一种小极性达玛烷型四环三萜配糖体的制备方法

摘要

本发明提供了一种小极性达玛烷型四环三萜配糖体的制备方法。其中，制备方法涉及蒸柜蒸制、超声波提取、高分子絮凝澄清、大孔吸附树脂柱层析、离子交换树脂柱层析、浓缩干燥等步骤。该方法与现有技术比较，其优点在于应用蒸柜蒸制技术进行高效环保炮制，应用超声波提取技术进行高效率与低能耗提取，应用高分子絮凝沉淀技术对大分子杂质进行处理，应用经典柱层析技术进行分离纯化。使用本发明提供的方法能实现小极性达玛烷型四环三萜配糖体的高效率、高质量、低成本和规模化生产。

说明书

技术领域

本发明涉及中药有效成分的提取、纯化技术领域，具体地说是一种以人参、三七、西洋参等为原料制备小极性达玛烷型四环三萜配糖体的方法。

背景技术

达玛烷型四环三萜配糖体主要存在于五加科（Araliaceae）人参属(Panax Linn)植物中，通常称为人参皂苷(ginsenosides)。三七[P. notoginseng (Burk.) F.H.Chen]、人参(P. ginseng C.A.Meyer)和西洋参(P. quenquefolius )是工业化生产小极性达玛烷型四环三萜配糖体的重要天然原料。

以达玛烷型四环三萜(damarrane tetracyclic triterpenoid)为基本骨架的植物配糖体(plant glycosides)具有提高免疫力、保护心脑血管和改善性功能等多方面的生理活性。现代药理药效学研究表明，许多大极性或中等极性达玛烷型四环三萜配糖体是通过在人体内代谢形成极性更小的达玛烷型四环三萜配糖体来发挥其生理活性的。随着对小极性达玛烷型配糖体研究的深入，其在医药卫生、保健食品和功能化妆品行业的应用也越来越广泛。因此，开发小极性达玛烷型四环三萜配糖体现代化生产技术，对于形成优势产业，培育龙头企业，促进小极性达玛烷型四环三萜配糖体医药健康产业的发展和中药现代化具有重要的意义。实现小极性达玛烷型配糖体的产业化将会掀起医药健康产业新兴的革命。目前，制备小极性达玛烷型四环三萜配糖体的方法主要有化学合成及降解、物理炮制和生物发酵等。化学方法和生物手段技术要求严格，生产成本高、周期长且对环境会造成污染。物理炮制方法具有操作简便、周期短、成本低、环保等优点，故本发明采用此方法来进行小极性达玛烷型四环三萜配糖体的制备。

中药炮制是根据中医药理论，按照中医辨证施治用药的需要和药物自身的性质对中药材所采取的加工处理技术，历史上又称炮炙、修治、修制、修事、治削等。中药炮制是我国传统中医药体系在药物方面的特色和优势，传统的炮制方法有蒸制、酒制、黄精汁制等。在本发明中，我们通过蒸制，改变药性，应用现代化的生产工艺，分离纯化有效部位，得到小极性达玛烷型四环三萜配糖体。

发明内容

本发明的目的是应用物理炮制方法，结合现代化的生产工艺，提供一种从植物原料中提取小极性达玛烷型四环三萜配糖体的工业化制备方法，该方法设计科学合理、质量可控、易于规模化生产；且收率高、产品纯度高、环境友好、节约能源、生产成本低。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种小极性达玛烷型四环三萜配糖体的制备方法，包括如下步骤：

步骤（1），蒸柜蒸制：将富含大极性或中等极性达玛烷型四环三萜配糖体的植物原料粉碎，过10-14mm筛，用纯化水润制1-2小时后，蒸制10-12小时，取出后干燥，得到富含小极性达玛烷型四环三萜配糖体的原料；

步骤（2），超声波提取：将步骤（1）得到的富含小极性达玛烷型四环三萜配糖体的原料粉碎，过20-40目筛后，用原料5-10倍量质量浓度为70-98%的乙醇超声提取3次，每次0.5-2小时，过滤，提取液减压浓缩至无醇味，回收乙醇，得浓缩液；

