公开/公告号CN102811620A
专利类型发明专利
公开/公告日2012-12-05
原文格式PDF
申请/专利权人 CHDI基金会股份有限公司;
申请/专利号CN201180015784.X
申请日2011-01-20
分类号A01N43/54;A61K31/505;
代理机构北京市柳沈律师事务所;
代理人陈桉
地址 美国纽约州
入库时间 2023-12-18 07:36:17
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2017-03-08
未缴年费专利权终止 IPC(主分类):A61K31/505 授权公告日:20150325 终止日期:20160120 申请日:20110120
专利权的终止
2015-03-25
授权
授权
2013-01-16
实质审查的生效 IPC(主分类):A01N43/54 申请日:20110120
实质审查的生效
2012-12-05
公开
公开
本申请要求201 0年1月25日提交的美国申请61/298,095的优先权，出 于所有目的，将其引入到本申请中作为参考。
技术领域
本申请提供一些犬尿氨酸-3-单加氧酶(Kynurenine-3-monooxygenase)抑 制剂、其药物组合物及其使用方法。
背景技术
犬尿氨酸-3-单加氧酶(KMO)为色氨酸降解途径的酶，其催化犬尿氨酸 (KYN)转化成3-羟基犬尿氨酸(3-HK)，所述3-羟基犬尿氨酸进一步降解成兴 奋性神经毒性NMDA受体激动剂QUIN(3-羟基邻氨基苯甲酸加氧酶)。 3-OH-KYN和QUIN协同发挥作用，即3-OH-KYN显著增强QUIN的兴奋 性神经毒性作用。来自数个实验室的研究已提供证据证明KYN途径代谢偏 离3-OH-KYN/QUIN支路使脑中神经保护剂KYNA增加，这会带来神经保 护作用。
也已报道，KMO表达在炎性病症或免疫刺激后增加。3-OH-KYN(KMO 的活性产物)在维生素B-6缺陷的新生大鼠的脑中积累且当将其加到初级培 养物中的神经元细胞时或当将其局部注射到所述脑中时，其引起细胞毒性。 近来的报道称，相对低浓度(纳摩尔)的3-OH-KYN可造成初级神经元培养物 中的神经元发生凋亡性细胞死亡。事实上，结构-活性研究已证明3-OH-KYN 和其它邻-氨基苯酚可经历由它们转化成醌亚胺而引发的氧化反应，该过程 与伴随产生氧自由基相关。最近几年已对缺血性神经元死亡中涉及的这些反 应类型进行广泛研究且已证明，氧自由基和谷氨酸介导的神经传递在缺血性 神经元死亡的发展中相互配合。
近来也已证明，KMO活性在虹膜-睫状体中特别高且新形成的 3-OH-KYN被分泌到晶状体液中。3-OH-KYN在所述晶状体中的过度累积可 引起白内障。
QUIN是NMDA受体亚群的激动剂，当将其直接注射到脑区域中时， 其破坏大多数神经元细胞体(该神经元细胞体使中途纤维(neuronal cell bodies sparing fiber en passant)和神经元末梢(neuronal terminal)空余出来)。对于含有 NR2C或NR2D亚单元的NMDA受体复合物，QUIN是相对较差的激动剂， 但其与含有NR2B亚单元的NMDA受体复合物以相对较高的亲和力相互作 用。纹状体内注射QUIN后发现的神经毒性分布非常类似于在亨廷顿病患者 基底核中发现的神经毒性分布：尽管大多数内源性纹状体神经元受到破坏， 但NADH-心肌黄酶-染色神经元(现在认为其能够表达一氧化氮合成酶)和含 有神经肽Y的神经元看上去与轴突末梢和中途纤维(fiber en passant)一起被 空余(spare)出来。
在体外，已在不同模型系统中研究所述化合物的神经毒性作用，所得不 同结果为：使器官型皮质-纹状体培养物慢性暴露于亚微摩尔浓度的QUIN 引起组织学病理体征，在经培养的神经元细胞慢性暴露后得到类似的结果。
