐、甘氨酸或其盐、丝氨酸或其盐的一种或以上的氨基酸稳定剂，其浓度为12-150mmol/L，通过添加稳定剂，可减少免疫球蛋白因高温、高浓度或储存时间较长而发生的聚合，提高药物的有效性。

说明书

技术领域

本发明涉及药物添加剂，具体是静脉注射用的人体血清免疫球蛋白溶液制剂的储存使用的稳定剂。

背景技术

人体血清免疫球蛋白（IgG）制剂主要用于原发性和继发性免疫球蛋白缺乏症，以及其他的自身免疫性疾病，如原发性血小板减少性紫癜、川崎病等。

IgG是从人血浆中纯化得到， 其由B细胞和浆细胞接触抗原后产生，其分子量大约为150KDa，由四条肽链组成，两条完全相同的轻链（L）和重链（H）通过两个二硫键共价相连，除此之外，以非共价交联形成一个均匀对称的Y型二聚物。轻链由两个同源结构域组成，重链由四个同源结构域组成，这些结构域的特征是包含2个β-折叠结构，包括3到5个反相平行β-链，通过一个二硫键来维持结构稳定。这些结构域对热敏感，在室温储存下其二级结构可发生改变，导致形成多聚体，免疫球蛋白制剂储存过程多聚体不断增加，药效逐渐降低，通过静脉注射后，多聚体还会产生副作用。

CN103282042A公开一种具有组氨酸的、且在弱酸性至中性pH下储存稳定的免疫球蛋白水性制剂，包括免疫球蛋白，从50mM至500mM的组氨酸，从0mM至10mM的碱金属阳离子，以及从5.5至7.0的pH，可使免疫球蛋白在弱酸性至中性条件下稳定。但在高温、高浓度或者储存时间较长时，免疫球蛋白聚合程度仍然较高。

发明内容

本发明的目的是提供一种可减少或避免人体血清免疫球蛋白溶液制剂在储存过程发生聚合的稳定剂，通过添加稳定剂，可减少免疫球蛋白因高温、高浓度或储存时间较长而发生的聚合，提高药物的有效性。

本发明的储存稳定剂是免疫球蛋白溶液制剂中含有L-半胱氨酸或其盐酸盐、谷胱甘肽的一种或以上的巯基保护剂，其浓度为3—20mmol/L；含有麦芽糖或海藻糖的一种或以上的糖稳定剂，其浓度为150—600mmol/L；以及含有脯氨酸或其盐、甘氨酸或其盐、丝氨酸或其盐的一种或以上的氨基酸稳定剂，其浓度为12—150mmol/L。

优选的是，巯基保护剂的摩尔浓度为4—8mmol/L，糖稳定剂的摩尔浓度为250—400mmol/L，氨基酸稳定剂的摩尔浓度为20—80mmol/L。

免疫球蛋白溶液制剂的pH值优选为4—6。

本发明所使用巯基保护剂可保护免疫球蛋分子内二硫键，维持其三级和四级结构，糖稳定剂用于保护免疫球蛋白分子中β折叠的二级结构稳定，氨基酸稳定剂可促进免疫球蛋白分子间的均匀分离，稳定其天然构象。由此可避免或减少免疫球蛋白溶液制剂在长期储存过程进一步聚合，提高储存稳定性，在室温及室温以下环境中制剂储存2年后，免疫球蛋白多聚聚体小于1%，在37℃环境中制剂储存2年后，免疫球蛋白多聚体小于2%。

具体实施方式

实施例1

取经病毒灭活后的人体血清免疫球蛋白层析溶液（纯度99.2%，浓度0.37mmol/L），超滤浓缩配制成浓度为10wt%的免疫球蛋白溶液，取1L样品，添加葡萄糖至230mmol/L，调节pH至4.1作为空白对照样品，另取3L，添加谷胱甘肽至6mmol/L，麦芽糖至300mmol/L，脯氨酸至50mmol/L，调节pH至4.1，分成样品1、样品2、样品3各1L。制品于室温储存条件下对分子大小分布进行考察。

分子大小分布采用高效液相色谱法进行检查：用亲水硅胶高效体积排阻色谱柱（SEC，排阻极限300kD，粒度10μm），柱直径7.5mm，长60cm；以含1%异丙醇，pH值7.0，0.2mol/L磷酸盐缓冲液（取0.5mol/L磷酸二氢钠200ml、0.5mol/L磷酸氢二钠420ml、异丙醇15.5ml及水914.5ml均匀混合）为流动相；检测波长为280nm；流速为每分钟0.6ml；分别取每1ml含蛋白质为12mg的免疫球蛋白、人血白蛋白溶液各20μl，分别注入色谱柱，记录色谱图，免疫球蛋白对照单体峰与裂解体峰的分离应大于1.5，人血白蛋白对照品单体峰与二聚体峰的分离度应大于1.5，拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95—1.40。按面积归一法计算，色谱图中单体加二聚体峰的含量，即为免疫球蛋白单体加二聚体含量。

储存3、6、9、12和24个月时测定免疫球蛋白单体加二聚体含量，结果如下表。

实施例2

取经病毒灭活后的人体血清免疫球蛋白层析溶液（纯度99.5%，浓度0.25mmol/L），超滤浓缩配制成浓度为10wt%的免疫球蛋白溶液，取1L样品，添加葡萄糖至220mmol/L，调节pH至3.85作为空白对照样品，另取3L，添加半胱氨酸至4mmol/L，麦芽糖至500mmol/L，甘氨酸至130mmol/L，调节pH至3.85，分别为样品1、样品2、样品3。制品于37℃储存条件下对分子大小分布进行考察。

分子大小分布按照实施例1，采用高效液相色谱法进行检查。储存3、6、9、12和24个月时测定免疫球蛋白单体加二聚体含量，结果如下表。

实施例3

取经病毒灭活后的免疫球蛋白层析溶液（纯度98.7%，浓度0.27mmol/L），超滤浓缩配制成浓度为5wt%的免疫球蛋白溶液，取1L样品，添加葡萄糖至225mmol/L，调节pH至6.9作为空白对照样品，另取3L，添加谷胱甘肽至8mmol/L，麦芽糖至250mmol/L，丝氨酸至75mmol/L，调节pH至6.9，分成样品1、样品2、样品3各1L。制品于37℃储存条件下对分子大小分布进行考察。

分子大小分布按照实施例1，采用高效液相色谱法进行检查。储存3、6、9、12和24个月时测定免疫球蛋白单体加二聚体含量，结果如下表。

实施例4

取经病毒灭活后的人体血清免疫球蛋白层析溶液（纯度99.0%，浓度0.26mmol/L），超滤浓缩配制成浓度为5wt%的免疫球蛋白溶液。取1L样品，添加葡萄糖200mmol/L，调节pH至5.5作为空白对照样品。另取3L，添加谷胱甘肽至8mmol/L，麦芽糖至350mmol/L，甘氨酸至80mmol/L，调节pH至5.5，分成样品1、样品2、样品3各1L。制品于15℃储存条件下对分子大小分布进行考察。

分子大小分布按照实施例1，采用高效液相色谱法进行检查。储存3、6、9、12和24个月时测定免疫球蛋白单体加二聚体含量，结果如下表。