步骤（3），高分子絮凝澄清：将步骤（2）得到的浓缩液加水稀释1.5-3倍，得到稀释液，将稀释液加热至70-90℃，加入稀释液体积1-3%的高分子絮凝剂液B组分，搅拌均匀，然后加入稀释液体积1-3%高分子絮凝剂液A组分，搅拌均匀，再于60-90℃下控温搅拌10-40min，放置，冷却至室温，离心，上清液存入储罐，不溶物用水搅拌，过滤，滤液存入储罐；所述的高分子絮凝剂液A组分所使用的絮凝剂包括但不仅限于101果汁澄清剂、甲壳素、ZTC天然澄清剂、明胶、鞣酸或蛋清；所述的高分子絮凝剂液B组分所使用的絮凝剂包括但不仅限于101果汁澄清剂、甲壳素、ZTC天然澄清剂、明胶、鞣酸或蛋清；但高分子絮凝剂液A组分与高分子絮凝剂液B组分所使用的絮凝剂不相同；

步骤（4），大孔吸附树脂柱层析：在层析柱中均匀装入大孔吸附树脂，树脂经预处理活化后，自顶部将步骤（3）储罐中的液体加入层析柱中，用水洗脱至洗脱液无色无味后，用质量浓度为70-98%乙醇洗脱，每小时洗脱流量为柱体积的2-8倍，用薄层层析检测，至洗脱液无达玛烷型四环三萜配糖体特征斑点，即停止洗脱，将乙醇洗脱液存入储罐；

步骤（5），离子交换树脂柱层析：在层析柱中均匀装入离子交换树脂，树脂经预处理活化后，将步骤（4）得到的乙醇洗脱液自顶部泵入，用质量浓度为70-98%乙醇洗脱，每小时洗脱流量为柱体积的2-8倍，用薄层层析检测，至洗脱液无达玛烷型四环三萜配糖体特征斑点，即停止洗脱，收集洗脱液；

步骤（6），浓缩干燥：将步骤（5）得到的洗脱液浓缩，干燥，即得到小极性达玛烷型四环三萜配糖体产品。

本发明技术方案中步骤（1）所述的富含大极性或中等极性达玛烷型四环三萜配糖体的植物原料包括但不限于人参、三七或西洋参这些富含大极性或中等极性达玛烷型四环三萜配糖体的植物地下部分和地上部分。

进一步，优选的是步骤（1）中所述的干燥采用热风循环干燥箱，所述的蒸制采用全自动控温控压蒸柜蒸制。

进一步，优选的是于步骤（1）中取粉碎好的原料，用纯化水以1:0.5-1的料液质量比润制1-2小时，放入蒸柜中以100-120℃的温度蒸制8-12小时。

本发明技术方案中步骤（3）所述的高分子絮凝剂液A组分的制备方法为取絮凝剂，边搅拌边加入纯化水至完全溶解，放置，过滤，取滤液，即得；所述的高分子絮凝剂液B组分的制备方法为取絮凝剂，边搅拌边加入质量浓度为0.5-2.5%的冰醋酸至其完全溶解，放置，过滤，取滤液，即得。

进一步，优选的是步骤（4）中所述的大孔吸附树脂为聚苯乙烯型大孔吸附树脂。

本发明技术方案中步骤（4）中所述的大孔吸附树脂树脂的预处理方法为：将大孔吸附树脂置于沉淀缸内，用水浸泡，过滤，后再加入质量浓度75-98%乙醇，乙醇液面高出大孔吸附树脂2-5cm，搅拌均匀，放置15-36h，装入层析柱，用2-5倍柱体积质量浓度75-98%的乙醇冲洗，然后用水洗净大孔吸附树脂上的乙醇，用质量浓度为3-5%盐酸溶液洗涤，盐酸溶液的用量为2-5倍柱体积，接着用水洗至中性，再以质量浓度为3-5%氢氧化钠溶液洗涤，氢氧化钠溶液用量为2-5倍柱体积，最后再用水洗至中性即得。

