改变PCR产物Tm值达到多重荧光PCR的方法和用途

摘要

本发明公开了一种准确、快速改变PCR产物Tm值达到多重荧光PCR的方法；在原有不同扩增片段Tm值的基础上，选择性地挑选至少1种目的片段小的产物，并在所述产物原有上下游引物5’端基于引物设计原则有针对性地添加碱基，当期望产物TM值变大则相应地多增加碱基GC，当期望产物Tm值变小则相应地多增加碱基AT，从而改变整个扩增片段GC％的比值，以致达到期望的扩增片段Tm值，从而通过熔解曲线能够有效的区分不同扩增片段。利用上述方法所得的改变PCR产物Tm值的用途是：准确、快速的达到多重实时荧光PCR。