虎杖抗高尿酸血症有效成分群及其制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种虎杖抗高尿酸血症有效成分群及其制备方法，其中含有5%~20%重量的决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、20%~30%重量的大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、30%~50%重量的大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和10%~20%大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷；本发明还公开了虎杖抗高尿酸血症有效成分群在制备治疗高尿酸血症产品中的应用。

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，涉及虎杖抗高尿酸血症有效成分群及其制备方法，还涉及虎杖抗高尿酸血症有效成分群在制备治疗高尿酸血症产品中的用途。

背景技术

高尿酸血症是嘌呤代谢紊乱或（和）尿酸排泄减少所引起的一组异质性疾病，是引发痛风的重要生化基础，与心血管疾病、慢性肾脏病及代谢综合征，如糖尿病、肥胖等密切相关，是一种严重影响公共健康的疾病。来自中国、美国和英国等国的流行病学调查显示高尿酸血症的发病率呈急速上升趋势，被世界卫生组织列为二十世纪人类十大顽症之一。高尿酸血症不仅严重影响病人的生活质量，甚至威胁患者生命，严重威胁到公共卫生健康状态，给社会带来沉重的经济负担。

黄嘌呤氧化酶作为尿酸生成关键酶是降低尿酸药物的作用靶点。人体内尿酸的来源有内源性和外源性之分，外源性尿酸来源于食物，占体内尿酸来源的20%；内源性尿酸源于体内氨基酸、磷酸核糖及其他小分子合成和核酸分解代谢，占体内尿酸来源的80%。尿酸生成过多是高尿酸血症的一个主要发病原因。黄嘌呤氧化酶广泛分布于人体心、肺、肝等组织细胞浆内，能催化黄嘌呤和次黄嘌呤的氧化生成尿酸，并产生过氧化物自由基，尿酸浓度过高会导致高尿酸血症，并可引起痛风发作。别嘌呤醇和非布索坦是在临床上使用的黄嘌呤氧化酶抑制剂，但皮肤过敏、肝炎、超敏反应综合征等不良反应在一定程度上限制了其使用。2013年国家食品药品监督管理总局发布第57期《药品不良反应信息通报》，提示别嘌呤醇引起重症药疹的安全问题。

虎杖入药始载于《雷公炮制伦》列为上品，源于蓼科蓼属植物虎杖 Polygonum cuspidatum Sieb. Et Zucc.的干燥根茎，为中国药典2010年版一部所收载。具有祛风利湿，散瘀止痛，止咳化痰之功能，用于关节痹痛，湿热黄疸，经闭，癥瘕，水火烫伤，跌扑损伤，痈肿疮毒，咳嗽痰多。迄今为止，从虎杖中分离鉴定了蒽醌类、芪类、黄酮类、香豆素类、木脂素类等化学成分（Peng W，Qin RX，Li XL，Zhou H. Journal of ethnopharmacology，2013，148：729-745）。虎杖提取物具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗艾滋病、抗炎镇痛、抗动脉粥样硬化、抗血栓、抗休克、抗氧化、扩张血管、心肌保护、肝保护、抑制血小板聚集、改善微循环等广泛的生物活性（樊惠婷，丁世兰，林洪生. 中国中药杂志，2013，38：2545-2548）。虎杖提取物显著降低高尿酸血症动物模型血尿酸水平和抑制黄嘌呤氧化酶活性，可改善痛风性关节炎的病理改变（林金朝. 亚太传统药物，2012，8（11）：21-22；侯建平. 中药药理与临床，2010，26（5）：76-78；王斌，侯建平，李敏，孟建国，孙建宁.  中药药理与临床，2008，19（6）：434-437），但缺乏活性物质基础系统深入研究。