进一步，优选的是步骤（5）中所述离子交换树脂柱层析所用的离子交换树脂包括强酸型离子交换树脂或弱酸型离子交换树脂。

本发明技术方案中步骤（5）中所述树脂预处理活化方法为：将离子交换树脂置于沉淀缸内，用质量浓度为75-98%乙醇浸泡15-36h，搅拌均匀，装入层析柱，然后加入质量浓度为75-98%乙醇洗涤，75-98%乙醇洗涤用量为2-5倍柱体积，然后用去离子水洗净离子交换树脂上的乙醇后，用质量浓度为2-8%盐酸溶液洗涤，盐酸溶液的用量为2-6倍柱体积，接着用水洗至中性，再以质量浓度为3-8%氢氧化钠溶液洗涤，氢氧化钠溶液用量为3-6倍柱体积，最后用水洗至中性，待用。

进一步，优选的是步骤（6）所述的浓缩方式采用膜浓缩设备；所述的干燥方式为喷雾干燥。

质量检测：应用薄层层析（TLC）和高压液相色谱（HPLC）分析检测方法，分析小极性达玛烷型四环三萜配糖体的组成与含量，建立指纹图谱分析方法，对植物原料和上述提取步骤进行质量检测。

本发明与现有技术相比，其有益效果为：

1.  本发明首次将蒸制技术应用于小极性达玛烷型四环三萜配糖体的生产中，不仅提高了生物转移率，而且安全可控，操作简单，炮制时间短、节约能源、对环境友好。特别有利于将大极性或中等极性达玛烷型四环三萜配糖体转化为小极性达玛烷型四环三萜配糖体。

2.本发明首次将超声波提取技术应用于小极性达玛烷型四环三萜配糖体的生产中，不仅提取率高、杂质少，而且缩短提取时间、节约能源、对环境友好。特别有利于极性大、对热和酸不稳定的配糖体物质的提取。

3. 本发明首次选用适宜提取小极性达玛烷型四环三萜配糖体的高分子絮凝剂。该技术能有效地去除提取液中的多糖、蛋白质、树胶等大分子杂质和重金属，回收率达95%以上，与传统醇沉法相比较，除杂效果明显，操作简单、低成本。

4. 本发明首次在小极性达玛烷型四环三萜配糖体的提取中应用膜分离和膜浓缩技术。该技术与高分子絮凝剂配合使用，在室温下进行，能有效去除大分子杂质和重金属，提高浓缩效率，防止小极性达玛烷型四环三萜配糖体受热降解，保证产品质量。较传统工艺速度快、效率高，节约能源。

附图说明

图1.1为三七根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体的硅胶G薄层层析图，其中，1为人参皂苷Rg₅, 2为人参皂苷Rh₄，3为三七根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体；   

图1.2为三七根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体的反相硅胶Rp-8薄层层析图，其中，11为人参皂苷Rg₅，12为人参皂苷Rh₄，13为三七根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体；

图2为三七根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体的高压液相色谱指纹图谱；

图3.1为人参根小极性达玛烷型四环三萜配糖体的硅胶G薄层层析图，其中，21为人参皂苷Rg₅，22为人参皂苷Rh₄，23为人参根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体；

图3.2为人参根小极性达玛烷型四环三萜配糖体的反相硅胶Rp-8薄层层析图，其中，31为人参皂苷Rg₅，32为人参皂苷Rh₄，33为人参根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体；

图4为人参根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体的高压液相色谱图。

图5.1为西洋参根小极性达玛烷型四环三萜配糖体的硅胶G薄层层析图，其中，41为人参皂苷Rg₅，42为人参皂苷Rh₄，43为西洋参根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体；

图5.2为西洋参根小极性达玛烷型四环三萜配糖体的反相硅胶Rp-8薄层层析图，其中，51为人参皂苷Rg₅，52为人参皂苷Rh₄，53为西洋参根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体；

图6为西洋参根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体的高压液相色谱图。

 

具体实施方式

为了更好地理解本发明的内容，以下以结合实施例作进一步的说明，但本发明的内容并不局限于此。

本发明所用试剂、仪器等基本情况如下表1：

表1

本发明超声波装置包括但不限于各种类型的封闭式和开放式的超声波强化提取装置。所述膜浓缩设备包括但不限于各种类型的膜分离和膜浓缩装置。

实施例1

以三七根茎为原料提取小极性达玛烷型四环三萜配糖体的方法，包括如下步骤：

步骤（1），蒸柜蒸制：干燥的三七根茎30kg粉碎，过10-14mm筛，用纯化水以1:0.5的料液质量比润制1小时后，采用全自动控温控压蒸柜以100℃的温度蒸制10小时，取出后用热风循环干燥箱干燥，得到富含小极性达玛烷型四环三萜配糖体的原料；

