一种那西肽含量为12的那西肽预混剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，是在链霉菌发酵生产那西肽的过程中补入了有机氮源。本发明的有益效果为：本发明提供的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，通过补入有机氮源，有效的延长了发酵周期，提高了发酵单位，提高了那西肽产生菌菌丝体内的那西肽含量，生产出12%的那西肽预混剂。本发明有效的改善了菌丝的状况，使发酵得以继续进行，提高了发酵液的发酵单位58%，提高了原材料的转化率。

说明书

技术领域

本发明涉及兽药预混剂制备领域，具体涉及一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法。

背景技术

那西肽是一种含硫多肽类抗生素产品，是效果极好的促生长剂，其作为一种新型的兽药预混剂产品，不但能促进畜禽生长，提高饲料效率，而且还具有不易产生耐药性，无残留，对环境影响小，对人畜安全等特点，完全符合人们对饲料添加剂的要求，而且它不仅能广泛应用于畜禽业，还能广泛应用于水产业，具有一定的社会效益和经济效益。但那西肽的一个重要缺陷是其产量低、成本高，现有那西肽的生产工艺中，发酵周期一般在220小时以内，预混剂产品最高含量8%。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种能够有效延长发酵周期，提高发酵单位，提高那西肽产生菌菌丝体内那西肽含量的那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，是在链霉菌发酵生产那西肽的过程中补入了有机氮源。

本发明所使用的生产菌来源：购于美国ATCC菌种保藏中心的ATCC25421号菌，经过生产菌种筛选后获得保藏号为N1209D的菌种，经中国科学院微生物研究所鉴定，属于链霉菌（Streptomyces sp. ）。

进一步的，上述的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，所述有机氮源为玉米浆、黄豆饼粉、豆粕粉、酵母粉或棉籽饼粉。

进一步的，上述的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，包括以下步骤：

1）将那西肽生产菌的斜面种子进行一级种子罐培养，得到一级种子罐培养物；

2）将步骤1）得到的一级种子罐培养物转入二级种子罐培养，得到二级种子罐培养物；

3）将步骤2）得到的二级种子罐培养物转入发酵罐进行发酵，并于100h～180h时，按发酵液体积补入质量体积百分含量为0.5%～5%的有机氮源（有机氮源为玉米浆、黄豆饼粉、豆粕粉、酵母粉或棉籽蛋白粉），得到发酵液；

4）将步骤3）得到的发酵液经过板框过滤得到菌丝体；

5）将步骤4）得到的菌丝体经过闪蒸干燥制备得到粉末原料；

6）将步骤5）得到的粉末原料加入辅料后得到那西肽含量为12%的那西肽预混剂产品。

进一步的，上述的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，所述步骤1）中，那西肽生产菌为筛选后的链霉菌streptomyces sp. N1209D；种子罐培养基每100ml组成为：蔗糖2.0g，玉米浆2.5g，蛋白胨1g，硫酸铵0.2g，碳酸钙0.5g，泡敌0.02g，豆油0.3g；一级种子罐培养条件为：发酵温度29℃，搅拌转数控制150至220 r/min，罐压0.05MPa，按照体积计每分钟通气比为1：1（v:v:m），培养48h转入二级种子罐。

进一步的，上述的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，所述步骤2）中，二级种子罐培养基与步骤1）的一级种子罐培养基相同，二级种子罐培养条件为：发酵温度29℃，搅拌转数控制150至220 r/min，罐压0.05MPa，按照体积计每分钟通气比为1：1（v:v:m），培养24h转入二级种子罐。

进一步的，上述的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，所述步骤3）中，发酵罐培养基每100ml组成为：玉米淀粉7g，黄豆饼粉3.2g，硫酸铵0.1g，氯化钠0.25g，硫酸钠0.1g，碳酸钙0.5g，泡敌0.04g，豆油1g，乳化剂0.06g，淀粉酶为淀粉量的0.15%，发酵罐培养条件为：发酵温度28℃～32℃，罐压0.03 MPa～0.08MPa，按照体积计每分钟通气比为（1：0.6）～（1：1.2）（v:v:m），转速80～130r/min；进入发酵罐后，每8小时取样检测总糖、还原糖、氨氮、菌浓和pH值，48小时后根据化验检查结果进行补糖控制发酵液总糖浓度在3.0%至6.0%之间，通过补盐控制发酵液pH 值在6.5至7.5之间；100h～180h时，按发酵液体积补入质量体积百分含量为0.5%～5%的有机氮源（有机氮源为玉米浆、黄豆饼粉、豆粕粉、酵母粉或棉籽蛋白粉）。

进一步的，上述的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，所述步骤4）中，板框过滤的具体条件为：箱式隔膜板框压滤机，进料压力小于等于0.8Mp。

进一步的，上述的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，所述步骤5）中，闪蒸干燥的具体条件为：进风温度130至170摄氏度，出风温度60至80摄氏度。

进一步的，上述的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，所述步骤6）中，根据含量计算加入辅料沸石粉使最终那西肽的含量为12%。