发明内容

本案发明人采用黄嘌呤氧化酶抑制活性指标指导下的导向分离模式研究虎杖提取物抗高尿酸血症活性物质基础，从有效部位中分离鉴定了决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、虎杖苷、白藜芦醇、大黄酚。其中决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对黄嘌呤氧化酶有明显的抑制作用。在此基础上，本案发明人发明制备了以决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷为主要成分的虎杖抗高尿酸血症有效成分群，本案发明人意外地发现制备的虎杖抗高尿酸血症有效成分群对黄嘌呤氧化酶抑制作用强于分离鉴定的化合物，因而完成了本发明。

本发明目的是提供一种虎杖抗高尿酸血症有效成分群及其制备方法和用途。

本发明的虎杖抗高尿酸血症有效成分群，从虎杖根茎及根中提取分离。

本发明的虎杖抗高尿酸血症有效成分群含有5%~20%重量的决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（I）、20%~30%重量的大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（II）、30%~50%重量的大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（III）和10%~20%重量的大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（IV），上述成分是由下述式I-IV表示的化合物。

本发明提供虎杖抗高尿酸血症有效成分群的制备方法，该方法包括以下步骤：

a）虎杖根茎及根粗粉用第一溶剂回流提取，滤过，提取液合并，提取液减压浓缩；

b）将步骤a）获得的提取物加水溶解，经大孔吸附树脂柱色谱，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；

c）用第二溶剂洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；

d）用第三溶剂洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，洗脱液减压浓缩、干燥得虎杖根茎及根。

在以上步骤中，其中步骤a）的第一溶剂为0~100%乙醇或丙酮水溶液；步骤b）大孔吸附树脂包括非极性或弱极性大孔吸附树脂。步骤c）的第二溶剂为10~20%乙醇水溶液，步骤d）的第三溶剂为50~70%乙醇水溶液。

本发明提供虎杖抗高尿酸血症有效成分群的制备方法，优选的包括以下步骤：

a）虎杖根茎及根粗粉加70~90%乙醇水溶液回流提取，滤过，提取液合并，减压回收乙醇；

b）将步骤a）获得的提取物加水溶解，经大孔吸附树脂柱色谱，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；

c）用10%乙醇水溶液洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；

d）用50%乙醇水溶液洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，洗脱液液减压浓缩、干燥得虎杖抗高尿酸血症有效成分群。

本发明的虎杖抗高尿酸血症有效成分群在制备治疗高尿酸血症产品中应用，特别是在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂产品中应用。

本发明采用以黄嘌呤为底物，HPLC法测定尿酸生成量的黄嘌呤氧化酶抑制活性评价体系测定虎杖抗高尿酸血症有效成分群抑制作用，避免紫外分光光度法反应体系中化学成分、黄嘌呤和尿酸紫外吸收相互干扰，影响测定结果的准确性。虎杖抗高尿酸血症有效成分群50μg/mL的抑制率90.12%~95.59%，决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷50μg/mL的抑制率84.52%，大黄素-6-O-β-D-β-D-吡喃葡萄糖苷50μg/mL的抑制率68.17%，大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷50μg/mL的抑制率62.69%、大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷50μg/mL的抑制率73.52%、虎杖苷50μg/mL的抑制率36.70%、白藜芦醇50μg/mL的抑制率44.45%、大黄酚50μg/mL的抑制率2.87%。上述结果表明虎杖抗高尿酸血症有效成分群可在制备治疗高尿酸血症产品中应用，特别是作为黄嘌呤氧化酶抑制剂在制备治疗高尿酸血症产品中应用。也可以含有虎杖抗高尿酸血症有效成分群的药物组合物在制备治疗高尿酸血症产品中应用，特别是作为黄嘌呤氧化酶抑制剂在制备治疗高尿酸血症产品中应用。

本发明的虎杖抗高尿酸血症有效成分群优点为其中含有5%~20%重量的决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、20%~30%重量的大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、30%~50%重量的大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和10%~20%重量的大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，这是以前技术尚未报道的，由于含量高，从而提高了疗效，满足制备治疗高尿酸血症产品的需要。

