用作选择性T细胞抑制剂和抗淋巴恶性肿瘤药物的N-酰基腙衍生物

摘要

本发明涉及新型N-酰基腙衍生物，并且更特别地涉及具有选择性T细胞抑制活性和/或抗淋巴恶性肿瘤活性的新型N-酰基腙衍生物，其立体异构体，其药学上可接受的盐，其用于制备药物组合物的用途，包含上述的药物组合物，使用所述组合物的治疗方法，以及制备新型N-酰基腙衍生物的方法。

说明书

技术领域

本发明涉及新型N-酰基腙衍生物，并且更特别地涉及具有选择性T细 胞抑制活性和/或抗淋巴恶性肿瘤活性的新型N-酰基腙衍生物，其立体异构 体，其药学上可接受的盐，其用于制备药物组合物的用途，包含上述的药 物组合物，使用所述组合物的治疗方法，以及制备新型N-酰基腙衍生物的 方法。

背景技术

免疫抑制药物

移植领域的关键问题是抑制导致移植物排斥的免疫应答。因此，研发 能够选择性且有效地调节特异性针对移植物的免疫应答的免疫抑制药物是 提高移植成功率的关键问题。T细胞是防止移植排斥的主要靶标，并且大多 数临床上使用的免疫抑制药物抑制T细胞应答。

硫唑嘌呤是首个在器官移植中使用的免疫抑制剂。然而，硫唑嘌呤抑 制DNA合成，导致诸如白细胞减少、骨髓抑制和大红细胞症的副作用，因 此，在引入环孢素后变为二线疗法。环孢素和他克莫司是钙神经素抑制剂， 目前在器官移植中被用作一线疗法。

所述两种药物通过抑制钙神经素来阻滞白细胞介素-2(IL-2)的表达。此 外，这些药物可抑制在初始阶段的T细胞活化，并因此强烈地抑制导致移 植物排斥的免疫应答。然而，这些药物需要被长时间给药，并引起副作用， 包括中毒性肾损害、贫血和高血压，以及由免疫系统的虚弱引起的传染病 和肿瘤。近年来，为了降低钙神经素抑制剂的副作用，已将吗替麦考酚酯(其 为核苷酸合成的抑制剂)与钙神经素抑制剂联合给药，但是已显示诸如消化 性疾病、白细胞减少和贫血的副作用。

西罗莫司和依维莫司(其为mTOR(雷帕霉素的哺乳动物靶标)的抑制剂) 是通过阻滞IL-2受体信号转导来抑制T细胞增殖的药物。主要将这些药物 与钙神经素抑制剂联合给药，因为当将它们单独给药时有效性较弱。然而， 这些药物增加钙神经素抑制剂的副作用，如高脂血症和血小板减少。

FTY720(鞘氨醇-1-磷酸酯的拮抗剂)是通过阻滞T细胞由淋巴器官向移 植物的迁移来降低免疫应答的药物，并且具有与其它药物相比低毒性的优 点。然而，当将FTY720与其它药物(例如全身麻醉药和β-阻断剂)一起给药 时，其可导致心脏病发作。在器官移植领域，用环孢素的联合疗法在临床 试验中(参见N Engl J Med.351,2715-2729；N Engl J Med.352,1371-1373； Nat Med.11,605-613；Business Insights.2010,BI00022-067)。

如上所述，目前用于防止移植排斥的免疫抑制药是有毒性的，并且导 致许多副作用，如感染的发生和由免疫系统的虚弱引起的肿瘤。因此，研 发能够选择性减少响应于移植抗原的T细胞的新药物是需要的。

移植物抗宿主病

异体(allogeneic)造血干细胞移植(HSCT)是对于多种恶性血液病和免疫 缺陷病的最有效和持久的治疗方法，并且在全世界每年被用于治疗约20,000 或更多的患者(Center for International Blood and Marrow Transplant Research 报道)。近年来，已尝试将HSCT应用于自身免疫病、实体癌症和器官移植 领域。虽然在过去20年间异体造血干细胞移植快速进展(例如HLA鉴定技 术和新免疫抑制剂的进展)，移植物抗宿主病(GVHD)(由供体T细胞导致的 并发症)仍然是移植后死亡的主要原因。在血缘关系的HLA配型的情况下， 急性GVHD(II-IV级)(主要在移植后前100天发生)在25-60％的患者中出 现，在非血缘关系的情况下，在45-70％的患者中出现，并且70％或更多的 患有所述疾病(III-IV级)的患者死亡。急性GVHD以三个阶段进展。在第一 阶段中，由在移植前的高剂量化学疗法和全身放射疗法产生的促炎因子 (TNF-α和LPS)激活外周淋巴器官的树突细胞。在第二阶段，由活化的树突 细胞引起异型抗原特异性T细胞增殖，并分化为效应细胞。在最后阶段， 异型抗原特异性效应T细胞迁移至肠、肝和皮肤(其为主要的靶标器官)，并 导致对组织的炎症性损伤。

作为防止急性GVHD的一线疗法的钙神经素抑制剂的应答率为约低于 50％，因此与器官移植相比，预防率非常低。GVHD进展后的治疗依赖于 甾族化合物疗法，但是甾族化合物疗法表现低于50％的应答率，并因此被 归类为具有高疗法相关死亡率的高风险疗法(参见Annu Rev Immunol.25, 139-170；Blood.114,4327-4336；Lancet.373,1550-1561,Curr Opin Immunol. 11,509-515)。因此，研发用于防止和治疗急性GVHD的新的有效药物是迫 切需要的。

多发性硬化

多发性硬化是中枢神经系统(CNS)的炎性疾病，其为由响应于源自髓磷 脂的抗原的T细胞引起的自身免疫病。其在进展的初始阶段表现复发-缓解 模式，然后由于脑和脊髓病损的进行性蓄积，进展为继发性进展性多发性 硬化。脑和脊髓病损的蓄积导致视力损失、运动和平衡病症、语言和感觉 病症、截瘫、性功能损伤以及排尿和排泄紊乱，并且当蓄积严重时，其导 致全身麻痹。

用于治疗多发性硬化的疗法大致分为急性加重的管理、疾病改善疗法、 治标疗法和预防疗法。急性加重的管理施用于弱的炎症，并提供免疫抑制 效果，施用疾病改善疗法来延缓疾病的进展以防止疾病发展为进展性多发 性硬化。

在急性加重的管理中，静脉内给药高剂量(500-1000mg/kg)的糖皮质激 素3-5天以缓解症状并防止永久性损伤。糖皮质激素功能在于抑制免疫细胞 向脑中的迁移或减少水肿，从而抑制在急性阶段发生的炎症(参见 Immunology and Cell Biology.76,55-64；Annu.Rev.Immunol.20,125-163)。尽 管糖皮质激素在急性阶段表现优异的效果，但是在疾病改善疗法中，它不 能防止疾病的进展。

在疾病改善疗法中，施用免疫疗法以治疗疾病并防止疾病的复发。US FDA批准用于免疫疗法的药物包括干扰素-β(IFN-β)、格拉默乙酸酯(GA)、 米托蒽醌和那他珠单抗。然而，它们表现下列副作用(参见N Engl J Med.362, 456-458)：

IFN-β是目前最常用的药物，其具有抗炎和抗病毒效果，并且用以抑制 抗原的表达并防止T细胞的活化。此外，IFN-β激活共刺激分子以诱导自身 反应(self-reactive)细胞的凋亡。然而，IFN-β仅可通过肌内或皮下途径给药， 因此，当将其长时间给药时，其在注射部位导致红斑和水肿，并且导致副 作用，包括肌肉疼痛、寒冷和自身免疫病。

米托蒽醌(novatrone)具有非常低的分子量，因此通过脑膜以抑制脑膜中 T细胞、B细胞和巨噬细胞的增殖以及抗原呈递细胞(APC)的抗原呈递功能， 从而缓解多发性硬化的症状。然而米托蒽醌具有以下缺点：由于其对心脏 有高压力，所以应该限制剂量。

格拉默乙酸酯(GA)是髓磷脂碱基蛋白(MBP)的类似物。当MBP结合至 HLA II类分子时，GA形成GA/MHC复合物，因此当其与T细胞受体(TCR) 结合时，通过与MBP竞争来抑制MBP-反应性T细胞的活化。DA具有减 少复发-缓解多发性硬化的复发次数的作用，并且当多发性硬化复发时，减 轻多发性硬化的症状(像IFN-β)，但是与IFN-β相比，表现增加在中枢神经 系统中产生持久性黑洞的频率。

那他珠单抗是人化的单克隆抗体，其直接结合至整联蛋白VLA 4(极晚 期抗原4)的α4亚基(CD49；白细胞表面上的粘附分子)，以防止白细胞与血 管内皮细胞的结合，从而防止活性T细胞进入中枢神经系统。它表现出对 于复发-缓解多发性硬化的优异作用，但是在给药2年后，在0.3-0.9％的患 者中导致进行性多灶性白质脑病(PML)的副作用。

芬戈莫德是对于多球壳菌素的S1P(鞘氨醇-1-磷酸酯)受体的合成类似 物，并且是近期被US FDA批准的首个口服给药的药物。

芬戈莫德通过将S1PR结合至激活的1型辅助性T细胞起作用以防止激 活的淋巴细胞从二级淋巴组织移动到中枢神经系统。然而，报道研发中的 药物具有副作用，包括感染、黄斑水肿、头痛、流行性感冒、腹泻、腰痛 和肝酶升高(参见Nat.Rev.Neurol.7,255-262；Nat Rev Drug Discov.11, 909-925)。

因此，需要研发可阻滞继发性进展性多发性硬化同时通过短期口服给 药表现高治疗效果的新的药物(参见N Engl J Med.362,456-458)。

淋巴恶性肿瘤

如本文中所使用，术语“淋巴恶性肿瘤”指骨髓和淋巴组织中淋巴样细胞 (B细胞、T细胞和NK/T细胞)的肿瘤。淋巴恶性肿瘤大致归类为白血病、 淋巴瘤和多发性骨髓瘤。淋巴样白血病是血液肿瘤，其中骨髓中不成熟的 淋巴细胞变成癌细胞，其在组织中蓄积并通过血液全身性扩散。淋巴样白 血病大致归类为急性淋巴样白血病和慢性淋巴样白血病。淋巴瘤是血液肿 瘤，其中淋巴组织中的淋巴细胞变成癌细胞，其在组织中蓄积并扩散至外 周血液和骨髓。其归类为霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤。多发性骨 髓瘤是血液肿瘤，其中外周淋巴组织中的浆细胞变成癌细胞，然后其在骨 髓中蓄积(参见J Clin Invest.2012；122:3396-3397；Blood.1994；84:1361-1392； Lancet.2012；380:848-857)。

通过使用环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松的组合的标准化学 疗法进行淋巴恶性肿瘤的治疗。对于药物的初始反应效果，成年患者的缓 解率高达约85％，但是有高的复发率，因此5年无病生存仅为30-40％。此 外，所述药物由于它们的高细胞毒性表现高的感染风险，并且经常导致副 作用，包括神经毒性、消化问题和出血(参见N Engl J Med.1998；339:21-26； N Engl J Med 2006；354:166-78；Nat Rev Drug Discov.2007；6:149-165)。

近期，已报道对于特定细胞具有细胞毒作用的药物对于当所述细胞变 为癌细胞时也具有抗肿瘤作用。抑制布鲁顿氏酪氨酸激酶(BTK)的B细胞免 疫抑制剂依鲁替尼(ibrutinib)是B细胞受体(BCR)的信号转导介质，报道其 具有针对复发或药物难治性B细胞淋巴瘤的抗癌效果。硼替佐米是NF-κB 活性的抑制剂，其用作抑制记忆T细胞和B细胞的免疫抑制剂。US FDA 批准硼替佐米作为治疗多发性硬化的治疗剂，并且近期还将其与依鲁替尼 联合用于B细胞淋巴瘤。伏立诺他(Suberoylanilide hydroxamic acid(SAHA)) 是组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(HDACi)，已知其具有针对皮肤T细胞淋巴瘤的 抗肿瘤效果。由于近期在动物模型中发现SAHA针对移植物抗宿主病 (GVHD)的抑制效果，SAHA作为免疫抑制剂受到新的关注(参见Semin  Cancer Biol.2011 Nov；21:335-46；Br J Haematol.2013；161:43-56；N Engl J  Med.2008；359:906-917；Nat Rev Drug Discov.2006；5:769-784；J.Clin.Invest. 2008；118:2562-2573)。因此，靶向特定免疫细胞的免疫抑制药物临床上可 用作能够特异性靶向特定肿瘤的新的抗癌剂。

发明公开

技术问题

本发明的目的是提供可选择性且有效地移除移植抗原-和自身抗原-特 异性T细胞，并因此可用作预防和治疗移植免疫排斥和/或治疗自身免疫病 的药剂的新型化合物。此外，本发明的目的是提供针对淋巴恶性肿瘤细胞 具有优异的细胞凋亡作用，并因此可用作治疗淋巴恶性肿瘤的药剂的新型 化合物。

因此，本发明的目的是提供具有选择性T细胞抑制活性和/或抗淋巴恶 性肿瘤活性的新型N-酰基腙衍生物，其立体异构体，其药学上可接受的盐， 包含上述的药物组合物，使用所述组合物的治疗方法，以及制备新型N-酰 基腙衍生物的方法。

技术方案

本发明涉及下式1的化合物，其立体异构体或其药学上可接受的盐：

[式1]

其中

A为N-H、O或S；

Q₁、Q₂、Q₃、Q₄和Q₅各自独立地为C或N；

R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地不存在或者为-H、-CF₃、-F、-Br、-Cl、 氰化物、-CH₂OH、-(CO)NH₂、-(C₁-C₆)烷基、-(C_1-3)烷氧基、-NH₂、-N(CH₃)₂或者包含选自N、O和S的1-3元的4、5或6-元杂芳基或杂环烷基(所述 杂芳基或杂环烷基具有至少一个选自-H、卤素和胺的取代基)；

P为-H、-(C₁-C₃)OH、-(C₁-C₆)烷基、-(CO)(C₁-C₆)烷基；

并且

B选自：

其中，X、Y和Z各自独立地为C、N或S，并且

R₆和R₇各自独立地不存在或者为-H、-Br、-(C₁-C₆)烷基、-(C₁-C₃)OH、

在本发明的一个方面中，所述式1的化合物通过以下进一步定义：

A为N-H、O或S；

Q₁、Q₂、Q₃、Q₄和Q₅为C；

R₂和R₄为H；

R₁、R₃和R₅各自独立地为-H、-F、-Br、-Cl、甲基、乙基、-CH₂OH、 氰化物、-NH₂或者包含选自N、O和S的1-3元的4、5或6-元杂芳基或杂 环烷基；

P为-H、甲基、-CH₂OH、-CH₂CH₂OH、

并且

B选自：

其中X和Y为C，

Z为N，并且

R₆和R₇各自独立地为-H、甲基或-CH₂CH₂OH。

本发明的式1的化合物一般可以其药学上可接受的盐的形式使用。所 述其药学上可接受的盐包括药学上可接受的碱加成盐或酸加成盐，例如金 属盐(如碱金属盐和碱土金属盐)、铵盐、有机胺加成盐、氨基酸加成盐和磺 酸盐。酸加成盐包括无机酸加成盐，如盐酸盐、磺酸盐和磷酸盐；以及有 机酸加成盐，如烷基磺酸盐、芳基磺酸盐、乙酸盐、苹果酸盐、延胡索酸 盐、酒石酸盐、柠檬酸盐和乳酸盐。金属盐的实例包括碱金属盐，如锂盐、 钠盐和钾盐；碱土金属盐，如镁盐、钙盐、铝盐和锌盐。铵盐的实例包括 铵盐和四甲基铵盐。有机胺加成盐的实例包括与吗啉和哌啶形成的盐。氨 基酸加成盐的实例包括与甘氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸和赖氨酸形成的盐。 磺酸盐的实例包括甲磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐。

术语“立体异构体”意指具有相同的分子式和键，但区别在于它们的三 维取向的异构体分子。

优选的本发明的式1的化合物的具体实施例包括：

化合物065

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰肼；

化合物092

(E)-N'-((1H-吲哚-5-基)亚甲基)-2-(4-溴-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼；

化合物108

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰肼；

化合物109

(E)-N'-((1H-吲哚-2-基)亚甲基)-2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰肼；

化合物112

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(4-溴-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼；

化合物133

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(4-溴-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼；

化合物135

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,4,6-三甲苯基氨基)乙酰肼；

化合物137

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,6-二甲基-4-(吡啶-3-基)苯氧基)乙 酰肼；

化合物139

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,6-二甲基-4-(吡啶-3-基)苯氧基)乙 酰肼；

化合物146

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼；

化合物147

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,4,6-三甲苯基硫基)乙酰肼；

化合物149

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,6-二甲基-4-(嘧啶-5-基)苯氧基)乙 酰肼；

化合物155

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(4-氯-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼；

化合物156

(E)-N'-((1H-吲哚-3-基)亚甲基)-2-(4-氯-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼；

化合物157

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(4-氯-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼；

化合物158

(E)-N'-((1H-吲哚-3-基)亚甲基)-2-(2,4,6-三甲苯基硫基)乙酰肼；

化合物159

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,4,6-三甲苯基硫基)乙酰肼；

化合物164

(E)-2-(2,4,6-三甲苯氧基)-N-甲基-N'-((1-甲基-1H-吲哚-4-基)亚甲基)乙 酰肼；

化合物177

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-N-(2-羟基乙基)-2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙 酰肼；

化合物180

(E)-N'-((1-(2-羟基乙基)-1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙 酰肼；

化合物182

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-3-基)苯氧基)乙 酰肼；

化合物183

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-3-基)苯氧基)乙 酰肼；

化合物184

(E)-N'-((1H-吲哚-5-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-3-基)苯氧基)乙 酰肼；

化合物187

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-((2-甲基吡啶-3-基)氧基)乙酰肼；

化合物195

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-N-(2-羟基乙基)-2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙 酰肼；

化合物217

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-4-基)苯氧基)乙 酰肼；

化合物218

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2-(呋喃-3-基)-4,6-二甲基苯氧基)乙 酰肼；

化合物227

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(4-(羟基甲基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酰 肼；

化合物228

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(4-(羟基甲基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酰 肼；

化合物229

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基) 乙酰肼；

化合物232

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(4-氨基-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼；

化合物233

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-N-(羟基甲基)-2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰 肼；

化合物236

(E)-(2-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-1-(2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰基)肼基)甲 基2-(二甲基氨基)乙酸酯；

化合物237

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(4-氰基-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼；

化合物238

(E)-(2-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-1-(2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰基)肼基)甲 基2-(二甲基氨基)乙酸酯；

化合物243

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-N-乙酰基-2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰肼；

化合物244

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-N-(羟基甲基)-2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰 肼；

化合物245

(E)-(2-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-1-(2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰基)肼基)甲 基4-(吗啉代甲基)苯甲酸酯；

化合物252

(E)-(2-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-1-(2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰基)肼基)甲 基乙酸酯；

化合物258

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼；

化合物259

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2-溴-4,6-二甲基苯氧基)乙酰肼；

化合物260

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2-溴-4,6-二甲基苯氧基)乙酰肼；

化合物272

(E)-(2-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-1-(2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰基)肼基)甲 基4-(吗啉代甲基)苯甲酸酯；

化合物311

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙 酰肼；

化合物312

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙 酰肼；

化合物313

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯氧基)乙酰肼；

化合物314

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯氧基)乙酰肼；

化合物317

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2-(呋喃-2-基)-4,6-二甲基苯氧基)乙 酰肼；

化合物319

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-((2-(呋喃-3-基)吡啶-3-基)氧基)乙酰 肼；

化合物320

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基) 乙酰肼；

化合物322

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(4-(呋喃-3-基)-2,6-二甲基苯氧基)乙 酰肼；

化合物323

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,6-二甲基-4-(四氢呋喃-3-基)苯氧基) 乙酰肼；

化合物329

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-((2-乙基-6-甲基吡啶-3-基)氧基)乙酰 肼；

化合物331

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-((2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)氧基)乙酰 肼；

化合物332

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-2-基)苯氧基) 乙酰肼；

化合物333

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2-(呋喃-3-基)-4,6-二甲基苯氧基)乙 酰肼；

化合物336

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(4-(呋喃-3-基)-2,6-二甲基苯氧基)乙 酰肼；

化合物337

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,6-二甲基-4-(四氢呋喃-3-基)苯氧基) 乙酰肼；

化合物343

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-((2-(噻吩-3-基)吡啶-3-基)氧基)乙酰 肼；

化合物344

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(噻吩-2-基)苯氧基)乙 酰肼；

化合物346

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2-(呋喃-2-基)-4-甲氧基苯氧基)乙酰 肼；

化合物375

(E)-2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)-N-甲基-N'-((1-甲基-1H-吲 哚-6-基)亚甲基)乙酰肼；

化合物378

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(4-氟-2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧 基)乙酰肼；

化合物379

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(4-氟-2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧 基)乙酰肼；

化合物380

(E)-2-(4-氟-2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)-N-甲基-N'-((1-甲基-1H- 吲哚-6-基)亚甲基)乙酰肼；和

化合物457

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯 氧基)乙酰肼。

更优选的本发明的式1的化合物的具体实施例包括：

化合物065

(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰肼；

化合物108

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰肼；

化合物229

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基) 乙酰肼；和

化合物457

(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯 氧基)乙酰肼。

本发明还提供药物组合物，其包含式1的N-酰基腙衍生物，其立体异 构体或其药学上可接受的盐；以及药学上可接受的载体。

优选地，所述组合物用于预防和治疗与抑制T细胞活性相关的疾病。 所述疾病的具体实例包括造血干细胞移植或器官移植后的移植物抗宿主病 (GVHD)、多发性硬化和类风湿关节炎。

优选地，所述组合物用于治疗淋巴恶性肿瘤。所述淋巴恶性肿瘤的具 体实例包括T淋巴样白血病、B淋巴样白血病、NK白血病、NKT白血病、 多发性骨髓瘤、T淋巴瘤和B淋巴瘤。

有益效果

本发明提供具有N-酰基腙结构的新型化合物，其可用作选择性T细胞 抑制剂和/或抗淋巴恶性肿瘤药物。

所述化合物有效地抑制活性T细胞。即所述化合物选择性且有效地移 除移植抗原-和自身抗原-特异性T细胞，并因此可用于预防和治疗移植后的 免疫排斥响应和治疗自身免疫病。这样的实例为造血干细胞移植或器官移 植后的移植物抗宿主病(GVHD)、多发性硬化、类风湿关节炎等。

此外，这些化合物针对淋巴恶性肿瘤细胞具有优异的凋亡作用，并因 此可用作治疗淋巴恶性肿瘤的药剂。这样的实例为T淋巴样白血病、B淋 巴样白血病、NK白血病、NKT白血病、多发性骨髓瘤、T淋巴瘤、B淋巴 瘤等。

附图简述

图1和2显示本发明的化合物在细胞培养的条件中针对异型抗原特异 性T细胞的抑制活性测试的结果。

图3显示本发明的化合物针对异型抗原特异性T细胞的抑制活性测试 的结果。

图4显示本发明的化合物针对急性移植物抗宿主病的抑制活性测试的 结果。

图5显示本发明的化合物对于多发性硬化的治疗活性测试的结果。

实施本发明的最佳方式

化合物的制备

可通过由多种文献中已知的方法制备本发明的式1的化合物。会随以 下的反应路线和实施例更详细地描述式1的化合物的制备方法。

[路线1]

化合物1-2的合成(溴乙酸甲酯反应)：

将化合物1-1和溴乙酸甲酯在乙腈中溶解，然后加入碳酸铯，随后搅拌。 反应完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤以移除碳酸铯，在加压下浓缩， 并纯化以得到化合物1-2。

化合物1-3的合成(肼反应)

将化合物1-2和肼一水合物在乙醇中溶解，随后搅拌。反应完成后，将 反应混合物在减压下浓缩，并纯化以得到白色固体形式的化合物1-3。

化合物1-4的合成(醛反应)

将化合物1-3和醛化合物在乙醇中溶解，随后搅拌。反应完成后，将反 应混合物在减压下浓缩以移除乙醇，然后纯化以得到化合物1-4。

通过相同的方法，可合成化合物013、014、034、065、083、092、100、 108、109、112、118、121、127、133、135、136、137、138、139、146、 147、149、152、155、156、157、158、159、180、182、183、184、187、 190、191、192、193、194、196、205、206、211、217、218、227、228、 229、237、256、258、259、260、279、280、286、288、291、293、301、 302、303、304、310、311、312、313、314、317、318、319、320、322、 323、326、327、329、330、331、332、333、336、337、343、344、345、 346、347、356、358、359、378、379和457。

实施例1.化合物013的合成

步骤1. 2-(邻甲苯磺酰基氧基)乙酸甲酯的合成：将邻甲酚(5g,46.24 mmol)在二甲基甲酰胺中溶解。向其中加入溴乙酸甲酯(7.1g,46.24mmol) 和碳酸钾(19g,138.42mmol)，随后在室温下搅拌1小时。反应完成后，向 反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用饱和氯化铵 水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，并在减压下浓缩，以得到2-(邻甲苯磺酰基氧 基)乙酸甲酯，将其在未进行任何进一步纯化下于下一步骤中使用。

步骤2. 2-(邻甲苯磺酰基氧基)乙酰肼的合成：向2-(邻甲苯磺酰基氧基) 乙酸甲酯(8.3g,46.24mmol)中加入过量的肼一水合物，随后在90℃下搅拌 10分钟。反应完成后，向其中加入水，从而形成固体，将其过滤并用乙醚 洗涤，以得到白色固体形式的2-(邻甲苯磺酰基氧基)乙酰肼。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(邻甲苯磺酰基氧基)乙酰肼的 合成：

将2-(邻甲苯磺酰基氧基)乙酰肼(0.1g,0.55mmol)和1H-吲哚-4-甲醛 (0.08g,0.55mmol)在乙醇中溶解，随后在90℃下搅拌3小时。反应完成后， 将反应混合物冷却至室温。向其中加入己烷。将所得的固体过滤，并用乙 醚洗涤，以得到白色固体形式的化合物013。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.51-11.37(m,2H),8.51-8.25(m, 0.7H),7.50-7.46(m,2H),7.23-6.97(m,5H),6.91-6.79(m,2H),5.22-4.68(m, 1H),2.26-2.22(m,3H).