本发明的有益效果为：本发明提供的一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，通过补入有机氮源，有效的延长了发酵周期，提高了发酵单位，提高了那西肽产生菌菌丝体内的那西肽含量，生产出12%的那西肽预混剂。本发明有效的改善了菌丝的状况，使发酵得以继续进行，提高了发酵液的发酵单位58%，提高了原材料的转化率。

附图说明

图1为那西肽生产方法测得的那西肽效价比较结果曲线图。

其中，横轴为发酵时间，纵轴为那西肽效价。

具体实施方式

实施例1：

本发明所用物料来源：

那西肽生产菌：购于美国ATCC菌种保藏中心的ATCC25421号菌，经过生产菌种筛选后获得保藏号为N1209D的菌种，经中国科学院微生物研究所鉴定，属于链霉菌（Streptomyces sp.）。

玉米浆：新疆天玉生物科技有限公司。

黄豆饼粉：青岛科瑞培养基有限公司，发酵专用豆饼粉。

豆粕粉：青岛科瑞培养基有限公司，发酵专用豆粕粉。

酵母粉：河北蠡县北高晃高人饲料加工厂。

棉籽蛋白粉：新疆石河子市金兰植物蛋白有限公司。

乳化剂：江苏省海安石油化工厂，均染剂O（平平加25）。

淀粉酶：诺维信（中国）生物技术有限公司，食品添加剂诺维信-利可来耐高温α-淀粉酶Supra，（Liquozyme Supra）。

一种那西肽含量为12%的那西肽预混剂的制备方法，包括以下步骤：

1）将那西肽生产菌的斜面种子进行一级种子罐培养，得到一级种子罐培养物；

其中，那西肽生产菌为筛选后的链霉菌streptomyces sp. N1209D；种子罐培养基每100ml组成为：蔗糖2.0g，玉米浆2.5g，蛋白胨1g，硫酸铵0.2g，碳酸钙0.5g，泡敌0.02g，豆油0.3g；一级种子罐培养条件为：发酵温度29℃，搅拌转数控制150至220 r/min，罐压0.05MPa，按照体积计每分钟通气比为1：1，培养48h转入二级种子罐；

2）将步骤1）得到的一级种子罐培养物转入二级种子罐培养，得到二级种子罐培养物；

其中，二级种子罐培养基与步骤1）的一级种子罐培养基相同，二级种子罐培养条件为：发酵温度29℃，搅拌转数控制150至220 r/min，罐压0.05MPa，按照体积计每分钟通气比为1：1，培养24h转入二级种子罐；

3）将步骤2）得到的二级种子罐培养物转入发酵罐进行发酵，并于100h～180h时，按发酵液体积补入质量体积百分含量为0.5%～5%的有机氮源（有机氮源为玉米浆、黄豆饼粉、豆粕粉、酵母粉或棉籽蛋白粉），得到发酵液；其中，发酵罐培养基每100ml组成为：玉米淀粉7g，黄豆饼粉3.2g，硫酸铵0.1g，氯化钠0.25g，硫酸钠0.1g，碳酸钙0.5g，泡敌0.04g，豆油1g，乳化剂0.06g，淀粉酶为淀粉量的0.15%，发酵罐培养条件为：发酵温度28℃～32℃，罐压0.03 MPa～0.08MPa，按照体积计每分钟通气比为（1：0.6）～（1：1.2），转速80～130r/min；进入发酵罐后，每8小时取样检测总糖、还原糖、氨氮、菌浓和pH值，48小时后根据化验检查结果进行补糖控制发酵液总糖浓度在3.0%至6.0%之间，通过补盐控制发酵液pH 值在6.5至7.5之间；并于100h～180h时，按发酵液体积补入质量体积百分含量为0.5%～5%的有机氮源（有机氮源为玉米浆、黄豆饼粉、豆粕粉、酵母粉或棉籽蛋白粉）；

4）将步骤3）得到的发酵液经过板框过滤得到菌丝体；

其中，板框过滤的具体条件为：箱式隔膜板框压滤机，进料压力小于等于0.8Mp；5）将步骤4）得到的菌丝体经过闪蒸干燥制备得到粉末原料；

其中，闪蒸干燥的具体条件为：进风温度130至170摄氏度，出风温度60至80摄氏度；

6）将步骤5）得到的粉末原料加入辅料后得到那西肽含量为12%的那西肽预混剂产品；

其中，根据含量计算加入辅料沸石粉使最终那西肽的含量为12%。

从40h开始每24小时检测一次那西肽效价，具体结果如图1所示。

从图1可以看出，补料工艺调整后，有效的延长了发酵时间，提高了发酵单位，实现了将那西肽预混剂中那西肽含量由现有的8%提高至12%。

本发明的技术关键点包括以下三部分：

1、采用有机氮源的补料工艺，根据菌丝情况补入有机氮源；

2、发酵时间200-400小时，较现有技术有效延长了发酵时间；

3、终产品预混剂中那西肽的含量为12%，发酵单位提高了58%。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。