在炎性神经障碍(例如实验性变应性脑炎(experimental allergic encephalitis)、细菌和病毒感染、前脑和全脑缺血(forebrain global ischemia) 或脊髓损伤(spinal trauma))模型中，脑QUIN水平非常高。脑QUIN浓度的 这种增加可能是由于兴奋性毒素的高循环浓度(circulating concentration)或由 于被激活的小胶质中或浸润巨噬细胞中从头合成增加。在感染反转录病毒的 猕猴中，据推测，脑QUIN浓度的增加(约98%)大多数是由于局部产生(local production)。事实上，已在脑炎症区域中发现IDO、KMO和犬尿氨酸酶活 性的剧烈增加。
在先的研究已证明，能够增加脑KYNA浓度的药物引起镇静、轻度镇 痛、惊厥阈值增加和抗兴奋性神经毒性或缺血性损伤的神经保护作用。除了 上面报道的证据，近来已证明，能够增加脑KYNA形成的多种化合物可通 过减少脑细胞外间隙中GLU的浓度而造成谷氨酸(GLU)介导的神经传递的 剧烈减少。
仍然需要为KMO有效抑制剂并可用于治疗神经变性障碍的化合物。
发明内容
本发明提供至少一种化学实体，其选自式I化合物及其药用盐和前药：
其中：
R1选自任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
R2选自氰基、任选取代的杂芳基和任选取代的杂环烷基；
R3选自氢和任选取代的低级烷基；和
R4选自氢、卤素和任选取代的低级烷基。
本发明还提供药物组合物，其包含本申请描述的至少一种化学实体和至 少一种药用赋形剂。
本发明还提供在需要所述治疗的受试者中治疗由犬尿氨酸-3-单加氧酶 活性介导的病症或障碍的方法，所述方法包括向所述受试者给药治疗有效量 的至少一种本申请描述的化学实体。
本发明还提供在需要所述治疗的受试者中治疗由犬尿氨酸-3-单加氧酶 活性介导的病症或障碍的方法，所述方法包括向所述受试者给药治疗有效量 的至少一种本申请描述的化学实体。
本发明还提供包装药物组合物，其包含至少一种本申请描述的药物组合 物和使用所述组合物治疗患有由犬尿氨酸-3-单加氧酶活性介导的病症或障 碍的受试者的说明书。
本说明书使用的以下词语、短语和符号通常旨在具有下述含义，除非使 用它们的上下文另有说明。以下缩写和术语在通篇中具有所示含义：
不是位于两个字母或符号之间的破折号(″-″)表示取代基的连接点。例 如，-CONH2通过碳原子来连接。
″任选″是指随后描述的事件或情况可能或不可能发生且描述包括事件 或情况的发生和事件或情况的不发生。例如，″任选取代的烷基″包括如下定 义的″烷基″和″取代的烷基″。本领域技术人员应当理解的是，就含有一个或 多个取代基的任意基团而言，这样的基团不意在引入立体化学上不实际的、 合成上不可行的和/或内在不稳定的任意取代或取代模式。
″烷基″包括具有所示碳原子数的直链和支链烷基，其通常具有1至20 个碳原子，例如1至8个碳原子，例如1至6个碳原子。例如，C1-C6烷基 包括具有1至6个碳原子的直链和支链烷基。烷基的实例包括甲基、乙基、 丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、2-戊基、异戊基、新戊基、 己基、2-己基、3-己基、3-甲基戊基等。亚烷基是烷基的另一亚组，其是指 与烷基相同的残基，但具有两个连接点。亚烷基通常将具有2至20个碳原 子，例如2至8个碳原子，例如2至6个碳原子。例如，C0亚烷基表示共价 键且C1亚烷基为亚甲基。当提到具有特定碳数的烷基残基时，意在包括具 有该碳数的所有几何异构体；因此，例如″丁基″意在包括正丁基、仲丁基、 异丁基和叔丁基；″丙基″包括正丙基和异丙基。″低级烷基″是指具有1至4 个碳的烷基。