实施例2.化合物014的合成

将2-(邻甲苯磺酰基氧基)乙酰肼(0.1g,0.55mmol)和1H-吲哚-5-甲醛 (0.08g,0.55mmol)在乙醇中溶解，随后在90℃下搅拌3小时。反应完成后， 将反应混合物冷却至室温，随后移除溶剂。向其中加入己烷和乙酸乙酯。 将所形成的固体过滤，并用乙醚洗涤，以得到白色固体形式的化合物014。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.38-11.28(m,2H),8.33-8.07(m,1H), 7.80-7.79(m,1H),7.54-7.52(m,1H),7.44-7.38(m,2H),7.17-7.11(m,2H), 6.88-6.83(m,2H),6.49(m,1H),5.15-4.63(m,2H),2.24-2.21(m,3H).

实施例3.化合物034的合成

将2-(邻甲苯磺酰基氧基)乙酰肼(0.1g,0.55mmol)和1H-吲哚-6-甲醛 (0.101g,0.67mmol)在EtOH中溶解，随后在90℃下搅拌18小时。反应完 成后，将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将所得的固体过滤， 并用乙醚洗涤，以得到化合物034。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.41-11.20(m,1.6H),8.33(s,0.3H), 8.06(m,0.4H),7.69-7.41(m,4H),7.18-7.06(m,2H),6.90-6.80(m,2H),6.45 (m,1H),5.14-4.63(m,2H),2.23-2.16(m,3H).

实施例4.化合物065的合成

步骤1. 2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酸甲酯的合成：将2,4,6-三甲基苯酚(1g, 7.3mmol)在二甲基甲酰胺中溶解。向其中加入溴乙酸甲酯(1.1g,7.3mmol) 和碳酸钾(3g,22mmol)，随后在室温下搅拌16小时。反应完成后，向反应 混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用水洗涤3次，用 硫酸镁干燥，并在减压下浓缩，以得到2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酸甲酯(1.5g 100％)。

步骤2. 2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰肼的合成：将2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙 酸甲酯(1.5g,7.3mmol)在四氢呋喃中溶解。向其中加入肼一水合物(5.16g, 103mmol)，随后在室温下搅拌1小时。反应完成后，将反应混合物在减压 下浓缩。向浓缩物中加入水，并过滤。将滤液用水和乙醚洗涤，以得到白 色固体形式的2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰肼(1.36g,89％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰肼的合 成：

将2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰肼(0.1g,0.48mmol)和1H-吲哚-4-甲醛(0.08 g,0.53mmol)在乙醇中溶解，随后在90℃下搅拌3小时。反应完成后，将 反应混合物冷却至室温。向其中加入己烷。将所得的固体过滤，并用乙醇 洗涤，以得到白色固体形式的化合物065(58mg,36％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.48-11.35(m,2H),8.70(s,0.5H), 8.23(s,0.5H),7.50-7.43(m,2H),7.25-7.10(m,2.5H),6.85-6.76(m,2.5H), 4.84(s,1H),4.36(s,1H),2.23(s,6H),2.19(s,3H).

实施例5.化合物083的合成

步骤1. 2-(邻甲苯氨基)乙酸甲酯的合成：将邻甲苯胺(1g,9.3mmol)在 二甲基甲酰胺中溶解。向其中加入溴乙酸甲酯(1.3g,9.3mmol)和碳酸钾(3.9 g,28mmol)，随后在室温下搅拌16小时。反应完成后，向反应混合物中加 入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用水洗涤3次，用硫酸镁干燥， 并在减压下浓缩，以得到2-(邻甲苯氨基)乙酸甲酯，将其在下一步骤中使用。

步骤2. 2-(邻甲苯氨基)乙酰肼的合成：将2-(邻甲苯氨基)乙酸甲酯(1.7g, 9.3mmol)在四氢呋喃中溶解。向其中加入肼一水合物(5.16g,103mmol)， 随后在室温下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将 所得的浓缩物通过柱色谱法纯化，以得到黄色液体形式的2-(邻甲苯氨基) 乙酰肼(0.3g,18％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(邻甲苯氨基)乙酰肼的合成：

将2-(邻甲苯氨基)乙酰肼(0.12g,0.67mmol)和1H-吲哚-4-甲醛(0.12g, 0.803mmol)在乙醇中溶解，随后在90℃下搅拌3小时。反应完成后，将反 应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将所得的固体过滤，并用乙醚洗 涤，以得到棕色的化合物083(58mg,5％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.40-11.20(m,2.4H),8.27-8.07(m, 1H),7.79-7.37(m,5H),7.00-6.97(m,2H),6.52-6.47(m,3H),4.26(d,J＝5.44 Hz,1.4H),3.82-3.80(d,J＝5.88Hz,1H),2.13-2.11(m,3H).

实施例6.化合物100的合成

将2-(邻甲苯磺酰基氧基)乙酰肼(0.1g,0.56mmol)和1H-吲哚-6-甲醛 (0.97g,0.67mmol)在乙醇中溶解，随后在90℃下搅拌3小时。反应完成后， 将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将所得的固体浓缩物通过柱 色谱法纯化，以得到化合物100(0.04g,47％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.37(bs,0.4H),8.37(bs,0.4H), 8.26-8.25(m,1H),8.09(bs,0.6H),7.85(s,1H),7.60(s,1H),7.16-7.08(m,2H), 6.88-6.81(m,2H),5.15-4.64(m,2H),2.23-2.20(m,3H).

实施例7.化合物108的合成

将2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰肼(0.12g,0.57mmol)和1H-吲哚-6-甲醛(0.1 g,0.69mmol)在乙醇中溶解，随后在90℃下搅拌过夜。反应完成后，将反 应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将所得的固体浓缩物通过柱色谱 法(乙酸乙酯:己烷＝1:1)纯化，并重结晶(乙酸乙酯:己烷＝1:1)，以得到化 合物108(0.03g,16％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.39-11.20(m,2H),8.48(s,0.5H), 8.01(s,0.3H),7.68(s,0.5H),7.57-7.24(m,3H),6.83(s,2H),6.45-6.41(m,1H), 4.73-4.30(m,2H),2.21-2.14(m,9H).

实施例8.化合物109的合成

将2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰肼(0.12g,0.57mmol)和1H-吲哚-2-甲醛(0.1 g,0.69mmol)在乙醇中溶解，随后在90℃下搅拌16小时。反应完成后，将 反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将所得的固体浓缩物通过柱色 谱法和重结晶纯化，以得到化合物109(0.07g,36％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.35-11.30(m,2H),8.47(s,0.6H), 8.01(s,0.4H),7.78-7.70(m,1H),7.53-7.34(m,3H),6.83(m,2H),6.49-6.49(m, 1H),4.72-4.29(m,2H),2.21-2.17(m,9H).

实施例9.化合物112的合成

步骤1. 2-(4-溴-2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯的合成：将4-溴-2,6-二甲基 苯酚(3.0g,14.9mmol)和溴乙酸甲酯(1.55mL,16.4mmol)在乙腈中溶解。向 其中加入碳酸铯(14.6g,44.8mmol)，随后在室温下搅拌1天。反应完成后， 向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并用乙酸乙酯萃取。将所得的 有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，未经纯化下得 到2-(4-溴-2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯(4.1g,100％)。

步骤2. 2-(4-溴-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼的合成：将2-(4-溴-2,6-二甲基 苯氧基)乙酸甲酯(4.1g,14.9mmol)和肼一水合物(0.87mL,17.9mmol)在乙 醇中溶解，随后在回流下搅拌1天。反应完成后，将反应混合物在减压下 浓缩。将浓缩的残渣干燥并纯化，以得到白色固体形式的2-(4-溴-2,6-二甲 基苯氧基)乙酰肼(2.5g,51％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(4-溴-2,6-二甲基苯氧基)乙酰 肼的合成：将2-(4-溴-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(0.18g,0.66mmol)和吲哚-4- 甲醛(0.11g,0.73mmol)在乙醇中溶解，随后在回流下搅拌过夜。反应完成 后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩的残渣干燥并纯化，以得到白色 固体形式的化合物112(52mg,20％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.52,11.48(s,1H),11.37(bs,1H), 8.67,8.23(s,1H),7.51-7.44(m,2H),7.29-7.24(m,2.65H),7.18-7.12(m,2H), 6.77(s,0.47H),4.90,4.42(s,2H),2.29,2.28(m,6H).

实施例10.化合物118的合成

步骤1. 2-(2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯的合成：将2,6-二甲基苯酚(3.0g, 24.6mmol)和溴乙酸甲酯(2.57mL,27.0mmol)在乙腈中溶解。向其中加入碳 酸铯(24.0g,73.7mmol)，随后在室温下搅拌1天。反应完成后，向反应混 合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用 盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩，未经纯化下得到 2-(2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯(4.77g,100％)。

步骤2. 2-(2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼的合成：将2-(2,6-二甲基苯氧基) 乙酸甲酯(4.77g,24.6mmol)和肼一水合物(1.43mL,29.4mmol)在乙醇中溶 解，随后在回流下搅拌1天。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。 将浓缩的残渣干燥并纯化，以得到白色固体形式的2-(2,6-二甲基苯氧基)乙 酰肼(2.2g,46％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼的 合成：将2-(2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(100mg,0.52mmol)和吲哚-4-甲醛 (82.2mg,0.57mmol)在乙醇中溶解，随后在回流下搅拌过夜。反应完成后， 将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩的残渣干燥并纯化，以得到白色固体 形式的化合物118(71.6mg,43％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.51,11.46(s,1H),11.37(bs,1H), 8.70,8.24(s,1H),7.51-7.43(m,2H),7.26-6.78(m,6H),4.89,4.41(s,2H),2.29, 2.28(m,6H).

实施例11.化合物121的合成

步骤1. 2-(2,6-二异丙基苯氧基)乙酸甲酯的合成：将2,6-二异丙基苯酚 (10g,56.1mmol)在乙腈中溶解。向其中加入溴乙酸甲酯(8.5g,56.1mmol) 和碳酸铯(37g,112.4mmol)，随后在回流下搅拌16小时。反应完成后，向 反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用水洗涤3次， 用硫酸镁干燥，并在减压下浓缩，以得到2-(2,6-二异丙基苯氧基)乙酸甲酯 (14g,100％)，将其在下一步骤中使用。

步骤2. 2-(2,6-二异丙基苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2,6-二异丙基苯氧基)乙酸酯(14g,56.1mmol)在EtOH中溶解。向 其中加入肼一水合物(2.5g,56.1mmol)，随后在室温下搅拌16小时。反应 完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将所得的浓缩物通过柱色谱法纯化， 以得到2-(2,6-二异丙基苯氧基)乙酰肼(8.8g,62％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,6-二异丙基苯氧基)乙酰肼 的合成：将2-(2,6-二异丙基苯氧基)乙酰肼(0.1g,0.399mmol)和1H-吲哚-4- 甲醛(0.07g,0.479mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌16小时。反 应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将所得的浓缩物通过柱色谱法纯 化，以得到化合物121(0.03g,20％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.57-11.22(m,2H),8.62-8.20(m,1H), 7.36-6.72(m,8H),4.83-4.33(m,2H),1.19-1.16(m,16H).

实施例12.化合物127的合成

步骤1. 2-(2,6-二叔丁基-4-甲基苯氧基)乙酸甲酯的合成：将2,6-二叔丁 基-4-甲基苯酚(10g,45.4mmol)在乙腈中溶解。向其中加入溴乙酸甲酯(7g, 45.4mmol)和碳酸铯(30g,91mmol)，随后在回流下搅拌16小时。反应完成 后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用水洗 涤3次，用硫酸镁干燥，并在减压下浓缩，以得到2-(2,6-二叔丁基-4-甲基 苯氧基)乙酸甲酯(13.3g,100％)，将其在下一步骤中使用。

步骤2. 2-(2,6-二叔丁基-4-甲基苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2,6-二叔丁基-4-甲基苯氧基)乙酸甲酯(13.3g,45.4mmol)在EtOH 中溶解。向其中加入肼一水合物(2.3g,45.4mmol)，随后在室温下搅拌16 小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将所得的浓缩物通过柱 色谱法纯化，以得到2-(2,6-二叔丁基-4-甲基苯氧基)乙酰肼(6g,45％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,6-二叔丁基-4-甲基苯氧基) 乙酰肼的合成：将2-(2,6-二叔丁基-4-甲基苯氧基)乙酰肼(0.1g,0.342mmol) 和1H-吲哚-4-甲醛(0.07g,0.41mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌 16小时。反应完成后，将所形成的固体过滤，并用乙腈洗涤，以得到化合 物127(0.025g,18％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.52-8.22(s,1H),7.78(m,1.6H),7.41 (m,0.8H),7.14(m,3.2H),6.92(m,0.7H),4.77(s,1.3H),4.23(s,0.5H),2.33(d, J＝4.56Hz,3H),1.38(s,18H).

实施例13.化合物133的合成

将2-(4-溴-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(0.1g,0.37mmol)和1H-吲哚-6-甲 醛(0.11g,0.74mmol)在乙醇中溶解，随后在回流下搅拌12小时。反应完成 后，将反应混合物在减压下浓缩，从而形成结晶固体，将其过滤，用乙醇 洗涤，并通过柱色谱法纯化，以得到化合物133。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.42(d,J＝9.72Hz,1H),11.33-11.22 (s,1H),8.47(s,0.5H),8.03(s,0.5H),7.70(s,0.5H),7.59-7.37(m,3H),7.29(m, 2.5H),6.45(m,1H),4.80(s,1H),4.37(s,1H),2.32(d,J＝5.36Hz,6H).

实施例14.化合物135的合成

步骤1. 2-(2,4,6-三甲苯基氨基)乙酸甲酯的合成：将2,4,6-三甲基苯酰胺 (10g,74mmol)在乙腈中溶解。向其中加入溴乙酸甲酯(11.3g,74mmol)和碳 酸铯(48g,148mmol)，随后在回流下搅拌16小时。反应完成后，向反应混 合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用水洗涤3次，用硫 酸镁干燥，并在减压下浓缩，以得到2-(2,4,6-三甲苯基氨基)乙酸甲酯(15.3g, 100％)，将其在下一步骤中使用。

步骤2. 2-(2,4,6-三甲苯基氨基)乙酰肼的合成：将2-(2,4,6-三甲苯基氨基) 乙酸甲酯(15.3g,74mmol)在EtOH中溶解。向其中加入肼一水合物(3.7g,74 mmol)，随后在100℃，回流下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物 在减压下浓缩。将所得的固体化合物过滤以得到2-(2,4,6-三甲苯基氨基)乙 酰肼(3.9g,25％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,4,6-三甲苯基氨基)乙酰肼的 合成：

将2-(2,4,6-三甲苯基氨基)乙酰肼(0.1g,0.48mmol)和1H-吲哚-4-甲醛 (0.084g,0.58mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌16小时。反应完 成后，将反应混合物在减压下浓缩。将所得的浓缩物通过柱色谱法纯化， 然后在减压下浓缩。将形成的结晶固体过滤以得到化合物135(0.089g,55 ％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.47-11.34(m,2H),8.41-8.20(m,1H), 7.47(m,2H),7.48-7.10(m,2H),6.91(s,0.6H),6.74(m,2H),4.36-3.60(m,3H), 2.25-2.12(m,9H).

实施例15.化合物136的合成

将2-(2,4,6-三甲苯基氨基)乙酰肼(0.1g,0.48mmol)和1H-吲哚-3-甲醛 (0.084g,0.58mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌16小时。反应完 成后，将反应混合物在减压下浓缩。将所得的浓缩物通过柱色谱法纯化， 然后在减压下浓缩。将形成的结晶固体过滤以得到化合物136(0.06g,37 ％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.53(bs,1H),11.25-11.06(m,1H), 8.33-8.03(m,2H),7.70(m,1H),7.40(m,1H),7.21-7.05(m,2H),6.74-6.71(m, 2H),4.36-4.01(m,3H),2.25-2.12(m,9H).

实施例16.化合物137的合成

步骤1. 2-(2,6-二甲基-4-(吡啶-2-基)苯氧基)乙酰肼的合成：将2-(4-溴 -2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(0.5g,1.8mmol)在二甲氧基乙烷/水(2:1)和二甲 基甲酰胺中溶解。向其中加入吡啶-2-基硼酸(0.27g,2.2mmol)和Pd(dppf)Cl₂(0.074g,0.055mmol)、碳酸钠(0.58g,5.5mmol)，随后在微波反应器中，于 120℃下反应15分钟。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用二氯甲 烷萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并在减压下浓缩。将浓缩物通过 柱色谱法纯化，以得到2-(2,6-二甲基-4-(吡啶-2-基)苯氧基)乙酰肼(0.34g,69 ％)。

步骤2.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,6-二甲基-4-(吡啶-2-基)苯氧 基)乙酰肼的合成：将2-(2,6-二甲基-4-(吡啶-2-基)苯氧基)乙酰肼(0.1g,0.37 mmol)和1H-吲哚-4-甲醛(0.11g,0.74mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下 搅拌12小时。反应完成后，将所形成的固体化合物过滤，以得到化合物137 (0.09g,61％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.54-11.35(m,2H),8.84(s,1H),8.68 (s,0.5H),8.5(m,1H),8.23(s,0.5H),8.02(m,1H),7.49-6.78(m,7H),4.93(s, 1H),4.38(s,1H),2.35(d,J＝3.08Hz,6H).

实施例17.化合物138的合成

将2-(2,6-二甲基-4-(吡啶-2-基)苯氧基)乙酰肼(0.1g,0.37mmol)和1H- 吲哚-3-甲醛(0.11g,0.74mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌12小时。 反应完成后，将所形成的固体化合物过滤，以得到化合物138(0.08g,46％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.57-11.22(m,2H),8.84-7.00(m, 12H),4.91(s,1H),4.40(s,1H),2.36(m,6H).

实施例18.化合物139的合成

将2-(2,6-二甲基-4-(吡啶-2-基)苯氧基)乙酰肼(0.1g,0.37mmol)和1H- 吲哚-6-甲醛(0.11g,0.74mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌12小时。 反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将所得的浓缩物通过柱色谱法 纯化，以得到化合物139(0.1g,52％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.45-11.22(m,2H),8.84-7.23(m, 11H),6.45(m,1H),4.88(s,0.8H),4.11(s,1H),2.31(d,J＝5.76Hz,6H).

实施例19.化合物146的合成

步骤1. 2-(2-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将2-(吡啶-3-基)苯酚(化合物6-6)(0.25g,1.4mmol)在乙腈中溶解。向 其中加入溴乙酸甲酯(0.15g,1.4mL)和碳酸钾(0.6g,0.4mmol)，随后搅拌16 小时。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤，并在减压下浓缩以得 到2-(2-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酸甲酯(0.35g,100％)，将其在下一步骤中使 用。

步骤2. 2-(2-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酸甲酯(0.32g,1.3mmol)在EtOH中溶解。 向其中加入肼一水合物(0.078g,1.56mmol)，随后在回流下搅拌16小时。 反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将所得的浓缩物通过柱色谱法 纯化，以得到2-(2-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼(0.1g,31％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼 的合成：将2-(2-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼(0.1g,0.41mmol)和1H-吲哚-4- 甲醛(0.072g,0.49mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌16小时。反 应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将所得的浓缩物通过柱色谱法纯 化，然后在减压下浓缩。将形成的结晶固体过滤以得到化合物146(0.030g, 20％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.54-11.33(bs,2H),8.83(m,1H), 8.53-8.49(m,1H),8.42(s,0.3H),8.25(s,0.7H),8.07-8.03(m,1H),7.49-7.32 (m,6H),7.23-6.94(m,5H),5.27-4.74(m,2H).