步骤（2），超声波提取：将步骤（1）得到的富含小极性达玛烷型四环三萜配糖体的原料粉碎，过20-40目筛后，用质量浓度为70%的乙醇150kg超声提取3次，每次0.5小时，提取液减压浓缩至无醇味，回收乙醇，得浓缩液；

步骤（3），高分子絮凝澄清：将步骤（2）得到的浓缩液加水稀释1.5倍，得到稀释液，将稀释液加热至70℃，加入稀释液体积1%的高分子絮凝剂液B组分，搅拌均匀，然后加入稀释液体积1%高分子絮凝剂液A组分，搅拌均匀，再于60℃下控温搅拌10min，放置，冷却至室温，离心，上清液存入储罐，不溶物用水搅拌，过滤，滤液存入储罐；所述的高分子絮凝剂液A组分所使用的絮凝剂为101果汁澄清剂；所述的高分子絮凝剂液B组分所使用的絮凝剂为甲壳素；其中，步骤（3）所述的高分子絮凝剂液A组分的制备方法为取101果汁澄清剂，边搅拌边加入纯化水至完全溶解，放置，过滤，取滤液，即得；所述的高分子絮凝剂液B组分的制备方法为取甲壳素，边搅拌边加入质量浓度为0.5%的冰醋酸至其完全溶解，放置，过滤，取滤液，即得；

步骤（4），大孔吸附树脂柱层析：在层析柱中均匀装入聚苯乙烯型大孔吸附树脂，树脂经预处理活化后，自顶部将步骤（3）储罐中的液体加入层析柱中，用水洗脱至洗脱液无色无味后，用质量浓度为70%乙醇洗脱，每小时洗脱流量为柱体积的2倍，用薄层层析检测，至洗脱液无达玛烷型四环三萜配糖体特征斑点，即停止洗脱，将乙醇洗脱液存入储罐；其中，步骤（4）中所述的大孔吸附树脂树脂的预处理方法为：将大孔吸附树脂置于沉淀缸内，用水浸泡，过滤，后再加入质量浓度75%乙醇，乙醇液面高出大孔吸附树脂2cm，搅拌均匀，放置15h，装入层析柱，用2倍柱体积质量浓度75%的乙醇冲洗，然后用水洗净大孔吸附树脂上的乙醇，用质量浓度为3%盐酸溶液洗涤，盐酸溶液的用量为2倍柱体积，接着用水洗至中性，再以质量浓度为3%氢氧化钠溶液洗涤，氢氧化钠溶液用量为2倍柱体积，最后再用水洗至中性即得。

步骤（5），离子交换树脂柱层析：在层析柱中均匀装入强酸型离子交换树脂，树脂经预处理活化后，将步骤（4）得到的乙醇洗脱液自顶部泵入，用质量浓度为70%乙醇洗脱，每小时洗脱流量为柱体积的2倍，用薄层层析检测，至洗脱液无达玛烷型四环三萜配糖体特征斑点，即停止洗脱，收集洗脱液；其中，所述树脂预处理活化方法为：将离子交换树脂置于沉淀缸内，用质量浓度为75%乙醇浸泡15h，搅拌均匀，装入层析柱，然后加入质量浓度为75%乙醇洗涤，75%乙醇洗涤用量为2倍柱体积，然后用去离子水洗净离子交换树脂上的乙醇后，用质量浓度为2%盐酸溶液洗涤，盐酸溶液的用量为2倍柱体积，接着用水洗至中性，再以质量浓度为3%氢氧化钠溶液洗涤，氢氧化钠溶液用量为3倍柱体积，最后用水洗至中性，待用。