本发明的虎杖抗高尿酸血症有效成分群制备方法优点为工艺简单，操作方便，技术易掌握，能耗小，溶剂可回收循环使用，生产成本低。

本发明的虎杖抗高尿酸血症有效成分群可用于制备治疗高尿酸血症产品优点为作用机制明确，基于抑制尿酸生成关键酶黄嘌呤氧化酶活性。

本发明还提供用本发明的虎杖抗高尿酸血症有效成分群以及药学上可接受的载体或赋形剂制备的药物制剂。这些药物制剂选自以下剂型：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、泡腾片剂、舌下片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、微球剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、膏剂、口服液、混悬剂、溶液剂、气雾剂、注射剂，注射乳剂、冻干粉针，还可以根据需要制备成缓释或控释制剂。

本发明的含有虎杖抗高尿酸血症有效成分群药物制剂，在制备药物制剂时可加入药物可接受的载体，所述药物可接受的载体来自：抗氧剂、鏊合剂、表面活性剂、填充剂、崩解剂、湿润剂、溶剂、缓释材料、肠溶材料、pH调节剂、矫味剂、色素等，常用载体如：甘露糖醇、右旋糖苷、乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、注射用水、注射用乙醇、氯化钠、硅衍生物、纤维素、纤维素衍生物、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐温80、琼脂、碳酸钙、聚乙二醇、环糊精、磷脂类材料、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙等。

口服剂量根据病人的年龄、体重、病情严重程度和其他类似的因素而改变，服用量按虎杖抗高尿酸血症有效成分群重量计：250~500 mg/次，一日2次。

以下通过具体实施例对本发明作进一步的说明，并非对本发明的限定，依照本领域公知的现有技术，本发明的实施方式并不限于具体实施例。

具体实施方式

实施例1

HPLC法测定虎杖抗高尿酸血症有效成分群中决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷含量的方法

     色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1甲酸溶液为流动相B，线性梯度洗脱：0 min（A 15%，B 85%）→ 20 min（A 20%，B 80%）→ 35 min（A 30%，B 70%）→ 55 min（A 50%，B 50%）→ 80 min（A 60%，B 40%）→ 85 min（A 100%，B 0%）→ 95 min（A 100%，B 0%）；流速：1.0 mL·min^-1；检测波长为280 nm。理论塔板数按大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷峰计算，不低于4000。

溶液的制备

     对照品溶液的制备

精密称取决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷10μg、大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷15μg、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷40μg和大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷15μg的溶液。

供试品溶液的制备

取虎杖抗高尿酸血症有效成分群100 mg，精密称定，加甲醇溶解，转移至100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取10 ml，置100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

样品测定方法

精密吸取供试品溶液和对照品溶液各20μl，按色谱条件进样测定，外标一点法计算虎杖抗高尿酸血症有效成分群中决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量。

实施例2

取虎杖根茎及根粗粉300 Kg，加9倍量乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收得提取物。取提取物加水溶解，加于HPD100大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用20%乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用60%乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，减压回收得虎杖抗高尿酸血症有效成分群457 g。采用实施例1的方法测定，含有5.15%重量的决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、20.64%重量的大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、32.26%重量的大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和14.20%重量的大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

实施例3

取虎杖根茎及根粗粉300 Kg，加12倍量90%乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收得提取物。取提取物加水溶解，加于HPD200大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用20%乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用60%乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，减压回收得虎杖抗高尿酸血症有效成分群479 g。采用实施例1的方法测定，含有5.86%重量的决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、22.57%重量的大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、30.20%重量的大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和11.15%重量的大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

实施例4

取虎杖根茎及根粗粉300 Kg，加8倍量70%乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收得提取物。取提取物加水溶解，加于AB-8大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用10%乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用70%乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，减压回收得虎杖抗高尿酸血症有效成分群642 g。采用实施例1的方法测定，含有5.37%重量的决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、24.59%重量的大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、47.30%重量的大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和12.28%重量的大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