实施例20.化合物147的合成

步骤1. 2-(2,4,6-三甲苯基硫基)乙酸甲酯的合成：将2,4,6-三甲基苯硫酚 (1.5g,10mmol)在乙腈中溶解。向其中加入溴乙酸甲酯(1.7g,11mmol)和碳 酸钾(3g,2.2mmol)，随后搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物通过硅 藻土过滤。向滤液中加入饱和氯化铵水溶液，并用乙酸乙酯萃取。将所得 的有机层用硫酸镁干燥，并在减压下浓缩，以得到2-(2,4,6-三甲苯基硫基) 乙酸甲酯，将其在下一步骤中使用。

步骤2. 2-(2,4,6-三甲苯基硫基)乙酰肼的合成：将2-(2,4,6-三甲苯基硫基) 乙酸甲酯(2.5g,11mmol)在EtOH中溶解。向其中加入肼一水合物(0.56g,11 mmol)，随后在100℃，回流下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物 在减压下浓缩。向所得的浓缩物加入饱和氯化铵水溶液，并用乙酸乙酯萃 取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化， 以得到2-(2,4,6-三甲苯基硫基)乙酰肼(1g,41％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,4,6-三甲苯基硫基)乙酰肼的 合成：

将2-(2,4,6-三甲苯基硫基)乙酰肼(0.1g,0.45mmol)和1H-吲哚-4-甲醛 (0.078g,0.54mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌16小时。反应完 成后，将反应混合物在减压下浓缩。将所得的浓缩物通过柱色谱法纯化， 然后在减压下浓缩。将形成的结晶固体过滤以得到化合物147(0.028g,6.3 ％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.32-11.27(m,2H),8.30-8.17(m,1H), 7.47(m,2H),7.47-6.88(m,5H),3.72-3.33(m,2H),2.44-1.96(m,9H).

实施例21.化合物149的合成

步骤1. 2-(2,6-二甲基-4-(嘧啶-5-基)苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将2,6-二甲基-4-(嘧啶-5-基)苯酚(化合物6-3)(0.32g,1.6mmol)在乙腈 中溶解。向其中加入溴乙酸甲酯(0.24g,1.6mmol)和碳酸铯(1g,3.2mmol)， 随后在回流下搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤。 向滤液中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并 在减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法纯化，以得到2-(2,6-二甲基-4-(嘧啶 -5-基)苯氧基)乙酸甲酯(0.44g,100％)。

步骤2. 2-(2,6-二甲基-4-(嘧啶-5-基)苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2,6-二甲基-4-(嘧啶-5-基)苯氧基)乙酸酯(0.44g,1.6mmol)在EtOH 中溶解。向其中加入肼一水合物(0.12g,2.4mmol)，随后在100℃，回流下 搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱色谱法 纯化，以得到2-(2,6-二甲基-4-(嘧啶-5-基)苯氧基)乙酰肼(0.085g,19％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,6-二甲基-4-(嘧啶-5-基)苯氧 基)乙酰肼的合成：将2-(2,6-二甲基-4-(嘧啶-5-基)苯氧基)乙酰肼(0.085g, 0.31mmol)和1H-吲哚-4-甲醛(0.068g,0.47mmol)在乙醇中溶解，随后在100 ℃下搅拌12小时。反应完成后，将所形成的固体化合物过滤，以得到化合 物149(0.06g,70％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.55(bs,1H),11.35(bs,1H),9.11(m, 3.2H),8.7(s,0.5H),8.24(s,0.5H),7.55-6.8(m,7H),4.95(s,1H),4.47(s,1H), 2.38(d,J＝3.2Hz,6H).

实施例22.化合物152的合成

步骤1. 2-(4-(2-氨基嘧啶-5-基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将4-(2-氨基嘧啶-5-基)-2,6-二甲基苯酚(化合物6-4)(0.27g,1.24mmol) 在乙腈中溶解。向其中加入溴乙酸甲酯(0.12g,1.24mmol)和碳酸铯(0.81g, 2.3mmol)，随后在回流下搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物通过硅 藻土过滤。向滤液中加入水，并用二氯甲烷萃取。将所得的有机层用硫酸 镁干燥，在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化，以得到2-(4-(2-氨基嘧啶-5- 基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯(0.28g,70％)。

步骤2. 2-(4-(2-氨基嘧啶-5-基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(4-(2-氨基嘧啶-5-基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯(0.28g,1mmol) 在EtOH中溶解。向其中加入肼一水合物(0.06g,1.2mmol)，随后在100℃， 回流下搅拌8小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将所形成 的固体过滤以得到2-(2,6-二甲基-4-(嘧啶-5-基)苯氧基)乙酰肼(0.31g,100 ％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(4-(2-氨基嘧啶-5-基)-2,6-二甲 基苯氧基)乙酰肼的合成：将2-(2,6-二甲基-4-(嘧啶-5-基)苯氧基)乙酰肼 (0.080g,0.28mmol)和1H-吲哚-4-甲醛(0.061g,0.41mmol)在乙醇中溶解， 随后在100℃下搅拌12小时。反应完成后，将所形成的固体过滤，并通过 柱色谱法纯化以得到化合物152。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ9.14-7.01(m,10H),4.93(s,1H),4.42(s, 1H),2.37(d,J＝7.96Hz,6H).

实施例23.化合物155的合成

步骤1. 2-(4-氯-2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯的合成：将4-氯-2,6-二甲基 苯酚(0.5g,3.2mmol)在乙腈中溶解。向其中加入溴乙酸甲酯(0.49g,3.2 mmol)和碳酸铯(1.8g,6.4mmol)，随后搅拌16小时。反应完成后，将反应 混合物通过硅藻土过滤。向滤液中加入水，并用二氯甲烷萃取。将所得的 有机层用硫酸镁干燥，并在减压下浓缩，以得到2-(4-氯-2,6-二甲基苯氧基) 乙酸甲酯(0.4g,55％)，将其在下一步骤中使用。

步骤2. 2-(4-氯-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(4-氯-2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯(0.5g,2.2mmol)在EtOH中溶 解。向其中加入肼一水合物(0.13g,2.6mmol)，随后在回流下搅拌12小时。 反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。向浓缩物中加入水，并用二氯 甲烷萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并在减压下浓缩，以得到2-(4- 氯-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(0.22g,44％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(4-氯-2,6-二甲基苯氧基)乙酰 肼的合成：将2-(4-氯-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(0.08g,0.35mmol)和1H-吲 哚-4-甲醛(0.076g,0.53mmol)在乙醇中溶解，随后在回流下搅拌12小时。 反应完成后，将所形成的固体过滤，以得到化合物155(0.063g,51％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.48-11.33(m,1.5H),8.64(s,0.3H), 8.21(s,0.4H),7.44(m,2H),7.24-6.75(m,5H),4.87(s,1H),4.39(s,1H),2.25 (d,J＝3.48Hz,6H).

实施例24.化合物156的合成

将2-(4-氯-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(0.08g,0.35mmol)和1H-吲哚-4-甲 醛(0.076g,0.53mmol)在乙醇中溶解，随后在回流下搅拌12小时。反应完 成后，将所形成的固体过滤，并通过柱色谱法纯化以得到化合物156(0.03g, 24％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.20(bs,1H),11.1(bs,1H),8.54(s, 0.5H),8.21(d,J＝7.16Hz,5H),8.14(s,0.5H),7.85(m,0.5H),7.75(m,1H), 7.40(m,1H),7.20-7.01(m,4H),4.84(s,1H),4.34(s,1H),2.2(d,J＝3.48Hz, 6H).

实施例25.化合物157的合成

将2-(4-氯-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(0.08g,0.35mmol)和1H-吲哚-6-甲 醛(0.076g,0.53mmol)在乙醇中溶解，随后在回流下搅拌12小时。反应完 成后，将所形成的固体过滤，以得到化合物157(0.043g,34％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.40-11.2(m,1.5H),8.45(s,0.5H), 8.02(s,0.4H),7.69-7.26(m,4H),7.11(d,J＝5.72Hz,2H),6.46(m,1H),4.79 (s,0.8H),4.36(s,1H),2.25(d,J＝4.92Hz,6H).

实施例26.化合物158的合成

将2-(2,4,6-三甲苯基硫基)乙酰肼(0.2g,0.89mmol)和1H-吲哚-3-甲醛 (0.155g,1.1mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌16小时。反应完成 后，将反应混合物在减压下浓缩。将形成的结晶固体过滤以得到化合物158 (0.035g,11％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.52(bs,1H),11.04-11.00(m,1H), 8.25-7.96(m,2H),7.75-7.71(m,1H),7.40(m,1H),7.18-6.88(m,4H),3.70(s, 1.4H),2.45-2.13(m,9H).

实施例27.化合物159的合成

将2-(2,4,6-三甲苯基硫基)乙酰肼(0.2g,0.89mmol)和1H-吲哚-6-甲醛 (0.16g,1.1mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌16小时。反应完成 后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法纯化，然后在减 压下浓缩。将所形成的结晶固体过滤以得到化合物159(0.023g,7.3％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.22(bs,2H),8.13-7.94(m,1H), 7.65-7.18(m,4H),6.93-6.86(m,2H),6.43(m,1H),3.68-3.30(m,2H), 2.49-2.08(m,9H).

实施例28.化合物180的合成

将2-(2,4,6-三甲苯基氨基)乙酰肼(0.03g,0.14mmol)和1-(2-羟基乙 基)-1H-吲哚-4-甲醛(0.03g,0.16mmol)在二甲基亚砜和乙酸中溶解，随后在 室温下搅拌12小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙醚萃取。 将所得的有机层用硫酸钠洗涤，并在减压下浓缩。将浓缩物重结晶以得到 化合物180(0.002g,3.3％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.44(d,J＝25Hz,1H),8.67(s,0.5H), 8.21(s,0.5H),7.55(m,1H),7.43(m,1H),7.26-7.09(m,2H),6.82-6.73(m,3H), 4.86(m,1H),4.81(s,1H),4.33(s,1H),4.23(m,2H),3.69(m,2H),2.2(d,J＝ 0.6Hz,6H),2.17(s,3H).

实施例29.化合物182的合成

步骤1. 2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将2,4-二甲基-6-(吡啶-3-基)苯酚(化合物6-7)(0.7g,3.51mmol)在乙腈 中溶解。向其中加入溴乙酸甲酯(0.54g,3.51mmol)和碳酸铯(2.3g,7.02 mmol)，随后在回流下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物通过硅藻 土过滤。向滤液中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁 干燥，在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化，以得到2-(2,4-二甲基-6-(吡啶 -3-基)苯氧基)乙酸甲酯(0.71g,75％)。

步骤2. 2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酸酯(0.71g,2.63mmol)在 EtOH中溶解。向其中加入肼一水合物(0.13g,2.63mmol)，随后在100℃， 回流下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱 色谱法纯化，以得到2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼(0.71g,100 ％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-3-基)苯氧 基)乙酰肼的合成：将2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼(0.2g,0.74 mmol)和1H-吲哚-4-甲醛(0.13g,0.88mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃ 下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将所得的浓缩 物通过柱色谱法纯化，以得到化合物182(0.1g,34％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.32(bs,1H),11.22(bs,1H), 8.78-8.75(m,1H),8.57-8.50(m,1.5H),8.04-7.98(m,1.5H),7.48-7.41(m,3H), 7.21-7.01(m,4.5H),6.33(m,0.5H),4.46-4.00(m,2H),2.35-2.27(m,6H).

实施例30.化合物183的合成

将2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼(0.2g,0.74mmol)和1H- 吲哚-6-甲醛(0.13g,0.88mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌16小时。 反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法纯化， 以得到化合物183(0.14g,47％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.29-11.14(m,2H),8.77-8.74(m,1H), 8.52-8.51(m,1H),8.36(s,0.5H),8.02-7.96(m,1H),7.87(s,0.5H),7.67-7.33 (m,5H),7.11-7.05(m,2.5H),6.45-6.41(m,1H),4.41-3.97(m,2H),2.37-2.21 (m,9H).

实施例31.化合物184的合成

将2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼(0.2g,0.74mmol)和1H- 吲哚-5-甲醛(0.13g,0.88mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌16小时。 反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法纯化， 以得到化合物184(0.14g,48％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.38-11.32(m,1H),11.11-11.09(m, 1H),8.78-8.75(m,1H),8.51(m,1H),8.37(s,0.5H),8.04-7.97(m,1H), 7.86-7.77(m,1H),7.58-7.05(m,6.5H),6.51-6.45(m,1H),4.40-3.96(m,2H), 2.32-2.27(m,6H).

实施例32.化合物187的合成

步骤1. 2-(2-甲基吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯的合成：将2-甲基吡啶-3-醇 (0.6g,4.4mmol)在乙腈中溶解。向其中加入溴乙酸甲酯(0.41mL,4.4mmol) 和碳酸铯(1.7g,5.3mmol)，随后在80℃下搅拌12小时。反应完成后，向 反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥， 在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化，以得到2-(2-甲基吡啶-3-基氧基)乙酸 甲酯(0.34g,42％)，将其在下一步骤中使用。

步骤2. 2-(2-甲基吡啶-3-基氧基)乙酰肼的合成：将2-(2-甲基吡啶-3-基 氧基)乙酸甲酯(0.34g,1.1mmol)在EtOH中溶解。向其中加入肼一水合物 (0.14mL,1.6mmol)，随后在回流下搅拌12小时。反应完成后，将反应混合 物在减压下浓缩。将浓缩物过滤以得到粗品状态的2-(2-甲基吡啶-3-基氧基) 乙酰肼。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2-甲基吡啶-3-基氧基)乙酰肼 的合成：将2-(4-氯-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(0.1g,0.55mmol)和1H-吲哚-4- 甲醛(0.088g,0.61mmol)在乙醇中溶解，随后在回流下搅拌3小时。反应完 成后，将所形成的固体过滤，以得到化合物187(0.14g,82％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.54(bs,1H),11.42(m,1H),8.49(s, 0.4H),8.24(s,0.6H),8.0(m,1H),7.47(m,2H),7.29-7.10(m,4H),6.96(s,1H), 5.28(s,1.3H),4.74(s,0.7H),2.39(d,J＝18.2Hz,3H).

实施例33.化合物190的合成

步骤1. 2-(2,4-二甲基吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯的合成：

将2,4-二甲基吡啶-3-醇(0.5g,3.2mmol)在乙腈中溶解。向其中加入溴 乙酸甲酯(0.35mL,3.9mmol)和碳酸铯(1.25g,3.9mmol)，随后在100℃下 搅拌12小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。 将所得的有机层用硫酸镁干燥，在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化，以 得到2-(2,4-二甲基吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯(0.18g,28％)，将其在下一步骤 中使用。

步骤2. 2-(2,4-二甲基吡啶-3-基氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2,4-二甲基吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯(0.18g,0.9mmol)在EtOH中 溶解。向其中加入肼一水合物(0.05mL,1.1mmol)，随后在回流下搅拌3小 时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩物用乙醇重结晶以 得到2-(2,4-二甲基吡啶-3-基氧基)乙酰肼。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基吡啶-3-基氧基)乙 酰肼的合成：将2-(4-氯-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(0.08g,0.41mmol)和1H- 吲哚-4-甲醛(0.065g,0.45mmol)在乙醇中溶解，随后在回流下搅拌3小时。 反应完成后，将所形成的固体通过从反应混合物中过滤收集，并通过柱色 谱法纯化以得到化合物190(0.045g,33％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.52-11.33(m,1H),8.62(s,0.5H),8.2 (s,0.5H,),8.08(m,1H),7.49-6.77(m,6H),4.94(s,1H),4.45(s,1H),2.47(m, 3H),2.29(m,3H).

实施例34.化合物191的合成

将2-(4-氯-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(0.065g,0.33mmol)和1H-吲哚-6- 甲醛(0.053g,0.36mmol)在乙醇中溶解，随后在回流下搅拌12小时。反应 完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法纯化，以得 到化合物191(0.088g,82％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.41(m,1H),11.25(m,1H),8.43(s, 0.5H),8.06(m,1.5H,),7.7-7.07(m,5H),6.43(m,1H),4.86(s,1H),4.66(s, 1H),2.39(d,J＝3.08Hz,3H),2.28(d,J＝3.08Hz,3H).

实施例35.化合物192的合成

步骤1. 2-(2-(三氟甲基)苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将2-(三氟甲基)苯酚(1g,6.2mmol)在乙腈中溶解。向其中加入溴乙酸 甲酯(0.94g,6.2mmol)和碳酸铯(4g,12mmol)，随后搅拌16小时。反应完 成后，将反应混合物通过硅藻土过滤。向滤液中加入饱和碳酸氢钠水溶液， 并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并在减压下浓缩，以 得到2-(2-(三氟甲基)苯氧基)乙酸甲酯(1.4g,100％)，将其在下一步骤中使 用。

步骤2. 2-(2-(三氟甲基)苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2-(三氟甲基)苯氧基)乙酸甲酯(1.4g,6.2mmol)在EtOH中溶解。 向其中加入肼一水合物(2g,40mmol)，随后在回流下搅拌16小时。反应完 成后，将反应混合物在减压下浓缩。向浓缩物中加入水，并用二氯甲烷萃 取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并在减压下浓缩，以得到2-(2-(三氟甲 基)苯氧基)乙酰肼(1.4g,96％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2-(三氟甲基)苯氧基)乙酰肼的 合成：将2-(2-(三氟甲基)苯氧基)乙酰肼(0.2g,0.85mmol)和1H-吲哚-4-甲醛 (0.13g,0.85mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌16小时。反应完成 后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法纯化，以得到化 合物192(0.27g,88％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.57-11.33(m,2H),8.43-8.25(m,1H), 7.64-7.44(m,4H),7.25-6.96(m,6H),5.37-4.84(m,2H).

实施例36.化合物193的合成

将2-(2-(三氟甲基)苯氧基)乙酰肼(0.2g,0.85mmol)和1H-吲哚-5-甲醛 (0.13g,0.85mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌16小时。反应完成 后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法纯化，以得到化 合物193(0.18g,43％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.57-11.33(m,2H),8.25-8.06(m,1H), 7.77-7.79(m,1H),7.62-7.51(m,4H),7.41-7.36(m,2.5H),7.16-7.07(m,2.5H), 7.47(m,1H),5.30-4.79(m,2H).

实施例37.化合物194的合成

将2-(2-(三氟甲基)苯氧基)乙酰肼(0.2g,0.85mmol)和1H-吲哚-6-甲醛 (0.13g,0.85mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌16小时。反应完成 后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法纯化，以得到化 合物194(0.17g,55％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.49-11.26(m,2H),8.27-8.07(m,1H), 7.71-7.54(m,4H),7.44-7.42(m,2H),7.20-7.06(m,2H),6.45(s,1H),5.31-4.80 (m,2H).

实施例38.化合物196的合成

步骤1. 2-(2-氯吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯的合成：

将2-氯吡啶-3-醇(0.6g,4.6mmol)在乙腈中溶解。向其中加入溴乙酸甲 酯(0.52mL,9.26mmol)和碳酸铯(1.8g,5.6mmol)，随后搅拌3小时。反应完 成后，向反应混合物中加入水，并用二氯甲烷萃取。将所得的有机层用硫 酸镁干燥，在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化，以得到2-(2-氯吡啶-3-基 氧基)乙酸甲酯(0.86g,92％)，将其在下一步骤中使用。

步骤2. 2-(2-氯吡啶-3-基氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2-氯吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯(0.4g,1.98mmol)在EtOH中溶解。 向其中加入肼一水合物(0.1mL,2.2mmol)，随后在回流下搅拌12小时。反 应完成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到2-(2-氯吡啶-3-基氧基)乙酰 肼。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2-氯吡啶-3-基氧基)乙酰肼的 合成：将2-(2-氯吡啶-3-基氧基)乙酰肼(0.1g,0.49mmol)和1H-吲哚-4-甲醛 (0.086g,0.59mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌12小时。反应完 成后，将所形成的固体化合物过滤，以得到化合物196(0.15g,92％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.61(bs,1H),11.36(m,1H),8.46(s, 0.2H),8.25(s,0.8H),7.56-7.09(m,7H),6.97(m,1H),5.42(s,1.5H),4.88(s, 0.5H),4.9(m,1H),4.88(s 2H),4.08(t,J＝6.28Hz,2H),3.58(m,2H),2.18(d,J ＝4.28Hz,9H).

实施例39.化合物205的合成

将2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰肼(0.10g,0.48mmol)和1H-苯并[d]咪唑-5- 甲醛(0.079g,0.48mmol)在EtOH中溶解，随后在100℃下搅拌16小时。 反应完成后，将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将所得的固体 通过柱色谱法纯化，以得到化合物205(0.058g,36％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ12.62-12.48(m,1H),11.47-11.39(m, 1H),8.52(s,0.5H),8.29-8.23(m,1H),8.05(s,0.5H),7.88-7.43(m,3H), 6.83-6.82(m,2H),4.74-4.31(m,2H),2.23-2.14(m,9H).

实施例40.化合物206的合成

将2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰肼(0.10g,0.39mmol)和苯并[d][1,2,3]噻二 唑-5-甲醛(0.079g,0.48mmol)在EtOH中溶解，随后在100℃下搅拌16小 时。反应完成后，将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将所得的 固体通过柱色谱法和重结晶纯化，以得到化合物206(0.11g,65％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.81-11.73(m,1H),8.89-8.85(m,1H), 8.69(s,0.5H),8.47-8.36(m,1H),8.23-8.07(s,1.5H),6.84-8.81(m,2H), 4.80-4.36(m,2H),2.22-2.16(m,9H).

实施例41.化合物211的合成

将2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰肼(0.10g,0.39mmol)和3-((4-甲基哌啶-1- 基)甲基)-1H-吲哚-4-甲醛(0.089g,0.42mmol)在二甲基亚砜中溶解，随后在 室温下搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物冷却至室温，加入水，并 用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并在减压下浓缩。将形 成的固体过滤以得到化合物211(0.078g,45％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.42-11.17(m,1H),11.1(m,1H),9.08 (s,0.5H),8.6(s,0.5H),7.59(d,J＝7.60Hz,5H),7.43-7.27(m,1.5H),7.13(t,J ＝7.68Hz,0.5H),7.0.3(t,J＝7.72Hz,0.5H),6.83(d,J＝10.0Hz,2H),4.74(s, 1H),4.34(s,1H),3.59(s,1H),3.50(m,1H),2.86(m,2H),2.23(s,3H),2.18(m, 6H),1.86(m,2H),1.47(m,2H),1.28(m,1H),1.01(m,2H),0.81(m,3H).