步骤（6），浓缩干燥：将步骤（5）得到的洗脱液采用膜浓缩设备浓缩，喷雾干燥，即得到得到三七根茎达小极性达玛烷型配糖体产品，得率按原料计算，为6.0%。

上述制备过程中质量控制：应用薄层层析（TLC）和高压液相色谱（HPLC）分析检测技术，分析达玛烷型配糖体的组成与含量，建立指纹图谱分析方法，对植物原料和上述提取步骤进行质量检测。图1.1、图1.2和图2 为三七根茎小极性玛烷型配糖体的薄层层析和高压液相色谱指纹图谱。

三七根茎小极性玛烷型四环三萜配糖体的硅胶薄层层析方法：取三七根茎小极性玛烷型配糖体样品，加甲醇分别制成1 mg/ml 的溶液，吸取供试品溶液10μl,点于硅胶G薄层板上，以体积比为8.0:2.0:0.2的三氯甲烷-甲醇－水混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，以含10％硫酸的乙醇溶液喷雾显色。结果见图1.1。

三七根茎达玛烷型配糖体的Rp-8反相硅胶薄层层析方法：取三七根茎小极性玛烷型配糖体样品，加甲醇分别制成1 mg/ml 的溶液，吸取供试品溶液10μl,点于反相硅胶Rp-8薄层板上，以体积比为8：2的甲醇－水混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，以含10％硫酸的乙醇溶液喷雾显色。结果见图1.2。

三七根茎小极性玛烷型四环三萜配糖体的高压液相色谱指纹图谱的分析条件：色谱条件及系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为乙腈，流动相B为水，梯度洗脱如表2所示；流速为1.0 ml/min；检测波长为203 nm；柱温25℃；人参皂甙Rg₁和人参皂甙Re的分离度应该大于1.5，理论板数按人参皂甙Rg₁计应不低于6000。高压液相色谱图如图2所示。

表2

实施例2

以人参根茎为原料提取小极性达玛烷型四环三萜配糖体的方法，包括如下步骤：

步骤（1），蒸柜蒸制：将干燥的人参根茎30kg粉碎，过10-14mm筛，用纯化水以1: 1的料液质量比润制2小时后，采用全自动控温控压蒸柜以120℃的温度蒸制12小时，取出后用热风循环干燥箱干燥，得到富含小极性达玛烷型四环三萜配糖体的原料；

步骤（2），超声波提取：将步骤（1）得到的富含小极性达玛烷型四环三萜配糖体的原料粉碎，过20-40目筛后，用质量浓度为98%的乙醇300kg超声提3次，每次2h，提取液减压浓缩至无醇味，回收乙醇，得浓缩液；

步骤（3），高分子絮凝澄清：将步骤（2）得到的浓缩液加水稀释3倍，得到稀释液，将稀释液加热至90℃，加入稀释液体积3%的高分子絮凝剂液B组分，搅拌均匀，然后加入稀释液体积3%高分子絮凝剂液A组分，搅拌均匀，再于90℃下控温搅拌40min，放置，冷却至室温，离心，上清液存入储罐，不溶物用水搅拌，过滤，滤液存入储罐；所述的高分子絮凝剂液A组分所使用的絮凝剂为ZTC天然澄清剂；所述的高分子絮凝剂液B组分所使用的絮凝剂为鞣酸；其中，步骤（3）所述的高分子絮凝剂液A组分的制备方法为取ZTC天然澄清剂，边搅拌边加入纯化水至完全溶解，放置，过滤，取滤液，即得；所述的高分子絮凝剂液B组分的制备方法为取鞣酸，边搅拌边加入质量浓度为2.5%的冰醋酸至其完全溶解，放置，过滤，取滤液，即得；

步骤（4），大孔吸附树脂柱层析：在层析柱中均匀装入聚苯乙烯型大孔吸附树脂，树脂经预处理活化后，自顶部将步骤（3）储罐中的液体加入层析柱中，用水洗脱至洗脱液无色无味后，用质量浓度为98%乙醇洗脱，每小时洗脱流量为柱体积的8倍，用薄层层析检测，至洗脱液无达玛烷型四环三萜配糖体特征斑点，即停止洗脱，将乙醇洗脱液存入储罐；其中，步骤（4）中所述的大孔吸附树脂树脂的预处理方法为：将大孔吸附树脂置于沉淀缸内，用水浸泡，过滤，后再加入质量浓度98%乙醇，乙醇液面高出大孔吸附树脂5cm，搅拌均匀，放置36h，装入层析柱，用5倍柱体积质量浓度98%的乙醇冲洗，然后用水洗净大孔吸附树脂上的乙醇，用质量浓度为5%盐酸溶液洗涤，盐酸溶液的用量为5倍柱体积，接着用水洗至中性，再以质量浓度为5%氢氧化钠溶液洗涤，氢氧化钠溶液用量为5倍柱体积，最后再用水洗至中性即得。