实施例5

取虎杖根茎及根粗粉300 Kg，加10倍量50%乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收得提取物。取提取物加水溶解，加于AB-8大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用10%乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用50%乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，减压回收得虎杖抗高尿酸血症有效成分群537g。采用实施例1的方法测定，含有6.96%重量的决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、21.45%重量的大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、49.22%重量的大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和10.17%重量的大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

实施例6

取虎杖根茎及根粗粉300 Kg，加10倍量70%乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收得提取物。取提取物加水溶解，加于D101大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用10%乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用50%乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，减压回收得虎杖抗高尿酸血症有效成分群582 g。采用实施例1的方法测定，含有9.47%重量的决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、29.25%重量的大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、31.11%重量的大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和10.74%重量的大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

实施例7

取虎杖根茎及根粗粉300 Kg，加8倍量水回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收得提取物。取提取物加水溶解，加于D101大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用20%乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用70%乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，减压回收得虎杖抗高尿酸血症有效成分群439g。采用实施例1的方法测定，含有5.24%重量的决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、22.17%重量的大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、31.59%重量的大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和19.73%重量的大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

实施例8

取虎杖根茎及根粗粉300 Kg，加10倍量70%乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收得提取物。取提取物加水溶解，加于AB-8大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用20%乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用70%乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，减压回收得虎杖抗高尿酸血症有效成分群549 g。采用实施例1的方法测定，含有7.24%重量的决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、28.59%重量的大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、34.17%重量的大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和12.56%重量的大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

实施例9

取虎杖根茎及根粗粉300 Kg，加12倍量70%丙酮回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收得提取物。取提取物加水溶解，加于AB-8大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用10%乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用50%乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，减压回收得虎杖抗高尿酸血症有效成分群596 g。采用实施例1的方法测定，含有8.47%重量的决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、25.26%重量的大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、33.35%重量的大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和10.37%重量的大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

实施例10

取虎杖根茎及根粗粉300 Kg，加9倍量丙酮回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收得提取物。取提取物加水溶解，加于HPD100大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用10%乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用50%乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，减压回收得虎杖抗高尿酸血症有效成分群405 g。采用实施例1的方法测定，含有19.43%重量的决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、22.22%重量的大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、31.59%重量的大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和12.74%重量的大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

实施例11

取虎杖根茎及根粗粉300 Kg，加8倍量90%乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收得提取物。取提取物加水溶解，加于HPD400大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用10%乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用50%乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，减压回收得虎杖抗高尿酸血症有效成分群424g。采用实施例1的方法测定，含有9.37%重量的决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、25.15%重量的大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、32.18%重量的大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和11.76%重量的大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

实施例12

虎杖抗高尿酸血症有效成分群化学成分的分离与鉴定

虎杖抗高尿酸血症有效成分群经ODS柱色谱和制备液相色谱分离得到7个化合物，利用ESI-MS、¹H-NMR、¹³C-NMR数据鉴定化合物的结构为大黄酚（1）、大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（2）、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3）、决明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）、大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、白藜芦醇(6)、虎杖苷(7)。

化合物1：¹H-NMR（DMSO-d₆，500 MHz）：7.80 （1H，t，J = 8.1，7.5 Hz，H-6），7.70（1H，d，J = 7.5 Hz，H-5），7.54（1H，s，H-4），7.38（1H，d，J = 8.1 Hz，H-7），7.21（1H，s，H-2），2.43（3H，s，-CH₃）；¹³C-NMR（DMSO-d₆，125 MHz）：191.6 （C-9），181.4（C-10），161.5（C-8），161.3（C-1），149.1（C-3），137.2 （C-6），133.3（C-10a），133.0（C-4a），124.2（C-2），124.0（C-7），120.5（C-4），119.2（C-5），115.8（C-8a），113.7（C-9a），21.5（-CH₃）；ESI-MS m/z：277 [M+Na]⁺。