实施例42.化合物217的合成

步骤1. 2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-4-基)苯氧基)乙酸甲酯的合成：将2,4-二 甲基-6-(吡啶-4-基)苯酚(化合物6-8)(0.12g,0.6mmol)在乙腈中溶解。向其 中加入溴乙酸甲酯(0.092g,0.6mmol)和碳酸铯(0.2g,0.6mmol)，随后搅拌 16小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化， 以得到2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-4-基)苯氧基)乙酸甲酯(0.1g,61％)。

步骤2. 2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-4-基)苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-4-基)苯氧基)乙酸酯(0.1g,0.37mmol)在EtOH 中溶解。向其中加入肼一水合物(0.13g,2.63mmol)，随后在100℃，回流 下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱色谱 法纯化，以得到2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼(0.1g,100％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-4-基)苯氧 基)乙酰肼的合成：将2-(2,4-二甲基-6-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼(0.06g,0.22 mmol)和1H-吲哚-4-甲醛(0.032g,0.22mmol)在乙醇中溶解，随后在回流下 搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩物通过柱 色谱法纯化，以得到化合物217(0.04g,45％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.28-11.12(m,2H),8.61-8.58(m,2H), 8.38-7.89(2s,1H),7.68(s,0.5H),7.63-7.34(m,5.5H),7.14-7.09(m,2.5H), 6.46-6.42(m,1H),4.443.99(2s,2H),2.34-2.29(m,6H).

实施例43.化合物218的合成

步骤1. 2-(2-(呋喃-3-基)-4,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将2-(呋喃-3-基)-4,6-二甲基苯酚(化合物6-2)(0.2g,1.1mmol)在乙腈中 溶解。向其中加入溴乙酸甲酯(0.16g,1.1mmol)和碳酸铯(0.35g,1.1mmol)， 随后搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤。将滤液在 减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化，以得到2-(2-(呋喃-3-基)-4,6-二甲基苯 氧基)乙酸甲酯(0.18g,64％)。

步骤2. 2-(2-(呋喃-3-基)-4,6-二甲基苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2-(呋喃-3-基)-4,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯(0.1g,0.38mmol)在 EtOH中溶解。向其中加入肼一水合物(1g,20mmol)，随后在回流下搅拌16 小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到2-(2-(呋喃-3-基)-4,6- 二甲基苯氧基)乙酰肼(0.03g,30％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2-(呋喃-3-基)-4,6-二甲基苯氧 基)乙酰肼的合成：将2-(2-(呋喃-3-基)-4,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(0.03g,0.12 mmol)和1H-吲哚-6-甲醛(0.017g,0.12mmol)在乙醇中溶解，随后在回流下 搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩物通过柱 色谱法纯化，以得到化合物218(0.02g,45％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.38-11.37(m,1H),11.29-11.16(m, 1H),8.46,8.30(2s,1H),8.26(s,0.5H),8.00(s,0.5H),7.73(m,1.5H),7.60-7.20 (m,4.5H),7.02-6.98(m,2H),6.51-6.39(m,1H),4.66(s,1H),4.20(m,1H), 2.30-2.27(m,6H).

实施例44.化合物227的合成

步骤1. 2-(4-(羟基甲基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将4-(羟基甲基)-2,6-二甲基苯酚(0.034g,0.22mmol)在甲醇中溶解。向 其中加入溴乙酸甲酯(0.034g,0.22mmol)和碳酸钾(0.031g,0.22mmol)，随 后搅拌16小时。反应完成后，向反应混合物中加入饱和氯化铵水溶液，并 用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并在减压下浓缩，以得 到2-(4-(羟基甲基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯(0.04g,80％)，将其在下一 步骤中使用。

步骤2. 2-(4-(羟基甲基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(4-(羟基甲基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯(0.3g,1.3mmol)在 EtOH中溶解。向其中加入肼一水合物(1g,18mmol)，随后在60℃下搅拌 16小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到2-(4-(羟基甲 基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(0.25g,83％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(4-(羟基甲基)-2,6-二甲基苯氧 基)乙酰肼的合成：将2-(2-(三氟甲基)苯氧基)乙酰肼(0.1g,0.45mmol)和1H- 吲哚-4-甲醛(0.065g,0.45mmol)在乙醇中溶解，随后在100℃下搅拌16小 时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法纯 化，以得到化合物227(0.05g,32％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.53-11.46(m,1H),11.37(bs,1H), 8.69(s,1H),8.22(s,1H),7.50-7.43(m,2H),7.25-7.11(m,2.5H),6.98(m,2H), 6.76(s,0.5H),5.10-5.08(m,1H),4.86(s,1H),4.39-4.38(m,3H),2.27-2.26(m, 6H).

实施例45.化合物228的合成

将2-(2-(三氟甲基)苯氧基)乙酰肼(0.07g,0.31mmol)和1H-吲哚-6-甲醛 (0.045g,0.31mmol)在乙醇中溶解，随后在回流下搅拌16小时。反应完成 后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法纯化，以得到化 合物228(0.05g,46％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.44-11.40(m,1H),11.33-11.23(m, 1H),8.50-8.03(2s,1H),7.77(s,0.5H),7.59-6.76(m,3.5H),6.98(s,2H), 6.47-6.42(m,1H),5.11-5.07(m,1H),4.77(s,1H),4.39-4.34(m,3H),2.26-2.24 (m,6H).

实施例46.化合物229的合成

步骤1. 2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯酚(化合物7-2)(0.4g,2.1mmol)在乙 腈中溶解。向其中加入溴乙酸甲酯(0.32g,2.1mmol)和碳酸铯(1.4g,4.2 mmol)，随后搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤。 将滤液在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化，以得到2-(2,4-二甲基-6-(四氢 呋喃-3-基)苯氧基)乙酸甲酯(0.42g,76％)。

步骤2. 2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酸甲酯(0.18g,0.68mmol) 在EtOH中溶解。向其中加入肼一水合物(1g,20mmol)，随后在回流下搅拌 16小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到2-(2,4-二甲基 -6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酰肼(0.1g,56％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-3-基) 苯氧基)乙酰肼的合成：将2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酰肼 (0.1g,0.38mmol)和1H-吲哚-6-甲醛(0.067g,0.45mmol)在乙醇中溶解，随 后在回流下搅拌16小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓 缩物通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝2:1)纯化，以得到化合物229(0.063g, 43％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.48-11.44(m,1H),11.35-11.23(m, 1H),8.48(s,0.5H),8.05(s,0.5H),7.72(s,0.5H),7.59-7.27(m,3.5H), 6.96-6.88(m,2H),6.47-6.43(m,1H),4.77(s,1H),4.34(s,1H),4.02-3.92(m, 2H),3.77-3.73(m,2H),3.53-3.43(m,1H),2.26-2.20(m,7H),1.89-2.20(m, 1H).

实施例47.化合物237的合成

步骤1. 2-(4-氰基-2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将4-羟基-3,5-二甲基苄腈(200mg,1.4mmol)、溴乙酸甲酯(0.15mL,1.4 mmol)和碳酸铯(500mg,1.68mmol)在乙腈4mL中溶解，随后在80℃下搅 拌2小时。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯萃取，用硫酸镁干燥， 并在减压下浓缩以得到2-(4-氰基-2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯(303mg,99 ％)。

步骤2. 2-(4-氰基-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(4-氰基-2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯(200mg,0.91mmol)和肼(0.05 mL,1.0mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在80℃下搅拌12小时。反应完 成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到2-(4-氰基-2,6-二甲基苯氧基)乙酰 肼(180mg,90％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(4-氰基-2,6-二甲基苯氧基)乙 酰肼的合成：将2-(4-氰基-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(92mg,0.42mmol)和 1H-吲哚-6-甲醛(67mg,0.46mmol)在EtOH 1mL中溶解，随后在80℃下搅 拌12小时。反应完成后，将反应混合物通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:1) 纯化，用己烷/乙酸乙酯重结晶，并过滤以得到化合物237(31mg,21％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.45(m,1H),11.32-11.24(m,1H), 8.45-8.04(2s,1H),7.71(s,0.5H),7.59-7.57(m,3H),7.53-7.38(m,2H),7.27 (m,0.5H),6.45(m,1H),4.92(s,1H),4.47(s,1H),2.30(d,J＝4.24Hz,6H).

实施例48.化合物256的合成

将化合物108(100mg,0.35mmol)和NBS(57mg,0.35mmol)在CH₂Cl₂2mL中溶解，随后在室温下搅拌2小时。反应完成后，将反应混合物过滤。 将滤液通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝2:1)纯化，以得到化合物256(40mg, 32％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.45(bs,1H),8.52(s,1H),8.06(s,1H), 7.73(s,0.5H),7.61(m,1H),7.54-7.39(m,2H),6.83(m,2H),2.21(m,9H).

实施例49.化合物258的合成

将2-(2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(100mg,0.51mmol)和1H-吲哚-6-甲醛 (74mg,0.51mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃下搅拌12小时。 移除溶剂，然后将残渣用四氢呋喃和己烷重结晶，以得到化合物258(42mg, 26％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.38(m,1H),11.29(m,1H),8.49,8.04 (2s,1H),7.71(s,0.5H),7.58(m,1H),7.52-7.27(m,2.5H),7.05(m,2H),6.96 (m,1H),6.45(m,1H),4.79(s,2H),4.37(s,2H),2.27(m,6H).

实施例50.化合物259的合成

步骤1. 2-(2-溴-4,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将2-溴-4,6-二甲基苯酚(200mg,1.4mmol)、溴乙酸甲酯(0.15mL,1.4 mmol)和碳酸铯(500mg,1.68mmol)在乙腈4mL中溶解，随后在100℃下 搅拌3小时。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯萃取，用硫酸镁干燥， 并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:3)纯化以得到2-(2-溴-4,6-二甲基苯氧 基)乙酸甲酯(516mg,100％)。

步骤2. 2-(2-溴-4,6-二甲基苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2-溴-4,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯(423mg,1.55mmol)和肼(0.08 mL,1.57mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃下搅拌12小时。反应 完成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到2-(2-溴-4,6-二甲基苯氧基)乙酰 肼(393mg,93％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2-溴-4,6-二甲基苯氧基)乙酰 肼的合成：将(2-溴-4,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(85mg,0.31mmol)和1H-吲哚 -4-甲醛(45mg,0.31mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃下搅拌12 小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩物用乙醇重结晶， 并过滤以得到化合物259(50mg,40％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.47-11.44(m,1H),11.34(bs,1H), 8.68(s,1H),8.23(s,1H),7.47(m,2H),7.25(m,2H),7.17-7.13(m,4H),7.12(s, 1H),6.78(s,1H),4.98(s,1H),4.48(s,2H),2.32-2.24(m,9H).

实施例51.化合物260的合成

将2-(2-溴-4,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(85mg,0.31mmol)和1H-吲哚-6-甲 醛(45mg,0.31mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃下搅拌12小时。 反应完成后，将反应混合物通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:1)纯化，以得 到化合物260(60mg,48％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.38(s,1H),11.29-11.20(m,1H), 8.48-8.02(2s,1H),7.71(s,0.5H),7.58-7.25(m,3H),7.28-7.25(m,0.5H),7.05 (m,1H),6.45(m,1H),4.88,(2s,2H),2.28(m,6H).

实施例52.化合物279的合成

将2-(邻甲苯磺酰基氧基)乙酰肼(100mg,0.56mmol)和1H-吲哚-6-甲醛 (81mg,0.56mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在90℃下搅拌6小时。反 应完成后，将所形成的固体过滤，以得到化合物279(50mg,29％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.30(m,1H),11.28(m,1H),8.34(s, 0.5H),8.08(s,0.5H),7.67(d,J＝2.8Hz,1H),7.46-7.37(m,2H),7.18-7.10(m, 2H),6.89-6.81(m,2H),6.47(m,1H),5.15(s,1H),4.65(s,1H),2.23(d,J＝ 13.2Hz,3H).

实施例53.化合物280的合成

步骤1. 1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚-6-甲醛的合成：将1H-吲哚-4-甲醛(1000 mg,6.89mmol)、氢化钠(360mg,8.26mmol)和苄基磺酰氯(1mL,6.89mmol) 在四氢呋喃10mL中溶解，随后在室温下搅拌12小时。反应完成后，将反 应混合物用乙酸乙酯萃取，用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷 ＝1:3)纯化以得到1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚-6-甲醛(500mg,25％)。

步骤2.(E)-2-(2,4,6-三甲苯氧基)-N'-((1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚-4-基)亚 甲基)乙酰肼的合成：将2-(2,4,6-三甲苯氧基)乙酰肼(30mg,0.14mmol)和 1H-吲哚-4-甲醛(44mg,0.16mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃下 搅拌12小时。反应完成后，将所形成的固体过滤，以得到化合物280(30mg, 39％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.64(m,1H),8.65-8.18(2s,1H), 8.02-7.97(m,4H),7.7-7.2(m,6H),4.78(s,1H),4.36(s,1H),2.20(m,9H).

实施例54.化合物286的合成

步骤1. 2-(2,6-二甲基吡啶-4-基氧基)乙酸甲酯的合成：

将2,6-二甲基吡啶-4-醇(300mg,2.44mmol)、2-溴乙酸甲酯(0.27mL, 2.93mmol)和碳酸铯(2.4g,7.32mmol)在乙腈6mL中溶解，随后在80℃下 搅拌1小时。反应完成后，将反应混合物在减压下过滤。将滤液在减压下 浓缩，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝3:1)纯化，以得到2-(4-氟-2-甲基 苯氧基)乙酸甲酯(200mg,42％)。

步骤2. 2-(2,6-二甲基吡啶-4-基氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2,6-二甲基吡啶-4-基氧基)乙酸甲酯(200mg,1.03mmol)和肼(0.05 mL,1.13mmol)在EtOH 3mL中溶解，随后在100℃下搅拌12小时。反应 完成后，将所形成的固体过滤以得到2-(4-氟-2-甲基苯氧基)乙酰肼(190mg, 79％)。

步骤2.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,6-二甲基吡啶-4-基氧基)乙 酰肼的合成：将2-(2,6-二甲基吡啶-4-基氧基)乙酰肼(30mg,0.15mmol)和 1H-吲哚-4-甲醛(22mg,0.15mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在90℃下搅 拌12小时。反应完成后，将所形成的固体过滤，以得到化合物286(20mg, 41％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.53(m,1H),11.38(m,1H),8.53-8.26 (s,1H),7.49(m,2H),7.19(m,2.5H),7.11(s,0.5H),6.70-6.64(m,2H),5.26(s, 1H),4.74(s,1H),2.34(m,6H).

实施例55.化合物288的合成

将2-(2,6-二甲基吡啶-4-基氧基)乙酰肼(100mg,0.51mmol)和1H-吲哚 -6-甲醛(74mg,0.51mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在110℃下搅拌12 小时。向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫 酸镁干燥，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝2:1)纯化，以得到化合物288 (30mg,18％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.43(m,1H),11.28(m,1H),8.35-8.07 (2s,1H),7.68(d,J＝18.0Hz,1H),7.57(d,J＝8.4Hz,1H),6.66(d,J＝22.0 Hz,2H),6.47(s,1H),5.20(s,H),4.69(s,1H),2.34(m,6H).

实施例56.化合物291的合成

步骤1. 2-(4-氟-2-甲基苯氧基)乙酸甲酯的合成：将4-氟-2-甲基苯酚(500 mg,3.96mmol)、2-溴乙酸甲酯(0.36mL,3.96mmol)和碳酸铯(1,9mg,5.94 mmol)在乙腈8mL中溶解，随后在90℃下搅拌5小时。向反应混合物中 加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色 谱法(己烷:乙酸乙酯＝3:1)纯化，以得到2-(4-氟-2-甲基苯氧基)乙酸甲酯 (450mg,57％)。

步骤2. 2-(4-氟-2-甲基苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(4-氟-2-甲基苯氧基)乙酸甲酯(400mg,2.02mmol)和肼(0.12mL, 2.42mmol)在EtOH 4mL中溶解，随后在90℃下搅拌3小时。反应完成后， 将所形成的固体过滤以得到2-(4-氟-2-甲基苯氧基)乙酰肼(280mg,70％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(4-氟-2-甲基苯氧基)乙酰肼的 合成：将2-(4-氟-2-甲基苯氧基)乙酰肼(100mg,0.50mmol)和1H-吲哚-6-甲 醛(73mg,0.50mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在90℃下搅拌4小时。 向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干 燥，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝2:1)纯化，以得到化合物291(37mg, 23％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.43-11.41(m,1H),11.34-11.30(m, 1H),8.34-8.07(2s,1H),7.72(d,J＝27.7Hz,1H),7.64(m,1H),7.44(m,2H), 6.95(m,3H),5.15(s,H),4.63(s,H),2.22(s,3H)

实施例57.化合物293的合成

步骤1. 2-(2-乙基-6-甲基吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯的合成：

将2-乙基-6-甲基吡啶-3-醇(500mg,3.62mmol)、2-溴乙酸甲酯(0.33mL, 3.62mmol)和碳酸铯(1.78g,5.43mmol)在乙腈5mL中溶解，随后在100℃ 下搅拌5小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。 将所得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝3:1)纯 化，以得到2-(2-乙基-6-甲基吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯(565mg,70％)。

步骤2. 2-(2-乙基-6-甲基吡啶-3-基氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2-乙基-6-甲基吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯(400mg,1.79mmol)和肼 (0.1mL,2.15mmol)在EtOH 4mL中溶解，随后在90℃下搅拌5小时。反 应完成后，将反应混合物在减压下过滤以得到2-(2-乙基-6-甲基吡啶-3-基氧 基)乙酰肼(242mg,65％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2-乙基-6-甲基吡啶-3-基氧基) 乙酰肼的合成：将2-(2-乙基-6-甲基吡啶-3-基氧基)乙酰肼(100mg,0.50 mmol)和1H-吲哚-6-甲醛(73mg,0.50mmol)在EtOH 3mL中溶解，随后在 90℃下搅拌4小时。反应完成后，将所形成的固体过滤，以得到化合物293 (46mg,29％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.43(bs,1H),11.30-11.27(s,1H), 8.32-8.06(2s,1H),7.64(m,1H),7.42(m,2H),7.36(m,1H),7.02(m,1H),6.45 (s,1H),5.17(s,1H),4.66(s,1H),2.75(m,2H),2.45(s,3H),1.21(m,3H).

实施例58.化合物301的合成

步骤1. 2-(2,6-二甲基嘧啶-4-基氧基)乙酸甲酯的合成：

将2,6-二甲基嘧啶-4-醇(300mg,2.42mmol)、溴乙酸甲酯(0.22mL,2.90 mmol)和碳酸铯(945mg,2.90mmol)在乙腈4mL中溶解，随后在80℃下搅 拌2小时。反应完成后，将反应混合物在减压下过滤。将滤液在减压下浓 缩，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:3)纯化，以得到2-(2,6-二甲基嘧啶 -4-基氧基)乙酸甲酯(170mg,36％)。

步骤2. 2-(2,6-二甲基嘧啶-4-基氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2,6-二甲基嘧啶-4-基氧基)乙酸甲酯(170mg,0.87mmol)和肼(0.05 mL,0.95mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃下搅拌12小时。反应 完成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到2-(2,6-二甲基嘧啶-4-基氧基)乙 酰肼(149mg,88％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,6-二甲基嘧啶-4-基氧基)乙 酰肼的合成：将2-(2,6-二甲基嘧啶-4-基氧基)乙酰肼(57mg,0.29mmol)和 1H-吲哚-4-甲醛(42mg,0.30mmol)在EtOH 1mL中溶解，随后在100℃下 搅拌12小时。反应完成后，将所形成的固体过滤，以得到化合物301(20mg, 21％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.51-11.33(m,2H),8.47-8.24(m,1H), 7.49(m,2H),7.19(m,2H),7.10(m,1H),6.71(m,1H),5.47(s,1H),4.94(s, 1H).

实施例59.化合物302的合成

步骤1. 2-(2-叔丁基-4-甲氧基苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将2-叔丁基-4-甲氧基苯酚(300mg,1.67mmol)、溴乙酸甲酯(0.18mL, 2.00mmol)和碳酸铯(653mg,2.00mmol)在乙腈4mL中溶解，随后在80℃ 下搅拌1小时。反应完成后，将反应混合物在减压下过滤。将滤液在减压 下浓缩，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:3)纯化，以得到2-(2-叔丁基-4- 甲氧基苯氧基)乙酸甲酯(259mg,62％)。

步骤2. 2-(2-叔丁基-4-甲氧基苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2-叔丁基-4-甲氧基苯氧基)乙酸甲酯(259mg,1.03mmol)和肼(0.06 mL,1.13mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在80℃下搅拌12小时。反应 完成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到2-(2-叔丁基-4-甲氧基苯氧基) 乙酰肼(231mg,89％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2-叔丁基-4-甲氧基苯氧基)乙 酰肼的合成：将2-(2-叔丁基-4-甲氧基苯氧基)乙酰肼(90mg,0.36mmol)和 1H-吲哚-4-甲醛(57mg,0.39mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在90℃下搅 拌12小时。反应完成后，将所形成的固体过滤，以得到化合物302(60mg, 44％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.50(m,1H),11.37(m,1H),8.47-8.27 (2s,1H),7.49(m,2H),7.16(m,2H),6.95(m,1H),6.80(m,1H),6.74(m,2H), 5.13(s,1H),4.12(s,1H),3.69(s,3H),1.38(s,9H).

实施例60.化合物303的合成

将2-(2-叔丁基-4-甲氧基苯氧基)乙酰肼(90mg,0.36mmol)和1H-吲哚 -6-甲醛(57mg,0.39mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在90℃下搅拌12小 时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的 有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:2)纯化，以得到 化合物303(66mg,48％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.41(m,1H),11.26(m,1H),8.31-8.08 (2s,1H),7.71(m,1H),7.56(m,1H),7.38(m,2H),6.85(m,1H),6.74(m,2H), 6.46(m,2H),5.06(s,1H),4.58(s,1H),3.69(s,3H),1.36(s,9H).

实施例61.化合物304的合成

步骤1. 2-((2-甲基吡啶-3-基)氧基)乙酸甲酯的合成：

将3-羟基-2-甲基吡啶(500mg,4.58mmol)和溴乙酸甲酯(0.48mL,5.04 mmol)在乙腈中溶解。向其中加入碳酸铯(2.24g,6.82mmol)，随后在室温下 搅拌1天。反应完成后，向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并用 乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤， 并在减压下浓缩。将浓缩的残渣通过柱色谱法(硅胶；己烷/乙酸乙酯,6/4)纯 化，以得到2-((2-甲基吡啶-3-基)氧基)乙酸甲酯(356mg,43％)。

步骤2. 2-((2-甲基吡啶-3-基)氧基)乙酰肼的合成：

将化合物1-2(2-((2-甲基吡啶-3-基)氧基)乙酸甲酯,356mg,1.94mmol) 和肼一水合物(0.19mL,3.93mmol)在乙醇中溶解，随后在回流下搅拌1天。 反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩的残渣干燥并纯化，以 得到白色固体形式的2-((2-甲基吡啶-3-基)氧基)乙酰肼(240mg,67％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-((2-甲基吡啶-3-基)氧基)乙酰 肼的合成：将2-((2-甲基吡啶-3-基)氧基)乙酰肼(240mg,1.32mmol)和吲哚 -6-甲醛(211.6mg,1.46mmol)在乙醇中溶解，随后在回流下搅拌过夜。反应 完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩的残渣通过柱色谱法(硅胶；二 氯甲烷/甲醇,10/1)纯化以得到褐色固体形式的化合物304(46mg,11％)

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.47(m,1H),11.29(m,1H),8.34-8.00 (m,2H),7.69(d,1H,J＝23.4Hz),7.58(d,1H,J＝8.2Hz),7.47-7.32(m,2H), 7.29-7.23(m,1H),7.21-7.13(m,1H),6.47(s,1H),5.24-4.73(m,2H),2.43(s, 3H).

