一种利用平端连接法高效筛选阳性转化子的DNA重组方法

摘要

一种利用平端连接法高效筛选阳性转化子的DNA重组方法，将载体使用限制性内切酶进行酶切线性化，产生平末端线性化质粒DNA；目的DNA片段使用DNA聚合酶进行PCR扩增并回收PCR产物；将平末端线性化载体与平末端PCR产物混合后加入限制性内切酶与T4DNA连接酶同时存在的反应体系中，进行连接反应，当发生载体自连时，进行酶切反应，限制性内切酶将自连载体切为平末端载体，继续与游离的PCR产物连接；该反应过程为连接反应和酶切反应的交替循环，最终反应终止于酶切反应；将上述体系直接转化入感受态大肠杆菌，转化子即为阳性克隆。本发明操作步骤简单，可加快试验进度、降低实验成本、提高克隆成功率，大幅提高了平端连接的反应效率和平端连接克隆方法的成功率。