步骤（5），离子交换树脂柱层析：在层析柱中均匀装入弱酸型离子交换树脂，树脂经预处理活化后，将步骤（4）得到的乙醇洗脱液自顶部泵入，用质量浓度为98%乙醇洗脱，每小时洗脱流量为柱体积的8倍，用薄层层析检测，至洗脱液无达玛烷型四环三萜配糖体特征斑点，即停止洗脱，收集洗脱液；其中，所述树脂预处理活化方法为：将离子交换树脂置于沉淀缸内，用质量浓度为98%乙醇浸泡36h，搅拌均匀，装入层析柱，然后加入质量浓度为98%乙醇洗涤， 98%乙醇洗涤用量为5倍柱体积，然后用去离子水洗净离子交换树脂上的乙醇后，用质量浓度为8%盐酸溶液洗涤，盐酸溶液的用量为6倍柱体积，接着用水洗至中性，再以质量浓度为8%氢氧化钠溶液洗涤，氢氧化钠溶液用量为6倍柱体积，最后用水洗至中性，待用。

步骤（6），浓缩干燥：将步骤（5）得到的洗脱液采用膜浓缩设备浓缩，喷雾干燥，即得到人参根达玛烷型四环三萜配糖体产品，得率按原料计算，为3.1%。

上述制备过程中进行质量控制：应用薄层层析和高压液相色谱方法，建立指纹图谱分析方法，进行生产全过程的质量控制。图3.1、图3.2和图4为人参根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体的薄层层析和高压液相色谱指纹图谱。

人参根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体的硅胶薄层层析方法：取人参根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体样品，加甲醇分别制成1 mg/ml 的溶液，吸取供试品溶液10μl,点于硅胶G薄层板上，以体积比为8.0:2.0:0.2三氯甲烷-甲醇－水的混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，以含10％硫酸的乙醇溶液喷雾显色。结果见图3.1。

人参根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体的Rp-8反相硅胶薄层层析方法：取人参根茎小极性达玛烷型配糖体样品，加甲醇分别制成1 mg/ml 的溶液，吸取供试品溶液10μl,点于反相硅胶Rp-8薄层板上，以体积比为8:2甲醇－水的混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，以含10％硫酸的乙醇溶液喷雾显色。结果见图3.2。

人参根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体的高压液相色谱图分析方法与三七根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体的高压液相色谱图分析方法相同。其高压液相色谱图如图4所示。

实施例3

以西洋参根茎为原料提取小极性达玛烷型四环三萜配糖体的制备方法，包括如下步骤：

步骤（1），蒸柜蒸制：将西洋参根茎30粉碎，过10-14mm筛，用纯化水以1:0.8的料液质量比润制1.4小时后，采用全自动控温控压蒸柜以112℃的温度蒸制11小时，取出后用热风循环干燥箱干燥，得到富含小极性达玛烷型四环三萜配糖体的原料；

步骤（2），超声波提取：将步骤（1）得到的富含小极性达玛烷型四环三萜配糖体的原料粉碎，过20-40目筛后，用质量浓度为80%的乙醇200Kg超声提取3次，每次50min，提取液减压浓缩至无醇味，回收乙醇，得浓缩液；

步骤（3），高分子絮凝澄清：将步骤（2）得到的浓缩液加水稀释2倍，得到稀释液，将稀释液加热至80℃，加入稀释液体积1.5%的高分子絮凝剂液B组分，搅拌均匀，然后加入稀释液体积2%高分子絮凝剂液A组分，搅拌均匀，再于75℃下控温搅拌30min，放置，冷却至室温，离心，上清液存入储罐，不溶物用水搅拌，过滤，滤液存入储罐；所述的高分子絮凝剂液A组分所使用的絮凝剂为明胶；所述的高分子絮凝剂液B组分所使用的絮凝剂为蛋清；其中，步骤（3）所述的高分子絮凝剂液A组分的制备方法为取明胶，边搅拌边加入纯化水至完全溶解，放置，过滤，取滤液，即得；所述的高分子絮凝剂液B组分的制备方法为取蛋清，边搅拌边加入质量浓度为1.8%的冰醋酸至其完全溶解，放置，过滤，取滤液，即得；