″环烷基″表示具有特定碳原子数(通常为3至7个环碳原子)的饱和烃环 基团。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基及桥连和笼形饱 和环基例如降莰烷。
″烷氧基″是指通过氧桥连接的具有指定碳原子数的烷基，例如甲氧基、 乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、2- 戊基氧基、异戊氧基、新戊氧基、己氧基、2-己氧基、3-己氧基、3-甲基戊 氧基等。烷氧基通常将具有1至6个通过氧桥连接的碳原子。″低级烷氧基″ 是指具有1至4个碳的烷氧基。
″芳基″包括：
5和6元芳族碳环，例如苯；
二环环系，其中至少一个环为碳环和芳族的，例如萘、茚满和四氢萘； 和
三环环系，其中至少一个环为碳环和芳族的，例如芴。
例如，芳基包括与含有1个或多个选自N、O和S的杂原子的5至7 元杂环烷基环稠合的5和6元芳族碳环，条件是连接点在芳族碳环上。由取 代的苯衍生物形成的并在环原子上具有自由价的二价基团称作取代的亚苯 基。通过从具有自由价的碳原子上除去一个氢原子而衍生自单价多环烃基 (其名称以″-基″结尾)的二价基团通过向相应单价基团的名称中加入″-亚基″ 来命名，例如具有两个连接点的萘基称作亚萘基。然而，芳基绝不包括以下 另有定义的杂芳基或与以下另有定义的杂芳基重叠。因此，若一个或多个芳 族碳环与芳族杂环烷基环稠合，则所得环系为如下定义的杂芳基而不是芳 基。
术语″卤代″包括氟代、氯代、溴代和碘代且术语″卤素″包括氟、氯、溴 和碘。
″杂芳基″包括：
5至7元芳族单环，其含有一个或多个例如1至4个或在一些实施方案 中为1至3个选自N、O和S的杂原子且其余环原子为碳；和
二环杂环烷基环，其含有一个或多个例如1至4个或在一些实施方案中 为1至3个选自N、O和S的杂原子且其余环原子为碳且其中至少一个杂原 子存在于芳环中。
例如，杂芳基包括与5至7元环烷基环稠合的5至7元芳族杂环烷基环。 例如，杂芳基也包括与5至7元芳基环稠合的5或6元芳族杂环烷基环。对 于其中仅一个环含有一个或多个杂原子的上述稠合二环杂芳基环系，连接点 可在杂芳环上或在环烷基环上。当杂芳基中S原子和O原子的总数超过1 时，这些杂原子不彼此相邻。在一些实施方案中，杂芳基中S原子和O原 子的总数不多于2个。在一些实施方案中，芳族杂环中S原子和O原子的 总数不多于1个。杂芳基的实例包括但不限于(由被优先指定为1的连接位 开始编号)：2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2,3-吡嗪基、3,4-吡嗪基、2,4- 嘧啶基、3,5-嘧啶基、2,3-吡唑啉基、2,4-咪唑啉基、异噁唑基、异噁唑啉基、 噁唑基、噁唑啉基、噁二唑基、噻唑啉基、噻二唑啉基、四唑基、噻吩基、 苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并咪唑啉基、苯并噁唑基、二氢吲哚 基、哒嗪基、三唑基、喹啉基、吡唑基和5,6,7,8-四氢异喹啉基。通过从具 有自由价的碳原子上除去一个氢原子而衍生自单价杂芳基(其名称以″-基″结 尾)的二价基团通过向相应单价基团的名称中加入″-亚基″来命名，例如具有 两个连接点的吡啶基为亚吡啶基。杂芳基不包括如上定义的芳基或与如上定 义的芳基重叠。
取代的杂芳基也包括取代有一个或多个氧化物(-O-)取代基的环系，例如 吡啶基-N-氧化物。