实施例62.化合物310的合成

步骤1. 2-(2-(呋喃-3-基)吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯的合成：

将2-(呋喃-3-基)吡啶-3-醇(化合物6-10)(100mg,0.62mmol)、溴乙酸甲 酯(0.07mL,0.75mmol)和碳酸铯(244mg,0.75mmol)在乙腈4mL中溶解， 随后在80℃下搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物在减压下过滤， 并在减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:3)纯化，以得 到2-(2-(呋喃-3-基)吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯(128mg,89％)。

步骤2. 2-(2-(呋喃-3-基)吡啶-3-基氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2-(呋喃-3-基)吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯(128mg,0.54mmol)和肼 (0.03mL,0.6mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在90℃下搅拌6小时。反 应完成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到2-(2-(呋喃-3-基)吡啶-3-基氧 基)乙酰肼(108mg,84％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2-(呋喃-3-基)吡啶-3-基氧基) 乙酰肼的合成：将2-(2-(呋喃-3-基)吡啶-3-基氧基)乙酰肼(100mg,0.43mmol) 和1H-吲哚-6-甲醛(70mg,0.44mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃ 下搅拌12小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。 将所得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝3:7)纯 化，以得到化合物310(60mg,39％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.57(bs,1H),11.30(bs,1H), 8.78-8.57(2s,1H),8.30(s,0.2H),8.21(m,1H),8.11(s,1H),7.75(m,1H),7.72 (s,0.9H),7.59-7.40(m,5H),7.26(m,1H),7.16(m,1H),6.47(m,1H),5.36(s, 1H),4.87(s,1H).

实施例63.化合物311的合成

步骤1. 2-(2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯酚(化合物7-3)(117mg,0.66mmol)、溴 乙酸甲酯(0.07mL,0.79mmol)和碳酸铯(258mg,0.79mmol)在乙腈2mL中 溶解，随后在100℃下搅拌2小时。反应完成后，将反应混合物在减压下 过滤，并在减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:3)纯化， 以得到2-(2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酸甲酯(141mg,86％)。

步骤2. 2-(2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酸甲酯(141mg,0.56mmol)和 肼(0.03mL,0.6mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃下搅拌12小时。 反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到2-(2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯 氧基)乙酰肼(127mg,90％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧 基)乙酰肼的合成：将2-(2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯氧基)乙酰肼(70mg,0.28 mmol)和1H-吲哚-6-甲醛(45mg,0.31mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在 100℃下搅拌12小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙 酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝ 1:1)纯化，以得到化合物311(70mg,67％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.31(m,1H),11.20(m,1H),8.47-8.04 (2s,1H),7.71(s,0.5H),7.58(m,1H),7.58-7.38(m,3H),7.27(m,0.5H),7.17 (m,1H),7.06(m,2H),6.45(m,1H),4.81(s,1H),4.04(m,1H),3.97(m,2H), 3.78(m,2H),3.52(m,1H),2.29(m,3H),2.29(m,1H),1.19(m,1H).

实施例64.化合物312的合成

将2-(2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯氧基)乙酰肼(70mg,0.28mmol)和1H-吲哚 -4-甲醛(45mg,0.31mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃下搅拌12 小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得 的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:1)纯化，以得 到化合物312(70mg,67％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.35(m,1H),11.3(m,1H),8.66-8.23 (2s,1H),7.46(m,2H),7.25(m,0.5H),7.16(m,5H),6.77(m,0.5H),4.90(s, 1H),4.40(s,1H),4.03(m,1H),3.77(m,2H),3.54(m,1H),3.34(m,1H),2.29 (s,3H),2.29(m,1H),1.89(m,1H).

实施例65.化合物313的合成

步骤1. 2-(2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯酚(化合物6-9)(100mg,0.57mmol)、溴乙酸 甲酯(0.04mL,0.68mmol)和碳酸铯(160mg,0.68mmol)在乙腈4mL中溶解， 随后在室温下搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物在减压下过滤。将 滤液在减压下浓缩，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:3)纯化，以得到 2-(2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯氧基)乙酸甲酯(146mg,100％)。

步骤2. 2-(2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯氧基)乙酸甲酯(146mg,0.57mmol)和肼 (0.03mL,0.6mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃下搅拌6小时。反 应完成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到2-(2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯氧 基)乙酰肼(121mg,83％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯氧基) 乙酰肼的合成：将2-(2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯氧基)乙酰肼(70mg,0.28mmol) 和1H-吲哚-6-甲醛(45mg,0.31mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃ 下搅拌12小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。 将所得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:1)纯 化，以得到化合物313(20mg,19％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.41(m,2H),8.45-8.01(2s,1H),8.30 (m,1H),7.72(m,1H),7.46(m,4H),7.10(m,4H),6.44(m,1H),4.70(s,1H), 4.25(s,1H),2.30(m,3H).

实施例66.化合物314的合成

将2-(2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯氧基)乙酰肼(70mg,0.28mmol)和1H-吲哚 -4-甲醛(45mg,0.31mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃下搅拌12 小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得 的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:1)纯化，以得 到化合物314(28mg,26％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.44(m,1H),11.34(m,1H),8.64(s, 1H),8.18(s,1H),8.32(m,1H),7.75(m,1H),7.47(m,3H),7.27-7.00(m,5.5H), 6.57(s,0.5H),4.78(s,1H),4.29(s,1H),2.37(m,3H).

实施例67.化合物317的合成

步骤1. 2-(2-(呋喃-2-基)-4,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯的合成：将2-(呋喃 -2-基)-4,6-二甲基苯酚(化合物6-18)(133mg,0.71mmol)、2-溴乙酸甲酯(0.08 mL,0.85mmol)和碳酸铯(276mg,0.85mmol)在乙腈1mL中溶解，随后在 100℃下搅拌1小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙 酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝ 1:4)纯化，以得到2-(2-(呋喃-2-基)-4,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯(168mg,100 ％)。

步骤2. 2-(2-(呋喃-2-基)-4,6-二甲基苯氧基)乙酰肼的合成：将2-(2-(呋 喃-2-基)-4,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯(168mg,0.65mmol)和肼(0.03mL,0.72 mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃下搅拌12小时。反应完成后， 将反应混合物在减压下浓缩以得到2-(2-(呋喃-2-基)-4,6-二甲基苯氧基)乙酰 肼(169mg,100％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2-(呋喃-2-基)-4,6-二甲基苯氧 基)乙酰肼的合成：将2-(2-(呋喃-2-基)-4,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(85mg,0.33 mmol)和1H-吲哚-4-甲醛(52mg,0.36mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在 100℃下搅拌24小时。反应完成后，将所形成的固体过滤，以得到化合物 317(140mg,31％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.57(m,1H),11.46(m,1H),8.64-8.24 (2s,1H),7.75(m,1H),7.47(m,3H),7.11(m,4.5H),6.62(m,1.5H),4.80(s, 1H),4.30(s,1H),2.32(m,6H).

实施例68.化合物318的合成

将2-(2-(呋喃-2-基)-4,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(85mg,0.33mmol)和1H- 吲哚-6-甲醛(52mg,0.36mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在90℃下搅拌 24小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所 得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝45:55)纯化， 以得到化合物318(30mg,23％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.44(m,1H),11.20(m,1H),8.47-8.02 (2s,1H),7.73(m,1H),7.44(m,4H),7.23(m,0.5H),7.14(m,1H),7.02(m,1H), 6.60(m,1H),6.43(m,1H),4.72(s,1H),4.44(s,1H),2.32(m,6H).

实施例69.化合物319的合成

将2-(2-(呋喃-3-基)吡啶-3-基氧基)乙酰肼(70mg,0.30mmol)和1H-吲哚 -4-甲醛(48mg,0.33mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在80℃下搅拌12小 时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的 有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:1)纯化。将生成 物用四氢呋喃/己烷重结晶，并过滤以得到化合物319(50mg,46％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.62(m,1H),11.39(m,1H),8.74-8.46 (m,1H),8.30(s,1H),8.21(m,1H),7.74(m,1H),7.52(m,3H),7.20(m,4H), 7.01(m,1H),5.43(s,1H),4.90(s,1H).

实施例70.化合物320的合成

将2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酰肼(40mg,0.15mmol)和 1H-吲哚-4-甲醛(22mg,0.15mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在90℃下搅 拌4小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱色谱法(乙 酸乙酯:己烷＝1:1)纯化，以得到化合物320(17mg,29％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.45(bs,1H),11.35(bs,1H),8.45(s, 1H),8.25-8.16(2s,1H),7.45(m,2H),7.25(m,3H),7.17(m,1H),7.11(m,1H), 6.96(m,1H),5.49-4.94(s,2H),4.01(m,2H),3.77(m,2H),3.51(m,1H),2.28 (s,3H),2.22(s,3H).

实施例71.化合物322的合成

步骤1. 2-(4-(呋喃-3-基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯的合成：将4-(呋喃 -3-基)-2,6-二甲基苯酚(化合物6-5)(120mg,0.46mmol)、2-溴乙酸甲酯(0.05 mL,0.55mmol)和碳酸铯(448mg,1.39mmol)在乙腈2mL中溶解，随后在 90℃下搅拌3小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯 萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝9:1) 纯化，以得到2-(4-(呋喃-3-基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酸甲酯(130mg,79％)。

步骤2. 2-(4-(呋喃-3-基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(4-(呋喃-3-基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酸酯(125mg,0.48mmol)和肼 (0.024mL,0.48mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在90℃下搅拌2小时。 反应完成后，将反应混合物在减压下过滤，并加入乙醚10mL，随后搅拌 10分钟。将所形成的固体过滤以得到2-(4-(呋喃-3-基)-2,6-二甲基苯氧基) 乙酰肼(102mg,82％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(4-(呋喃-3-基)-2,6-二甲基苯氧 基)乙酰肼的合成：将2-(4-(呋喃-3-基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(40mg,0.15 mmol)和1H-吲哚-6-甲醛(22mg,0.15mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在 90℃下搅拌3小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱 色谱法(己烷:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以得到化合物322(19mg,32％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.41-11.38(m,1H),11.30-11.20(m, 1H),8.50-8.04(2s,1H),8.08(m,1H),7.88(m,1H),7.61(m,1H),7.48-7.37(m, 2H),7.38(m,1H),7.27(m,3H),6.89(m,1H),6.47(m,1H),4.81(s,1H),4.34 (s,1H),2.07(m,6H).

实施例72.化合物323的合成

步骤1. 2-(2,6-二甲基-4-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将2,6-二甲基-4-(四氢呋喃-3-基)苯酚(化合物7-6)(68mg,0.35mmol)、 2-溴乙酸甲酯(0.04mL,0.45mmol)和碳酸铯(341mg,1.05mmol)在乙腈2 mL中溶解，随后在100℃下搅拌4小时。反应完成后，将反应混合物在减 压下过滤。将滤液在减压下浓缩，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝9:1)纯 化，以得到2-(2,6-二甲基-4-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酸甲酯(74mg,79％)。

步骤2. 2-(2,6-二甲基-4-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2,6-二甲基-4-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酸甲酯(67mg,0.25mmol) 和肼(0.012mL,0.25mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在90℃下搅拌2小 时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，加入乙醚10mL，并搅拌 10分钟。将所形成的固体过滤以得到2-(2,6-二甲基-4-(四氢呋喃-3-基)苯氧 基)乙酰肼(45mg,66％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,6-二甲基-4-(四氢呋喃-3-基) 苯氧基)乙酰肼的合成：将2-(2,6-二甲基-4-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酰肼(30 mg,0.11mmol)和1H-吲哚-6-甲醛(17mg,0.11mmol)在EtOH 1mL中溶解， 随后在90℃下搅拌3小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并 通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以得到化合物323(15mg,34％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.42-11.39(m,1H),11.37-11.32(m, 1H),8.47-8.03(s,1H),7.57-7.48(m,2H),7.40-7.37(m,2H),6.95(m,2H),6.47 (m,1H),4.74(s,1H),4.31(s,1H),3.96(m,3H),3.75(m,2H),2.32(s,3H), 2.21(s,3H).

实施例73.化合物326的合成

步骤1. 2-(2,3-二甲基苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将2,3-二甲基苯酚(500mg,4.09mmol)、2-溴乙酸甲酯(0.45mL,4.90 mmol)和碳酸铯(4.0g,12.3mmol)在乙腈8mL中溶解，随后在100℃下搅 拌3小时。反应完成后，将反应混合物在减压下过滤。将滤液在减压下浓 缩，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝9:1)纯化，以得到2-(2,3-二甲基苯氧 基)乙酸甲酯(628mg,83％)。

步骤2. 2-(2,3-二甲基苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2,3-二甲基苯氧基)乙酸甲酯(600mg,3.09mmol)和肼(0.15mL, 3.09mmol)在EtOH 8mL中溶解，随后在90℃下搅拌2小时。反应完成后， 将反应混合物在减压下浓缩，加入乙醚10mL，并搅拌10分钟。将所形成 的固体过滤以得到2-(2,3-二甲基苯氧基)乙酰肼(572mg,95％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,3-二甲基苯氧基)乙酰肼的 合成：将2-(2,3-二甲基苯氧基)乙酰肼(100mg,0.55mmol)和1H-吲哚-4-甲醛 (75mg,0.52mmol)在EtOH 3mL中溶解，随后在90℃下搅拌2小时。反 应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝ 1:1)纯化，以得到化合物326(93mg,56％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.50-11.44(m,1H),11.37-11.32(m, 1H),8.52-8.25(2s,1H),7.50(m,2H),7.23(m,2H),7.06(m,2H),6.81(m,1H), 6.75(m,1H),5.18(s,1H),4.65(s,1H),2.23(s,3H),2.21(s,3H).

实施例74.化合物327的合成

将2-(2,3-二甲基苯氧基)乙酰肼(100mg,0.55mmol)和1H-吲哚-4-甲醛 (75mg,0.52mmol)在EtOH 3mL中溶解，随后在90℃下搅拌2小时。反 应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝ 1:1)纯化，以得到化合物327(104mg,62％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.41(bs,1H),11.27(bs,1H), 8.34-8.07,(2s,1H),7.69(d,J＝22.9Hz,1H),7.56(m,1H),7.41(m,2H),6.98 (m,1H),6.70(m,2H),6.46(m,1H),4.82(d,2H),2.49(s,3H),2.23(s,3H).

实施例75.化合物329的合成

将2-(2-乙基-6-甲基吡啶-3-基氧基)乙酰肼(30mg,0.14mmol)和1H-吲 哚-4-甲醛(21mg,0.37mmol)在EtOH 1mL中溶解，随后在90℃下搅拌4 小时。反应完成后，将所形成的固体过滤，以得到化合物329(19mg,40％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.52(bs,1H),11.37(bs,1H), 8.49-8.25(2s,1H),7.48(m,2H),7.17(m,3H),6.98(m,2H),5.23(s,1H),4.70 (s,1H),2.78(m,2H),2.35(s,3H),1.18(m,3H).

实施例76.化合物330的合成

步骤1. 2-(4-溴-2-氰基苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将5-溴-2-羟基苄腈(400mg,2.01mmol)、2-溴乙酸甲酯(0.2mL,2.2 mmol)和碳酸铯(716mg,2.2mmol)在乙腈4mL中溶解，随后在80℃下搅 拌2小时。反应完成后，将反应混合物在减压下过滤。将滤液在减压下浓 缩，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:3)纯化，以得到2-(4-溴-2-氰基苯 氧基)乙酸甲酯(451mg,83％)。

步骤2. 2-(4-溴-2-氰基苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(4-溴-2-氰基苯氧基)乙酸甲酯(451mg,1.67mmol)和肼(0.09mL, 1.84mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃下搅拌12小时。反应完成 后，将所形成的固体过滤以得到2-(4-溴-2-氰基苯氧基)乙酰肼(398mg,88 ％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(4-溴-2-氰基苯氧基)乙酰肼的 合成：将2-(4-溴-2-氰基苯氧基)乙酰肼(100mg,0.37mmol)和1H-吲哚-4-甲 醛(53mg,0.39mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在90℃下搅拌12小时。 反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机 层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝2:1)纯化，以得到化合 物330(21mg,0.05mmol,14％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.6(bs,1H),11.37(m,1H),8.45-8.26 (2s,1H),8.03(m,1H),7.78(m,1H),7.47(m,2H),7.16(m,3H),6.98(m,1H), 5.47(s,1H),4.93(s,1H).

实施例77.化合物331的合成

步骤1. 2-(2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯的合成：

将2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-醇(化合物7-9)(78mg,0.41mmol)、溴乙酸甲 酯(0.05mL,0.49mmol)和碳酸铯(159mg,0.49mmol)在乙腈2mL中溶解， 随后在80℃下搅拌3小时。反应完成后，将反应混合物在减压下过滤。将 滤液在减压下浓缩，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:5)纯化，以得到 2-(2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯(86mg,88％)。

步骤2. 2-(2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯(86mg,0.36mmol)和肼 (0.02mL,0.39mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃下搅拌12小时。 反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到2-(2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3- 基氧基)乙酰肼(85mg,99％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基氧基) 乙酰肼的合成：将2-(2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基氧基)乙酰肼(85mg,0.36 mmol)和1H-吲哚-6-甲醛(57mg,0.39mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在 100℃下搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯萃取，用硫 酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:1)纯化，以得到化合物331 (64mg,48％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.44(m,1H),11.27(m,1H),8.32-8.07 (2s,1H),7.69(m,2H),7.56(m,1H),7.43(m,2H),7.06(m,1H),6.55(m,1H), 6.46(m,1H),5.09(s,1H),4.59(s,1H),3.59(m,4H),1.82(m,4H).

实施例78.化合物332的合成

步骤1. 2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-2-基)苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-2-基)苯酚(化合物7-5)(200mg,1.04mmol)、 2-溴乙酸甲酯(0.095mL,1.14mmol)和碳酸铯(327mg,1.14mmol)在乙腈2 mL中溶解，随后在100℃下搅拌3小时。反应完成后，将反应混合物在减 压下过滤。将滤液在减压下浓缩，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:3)纯 化，以得到2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-2-基)苯氧基)乙酸甲酯(145mg,0.73 mmol,30％)。

步骤2. 2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-2-基)苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-2-基)苯氧基)乙酸甲酯(80mg,0.30mmol) 和肼(0.02mL,0.33mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃下搅拌6小 时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到2-(2,4-二甲基-6-(四氢 呋喃-2-基)苯氧基)乙酰肼(80mg,100％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-2-基) 苯氧基)乙酰肼的合成：将2-(2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-2-基)苯氧基)乙酰肼(80 mg,0.30mmol)和1H-吲哚-6-甲醛(43mg,0.32mmol)在EtOH 2mL中溶解， 随后在100℃下搅拌12小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用 乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯: 己烷＝1:1)纯化，以得到化合物332(60mg,51％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.36(m,1H),11.2(m,1H),8.48-8.03 (2s,1H),7.70(s,0.5H),7.50(m,4H),7.39(m,0.5H),6.85(m,2H),6.47(m, 1H),4.74-4.31(2s,1H),4.31(m,1H),3.38(m,2H),2.22(m,6H),1.58(m,2H), 1.45(m,2H).

实施例79.化合物333的合成

将2-(2-(呋喃-3-基)-4,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(30mg,0.12mmol)和1H- 吲哚-4-甲醛(17mg,0.12mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在90℃下搅拌6 小时。反应完成后，将所形成的固体过滤，以得到化合物333(14mg,31％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.48-11.43(m,1H),11.34(s,1H),8.43 (d,J＝10.6Hz,1H),8.64-8.27(2s,1H),7.72(m,1H),7.48(m,2H),7.39(m, 1H),7.24(m,2H),7.01(m,1H),6.98(m,1H),4.74(s,1H),4.23(s,1H),2.27(s, 3H),2.24(s,3H).

实施例80.化合物336的合成

将2-(4-(呋喃-3-基)-2,6-二甲基苯氧基)乙酰肼(30mg,0.11mmol)和1H- 吲哚-4-甲醛(17mg,0.15mmol)在EtOH 1mL中溶解，随后在90℃下搅拌 10小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱色谱法(己烷: 乙酸乙酯＝1:1)纯化，以得到化合物336(18mg,41％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.51(bs,1H),11.35(s,1H),8.35-8.27 (2s,1H),8.08(m,1H),7.50(m,1H),7.46(m,1H),7.32(m,1H),7.24(m,2H), 7.05(m,1H),6.90(m,1H),5.04(s,1H),4.77(s,1H),2.31(d,J＝16.0Hz,3H), 2.16(s,3H).

实施例81.化合物337的合成

将2-(2,6-二甲基-4-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酰肼(50mg,0.19mmol)和 1H-吲哚-4-甲醛(100mg,0.55mmol)在EtOH 1mL中溶解，随后在90℃下 搅拌3小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。 将所得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝1:1)纯 化，以得到化合物337(31mg,50％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.42(bs,1H),11.29(m,1H),8.55-8.16 (2s,1H),7.58(m,2H),7.40(m,2H),6.95(m,2H),6.47(m,1H),5.26(s,1H), 4.73(s,1H),3.96(m,3H),3.75(m,2H),2.32(s,3H),2.21(s,3H).

实施例82.化合物343的合成

步骤1. 2-(2-(噻吩-3-基)吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯的合成：将2-(噻吩-3- 基)吡啶-3-醇(化合物6-12)(50mg,0.28mmol)、2-溴乙酸甲酯(0.03mL,0.31 mmol)和碳酸铯(101mg,0.31mmol)在乙腈1mL中溶解，随后在80℃下搅 拌3小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将 所得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:1)纯化， 以得到2-(2-(噻吩-3-基)吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯(48mg,67％)。

步骤2. 2-(2-(噻吩-3-基)吡啶-3-基氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2-(噻吩-3-基)吡啶-3-基氧基)乙酸甲酯(48mg,0.19mmol)和肼 (0.01mL,0.21mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在90℃下搅拌12小时。 反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到2-(2-(噻吩-3-基)吡啶-3-基 氧基)乙酰肼(48mg,100％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2-(噻吩-3-基)吡啶-3-基氧基) 乙酰肼的合成：将2-(2-(噻吩-3-基)吡啶-3-基氧基)乙酰肼(48mg,0.19mmol) 和1H-吲哚-6-甲醛(30mg,0.21mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在85℃ 下搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱色谱 法(乙酸乙酯:己烷＝1:1)纯化，以得到化合物343(31mg,42％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.50(m,1H),11.30(m,1H),8.62-8.50 (m,1H),8.29-8.21(m,1H),8.11(s,1H),7.98(m,1H),7.67(m,1H),7.57(m, 3H),7.45(m,2H),7.29(m,1H),6.47(m,1H),5.37(s,1H),4.86(s,1H).