    化合物2：¹H-NMR（DMSO-d₆，500 MHz）：13.02（1H，s，-OH），7.47（1H，s，H-4），7.35（1H，s，H-5），7.17（2H，s，H-2，7），5.12（1H，d，J = 7.5 Hz，H-1'），3.95（3H，s，-OCH₃），2.40（3H，s，-CH₃）；¹³C-NMR（DMSO-d₆，125 MHz）：186.4（C-9），181.9（C-10），164.7（C-6），161.7（C-8），160.7（C-1），147.1（C-3），136.3（C-5a），132.0（C-4a），124.2（C-2），119.3（C-4），114.4（C-10a），114.4（C-8a），107.3（C-5），106.5（C-7），100.7（C-1'），77.4（C-5'），76.6 （C-3'），73.3（C-2'），69.8（C-4'），60.7（C-6'），56.0（-OCH₃），21.4（-CH₃）；ESI-MS m/z：469 [M+Na]⁺。

    化合物3：¹H-NMR（DMSO-d₆，500 MHz）：13.22（1H，s，OH），7.43（1H，s，H-4），7.26（1H，s，H-5），7.13（1H，s，H-2），6.99（1H，s，H-7），5.04（1H，d，J = 7.5 Hz，H-1'），2.39（3H，s，-CH₃）；¹³C-NMR（DMSO-d₆，125 MHz）：186.2（C-9），182.2（C-10），165.1（C-6），161.7（C-8），161.2（C-1），146.7（C-3），136.4（C-5a），132.1（C-4a），124.1（C-2），119.1（C-4），114.5（C-1a），112.8（C-5），108.8（C-8a），108.6（C-7），101.0（C-1'），77.3（C-5'），76.3（C-3'），73.3（C-2'），69.5（C-4'），60.6（C-6'），21.3（-CH₃）；ESI-MS m/z：455 [M+Na]⁺。

化合物4：¹H-NMR（CD₃OD，500 MHz）：6.98（2H，s，H-5，7），6.77（1H，s，H-4），5.07（1H，d，J = 7.7，H-1'），3.84（3H，s，-OCH₃），2.58（3H，s，-COCH₃），2.27（3H，s，-CH₃）；¹³C-NMR（CD₃OD，125 MHz）：208.1（-COCH₃），160.4（C-6），157.1（C-8），153.7（C-1），139.1（C-9），135.4（C-3），123.9（C-2），120.3（C-4），110.3（C-10），104.4（C-7），104.3（C-1'），102.5（C-5），78.8（C-5'），78.1（C-3'），74.9（C-2'），71.3（C-4'），62.4（C-6'），56.0（-OCH₃），32.6（-COCH₃），20.2（-CH₃）；ESI-MS m/z：431 [M+Na]⁺。

化合物5：¹H-NMR（DMSO-d₆，500 MHz）：13.22（1H，s，-OH），7.68（1H，s，H-4），7.60（1H，s，H-2），7.53（1H，s，H-5），6.58（1H，s，H-7），5.11（1H，d，J = 7.6 Hz， H-1'），2.46（3H，s，-CH₃）；¹³C-NMR（DMSO-d₆，125 MHz）：186.0（C-9），182.1（C-10），164.7（C-6），164.5（C-1），158.3（C-8），146.5（C-3），134.3（C-10a），134.1（C-4a），123.3（C-4），121.5（C-2），118.4（C-8a），110.0（C-9a），108.2（C-5），107.4（C-7）100.9（C-1'），77.3（C-5'），76.5（C-3'），73.3（C-2'），69.6（C-4'），60.6（C-6'），21.5（-CH₃）；ESI-MS m/z：455 [M+Na]⁺。