″杂环烷基″是指脂族单环，其通常具有3至7个环原子，除1-3个独立 选自氧、硫和氮及其组合(包含至少一个上述杂原子)的杂原子外还含有至少 2个碳原子。″杂环烷基″也指与含有1个或多个选自N、O和S的杂原子的 5至7元杂环烷基环稠合的5和6元芳族碳环，条件是连接点在杂环烷基环 上。适当的杂环烷基包括例如(由被优先指定为1的连接位开始编号)：2-吡 咯啉基、2,4-咪唑烷基、2,3-吡唑烷基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基和2,5- 哌嗪基。吗啉基也在本发明范围内，包括2-吗啉基和3-吗啉基(按氧被优先 指定为1来编号)。取代的杂环烷基也包括取代有一个或多个氧代部分的环 系，例如哌啶基-N-氧化物、吗啉基-N-氧化物、1-氧代-1-硫吗啉基和1,1-二 氧代-1-硫吗啉基。
本申请使用的术语″取代″是指指定原子或基团上的任意一个或多个氢 被从指定组中选择的基团代替，条件是不超过指定原子的正常化合价。当取 代基为氧代(即=O)时，原子上的2个氢被代替。仅当取代基和/或变量的组 合得到稳定的化合物或有用的合成中间体时，这样的组合才是允许的。稳定 的化合物或稳定的结构预示化合物足够稳定以经历从反应混合物中分离和 随后配制成具有至少一种实际用途的药物。除非另有说明，将取代基命名到 核心结构中。例如，应当理解的是，当将(环烷基)烷基列为可能的取代基时， 该取代基与核心结构的连接点在所述烷基部分中。
除非另有专门定义，术语″取代的″烷基(包括但不限于低级烷基)、环烷 基、芳基(包括但不限于苯基)、杂环烷基(包括但不限于吗啉-4-基、3,4-二氢 喹啉-1(2H)-基、二氢吲哚-1-基、3-氧代哌嗪-1-基、哌啶-1-基、哌嗪-1-基、 吡咯烷-1-基、氮杂环丁烷-1-基和异二氢吲哚-2-基)和杂芳基(包括但不限于吡 啶基)分别是指其中一个或多个(例如最多5个且例如最多3个)氢原子被独立 选自以下的取代基代替的烷基、环烷基、芳基、杂环烷基和杂芳基：
-Ra、-ORb、-O(C1-C2烷基)O-(例如亚甲基二氧基)、-SRb、胍基、胍上 的一个或多个氢被低级烷基代替的胍基、-NRbRc、卤素、氰基、氧代(作为 杂环烷基上的取代基)、硝基、-CORb、-CO2Rb、-CONRbRc、-OCORb、-OCO2Ra、 -OCONRbRc、-NRcCORb、-NRcCO2Ra、-NRcCONRbRc、-SORa、-SO2Ra、 -SO2NRbRc和-NRcSO2Ra，
其中Ra选自任选取代的C1-C6烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳 基、任选取代的杂环烷基和任选取代的杂芳基；
Rb选自H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳 基、任选取代的杂环烷基和任选取代的杂芳基；和
Rc选自氢和任选取代的C1-C4烷基；或
Rb和Rc与它们所连接的氮形成任选取代的杂环烷基；和
其中每个任选取代的基团为未取代的或独立取代有一个或多个例如一 个、两个或三个独立选自以下的取代基：C1-C4烷基、环烷基、芳基、杂环 烷基、杂芳基、芳基-C1-C4烷基-、杂芳基-C1-C4烷基-、C1-C4卤代烷基-、-OC1-C4烷基、-OC1-C4烷基苯基、-C1-C4烷基-OH、-C1-C4烷基-O-C1-C4烷基、-OC1-C4卤代烷基、卤素、-OH、-NH2、-C1-C4烷基-NH2、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、 -NH(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基苯基)、-NH(C1-C4烷基苯基)、氰 基、硝基、氧代(作为杂芳基上的取代基)、-CO2H、-C(O)OC1-C4烷基、 -CON(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、-CONH(C1-C4烷基)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-NHC(O)(苯基)、-N(C1-C4烷基)C(O)(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷 基)C(O)(苯基)、-C(O)C1-C4烷基、-C(O)C1-C4苯基、-C(O)C1-C4卤代烷基、 -OC(O)C1-C4烷基、-SO2(C1-C4烷基)、-SO2(苯基)、-SO2(C1-C4卤代烷基)、 -SO2NH2、-SO2NH(C1-C4烷基)、-SO2NH(苯基)、-NHSO2(C1-C4烷基)、 -NHSO2(苯基)和-NHSO2(C1-C4卤代烷基)。
术语″取代的烷氧基″是指烷基部分被取代的烷氧基(即-O-(取代的烷 基))，其中″取代的烷基″如本申请所述。″取代的烷氧基″也包括糖苷(即糖基) 和抗坏血酸的衍生物。
术语″取代的氨基″是指基团-NHRd或-NRdRd，其中每个Rd独立选自羟 基、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的酰基、氨基羰基、任 选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环烷基、任选取代的烷氧 基羰基、亚磺酰基和磺酰基，所述基团各自如本申请所述且条件是仅一个 Rd可为羟基。术语″取代的氨基″也指各自如上所述的基团-NHRd和-NRdRd的N-氧化物。N-氧化物可如下制备：相应的氨基用例如过氧化氢或间氯过 氧苯甲酸处理。本领域技术人员熟知进行N-氧化的反应条件。
″氨基羰基″包括式-(C=O)(任选取代的氨基)基团，其中取代的氨基如上 所述。
″酰基″是指基团(烷基)-C(O)-；(环烷基)-C(O)-；(芳基)-C(O)-；(杂芳 基)-C(O)-；和(杂环烷基)-C(O)-，其中所述基团通过羰基官能团与母体结构 连接且其中烷基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环烷基如本申请所述。酰基具 有所指示的碳原子数，其中酮基的碳包括在所编号的碳原子内。例如，C2 酰基为具有式CH3(C=O)-的乙酰基。
″烷氧基羰基″是指通过羰基碳连接的具有式(烷氧基)(C=O)-的酯基，其 中所述烷氧基具有所指示的碳原子数。因此，C1-C6烷氧基羰基为通过其氧 与羰基连接基连接的具有1至6个碳原子的烷氧基。
″氨基″是指基团-NH2。
术语″亚磺酰基″包括基团-S(O)-H、-S(O)-(任选取代的(C1-C6)烷基)、 -S(O)-(任选取代的芳基)、-S(O)-(任选取代的杂芳基)、-S(O)-(任选取代的杂 环烷基)和-S(O)-(任选取代的氨基)。
术语″磺酰基″包括基团-S(O2)-H、-S(O2)-(任选取代的(C1-C6)烷基)、 -S(O2)-(任选取代的芳基)、-S(O2)-(任选取代的杂芳基)、-S(O2)-(任选取代的 杂环烷基)、-S(O2)-(任选取代的烷氧基)、-S(O2)-(任选取代的芳基氧基)、 -S(O2)-(任选取代的杂芳基氧基)、-S(O2)-(任选取代的杂环基氧基)和 -S(O2)-(任选取代的氨基)。
术语″取代的酰基″是指基团(取代的烷基)-C(O)-、 (取代的环烷基)-C(O)-、(取代的芳基)-C(O)-、(取代的杂芳基)-C(O)-、和(取 代的杂环烷基)-C(O)-，其中所述基团通过羰基官能团与母体结构连接且其中 取代的烷基、取代的环烷基、取代的芳基、取代的杂芳基和取代的杂环烷基 如本申请所述。