实施例83.化合物344的合成

步骤1. 2-(2,4-二甲基-6-(噻吩-2-基)苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将2,4-二甲基-6-(噻吩-2-基)苯酚(化合物6-13)(100mg,0.49mmol)、2- 溴乙酸甲酯(0.05mL,0.53mmol)和碳酸铯(190mg,0.53mmol)在乙腈1mL 中溶解，随后在100℃下搅拌1小时。反应完成后，将反应混合物在减压 下过滤。将滤液在减压下浓缩，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:4)纯化， 以得到2-(2,4-二甲基-6-(噻吩-2-基)苯氧基)乙酸甲酯(141mg,100％)。

步骤2. 2-(2,4-二甲基-6-(噻吩-2-基)苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2,4-二甲基-6-(噻吩-2-基)苯氧基)乙酸甲酯(141mg,0.51mmol)和 肼(0.03mL,0.56mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在85℃下搅拌12小时。 反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到2-(2,4-二甲基-6-(噻吩-2- 基)苯氧基)乙酰肼(128mg,91％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(噻吩-2-基)苯氧 基)乙酰肼的合成：将2-(2,4-二甲基-6-(噻吩-2-基)苯氧基)乙酰肼(70mg,0.25 mmol)和1H-吲哚-4-甲醛(40mg,0.26mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在 100℃下搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过 柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:1)纯化，以得到化合物344(31mg,31％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.42(bs,0.5H),11.35(m,1.5H),8.68 (s,1H),8.15(s,0.5H),7.61-7.59(m,2H),7.35-7.05(m,7H),6.49(m,0.5H), 4.72(s,1H),4.25(s,1H),2.28(m,6H).

实施例84.化合物345的合成

将2-(2,4-二甲基-6-(噻吩-2-基)苯氧基)乙酰肼(70mg,0.25mmol)和1H- 吲哚-6-甲醛(40mg,0.26mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在100℃下搅拌 12小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱色谱法(乙酸 乙酯:己烷＝1:1)纯化，以得到化合物345(20mg,20％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.35(m,1H),11.20(m,1H),8.49-7.97 (2s,1H),7.71(s,1H),7.61-7.34(m,6.5H),7.16-7.09(m,1H),7.02(m,1H), 6.44(m,1H),4.65-4.20(2s,1H),2.19(m,6H).

实施例85.化合物346的合成

步骤1. 2-(2-(呋喃-2-基)-4-甲氧基苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将2-(呋喃-2-基)-4-甲氧基苯酚(化合物6-14)(205mg,1.09mmol)、2-溴 乙酸甲酯(0.1mL,1.08mmol)和碳酸铯(1.05g,3.24mmol)在乙腈4mL中溶 解，随后在90℃下搅拌9小时。反应完成后，将反应混合物在减压下过滤。 将滤液在减压下浓缩，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝9:1)纯化，以得到 2-(2-(呋喃-2-基)-4-甲氧基苯氧基)乙酸甲酯(194mg,68％)。

步骤2. 2-(2-(呋喃-2-基)-4-甲氧基苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2-(呋喃-2-基)-4-甲氧基苯氧基)乙酸甲酯(189mg,0.72mmol)和肼 (0.035mL,0.72mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在90℃下搅拌3小时。 反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，加入乙醚10mL，并搅拌10分 钟。将所形成的固体过滤以得到2-(2-(呋喃-2-基)-4-甲氧基苯氧基)乙酰肼 (146mg,80％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2-(呋喃-2-基)-4-甲氧基苯氧基) 乙酰肼的合成：将2-(2-(呋喃-2-基)-4-甲氧基苯氧基)乙酰肼(50mg,0.19 mmol)和1H-吲哚-4-甲醛(28mg,0.19mmol)在EtOH 1mL中溶解，随后在 90℃下搅拌4小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱 色谱法(己烷:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以得到化合物346(21mg,28％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.57-11.54(m,1H),11.34-11.28(m, 1H),8.27-7.75(2s,1H),7.74(m,1H),7.30(m,3H),7.17(m,5H),6.98(m,1H), 6.61(m,1H),5.26(s,1H),4.73(s,1H),3.76(s,3H).

实施例86.化合物347的合成

将2-(2-(呋喃-2-基)-4-甲氧基苯氧基)乙酰肼(50mg,0.19mmol)和1H-吲 哚-6-甲醛(28mg,0.19mmol)在EtOH 1mL中溶解，随后在90℃下搅拌4 小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱色谱法(己烷: 乙酸乙酯＝1:1)纯化，以得到化合物347(39mg,53％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.50-11.47(m,1H),11.32-11.28(m, 1H),8.30-8.09(2s,1H),7.75(m,2H),7.65(m,1H),7.31(m,4H),7.06(m,1H), 6.87(m,1H),6.60(s,1H),6.46(s,1H),5.20(s,1H),4.70(s,1H),3.76(s,3H).

实施例87.化合物356的合成

步骤1. 2-(3-(呋喃-2-基)苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将3-(呋喃-2-基)苯酚(化合物6-15)(183mg,1.14mmol)、2-溴乙酸甲酯 (0.11mL,1.14mmol)和碳酸铯(556mg,1.71mmol)在乙腈2mL中溶解，随 后在90℃下搅拌4小时。反应完成后，将反应混合物在减压下过滤。将滤 液在减压下浓缩，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝9:1)纯化，以得到 2-(3-(呋喃-2-基)苯氧基)乙酸甲酯(228mg,86％)。

步骤2. 2-(3-(呋喃-2-基)苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(3-(呋喃-2-基)苯氧基)乙酸甲酯(220mg,0.95mmol)和肼(0.05mL, 0.95mmol)在EtOH 2mL中溶解，随后在90℃下搅拌2小时。反应完成后， 将反应混合物在减压下浓缩，加入乙醚10mL，并搅拌10分钟。将所形成 的固体过滤以得到2-(3-(呋喃-2-基)苯氧基)乙酰肼(185mg,84％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(3-(呋喃-2-基)苯氧基)乙酰肼 的合成：将2-(3-(呋喃-2-基)苯氧基)乙酰肼(50mg,0.21mmol)和1H-吲哚-4- 甲醛(32mg,0.21mmol)在EtOH 1mL中溶解，随后在90℃下搅拌17小时。 反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯 ＝1:1)纯化，以得到化合物356(47mg,61％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.54-11.49(m,1H),11.41-11.38(m, 1H),8.58-8.27(2s,1H),7.75(m,1H),7.49(m,2H),7.46(m,3H),7.30(m,3H), 7.23(m,1H),6.98(m,1H),6.94(m,1H),6.57(m,1H),5.26(s,1H),4.74(s, 1H).

实施例88.化合物358的合成

步骤1. 2-(3-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将3-(吡啶-3-基)苯酚(化合物6-16)(379mg,2.22mmol)、2-溴乙酸甲酯 (0.2mL,2.22mmol)和碳酸铯(1086mg,3.33mmol)在乙腈5mL中溶解，随 后在100℃下搅拌4小时。反应完成后，将反应混合物在减压下过滤。将 滤液在减压下浓缩，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝7:3)纯化，以得到 2-(3-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酸甲酯(420mg,78％)。

步骤2. 2-(3-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(3-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酸甲酯(410mg,1.69mmol)和肼(0.08mL, 1.69mmol)在EtOH 4mL中溶解，随后在90℃下搅拌2小时。反应完成后， 将反应混合物在减压下浓缩，加入乙醚10mL，并搅拌10分钟。将所形成 的固体过滤以得到2-(3-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼(365mg,89％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(3-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼 的合成：将2-(3-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼(50mg,0.20mmol)和1H-吲哚-4- 甲醛(30mg,0.20mmol)在EtOH 1mL中溶解，随后在90℃下搅拌17小时。 反应完成后，将所形成的固体过滤，以得到化合物358(39mg,53％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.53(bs,1H),11.39-11.34(m,1H), 8.90(m,1H),8.58(m,1H),8.57-8.26(2s,1H),8.05(m,1H),7.39(m,6H),7.13 (m,3H),6.99(m,1H),5.32(s,1H),4.80(s,1H).

实施例89.化合物359的合成

将2-(3-(吡啶-3-基)苯氧基)乙酰肼(50mg,0.21mmol)和1H-吲哚-6-甲醛 (32mg,0.21mmol)在EtOH 1mL中溶解，随后在90℃下搅拌17小时。反 应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝ 1:1)纯化，以得到化合物359(28mg,38％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.45-11.42(m,1H),11.33-11.28(m, 1H),8.91(m,1H),8.88(m,1H),8.56-8.23(s,1H),8.09(m,1H),7.66(m,1H), 7.56(m,1H),7.39(m,6H),7.05(m,1H),6.46(m,1H),5.26(s,1H),4.76(s, 1H).

实施例90.化合物378的合成

步骤1. 2-(4-氟-2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将4-氟-2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯酚(化合物7-4)(368mg,1.87mmol) 和溴乙酸甲酯(0.21mL,2.25mmol)在乙腈中溶解。向其中加入碳酸铯(915 mg,2.81mmol)，随后在室温下搅拌1天。反应完成后，向反应混合物中加 入饱和碳酸氢钠水溶液，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用盐水洗涤， 用无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残渣通过柱色谱法(硅胶；己 烷/乙酸乙酯,9/1)纯化，以得到2-(4-氟-2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙 酸甲酯(415mg,83％)。

步骤2. 2-(4-氟-2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(4-氟-2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酸甲酯(415mg,1.55 mmol)和肼一水合物(91.0μL,3.93mmol)在乙醇中溶解，随后在回流下搅拌 1天。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将浓缩的残渣通过柱色谱 法(硅胶；二氯甲烷/甲醇,9/1)纯化，以得到无色油形式的2-(4-氟-2-甲基 -6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酰肼(316mg,76％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(4-氟-2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基) 苯氧基)乙酰肼的合成：将2-(4-氟-2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酰肼 (230mg,0.86mmol)和吲哚-6-甲醛(137mg,0.94mmol)在乙醇中溶解，随后 在回流下搅拌过夜。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱 色谱法(硅胶；乙酸乙酯:己烷,3/7)纯化，以得到化合物378(145mg,45％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.48-11.44(m,1H),11.35-11.23(m, 1H),8.48,8.05(2s,1H),7.72(s,0.5H),7.59-7.27(m,3.5H),6.96-6.88(m,2H), 6.47-6.43(m,1H),4.77(s,1H),4.34(s,3H),4.02-3.92(m,2H),3.77-3.73(m, 2H),3.53-3.43(m,2H),2.26-2.20(m,7H),1.89-2.20(m,1H).

实施例91.化合物379的合成

将2-(4-氟-2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯氧基)乙酰肼(80.5mg,0.30mmol) 和吲哚-4-甲醛(52.3mg,0.36mmol)在乙醇中溶解，随后在回流下搅拌1天。 反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并通过柱色谱法(硅胶；乙酸乙 酯:己烷,3/7)纯化，以得到化合物379(42mg,36％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.48-11.44(m,1H),11.35-11.23(m, 1H),8.48,8.05(2s,1H),7.72(s,0.5H),7.59-7.27(m,3.5H),6.96-6.88(m,2H), 6.47-6.41(m,1H),4.75(s,1H),4.31(s,3H),4.02-3.92(m,2H),3.75-3.71(m, 2H),3.53-3.43(m,2H),2.26-2.21(m,7H),1.88-2.22(m,1H).

实施例92.化合物457的合成

步骤1. 2-(2,4-二甲基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯氧基)乙酸甲酯的合成：

将2,4-二甲基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯酚(化合物7-7)(156mg,0.76 mmol)和溴乙酸甲酯(0.089mL,0.91mmol)在乙腈中溶解。向其中加入碳酸 铯(370mg,1.14mmol)，随后在室温下搅拌1天。反应完成后，向反应混合 物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用盐 水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残渣通过柱色谱 法(硅胶；己烷/乙酸乙酯,9/1)纯化，以得到2-(2,4-二甲基-6-(四氢-2H-吡喃 -4-基)苯氧基)乙酸甲酯(168mg,80％)。

步骤2. 2-(2,4-二甲基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯氧基)乙酰肼的合成：

将2-(2,4-二甲基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯氧基)乙酸甲酯(168mg,0.60 mmol)和肼一水合物(36.0μL,0.72mmol)在甲醇中溶解，随后在回流下搅拌 1天。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。向浓缩物中加入己烷。将 所得的白色沉淀过滤，并干燥以得到白色固体形式的2-(2,4-二甲基-6-(四氢 -2H-吡喃-4-基)苯氧基)乙酰肼(114mg,68％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(2,4-二甲基-6-(四氢-2H-吡喃 -4-基)苯氧基)乙酰肼的合成：将2-(2,4-二甲基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯氧基) 乙酰肼(114mg,0.41mmol)和吲哚-6-甲醛(65.3mg,0.45mmol)在乙醇中溶 解，随后在回流下搅拌过夜。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩， 并通过柱色谱法(硅胶；乙酸乙酯:己烷＝7:3)纯化，以得到褐色固体形式的 化合物457(78mg,47％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.44-11.40(m,1H),11.32-11.23(m, 1H),8.49(s,0.5H),8.04(2s,0.45H),7.72(s,0.53H),7.60-7.26(m,3.5H), 6.93-6.88(m,2H),6.48-6.43(m,1H),4.77(s,0.9H),4.33(s,1.1H),3.91(bs, 2H),3.22-3.18(m,2H),2.25-2.23(m,6H),1.67-1.61(m,4H).

以下路线2示出使用根据路线1合成的化合物108、065和187制备化 合物233、272、236、252、244、245、238和289的方法。

[路线2]

实施例93.化合物233的合成

将化合物108(510mg,1.52mmol)、甲醛35％(0.6mL,15.2mmol)、碳 酸钾(210mg,1.52mmol)在二甲基甲酰胺1mL中溶解，随后在40℃下搅拌48 小时。反应完成后，向其中加入水，然后将所形成的白色固体滤出。将滤 液在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化，以得到化合物233(110mg,20％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.43-11.40(m,1H),8.52(s,1H), 8.07-7.37(m,5H),6.83(d,J＝4.44Hz,2H),6.45(m,1H),6.45(m,2H),5.52 (d,J＝15.5Hz,2H),4.89(s,1H),4.03(s,1H),2.22(m,9H).

实施例94.化合物244的合成

将化合物065(510mg,1.52mmol)、甲醛35％(0.6mL,15.2mmol)和碳 酸钾(210mg,1.52mmol)在二甲基甲酰胺1mL中溶解，随后升高温度至40 ℃，并搅拌2天。反应完成后，向其中加入水，然后将所形成的白色固体滤 出。将滤液在减压下浓缩，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:1)纯化，以 得到化合物244(110mg,20％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.4(m,1H),8.69-8.24(2s,1H),7.67 (m,1H),7.50(m,1H),7.22(m,3H),6.83(m,2H),6.45(m,1H),5.54(m,2H), 4.83(s,1H),4.36(s,1H),2.31(m,9H).

实施例95.化合物289的合成

将化合物187(110mg,0.36mmol)在二甲基甲酰胺1.5mL中溶解。向其 中加入甲醛(0.09mL,1.08mmol)和碳酸钾(41mg,0.36mmol)，随后在45℃ 下搅拌16小时。反应完成后，将所形成的固体过滤，以得到化合物289(50mg, 41％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.56(m,1H),8.51-8.27(m,1H),8.02 (m,1H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H),7.51(m,1H),7.31-6.97(m,4H),5.75(m,2H), 5.42-4.76(m,2H),2.43(m,3H).

实施例96.化合物272的合成

将化合物233(200mg,0.55mmol)和3-(氯甲基)苄基氯化物(113mg,0.60 mmol)在吡啶2mL中溶解，随后在室温下搅拌3小时。反应完成后，向反应 混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并 在减压下浓缩。将浓缩物在二甲基甲酰胺中溶解，然后向其中加入吗啉(0.04 mL,0.44mmol)和碘化钠(催化)，随后在室温下搅拌4小时。反应完成后，向 其中加入水，由此形成白色固体，将其过滤以得到化合物272(20mg,0.03 mmol,32％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.49(m,1H),8.55(s,0.5H),7.88(s, 0.5H),7.81(m,3H),7.69-7.63(m,1.5H),7.57-7.51(m,1.5H),7.41(m,3H), 6.83(d,J＝12.0Hz,2H),6.59(m,1H),6.50(d,J＝1.80Hz,2H),4.77(s,1H), 4.34(s,1H),3.52(m,6H),2.30(m,4H),2.20(m,9H)

实施例97.化合物245的合成

将化合物244(33mg,0.09mmol)和3-(氯甲基)苄基氯化物(17mg,0.12 mmol)在吡啶0.2mL中溶解，随后在室温下搅拌3小时。反应完成后，向反 应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥， 并在减压下浓缩。将浓缩物在二甲基甲酰胺中溶解，然后向其中加入吗啉 (0.02mL,0.24mmol)和碘化钠(催化)，随后在室温下搅拌4小时。向反应混 合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并通 过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:1～2:1)纯化，以得到化合物245(18mg,58 ％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.52-46(m,1H),8.71-8.24(2s,1H), 7.89-7.76(m,3H),7.70-7.65(m,1H),7.44-7.23(m,5H),6.84(m,2H),6.50(d, J＝14.7Hz,2H),4.83(s,1H),4.36(s,1H),3.53-3.49(m,6H),2.31(m,4H), 2.22(m,9H).

实施例98.化合物238的合成

将化合物244(20mg,0.05mmol)、N,N-二甲基甘氨酸(6mg,0.05mmol)、 EDC(24mg,0.13mmol)和4-二甲基氨基吡啶(3mg,0.03mmol)在二氯甲烷: 二甲基甲酰胺＝1mL:1mL中溶解，随后在室温下搅拌2小时。向反应混合物 中加入水，并用二氯甲烷萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并用己烷 重结晶，以得到化合物238(10mg,44％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆:δ11.4(m,1H),8.70(s,0.5H),8.23(s, 0.5H),7.74-7.56(m,2H),7.34-7.21(m,3H),6.84(d,J＝5.92Hz,2H),6.27(d, J＝15.2Hz,2H),4.83(s,1H),4.36(s,1H),2.19(m,15H).

实施例99.化合物236的合成

将化合物233(20mg,0.06mmol)、N,N-二甲基甘氨酸(16mg,0.15 mmol)、EDC(28mg,0.15mmol)和4-二甲基氨基吡啶(4mg,0.03mmol)在二 甲基乙酰胺1mL中溶解，随后在40℃下搅拌1.5小时。将反应混合物冷却至 0℃，然后在缓慢加入1.5mL水下搅拌30分钟。搅拌另外1小时，然后向反 应混合物中加入水，并用二氯甲烷萃取。将所得的有机层在减压下浓缩。 将浓缩物通过柱色谱法(乙酸乙酯:二氯甲烷＝1:4)纯化，以得到化合物236 (10mg,37％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.52(m,1H),8.54,8.06(s,1H),7.89 (s,0.5H),7.59-7.56(m,3H),6.85(d,J＝7.48Hz,2H),6.5(m,1H),6.45(d,J＝ 18.0Hz,1H),4.76(s,1H),4.34(s,1H),3.15(d,J＝18.9Hz,2H),2.19(m, 15H).

实施例100.化合物252的合成

将化合物233(30mg,0.08mmol)、乙酸酐(8mg,0.08mmol)和三乙胺(8 mg,0.08mmol)在二甲基甲酰胺1mL中溶解，随后在室温下搅拌12小时。向 反应混合物中加入水，由此形成白色固体，将其过滤，然后用己烷重结晶 以得到化合物252(20mg,0.04mmol,60％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.47(m,1H),8.69-8.24(2s,1H), 7.67-7.62(m,1H),7.50(m,1H),7.31-7.09(m,2.5H),6.84(d,J＝7.4Hz,2H), 6.77(d,J＝3.2Hz,0.5H),6.45(m,1H),5.54(m,2H),4.84(s,1H),4.36(s,1H), 2.24(m,9H).

以下路线3示出使用根据路线1合成的化合物065、108、229和378 制备化合物164、177、243、195、198、201、375和380的方法。

[路线3]

实施例101.化合物164的合成

将化合物065(265mg,0.79mmol)、2-碘甲烷(336mg,2.37mmol)、氢化 钠(38mg,1.58mmol)在二甲基甲酰胺(2mL)中溶解，随后在90℃下搅拌12 小时。向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫 酸镁干燥，并在减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法纯化，以得到化合物 164(152mg,0.42mmol,53％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆:δ8.18(s,0.5H),7.48(s,0.5H),7.36(d,J＝ 3.0Hz,1H),7.32(m,1H),7.18(m,0.5H),6.81(s,2H),6.77(d,J＝3.0Hz,1H), 4.96(s,2H),3.77(s,3H),3.38(s,3H),2.18(s,9H).

实施例102.化合物375的合成

将化合物229(50mg,0.13mmol)在二甲基甲酰胺中溶解。向其中加入氢 化钠(16.7mg,0.38mmol)和碘甲烷(54.5mg,0.38mmol)。在室温下反应2小 时，然后将反应混合物在减压下浓缩。将残渣通过柱色谱法(硅胶；二氯甲 烷/甲醇,10/1)纯化以得到褐色固体形式的化合物375(8.5mg,16％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.48-11.44(m,1H),11.35-11.23(m, 1H),8.48,8.05(2s,1H),7.72(s,0.5H),7.59-7.27(m,3.5H),6.96-6.88(m,2H), 6.47-6.43(m,1H),4.77(s,1H),4.34(s,3H),4.02-3.92(m,2H),3.77-3.73(m, 2H),3.56(s,3H),3.53-3.43(m,2H),2.26-2.20(m,7H),1.89-2.20(m,1H).

实施例103.化合物380的合成

将化合物378(115mg,0.28mmol)在二甲基甲酰胺中溶解。向其中加入 氢化钠(36.9mg,0.85mmol)和碘甲烷(0.53mL,0.85mmol)。在室温下反应1 天，然后向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层在 减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法(硅胶；己烷/乙酸乙酯,3/7)纯化以得到 白色固体形式的化合物380(26mg,22％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.88(s,1H),7.59(d,1H,J＝8.3Hz),7.47 (s,1H),7.43(dd,1H,J＝8.3,1.3Hz),7.13(d,1H,J＝3.0Hz),6.88(dd,1H,J ＝9.5,3.1Hz),6.79(dd,1H,J＝8.7,3.0Hz),6.49(d,1H,J＝3.0Hz),5.03, 5.01(ABq,2H,J＝10.3,15.8Hz),4.14-4.04(m,2H),3.94-3.84(m,2H),3.81(s, 3H),3.74-3.71(m,1H),3.49(s,3H),2.44-2.38(m,1H),2.36(s,3H),1.98-1.89 (m,1H).

实施例104.化合物177的合成

将化合物065(265mg,0.79mmol)、2-碘乙醇(0.12mL,1.58mmol)和碳 酸钾(436mg,3.16mmol)在二甲基甲酰胺(2mL)中溶解，随后在50℃下搅拌 12小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所 得的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法纯化，以得到化 合物177(121mg,0.32mmol,41％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆:δ11.33(bs,1H),8.37(s,1H),7.44(d,J＝ 7.92Hz,1H),7.39(t,J＝2.88Hz,1H),7.26(d,J＝7.08Hz,1H),7.12(t,J＝7.8 Hz,1H),6.82(s,2H),6.79(m,1H),4.99(m,2H),4.96(s,2H),4.14(t,J＝5.76 Hz,2H),3.3(m,2H),2.20(s,6H),2.16(s,3H).

