一株诱导降香黄檀形成降香的真菌

摘要

本发明公开了一株能够诱导降香黄檀形成中药降香的真菌菌株，它是保藏编号为CGMCC No.6379的镰孢属真菌JXMFC-5（

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体地说涉及一株能够诱导降香黄檀形成降香的真菌。 

背景技术

降香黄檀Dalbergia odorifera T. Chen，又名降香、花梨母（海南），豆科蝶形花亚科黄檀属常绿乔木，是我国5属8类34种珍贵红木品种之一，也是海南省特有的濒危树种，属国家二级保护植物，其树干和根的干燥心材为名贵中药“降香”。降香具有行气活血，止痛、止血的功效，可用于脘腹疼痛，肝郁肋痛，胸痹刺痛，跌打损伤，外伤出血等病症，入药始见于我国唐代，在传统中医学和藏医学中已有上千年的历史。《中华人民共和国药典》从1985年版开始，规定降香黄檀为降香的基源植物。由于降香价格高，市场需求极大，近年来降香黄檀遭到掠夺式砍伐，野生资源趋于枯竭。近年来，为保护濒危的降香黄檀自然资源，并实现对资源的可持续利用，除产区海南省外，在广东、广西、云南等省已成功引种降香黄檀，并建成了一些规模化的人工种植基地。自然条件下，降香的产生过程十分缓漫，一般生长7~8年的降香黄檀主干开始形成心材，二十年左右才能积累到一定数量以供药用，结香过程往往长达几十年甚至上百年，不能满足社会的用药需求。 

目前，生产上主要靠降香黄檀自然生长形成药材，生产周期过长是其最大的缺陷。因此，充分利用降香黄檀资源，提高结香效率，加快结香过程，增加产量，缓解药材供需矛盾，是当前降香生产上亟待解决的关键问题。 

经文献检索，尚未见到利用真菌诱导降香黄檀生产中药降香的相关公开报道。利用微生物来提高降香产量，改善品质，缩短生产周期，是最有应用前景的途径之一，适用于大规模标准化、商品化生产，对降香黄檀资源的保护、开发和利用提供有效的途径，具有重要的经济、社会和生态效益。 

发明内容

本发明的目的在于提供一株能够诱导降香黄檀形成降香的真菌，该株真菌菌株是从降香黄檀的结香部位分离得到的，它能诱导降香黄檀树干分泌形成中药降香。 

为实现上述目的，本发明采用的技术步骤是先培养真菌，再将真菌接种到降香黄檀树的树干上。经过一段时间后，在接种部位的周围会产生中药降香，该物质燃烧时能产生降香燃烧特有的辛辣香气。 

本发明采用的一株真菌经鉴定为镰孢 (Fusarium sp.)，保藏编号CGMCC No.6379。这株真菌于2012年7月17日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。 

    真菌JXMFC-5的培养特性为：在PDA培养基上菌落为白色，气生菌丝为毡状，菌落背面为微黄色，生长1周菌落直径为6~8cm，小型分生孢子单孢，椭圆形或长圆形，稍弯曲，（7.92~10.64）×（2.1~3.76）μm。 

具体地说，本发明的培养技术步骤如下： 

    将由降香黄檀茎干结香部位分离得到的镰孢 (Fusarium sp.) 属真菌JXMFC-5自低温保藏的斜面试管菌种活化后，转接于PDA培养基的平皿中，25℃恒温培养4~7天，然后转接于锯末-麦麸固体培养基中，恒温培养15~35天；锯末-麦麸培养温度为22~28℃。

将上述培养的菌种接种到锯末-麦麸复合固体培养基中进行培养，待菌丝长到培养基三分之二之后就可以作为接菌菌株使用；锯末-麦麸复合固体培养基中锯末-麦麸的体积比为1:1。 

具体实施方式

一株诱导降香黄檀形成降香的真菌，其培养方法为：先将这株真菌自低温保藏的斜面试管菌种活化后，转接于PDA培养基的平皿中，25℃恒温培养4~7天，然后转接于锯末-麦麸固体培养基中，恒温培养15~35天，培养温度为22~28℃；锯末-麦麸复合固体培养基中锯末-麦麸的体积比为1:1，待菌丝长到培养基三分之二之后就可以作为接菌菌株使用。 

实施例1 

PDA培养基平皿中培养的真菌JXMFC-5接种在锯末-麦麸复合固体培养基上生长15天，备用。

选取树龄为5年的降香黄檀树，用直径为lcm的钻头在树干上钻孔3个，孔深为2~3cm，各个孔洞上下间的间隔约为10cm，左右间隔约为7cm，每个孔洞各接入0.8~1.2g上述培养15天的真菌JXMFC-5。 

接种4个月后进行观察：接入真菌JXMFC-5的孔洞周围均有紫褐色的降香产生，从孔洞周围取下的木料燃烧时，产生浓烈的独特的降香香味，且其醇溶性固形物含量达到10%以上，符合药典规定要求。 

比较例1 

    PDA培养基平皿中培养的真菌JXMFC-5接种在锯末-麦麸复合固体培养基上生长20天，备用。

选取树龄为6年的降香黄檀树，用直径为lcm的钻头在树干上钻孔6个，孔深为2~3cm，各个孔洞上下间的间隔约为15cm，左右间隔约为6cm，其中3个孔洞各接入0.8~1.2g上述培养20天的真菌JXMFC-5，另外3个孔洞各注射5%硫酸锌5ml。 

接种4个月后进行观察：接入真菌JXMFC-5的孔洞周围均有紫褐色的降香产生；注射5%硫酸锌的孔洞周围有浅黄色的降香产生。从孔洞周围取下木料燃烧时，JXMFC-5形成的紫褐色的降香产生较浓烈的独特的降香香味。 

按照2010年版药典规定的热浸法测定降香醇溶性浸出物，各称取接种真菌JXMFC-5  4个月形成的降香、5%硫酸锌诱导形成的降香和市售降香0.3g，精密称定(准确至0.0001g)，每个样做三个重复，置100ml的锥形瓶中，精密加乙醇30ml，密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液10ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量（%）。其测定结果如下表： 

表1不同处理诱导形成的降香与市售降香的醇溶性浸出物含量

不同处理JXMFC-55%硫酸锌市售降香醇溶性浸出物含量（%）10.1±0.35.6±0.28.4±0.6

2010版药典规定降香醇溶性浸出物的含量不少于8%，可见真菌JXMFC-5诱导形成的降香质量较好。

比较例2 

    PDA培养基平皿中培养的真菌JXMFC-5接种在锯末-麦麸复合固体培养基上生长25天，备用。

选取树龄为5年的降香黄檀树，用直径为lcm的钻头在树干上钻孔6个，孔深为2~3cm，各个孔洞上下间的间隔约为20cm，左右间隔约为8cm，6个孔洞各接入0.8~1.2g上述培养25天的真菌JXMFC-5。 

接种2个月后，取3个孔的样品进行观察：接入真菌的孔洞周围均有浅紫褐色降香产生。从孔洞周围取下木料燃烧时，能产生降香燃烧的独特气味。按照比较例1的方法，测定接菌2个月诱导形成的降香的醇溶性固形物含量为5.0%。 

接种4个月后，取3个孔的样品进行观察：接入真菌的孔洞周围均有深紫褐色物质降香产生。从孔洞周围取下木料燃烧时，能产生降香燃烧的独特气味，且气味浓烈。按照比较例1的方法，测定接菌4个月诱导形成的降香的醇溶性固形物含量达到10.1%。 

可见，接种真菌JXMFC-5  4个月时形成的降香质量较好。