术语″取代的烷氧基羰基″是指基团(取代的烷基)-O-C(O)-，其中所述基 团通过羰基官能团与母体结构连接且其中取代的烷基如本申请所述。
″糖苷″是指多种糖衍生物中的任意一种，其含有与糖中的氧原子或氮原 子连接的非糖基团且在水解后得到该糖。糖基的实例为葡萄糖基。
″抗坏血酸的衍生物″或″抗坏血酸衍生物″是指以下多种衍生物中的任 意一种，其含有与抗坏血酸中的氧原子或氮原子连接的非糖基团且在水解后 得到抗坏血酸(即(R)-5-((S)-1,2-二羟基乙基)-3,4-二羟基呋喃-2(5H)-酮)。
本申请所述化合物包括但不限于它们的光学异构体、外消旋体和它们的 其它混合物。在这些情况下，单一的对映异构体或非对映异构体(即光学活 性形式)可通过非对称合成或通过拆分外消旋体来得到。可通过例如以下方 式完成外消旋体的拆分：常规方法，例如在拆分剂存在下进行结晶，或色谱 法(使用例如手性高压液相色谱(HPLC)柱)。另外，这样的化合物包括具有碳 -碳双键的化合物的Z-和E-形式(或顺式-和反式-形式)。当本申请所述化合物 以不同互变异构形式存在时，术语″化合物″意欲包括所述化合物的所有互变 异构形式。这样的化合物也包括晶体形式包括多晶型物和包合物。类似地， 术语″盐″意欲包括所述化合物的所有互变异构形式和晶体形式。
化学实体包括但不限于本申请描述的化合物和及其所有药用形式。本申 请所述化合物的药用形式包括药用盐、前药和它们的混合物。在一些实施方 案中，本申请所述化合物为药用盐和前药形式。因此，术语″化学实体(一种 或多种)″也包括药用盐、前药和它们的混合物。
″药用盐″包括但不限于与无机酸的盐，例如盐酸盐、磷酸盐、焦磷酸盐、 氢溴酸盐、硫酸盐、亚磺酸盐、硝酸盐等类似盐；及与无机酸的盐，例如苹 果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、枸橼酸盐、乙酸盐、 乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、2-羟基乙基磺酸盐、苯甲酸盐、水杨酸 盐、硬脂酸盐和烷酸盐例如乙酸盐、HOOC-(CH2)n-COOH(其中n为0-4)等 类似盐。类似地，药用阳离子包括但不限于钠、钾、钙、铝、锂和铵。
另外，若本申请所述化合物以酸加成盐形式得到，则可通过碱化所述酸 式盐的溶液得到游离碱。反之，若所述产物为游离碱，则可按照由碱性化合 物制备酸加成盐的常规操作，通过将所述游离碱溶解在适当的有机溶剂中并 用酸的溶液处理来自制备加成盐特别是药用加成盐。本领域技术人员会意识 到可用于制备无毒药用加成盐的各种合成方法。
如上所述，前药也落入本申请描述的化学实体的范围内。在一些实施方 案中，本申请所述″前药″包括当给药至患者时变成(例如经所述前药的代谢加 工)式I化合物的任意化合物。前药的实例包括式I化合物中的官能团例如羧 酸基团的衍生物。
羧酸基团的示例性前药包括但不限于羧酸酯例如烷基酯、羟基烷基酯、 芳基烷基酯和芳基氧基烷基酯。其它示例性前药包括低级烷基酯例如乙基 酯、酰基氧基烷基酯例如特戊酰基氧基甲基(POM)、糖苷和抗坏血酸衍生物。
其它示例性前药包括羧酸的酰胺。示例性酰胺前药包括由例如胺和羧酸 形成的代谢不稳定酰胺。胺的实例包括NH2、伯胺和仲胺例如NHRx和 NRxRy，其中Rx为氢、(C1-C18)-烷基、(C3-C7)-环烷基、(C3-C7)-环烷基-(C1-C4)- 烷基-、(C6-C14)-芳基(其为未取代的或被残基(C1-C2)-烷基、(C1-C2)-烷氧基、 氟或氯取代)；杂芳基-、(C6-C14)-芳基-(C1-C4)-烷基-，其中所述芳基为未取 代的或被残基(C1-C2)-烷基、(C1-C2)-烷氧基、氟或氯取代；或杂芳基-(C1-C4)- 烷基-且其中Ry具有针对Rx所示的含义，但不包括氢，或Rx和Ry与它们连 接的氮一起形成任选取代的4至7元杂环烷基环，其任选包括一个或两个额 外的选自氮、氧和硫的杂原子。