实施例105.化合物195的合成

将化合物108(265mg,0.79mmol)、2-碘乙醇(0.12mL,1.58mmol)和碳 酸钾(436mg,3.16mmol)在二甲基甲酰胺(2mL)中溶解，随后在50℃下搅拌 12小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所 得的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法纯化，以得到化 合物195(50mg,17％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆:δ11.27(bs,1H),8.19(s,1H),7.64(s,1H), 7.50(d,J＝8.2Hz,1H),7.39(t,J＝2.96Hz,1H),7.30(m,1H),6.83(s,2H), 6.41(m,1H),4.9(m,1H),4.88(s 2H),4.08(t,J＝6.28Hz,2H),3.58(m,2H), 2.18(d,J＝4.28Hz,9H).

实施例106.化合物198的合成

将化合物108(100mg,0.29mmol)、4-(2-氯乙基)吗啉(0.11g,0.58mmol) 和碳酸钾(164mg,1.2mmol)在二甲基甲酰胺(2mL)中溶解，随后在90℃下 搅拌12小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。 将所得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法纯化，以得到化合物198。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆:δ11.26(bs,1H),8.13(s,1H),7.66(s,1H), 7.52(d,J＝8.2Hz,1H),7.39(t,J＝2.96Hz,1H),7.30(m,1H),6.82(s,2H), 6.41(m,1H),4.87(s,2H),4.16(m2H),3.46(m,4H),2.22(d,J＝4.28Hz,9H).

实施例107.化合物201的合成

将化合物108(40mg,0.12mmol)、1-(2-氯乙基)吡咯烷(40mg,0.24mmol) 和碳酸铯(116mg,0.36mmol)在二甲基甲酰胺中溶解，随后在100℃下搅拌 12小时。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用二氯甲烷萃取。将所 得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法纯化，以得到化合物201(17mg, 33％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆:δ11.26(bs,1H),8.11(s,1H),7.65(s,1H), 7.52(d,J＝8.2Hz,1H),7.39(t,J＝2.96Hz,1H),7.31(m,1H),6.82(s,2H),6.4 (m,1H),4.87(s,2H),4.15(s,2H),2.53(m,6H),2.18(d,J＝3.2Hz,9H),1.68 (m,4H).

实施例108.化合物243的合成

将化合物065(30mg,0.08mmol)、乙酸酐(9mg,0.08mmol)和碳酸钾(12 mg,0.08mmol)在二甲基甲酰胺2mL中溶解，随后在室温下搅拌12小时。反 应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层 用硫酸镁干燥，并在减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法纯化，以得到化 合物243(517mg,64％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.62(m,1H),8.44-8.37(m,1H),8.25 (s,0.5H),8.80(m,1H),7.51-7.33(m,2.5H),7.02(d,J＝3.48Hz,0.5H),6.85(d, J＝5.8Hz,1H),4.83(s,1H),4.37(s,1H),2.66(m,3H),2.10(m,9H).

以下路线4示出化合物072、232、237和239的制备方法。

[路线4]

实施例109.化合物072的合成

将化合物014(100mg,1.52mmol)、甲醛(48.6mg,1.62mmol)和2M二甲 胺在四氢呋喃中的溶液(1.62mL,3.24mmol)在回流下搅拌6小时。反应完成 后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸 镁干燥，并在减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法纯化，以得到化合物072 (6mg,5％)。

1H NMR(400MHz,DMSO-d₆δ11.4(bs,0.8H),8.32-8.06(m,0.7H), 7.80-7.79(m,1H),7.63-7.61(m,1H),7.57-7.55(m,1H),7.41-7.40(m,1H), 7.14-7.10(m,2H),6.87-6.79(m,2H),6.51-6.50(m,1H),5.14-4.63(m,4H), 2.23-2.18(m,9H).

实施例110.化合物232的合成

步骤1. 2-(2,6-二甲基-4-硝基苯氧基)乙酸甲酯(化合物4-2)的合成：

将2,6-二甲基-4-硝基苯酚(1000mg,5.98mmol)和溴乙酸甲酯(0.6mL, 5.98mmol)以及碳酸铯(2.9g,8.97mmol)在乙腈10mL中溶解，随后在80℃ 下搅拌12小时。向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有 机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:1)纯化，以得到 2-(2,6-二甲基-4-硝基苯氧基)乙酸甲酯(682mg,48％)。

步骤2. 2-(2,6-二甲基-4-硝基苯氧基)乙酰肼(化合物4-3)的合成：

将2-(2,6-二甲基-4-硝基苯氧基)乙酸甲酯(300mg,1.25mmol)、肼一水合 物(0.07mL,1.40mmol)在EtOH 3mL中溶解，随后在90℃下搅拌12小时。将 反应混合物通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:1)纯化，以得到2-(2,6-二甲基 -4-硝基苯氧基)乙酰肼(280mg,96％)。

步骤3.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,6-二甲基-4-硝基苯氧基)乙 酰肼(化合物4-4)的合成：

将2-(2,6-二甲基-4-硝基苯氧基)乙酰肼(289mg,1.21mmol)、1H-吲哚-4- 甲醛(175mg,1.21mmol)在EtOH 3mL中溶解，随后在90℃下搅拌12小时。 将反应混合物通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:1)纯化，以得到(E)-N'-((1H- 吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,6-二甲基-4-硝基苯氧基)乙酰肼(127mg,29％)。

步骤4.(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(4-氨基-2,6-二甲基苯氧基)乙 酰肼(化合物232)的合成：

将(E)-N'-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-2-(2,6-二甲基-4-硝基苯氧基)乙酰肼 (20mg,0.05mmol)和锌(74mg,1mmol)在乙酸1mL中溶解，随后在室温下 搅拌6小时。将反应混合物通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝2:1)纯化，以得 到化合物232(2mg,11％)。

¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.68(s,0.6H),8.20(s,0.4H),7.51-7.30 (m,3H),7.21-7.15(m,2H),6.83(m,0.5H),6.45(d,J＝8.04H,1.5H),4.62(s, 1H),4.40(s,1H),2.25(s,6H).

实施例111.化合物239的合成

将化合物237(16mg,0.05mmol)在EtOH:二甲基亚砜＝4mL:1mL中溶 解。将反应混合物冷却至0℃，并加入1M氢氧化钠和30％H₂O₂。将反应混 合物的温度升高至室温，随后搅拌2小时。反应完成后，向反应混合物中加 入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并在减压下浓 缩。将浓缩物通过柱色谱法纯化，以得到化合物239(8mg,44％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.43(d,J＝15.4Hz,1H),11.32-11.21 (d,J＝40.9Hz,1H),8.48-8.04(2s,1H),7.84(m,1H),7.71(s,0.5H),7.29-7.22 (m,1.5H),6.45(m,1H),4.85(s,1H),4.42(s,1H),2.30(d,J＝5.16Hz,6H).

以下路线5示出路线1的醛化合物(化合物1-5)的制备方法。

[路线5]

制备实施例1.化合物5-2的合成(化合物211的中间体)：将化合物5-1 (200mg,1.38mmol)和甲醛37％(1.1mL,1.66mmol)在乙酸中溶解。将反应 混合物冷却至0℃，并加入4-甲基哌啶(154mL,1.38mmol)，随后在室温下 搅拌3小时。反应完成后，向反应混合物中加入1M NaOH，并用乙酸乙酯 萃取。将所得的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并在减压下浓缩，以 得到化合物5-2(311mg,87％)。

制备实施例2.化合物5-3的合成(化合物180的中间体)：将化合物5-1 (125mg,1.06mmol)、2-碘乙醇(0.1mL,1.59mmol)和KOH(96mg,2.12mmol) 在二甲基甲酰胺(2mL)中溶解，随后在室温下搅拌12小时。反应完成后，向 反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层通过柱色谱法 纯化，以得到化合物5-3(120mg,59.8％)。

制备实施例3.化合物5-4的合成(化合物280的中间体)：将化合物5-1(1 g,6.89mmol)在四氢呋喃中溶解，然后向其中加入氢化钠(360mg,8.27 mmol)。向其中加入苯磺酰氯(1.2g,6.89mmol)，随后在室温下搅拌12小时。 反应完成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机 层通过柱色谱法纯化，以得到化合物5-4(500mg,25％)。

以下路线6示出路线1和7的起始化合物(化合物1-1)的制备方法。

[路线6]

制备实施例4. 2-(呋喃-3-基)-4,6-二甲基苯酚(化合物6-2)的合成：将2-溴 -4,6-二甲基苯酚(1.8g,8.9mmol)在二甲氧基乙烷/水(2:1)中溶解。向其中加 入呋喃-3-基硼酸(1g,8.9mmol)、Pd(dppf)Cl₂(0.36g,0.45mmol)和碳酸钠 (3.7g,45mmol)，随后在回流下搅拌1小时。反应完成后，向反应混合物中 加入饱和碳酸氢钠水溶液，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁 干燥，在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化，以得到2-(呋喃-3-基)-4,6-二甲 基苯酚(0.9g,54％)。

制备实施例5. 2,6-二甲基-4-(嘧啶-5-基)苯酚(化合物6-3)的合成：将4-溴 -2,6-二甲基苯酚(0.5g,2.5mmol)在二甲氧基乙烷/水(2:1)中溶解。向其中加 入嘧啶-5-基硼酸(0.37g,2.8mmol),Pd(dppf)Cl₂(0.02g,0.13mmol)和碳酸钠 (0.79g,7.5mmol)，随后在微波反应器中，于120℃下反应15分钟。反应完 成后，向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫 酸镁干燥，在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化，以得到2,6-二甲基-4-(嘧 啶-5-基)苯酚(0.1g,20％)。

制备实施例6. 4-(2-氨基嘧啶-5-基)-2,6-二甲基苯酚(化合物6-4)的合成： 将2-氨基嘧啶-5-基硼酸(0.76g,5.4mmol)在二甲氧基乙烷/水(2:1)中溶解。向 其中加入4-溴-2,6-二甲基苯酚(0.91g,4.52mmol)和Pd(dppf)Cl₂(0.19g,0.14 mmol)、碳酸钠(1.4g,14mmol)，随后在微波反应器中，于120℃下反应15 分钟。反应完成后，向反应混合物中加入水，并用二氯甲烷萃取。将所得 的有机层用硫酸镁干燥，在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化，以得到4-(2- 氨基嘧啶-5-基)-2,6-二甲基苯酚(0.27g,27％)。

制备实施例7. 4-(呋喃-3-基)-2,6-二甲基苯酚(化合物6-5)的合成：将4-溴 -2,6-二甲基苯酚(350mg,1.74mmol)、3-呋喃基硼酸(269mg,2.26mmol)、 Pd(dppf)Cl₂(71mg,0.087mmol)和碳酸钠(553mg,5.22mmol)在DME:水＝ 4mL:2mL中溶解，随后在微波中，于120℃下搅拌20分钟。反应完成后， 将反应混合物使用硅藻土过滤。将所得的滤液用乙酸乙酯萃取，用硫酸镁 干燥，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝9:1)纯化，以得到4-(呋喃-3-基)-2,6- 二甲基苯酚(225mg,50％)。

制备实施例8. 2-(吡啶-3-基)苯酚(化合物6-6)的合成：

将2-溴苯酚(0.5g,2.9mmol)在二甲氧基乙烷/水(2:1)中溶解。向其中加 入吡啶-3-基硼酸(0.71g,5.8mmol)和Pd(dppf)Cl₂(0.12g,0.14mmol)、碳酸钠 (1.2g,14mmol)，随后在回流下搅拌1小时。反应完成后，向反应混合物中 加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，在减压下浓 缩，并通过柱色谱法纯化，以得到2-(吡啶-3-基)苯酚(0.25g,20％)。

制备实施例9. 2,4-二甲基-6-(吡啶-3-基)苯酚(化合物6-7)的合成：将2-溴 -4,6-二甲基苯酚(1g,5mmol)在二甲氧基乙烷/水(2:1)中溶解。向其中加入吡 啶-3-基硼酸(0.62g,5mmol)和Pd(dppf)Cl₂(0.20g,0.25mmol)、碳酸钠(2.1g, 25mmol)，随后在回流下搅拌1小时。反应完成后，向反应混合物中加入水， 并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，在减压下浓缩，并通 过柱色谱法纯化，以得到2,4-二甲基-6-(吡啶-3-基)苯酚(0.7g,70％)。

制备实施例10. 2,4-二甲基-6-(吡啶-4-基)苯酚(化合物6-8)的合成：将2- 溴-4,6-二甲基苯酚(0.5g,2.5mmol)在二甲氧基乙烷/水(2:1)中溶解。向其中 加入吡啶-4-基硼酸(0.32g,2.5mmol)和Pd(dppf)Cl₂(0.10g,0.13mmol)、碳酸 钠(1g,13mmol)，随后在回流下搅拌1小时。反应完成后，向反应混合物中 加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，在减压下浓 缩，并通过柱色谱法纯化，以得到2,4-二甲基-6-(吡啶-4-基)苯酚(0.15g, 30％)。

制备实施例11. 2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯酚(化合物6-9)的合成：将2-溴-6- 甲基苯酚(800mg,4.28mmol)、3-呋喃硼酸(574mg,5.13mmol)、碳酸钠(1400 mg,12.8mmol)和Pd₂(dppf)₂Cl₂(699mg,0.82mmol)在二甲氧基乙烷/水10 mL/10mL中溶解，随后在微波中，于120℃下搅拌20分钟。反应完成后， 将反应混合物使用硅藻土过滤。向滤液中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将 所得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:3)纯化， 以得到2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯酚(273mg,26％)。

制备实施例12. 2-(呋喃-3-基)吡啶-3-醇(化合物6-10)的合成：将2-溴吡啶 -3-醇(200mg,1.15mmol)、3-呋喃硼酸(574mg,1.38mmol)、碳酸钠(365mg, 12.8mmol)和Pd₂(dppf)₂Cl₂(187mg,0.23mmol)在二甲氧基乙烷/水2mL/1 mL中溶解，随后在微波中，于120℃下搅拌20分钟。反应完成后，将反应 混合物使用硅藻土过滤。向滤液中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的 有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:3)纯化，以得到 2-(呋喃-3-基)吡啶-3-醇(50mg,27％)。

制备实施例13. 4-氟-2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯酚(化合物6-11)的合成：将 2-溴-4-氟-6-甲基苯酚(337mg,1.20mmol)、3-呋喃基硼酸(162mg,1.45 mmol)、Pd(dppf)Cl₂(98.3mg,0.12mmol)和碳酸钠(383mg,3.61mmol)在 DME:水＝20mL:10mL中溶解，随后在微波中，于120℃下搅拌20分钟。将 反应混合物通过硅藻土过滤。将滤液在减压下浓缩，并通过柱色谱法(硅胶； 己烷/乙酸乙酯,9/1)纯化，以得到黄色油形式的4-氟-2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯 酚(96mg,30％)。

制备实施例14. 2-(噻吩-3-基)吡啶-3-醇(化合物6-12)的合成：将2-溴吡啶 -3-醇(100mg,0.58mmol)、3-噻吩基硼酸(88mg,0.69mmol)、碳酸钠(184mg, 2.07mmol)和Pd₂(dppf)₂Cl₂(94mg,0.12mmol)在二甲氧基乙烷/水1mL/1mL 中溶解，随后在微波中，于120℃下搅拌20分钟。反应完成后，将反应混合 物使用硅藻土过滤。向滤液中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所得的有机 层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:3)纯化，以得到2-(噻 吩-3-基)吡啶-3-醇(50mg,48％)。

制备实施例15. 2,4-二甲基-6-(噻吩-2-基)苯酚(化合物6-13)的合成：将2- 溴-4,6-二甲基苯酚(500mg,2.49mmol)、2-噻吩基硼酸(88mg,2.99mmol)、 碳酸钠(791mg,7.47mmol)和Pd₂(dppf)₂Cl₂(406mg,0.49mmol)在二甲氧基 乙烷/水6mL/3mL中溶解，随后在微波中，于120℃下搅拌20分钟。反应完 成后，将反应混合物使用硅藻土过滤。向滤液中加入水，并用乙酸乙酯萃 取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:3) 纯化，以得到2,4-二甲基-6-(噻吩-2-基)苯酚(231mg,45％)。

制备实施例16. 2-(呋喃-2-基)-4-甲氧基苯酚(化合物6-14)的合成：将2- 溴-4-甲氧基苯酚(400mg,1.97mmol)、2-呋喃基硼酸(287mg,2.56mmol)、 Pd(dppf)Cl₂(81mg,0.1mmol)和碳酸钠(626mg,5.91mmol)在DME:水＝4 mL:2mL中溶解，随后在微波中，于120℃下搅拌20分钟。反应完成后，将 反应混合物使用硅藻土过滤。向滤液中加入水，并用乙酸乙酯萃取。将所 得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝9:1)纯化，以 得到2-(呋喃-2-基)-4-甲氧基苯酚(212mg,57％)。

制备实施例17. 3-(呋喃-2-基)苯酚(化合物6-15)的合成：

将3-溴苯酚(500mg,2.86mmol)和呋喃-2-硼酸(420mg,3.76mmol)在二 甲氧基乙烷/水＝5mL/2.5mL中溶解。向其中加入Pd(dppf)Cl₂(118mg,0.14 mmol)和碳酸钠(919mg,8.67mmol)，随后在微波中，于120℃下搅拌20分 钟。反应完成后，将反应混合物使用硅藻土过滤。向滤液中加入水，并用 乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(己烷:乙酸 乙酯＝9:1)纯化，以得到3-(呋喃-2-基)苯酚(191mg,41％)。

制备实施例18. 3-(吡啶-3-基)苯酚(化合物6-16)的合成：

将3-溴苯酚(500mg,2.86mmol)和吡啶-3-基硼酸(422mg,3.76mmol)在 二甲氧基乙烷/水＝5mL/2.5mL中溶解。向其中加入Pd(dppf)Cl₂(118mg,0.14 mmol)和碳酸钠(919mg,8.67mmol)，随后在微波中，于120℃下搅拌20分 钟。反应完成后，将反应混合物使用硅藻土过滤。向滤液中加入水，并用 乙酸乙酯萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(己烷:乙酸 乙酯＝9:1)纯化，以得到3-(吡啶-3-基)苯酚(386mg,78％)。

制备实施例19. 2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4,6-二甲基苯酚(化合物6-17) 的合成：将2-溴-4,6-二甲基苯酚(430mg,2.14mmol)、2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4- 基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(494mg,2.35mmol)、Pd(dbpf)Cl₂(69.7mg,0.11mmol)和碳酸钠(680mg,6.45mmol)在二甲氧基乙烷:水＝3 mL:1mL中溶解，随后在微波中，于120℃下搅拌30分钟。将反应混合物通 过硅藻土过滤。将滤液在减压下浓缩，并通过柱色谱法(硅胶；己烷/乙酸乙 酯,9/1)纯化，以得到无色油形式的2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4,6-二甲基苯 酚(160mg,37％)。

制备实施例20. 2-(呋喃-2-基)-4,6-二甲基苯酚(化合物6-18)的合成：将2- 溴-4,6-二甲基苯酚(500mg,2.49mmol)、呋喃-2-基硼酸(88mg,2.99mmol)、 碳酸钠(791mg,7.47mmol)和Pd₂(dppf)₂Cl₂(406mg,0.49mmol)在二甲氧基 乙烷/水6mL/3mL中溶解，随后在微波中，于120℃下搅拌20分钟。反应完 成后，将反应混合物使用硅藻土过滤。向滤液中加入水，并用乙酸乙酯萃 取。将所得的有机层用硫酸镁干燥，并通过柱色谱法(乙酸乙酯:己烷＝1:3) 纯化，以得到2-(呋喃-2-基)-4,6-二甲基苯酚(231mg,45％)。

以下路线7示出路线1的起始化合物(化合物1-1)的制备方法。

[路线7]

制备实施例21. 2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯酚(化合物7-2)的合成： 将2-(呋喃-3-基)-4,6-二甲基苯酚(化合物6-2)(0.6g,3.2mmol)在甲醇中溶解。 向其中加入钯碳(0.06g)，随后在氢气球下，于室温下搅拌6小时。反应完成 后，将反应混合物通过硅藻土过滤。将滤液在减压下浓缩，并通过柱色谱 法纯化，以得到2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯酚(0.45g,73％)。

制备实施例22. 2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯酚(化合物7-3)的合成：将 2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯酚(化合物6-9)(173mg,0.70mmol)和钯碳(25mg, 15％)在甲醇:四氢呋喃＝1mL:1mL中溶解，随后在氢气球下搅拌48小时。 反应完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤。将滤液在减压下浓缩，并通 过柱色谱法(己烷:乙酸乙酯＝3:1)纯化，以得到2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯 酚(117mg,93％)。

制备实施例23. 4-氟-2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯酚(化合物7-4)的合成： 将4-氟-2-(呋喃-3-基)-6-甲基苯酚(化合物6-11)(471mg,2.45mmol)在甲醇中 溶解。向其中加入钯碳(64.3mg,5wt％)，随后在氢气球下搅拌24小时。反应 完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤。将滤液在减压下浓缩。将浓缩物 通过柱色谱法(硅胶；己烷/乙酸乙酯,9/1)纯化，以得到白色固体形式的4-氟 -2-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)苯酚(368mg,76％)。

制备实施例24. 2,4-二甲基-6-(四氢呋喃-2-基)苯酚(化合物7-5)的合成： 将2-(呋喃-2-基)-4,6-二甲基苯酚(化合物6-18)(200mg,1.06mmol)在甲醇3 mL中溶解。向其中加入钯碳(30mg)，随后在氢气球下搅拌12小时。反应完 成后，将反应混合物通过硅藻土过滤。将滤液在减压下浓缩，以得到2,4- 二甲基-6-(四氢呋喃-2-基)苯酚(200mg,98％)。

制备实施例25. 2,6-二甲基-4-(四氢呋喃-3-基)苯酚(化合物7-6)的合成： 将4-(呋喃-3-基)-2,6-二甲基苯酚(化合物6-5)(110mg,0.74mmol)在四氢呋喃: 甲醇＝1mL:1mL中溶解。向其中加入钯碳(15mg,15％)，随后在氢气球下 搅拌18小时。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤。将滤液在减压 下浓缩，以得到2,6-二甲基-4-(四氢呋喃-3-基)苯酚(74mg,72％)。

制备实施例26. 2,4-二甲基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯酚(化合物7-7)的合 成：将2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4,6-二甲基苯酚(化合物6-17)(234mg,1.14 mmol)在甲醇中溶解。向其中加入钯碳(92mg,40wt％)，随后在氢气球下搅 拌24小时。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤。将滤液在减压下 浓缩。将残渣通过柱色谱法(硅胶；己烷/乙酸乙酯,9/1)纯化，以得到白色固 体形式的2,4-二甲基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯酚(156mg,66％)。

制备实施例27. 2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-醇(化合物7-9)的合成：将2-溴吡 啶-3-醇(200mg,1.15mmol)和吡咯烷(184mg,2.58mmol)加入至反应管中， 随后在微波中，于120℃下反应20分钟。向反应混合物中加入1M HCl溶液 以中和，并用乙酸乙酯和二氯甲烷萃取。将所得的有机层用硫酸镁干燥， 并在减压下浓缩。将浓缩物通过柱色谱法纯化，以得到2-(吡咯烷-1-基)吡啶 -3-醇(78mg,41％)。

结构式如下表1-9中所示。

表1.