步骤（4），大孔吸附树脂柱层析：在层析柱中均匀装入聚苯乙烯型大孔吸附树脂，树脂经预处理活化后，自顶部将步骤（3）储罐中的液体加入层析柱中，用水洗脱至洗脱液无色无味后，用质量浓度为88%乙醇洗脱，每小时洗脱流量为柱体积的5倍，用薄层层析检测，至洗脱液无达玛烷型四环三萜配糖体特征斑点，即停止洗脱，将乙醇洗脱液存入储罐；其中，步骤（4）中所述的大孔吸附树脂树脂的预处理方法为：将大孔吸附树脂置于沉淀缸内，用水浸泡，过滤，后再加入质量浓度85%乙醇，乙醇液面高出大孔吸附树脂3cm，搅拌均匀，放置24h，装入层析柱，用4倍柱体积质量浓度80%的乙醇冲洗，然后用水洗净大孔吸附树脂上的乙醇，用质量浓度为4%盐酸溶液洗涤，盐酸溶液的用量为3倍柱体积，接着用水洗至中性，再以质量浓度为3.6%氢氧化钠溶液洗涤，氢氧化钠溶液用量为4.5倍柱体积，最后再用水洗至中性即得。

步骤（5），离子交换树脂柱层析：在层析柱中均匀装入离子交换树脂，树脂经预处理活化后，将步骤（4）得到的乙醇洗脱液自顶部泵入，用质量浓度为75%乙醇洗脱，每小时洗脱流量为柱体积的6倍，用薄层层析检测，至洗脱液无达玛烷型四环三萜配糖体特征斑点，即停止洗脱，收集洗脱液；其中，所述树脂预处理活化方法为：将离子交换树脂置于沉淀缸内，用质量浓度为80%乙醇浸泡30h，搅拌均匀，装入层析柱，然后加入质量浓度为90%乙醇洗涤，85%乙醇洗涤用量为4倍柱体积，然后用去离子水洗净离子交换树脂上的乙醇后，用质量浓度为5%盐酸溶液洗涤，盐酸溶液的用量为5倍柱体积，接着用水洗至中性，再以质量浓度为6%氢氧化钠溶液洗涤，氢氧化钠溶液用量为4倍柱体积，最后用水洗至中性，待用。

步骤（6），浓缩干燥：将步骤（5）得到的洗脱液采用膜浓缩设备浓缩，喷雾干燥，即得到得到西洋参根茎达小极性达玛烷型配糖体产品，得率按原料计算，为5.1%。

上述制备过程中进行质量控制：应用薄层层析和高压液相色谱方法，建立指纹图谱分析方法，进行生产全过程的质量控制。图5.1、图5.2和图6为西洋参根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体的薄层层析和高压液相色谱指纹图谱。

西洋参根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体的硅胶薄层层析方法：取西洋参根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体样品，加甲醇分别制成1 mg/ml 的溶液，吸取供试品溶液10μl,点于硅胶G薄层板上，以体积比为8.0:2.0:0.2三氯甲烷-甲醇－水的混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，以含10％硫酸的乙醇溶液喷雾显色。结果见图5.1。

西洋参根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体的Rp-8反相硅胶薄层层析方法：取西西洋参根茎小极性达玛烷型配糖体样品，加甲醇分别制成1 mg/ml 的溶液，吸取供试品溶液10μl,点于反相硅胶Rp-8薄层板上，以体积比为8:2甲醇－水的混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，以含10％硫酸的乙醇溶液喷雾显色。结果见图5.2。

西洋参根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体的高压液相色谱图分析方法与三七根茎小极性达玛烷型四环三萜配糖体的高压液相色谱图分析方法相同。其高压液相色谱图如图6所示。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。