化合物6：¹H-NMR（CD₃COCD₃，500 MHz）： 7.43（2H，dd，J = 11.2，2.6 Hz，H-2'，6'），7.02（1H，d，J = 16.3 Hz，H-b），6.89（1H，d，J = 16.3 Hz，H-a），6.84（2H，dd，J = 11.2，2.6 Hz，H-3'，5'），6.55（2H，d，J = 2.2 Hz，H-2，6），6.28（1H，t，J = 2.2 Hz，H-4)；¹³C-NMR（CD₃COCD₃，125MHz）：159.1（C-3，5），158.1（C-4'），140.9（C-1），130.0（C-2'），130.0（C-6'），129.1（C-b），128.7（C-1'），126.9（C-a），116.4（C-3'），116.4（C-5'），105.7（C-6），105.7（C-2），102.7（C-4）；ESI-MS m/z：251 [M+Na]⁺。

    化合物7：¹H-NMR（CD₃COCD₃，500 MHz）：7.43（1H，dd，J = 8.6，2.8 Hz，H-2'，6'），7.10（1H，d，J = 16.4，H-b），6.92（1H，d，J = 16.3 Hz，H-a），6.84（1H，dd，J = 8.6，2.8 Hz，H-3'， 5'），6.82（1H，t，J = 1.6 Hz，H-2），6.68（1H，t，J = 1.6 Hz，H-6），6.48（1H，t，J = 1.6 Hz，H-4），4.95（1H，d，J = 7.7 Hz，H-1''）；¹³C-NMR（CD₃COCD₃，125 MHz）：160.3（C-3），159.4（C-5），158.3（C-4'），140.8（C-1），129.9（C-1'）129.7（C-b），128.8（C-2'），126.5（C-a），116.4（C-3'），108.2（C-6），106.5（C-2），103.9（C-4），116.4（C-5'），128.8（C-6'）102.1（C-1''），78.1（C-5''），77.8（C-3''），74.8（C-2''），71.5（C-4''），62.8（C-6''）；ESI-MS m/z：413 [M+Na]⁺。

实施例13

虎杖抗高尿酸血症有效成分群用药学上可接受的载体或赋形剂制备的药物制剂。这些药物制剂选自以下剂型：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、泡腾片剂、舌下片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、微球剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、膏剂、口服液、混悬剂、溶液剂、气雾剂、注射剂，注射乳剂、冻干粉针，还可以根据需要制备成缓释或控释制剂，在制备药物制剂时可加入药物可接受的载体，所述药物可接受的载体来自：抗氧剂、鏊合剂、表面活性剂、填充剂、崩解剂、湿润剂、溶剂、缓释材料、肠溶材料、pH调节剂、矫味剂、色素等，常用载体如：甘露糖醇、右旋糖苷、乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、注射用水、注射用乙醇、氯化钠、硅衍生物、纤维素、纤维素衍生物、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐温80、琼脂、碳酸钙、聚乙二醇、环糊精、磷脂类材料、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙。上述制备工艺均为本领域常规操作，在此不加赘述。

实施例14

虎杖抗高尿酸血症有效成分群为原料制得的药物制剂不仅包括单独使用虎杖抗高尿酸血症有效成分群的药物制剂，还包括添加虎杖抗高尿酸血症有效成分群作为活性成分的药物制剂。

实施例15

黄嘌呤氧化酶抑制活性测定

HPLC测定方法：Diamonsil ODS色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：100 mmol/L磷酸二氢钠溶液（pH=3.5）；检测波长：290 nm；流速：1.0 mL/min。

测定体系：测试品溶液（含0.25%DMSO的0.07 mol/L磷酸盐缓冲液）200μL加入0.07 mol/L磷酸盐缓冲液140μL，黄嘌呤氧化酶溶液120μL（0.02 unit/mL，0.07 mol/L磷酸盐缓冲液），25℃保温15 min，加入黄嘌呤溶液240μL（300 μmol/L，0.07 mol/L磷酸盐缓冲液），25℃保温15 min，加入1 mol/L盐酸100μL终止反应。HPLC法测定尿酸生成量。对照测定，供试品溶液用含0.25%DMSO的0.07 mol/L磷酸盐缓冲液代替。结果见表1。

表1  黄嘌呤氧化酶抑制活性测定结果表