表2.

表3.

表4.

表5.

表6.

表7.

表8.

表9.

化合物活性的测量-实验方案

实验实施例1.化合物的促凋亡活性的测量

为了研究所制备的化合物的效果，以下述方式评价化合物对人T细胞 急性淋巴细胞白血病细胞系(Jurkat T细胞)的凋亡诱导效果。

收集培养在包含10％胎牛血清(FBS)的RPMI培养基中的Jurkat T细胞， 并将其用锥虫蓝(Sigma)染色。染色结果表明细胞的活力为97％或更高。然 后，将细胞在室温下，于1200rpm下离心5分钟，并以1.5×10⁵细胞/mL的 浓度在包含10％FBS的RPMI培养基中再悬浮。将200μL的细胞悬浮液分 配至平底96孔板(Costar)的各孔中。然后，将细胞用10μL在RPMI培养基 中稀释的化合物(终浓度为1μM或5μM)处理，并在5％CO₂培养箱中，于 37℃下孵育72小时。在媒介物对照组中，将细胞用10μL包含1％二甲基 亚砜(DMSO,Sigma)的RPMI培养基处理。收获孵育的细胞，将其放入5-mL FACS管(BD Falcon)中，用1mL的磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤，然后在0.1 mL的结合缓冲液(10mM Hepes-NaOH,pH 7.4,140mM NaCl,2.5mL CaCl₂) 中再悬浮。将悬浮的细胞用异硫氰酸荧光素(FITC)-膜联蛋白V(BD  Biosciences)和7-氨基-放线菌素D(7-AAD,e-Biosciences)在室温下染色15 分钟。将染色的细胞在0.3mL的结合缓冲液中悬浮，并通过流式细胞器分 析。通过用FITC-膜联蛋白V和7-AAD染色的细胞与总细胞的比率(％)(参 见表10和11)测定凋亡。

表10.

表11.

实验实施例2.在体外对于异型抗原特异性T细胞的抑制效果

为了评价本发明的化合物229对于异型抗原特异性T细胞的抑制效果， 进行以下实验。

从正常的C57BL/6小鼠(8-12周大，雌性，20±2g)无菌地收集淋巴结 和脾，并在加入RPMI培养基下研磨。然后，将研磨的组织通过细胞粗滤 器(BD Falcon)，以制备单细胞悬浮液。将脾的单细胞悬浮液以1200rpm离 心5分钟。移除上清液，然后向细胞中加入1mL氯化铵/碳酸氢钾(ACK) 裂解缓冲液(0.15M NH₄Cl,1mM KHCO₃,0.1mM Na₂EDTA)，然后将其涡旋 1分钟，并用RPMI培养基洗涤。将红细胞裂解的脾细胞与淋巴结细胞一起 离心，然后在1mL磁性活化细胞分选(MACS)缓冲液(0.5％BSA,2mM  EDTA在PBS中)中再悬浮，并向细胞中加入100μL小鼠CD90.2微球体 (Miltenyi Biotec)，然后在4℃下孵育15分钟。向孵育的细胞悬浮液中加入 10mL MACS缓冲液，离心5分钟，洗涤，然后在2mL MACS缓冲液中再 悬浮。将悬浮的细胞置于自动MACS Pro Separator(Miltenyi Biotec)，并分 离结合至CD90.2微球体的T细胞。将分离的T细胞用磷酸盐缓冲盐水(PBS) 洗涤，然后在PBS中，以1×10⁸细胞/mL的浓度再悬浮。使用IBL 437C辐 照器(CIS bio international)，将正常的BALB/c小鼠(10-12周大，雌性，20-23 g)用950rad的γ放射线照射，然后将100μL上述制备的C57BL/6小鼠的T 细胞悬浮液注射入BALB/c小鼠的尾静脉。细胞注射3天时，将小鼠处死， 并得到脾。以与上述相同的方式，由获得的脾制备无红细胞的单细胞悬浮 液，并使用自动MACS Pro Separator由脾细胞悬浮液分离供体T细胞，由 此制备次级应答细胞。同时，以与上述相同的方式，从正常C57BL/6小鼠 分离T细胞，由此制备初级应答细胞。将各初级和次级应答细胞在1mL的 包含1％FBS的PBS中再悬浮，并用3μM二醋酸羧基荧光素琥珀酰亚胺酯 (CFSE,Invitrogen)处理，然后使其在室温下反应4分钟。为了停止反应，向 细胞悬浮液中加入冷冻储存的包含5％FBS的PBS，随后洗涤。将洗涤的细 胞在包含10％FBS的RPMI培养基中以2×10⁶/mL的浓度再悬浮。无菌地收 集BALB/c小鼠(8-12周大，雌性，20±2g)的脾。以与上述相同的方式制 备无红细胞的脾细胞，然后在1mL PBS中再悬浮。向悬浮液中以0.5μg/mL 的浓度加入0.5mg/mL的丝裂霉素-C(Sigma)，并将细胞在37℃下孵育20 分钟，然后用过量的PBS洗涤三次。将洗涤的细胞在包含10％FBS的RPMI 培养基中以4×10⁶细胞/mL的浓度再悬浮，由此制备刺激细胞。将初级和次 级应答细胞各自与刺激细胞以1:1的比率混合，并将200μL的各细胞混合 物分配至圆底96孔板(Costar)的各孔中。然后，将细胞用10μL多种浓度的 在RPMI培养基中稀释的化合物229处理，并在5％CO₂培养箱中，于37℃ 下孵育72小时。在媒介物对照组中，将细胞用10μL的包含0.2％DMSO 的RPMI培养基处理。将孵育的细胞置于5-mL FACS管中，并用1mL荧 光激活细胞分选(FACS)缓冲液(1％FBS和0.1％叠氮化钠在PBS中)洗涤。 将洗涤的细胞在0.1mL FACS缓冲液中再悬浮，然后用1μg小鼠免疫球蛋 白G(IgG,e-Biosciences)处理以防止抗体的非特异性结合，随后在4℃下孵 育15分钟。然后将细胞用0.5μg藻红蛋白缀合的抗小鼠H-2K^bmAb (e-Biosciences)染色，并在4℃下染色30分钟。染色后，将细胞用1mL FACS 缓冲液洗涤两次，在0.1mL FACS缓冲液中再悬浮，用7-AAD在室温下染 色5分钟。将染色的细胞在0.3mL FACS缓冲液中悬浮，然后通过流式细 胞器分析。通过测量具有低CFSE荧光强度的细胞部分与总活应答细胞的比 率(％)来测定T细胞增殖的抑制，并通过测量用7-氨基-放线菌素D(7-AAD) 染色的细胞与总应答细胞的比率(％)来测定T细胞的凋亡。

结果表明在媒介物对照组中响应于异型抗原增殖的T细胞(CFSE^低)的 比率为总T细胞的50％，但是在用0.5μM或更高的化合物229处理的测试 组中降低至3％或更低，这表明响应于异型抗原的T细胞增殖被显著抑制。 此外，在次级应答的条件(其中主要由体内异型抗原激活的T细胞在体外与 相同的抗原反应)下，化合物229有效地抑制异型抗原特异性T细胞的增殖 (参见图1)。为了检查化合物229对于异型抗原特异性T细胞的抑制作用是 否是由于凋亡的诱导，将细胞用7-AAD染色，并通过流式细胞器分析。结 果表明，在初级应答中，与媒介物对照组的凋亡相比，用0.5μM或更高的 化合物229处理的测试组的凋亡增加14-19％，并且在次级应答中，与媒介 物对照组相比，用0.25μM或更高的化合物229处理的测试组的凋亡显著 增加(21-42％)(参见图2和表12)。

表12.

*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001

因此，本发明的化合物229对于初级或次级响应于异型抗原的所有T 细胞的增殖具有抑制作用，并且该增殖抑制作用是由于凋亡的诱导引起的。 此外，次级激活的T细胞的增殖甚至被更低浓度的化合物229抑制，因此， 化合物229可有效地用作不仅是预防的，而且是治疗移植排斥的免疫抑制 剂。

实验实施例3.在体内对于异型抗原特异性T细胞的抑制效果

为了检查本发明的化合物229是否具有针对响应于体内异型抗原的T 细胞的抑制效果，以下述方式在动物模型中进行实验。

从正常的C57BL/6-Ly5.1小鼠(8-12周大，雌性，20±2g)无菌地收集 淋巴结和脾，并且以与在实验实施例2中所述相同的方式分离T细胞，然 后将其以1×10⁸细胞/mL的浓度在PBS中再悬浮。将正常的BDF1小鼠 (10-12周大，雌性，20-23g)用950rad的γ放射线照射，然后将100μL上 述制备的C57BL/6-Ly5.1小鼠的T细胞注射入BDF1小鼠的尾静脉。将化 合物229以对应于15％(v/v)的给药体积(用于腹膜内给药)的量和对应于 7.5％(v/v)(用于口服给药)的量在Cremophor EL(Sigma)/乙醇混合物(1:1, v/v)中完全溶解，并将化合物溶液在PBS中稀释。从细胞注射那天起，每天 将稀释物腹膜内(200μL/小鼠)或口服(500μL/小鼠)给药，持续5天。以与测 试组中相同的比率和体积向媒介物对照组给药Cremophor EL-乙醇-PBS混 合物。在细胞注射后6天时，将小鼠处死，并从小鼠收集脾，以与实验实 施例2中所述相同的方式制备无红细胞的脾细胞。将脾细胞用锥虫蓝染色， 并对各动物的每个器官的活细胞数目计数。然后，将脾细胞置于5mL FACS 管，并用1mL FACS缓冲液洗涤。将细胞在0.1mL FACS缓冲液中再悬浮， 然后用1μg小鼠免疫球蛋白G处理以防止抗体的非特异性结合，随后在4 ℃下孵育15分钟。然后将细胞用0.5μg藻红蛋白缀合的抗小鼠Ly5.1mAb (单克隆抗体)在4℃下染色30分钟。将染色的细胞用1mL FACS缓冲液洗 涤两次，在0.3mL FACS缓冲液中再悬浮，并通过流式细胞器分析。通过 测量供体T细胞部分(Ly5.1⁺细胞)相对于每个脾的活细胞的比率(％)来测定 脾中的供体T细胞的数目。

结果表明与媒介物对照组的相比，腹膜内(图3A)或口服(图3B)给药本 发明的化合物229的小鼠的脾中的异型抗原特异性T细胞的数目以浓度依 赖性方式显著减少，并且当将化合物229以50mg/kg的剂量给药时，活化 的T细胞数目显著减少，这表明响应于异型抗原的T细胞的增殖被完全地 抑制(参见图3A和3B)。

因此，本发明的化合物229在体内对异型抗原特异性T细胞具有抑制 效果，并且还可能被开发为口服免疫抑制剂。

实验实施例4.针对急性移植物抗宿主病的抑制效果

为了检查本发明的化合物229针对急性移植物抗宿主病的抑制效果， 如下述在异体骨髓移植的小鼠模型中诱导急性移植物抗宿主病，将小鼠用 化合物229处理，并评价化合物的效果。

从正常的C57BL/6小鼠(8-12周大，雌性，20-23g)无菌地收集淋巴结、 脾、股骨和胫骨，并以与在实验实施例2中所述相同的方式从淋巴结和脾 分离T细胞，将其以8×10⁷细胞/mL的浓度在PBS中再悬浮。在末端切割 股骨和胫骨，并使用注射器(21G用于股骨，以及26G用于胫骨)用RPMI 培养基从股骨和胫骨冲洗骨髓，以提取骨髓，然后将其悬浮并通过细胞粗 滤器以制备单细胞悬浮液。将骨髓细胞悬浮液以1200rpm离心5分钟，并 移除上清液，然后将细胞加入1mL的ACK裂解缓冲液，并涡旋1分钟， 随后用RPMI培养基洗涤。将通过离心收集的骨髓细胞在300μL MACS缓 冲液中再悬浮，并向其中加入30μL CD90.2微球体，随后在4℃下孵育15 分钟。向孵育的细胞悬浮液中加入5mL MACS缓冲液，离心5分钟，洗涤， 然后在2mL MACS缓冲液中再悬浮。将悬浮的细胞置于自动MACS Pro  Separator，并移除结合至CD90.2微球体的T细胞。将分离的去除T细胞的 骨髓细胞(TCD-BM)用PBS洗涤，并在PBS中，以1×10⁸细胞/mL的浓度 再悬浮。使用辐照器，将正常的BDF1小鼠(10-12周大，雌性，20-23g)用 850rad的γ放射线照射，然后将100μL通过以1:1的比率混合C57BL/6小 鼠T细胞和TCD-BM获得的移植物注射入BDF1小鼠的尾静脉。在用本发 明的化合物229处理的组中，将化合物229以对应于15％(v/v)的给药体积 的量在Cremophor EL-乙醇混合物(1:1,v/v)中完全溶解，然后将化合物溶液 在PBS中稀释，并从移植物注射那天起，每天以25mg/kg的剂量将稀释物 向各小鼠腹膜内给药，持续10天。同时，将目前临床上使用的免疫抑制剂 他克莫司向另一组的小鼠以与化合物229相同的量给药，以比较对急性移 植物抗宿主病的抑制效果，并向媒介物对照组的小鼠以与处理组相同的方 式给药200μL的Cremophor EL-乙醇-PBS(7.5:7.5:85,v/v/v)。然后，每天 监测小鼠的存活，并用临床GVHD评分系统对于各自体重损失的降低、隆 起的体态、活动减少、皮毛起皱和皮肤病损，每周评估两次GVHD的严重 性。将各参数以3分(0-2)量表评分。

结果是，媒介物对照组的小鼠从细胞移植后29天起开始死亡，并在第 70天表现10％的存活率，用他克莫司治疗的组的小鼠从23天起开始死亡， 并最终表现50％的存活率。同时，用本发明的化合物229处理的组在细胞 移植后35天和46天时出现小鼠死亡，但最后表现80％的小鼠存活率，这 显著高于媒介物对照组的存活率。此外，与他克莫司治疗组相比，用化合 物229的治疗组的存活率提高，但是该提高是不显著的(参见图4A)。在使 用临床评分系统评价GVHD的严重性的结果中，在用他克莫司治疗的小鼠 中，观察到皮毛起皱和严重的皮肤病损，而在用化合物229治疗的小鼠中， 观察到轻微的GVHD的症状，包括轻微的体重损失。通过用化合物229治 疗使GVHD症状的这种减少是统计学显著的(参见图4B)。

因此，本发明的化合物229对于小鼠模型中的GVHD具有抑制效果， 并且化合物229的抑制效果优于常规的免疫抑制剂他克莫司的抑制效果。 所以，本发明的化合物229可有效地用作新型免疫抑制剂。

实验实施例5.治疗多发性硬化的效果

为了检查本发明的化合物229针对多发性硬化的治疗效果，如下述在 鼠模型中诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)，将小鼠用化合物229治疗， 并评价化合物的效果。

在诱导的第一天，将髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白_35-55(MOG_35-55,Peptron) (200ug)、结核分枝杆菌(Difco,Cat No.231141)(500μg)和完全弗氏(Freund's) 佐剂(Sigma Aldrich,Cat No.F5506)互相混合，并浸渍5分钟。将0.1mL浸 渍的肽皮下注射入各个C57BL/6小鼠(9周大，雌性，18±2g)的两侧，随 后静脉内注射0.1mg百日咳毒素(Sigma Aldrich,Cat No.P2980)(200ng)。在 2天时，静脉内注射相同量的百日咳毒素。检查是否从小鼠的注射的部位漏 出浸渍液，并且从7天时，还通过目视观察来检查是否诱导了EAE。

将化合物229和目前临床上用于治疗多发性硬化的芬戈莫德以对应于 7.5％(v/v)的给药体积的量在Cremophor EL-乙醇混合物(1:1,v/v)中完全溶 解，并将化合物溶液在PBS中稀释。实验开始后17天至37天(总共21次)， 每天向两组小鼠以分别25和50mg/kg的各剂量口服给药200μL的化合物 229的稀释溶液，并向第三组小鼠以1mg/kg的剂量口服给药200μL的芬 戈莫德的稀释溶液。在媒介物对照组中，以与治疗组相同的方式向各小鼠 给药200μL的Cremophor EL-乙醇-PBS混合物(3.75:3.75:92.5,v/v/v)。从 实验的7天时，基于目视观察，使用严重性指数系统(6分(0至5)量表)每天 记录EAE的指数。基于以下标准评价多发性硬化的症状：

0：无异常；

1：无力的尾部(limp tail)；

2：无力的尾部和后肢无力；

3：后肢瘫痪；

4：后肢瘫痪和前肢无力；以及

5：垂死。

分析结果表明，在所有测试组中，从实验的7天时产生EAE，并且在 实验的17天时严重性指数为3±1.25，表明诱导100％的急性反应。在媒介 物对照组的小鼠的情况中，在实验的17天时，严重性指数为3±1，实验的 39天(慢性反应期)时为2.5±0.75，并且在实验的101天时为2.33±0.25。 媒介物对照组表现复发-缓解模式以及在整个实验期间高严重性指数。在芬 戈莫德治疗组中，在实验17天时，严重性指数为3±1，但是在实验39天 时为1.5±0.5，表明与媒介物对照组相比，芬戈莫德治疗组表现减轻的急性 反应和温和的慢性反应治疗效果。然而，从完成药物给药后，实验的39天 起，芬戈莫德治疗组表现增加的严重性指数，并且在实验的101天时表现 2.7±0.25的高严重性指数。此外，在实验的17天时，在用25mg/kg的本 发明的化合物229的治疗组中表现3±1的严重性指数，这与媒介物对照组 相似，但是在实验的39天时表现1.25±0.75的严重性指数，并且在实验的 55天时表现1.17±0.75的严重性指数，这表明出现与媒介物对照组相比统 计学显著的治疗效果。然而，在用25mg/kg化合物229治疗的组中，从实 验的57天时严重性指数开始增加，并且在实验的101天时为1.83±0.5，这 比媒介物对照组的低，但是比实验的开始阶段稍高(#,p<0.05；##,p<0.01；以 及###,p<0.001,与媒介物对照组相比，参见图5)。此外，在实验的17天时， 在用50mg/kg的本发明的化合物229的治疗组中表现3±0.75的严重性指 数，这与媒介物对照组的相似，但是在实验的39天时表现0.9±0.25的严 重性指数，并且在实验的101天时表现0.63±0.25的严重性指数，这表明 出现与媒介物对照组相比统计学显著的治疗效果(*,p<0.05；**,p<0.01；以 及***,p<0.001,与媒介物对照组相比，参见图5)。在用50mg/kg化合物229 治疗的组中，在口服给药化合物后治疗效果持续维持，并且在实验的49天 时，该效果与芬戈莫德治疗组的效果统计学上显著不同(p<0.05；p<0.01；以及p<0.001,与芬戈莫德治疗组相比，参见图5)。当将本发明 的化合物229以25mg/kg的剂量使用时，其在初始阶段表现优异的治疗效 果，但是对于复发的预防表现稍微不显著的效果，并且当将本发明的化合 物229以50mg/kg的剂量使用时，其在初始阶段表现治疗效果，并且对复 发的预防表现连续的效果。因此，本发明的化合物229具有针对鼠模型中 的EAE的治疗效果，并且与芬戈莫德(其为针对多发性硬化的常规治疗剂) 相比，其治疗效果较优，并维持较长时间。所以，本发明的化合物229是 针对多发性硬化的新型口服治疗剂，其可呈现更有吸引力的治疗方案。

实验实施例6：对淋巴恶性肿瘤细胞系的凋亡的作用

为了评价化合物457针对淋巴恶性肿瘤细胞系的抑制效果，进行以下 实验。

将各急性T细胞白血病细胞系Jurkat、Molt4和CCRF-CEM、急性B 细胞白血病细胞系Raji以及多发性硬化细胞系KMS11、KMS12BM、 KMS26、KMS28BM和IM9在包含10％FBS的RPMI培养基中以1.5×10⁵细胞/mL的浓度再悬浮，并将200μL各细胞悬浮液在平底96孔板(Costar) 中悬浮。将急性NK细胞淋巴瘤细胞系NK-92MI在α-MEM培养基(补充有 20％FBS、1X MEM维生素溶液、50μM 2-巯基乙醇和1X青霉素/链霉素) 中以1.5×10⁵细胞/mL的浓度再悬浮，并且将200μL细胞悬浮液在平底96 孔板中培养。将各孔中的细胞用10μL各0.1、0.25、0.5、0.75和1μM的 用RPMI培养基稀释的化合物处理，随后将细胞在5％CO₂培养箱中于37℃ 下孵育24小时。在媒介物对照组中，将细胞用10μL包含0.05％二甲基亚 砜(DMSO,Sigma)的培养基处理。

收集细胞，然后在用膜联蛋白V-7-AAD染色后，通过流式细胞器分析 其凋亡。将孵育的细胞收集，将其置于5mL FACS管(BD Falcon)中，并用 1mL荧光激活细胞分选(FACS)缓冲液(1％FBS和0.1％叠氮化钠在PBS中) 洗涤。将细胞在0.1mL FACS缓冲液中再悬浮，随后将细胞处理并用藻红 蛋白-膜联蛋白V在室温下染色10分钟。染色10分钟后，将细胞处理，并 用7-AAD在室温下染色5分钟。将染色的细胞在0.3mL FACS缓冲液中悬 浮，然后通过流式细胞器分析。如表12-15中所示，本发明的化合物065、 108、229和457表现诱导多种淋巴恶性肿瘤细胞凋亡的效果。所以，本发 明的化合物065、108、229和457可用作新型抗淋巴恶性肿瘤药物。

表13.

表14.

表15.

表16.

实验实施例7.毒性测试

以10mg/kg、50mg/kg和100mg/kg的各个剂量，向ICR雄性小鼠口 服给药一次化合物229在0.5％甲基纤维素溶液中的悬浮液，并研究小鼠的 存活率和体重，持续7天。在这样的给药后，监测小鼠是否死亡、临床条 件和体重变化。进行血液学测试和血液的生物化学检查。进行尸体解剖后， 用裸眼观察腹部和胸腔中的器官是否异常。

结果表明没有任何明显的临床条件或死亡的小鼠。在体重变化、血液 学测试、血液的生物化学检查和尸体解剖的检查中，也没有观察到任何由 于毒性的变化。如此可见，直至100mg/kg的剂量，化合物229未表现任 何由于毒性的变化。

因此，化合物229具有100mg/kg的半数致死量(LD50)，所以它是安全的。