关于前药的讨论在以下文献中提供：T. Higuchi和V.Stella,Pro-drugs as Novel Delivery Systems,Vol.14 of the A.C.S. Symposium Series，Edward B.Roche,ed.,Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association和Pergamon Press,1987和Design of Prodrugs,ed.H.Bundgaard,Elsevier,1985。
″溶剂化物″是通过溶剂与化合物相互作用形成的。术语″化合物″意在包 括化合物的溶剂化物。类似地，″盐″包括盐的溶剂化物。适当的溶剂化物为 药用溶剂化物如水合物(包括一水合物和半水合物)。
″螯合物″是通过化合物与金属离子在两个(或更多)点处配位形成的。术 语″化合物″意在包括化合物的螯合物。类似地，″盐″包括盐的螯合物。
″非共价络合物″是通过化合物与另一分子相互作用形成的，其中在所示 化合物与所述分子之间没有形成共价键。例如，可通过范德华相互作用、氢 键和静电作用(也称作离子键合)发生络合。这样的非共价络合物也包括在术 语″化合物″内。
术语″氢键″是指一个电负性原子(也称作氢键受体)和与另一个相对电负 性原子(也称作氢键供体)连接的氢原子之间的缔合形式。适当的氢键供体和 受体是药物化学领域熟知的(G.C.Pimentel和A.L.McClellan,The Hydrogen Bond,Freeman,San Francisco,1960；R.Taylor和O.Kennard,″Hydrogen Bond Geometry in Organic Crystals″,Accounts of Chemical Research,17,pp. 320-326(1984))。
″氢键受体″是指包含氧或氮的基团，例如sp2-杂化的氧或氮、醚型氧或 亚砜型或N-氧化物型氧。
术语″氢键供体″是指具有氢的氧、氮或杂芳族碳、含有环氮的杂环基或 含有环氮的杂芳基。
本申请使用的术语″基团″、″基″或″片段″是同义的并预期是指分子的官 能团或片段，所述官能团或片段其与分子的键或其它片段是可连接的。
术语″活性剂″用于指具有生物活性的化学实体。在一些实施方案中，″ 活性剂″为具有药物用途的化合物。例如，活性剂可为抗-神经变性治疗剂。
本申请描述的术语化学实体的″治疗有效量″是指当给药至人或非-人受 试者时有效提供治疗益处例如改善症状、减慢疾病进展或预防疾病的量，例 如治疗有效量可为足以减少以下疾病的症状的量，所述疾病对抑制KMO活 性和调节犬尿氨酸途径代谢产物(例如犬尿氨酸、犬尿烯酸、邻氨基苯甲酸、 3-OH-犬尿氨酸、3-OH-2-氨基苯甲酸或喹啉酸)有响应。在一些实施方案中， 治疗有效量为足以治疗神经变性途径或疾病的症状的量。在一些实施方案 中，治疗有效量为足以减少神经变性疾病症状或副作用的量。在一些实施方 案中，化学实体的治疗有效量为足以预防神经元细胞死亡水平显著增加或显 著减少的量。在一些实施方案中，化学实体的治疗有效量为足以预防与神经 元细胞死亡有关的QUIN水平显著增加或显著减少的量。在一些实施方案 中，化学实体的治疗有效量为足以引起与神经元细胞死亡有关的KYNA水 平增加的量。在一些实施方案中，化学实体的治疗有效量为足以增加与降低 水平的QUIN或增加水平的KYNA有关的抗惊厥和神经保护性质的量。在 一些实施方案中，治疗有效量为足以调节体内炎性过程的量，所述炎性过程 包括但不限于脑、脊髓和外周神经系统或脑膜中的炎症。在一些实施方案中， 治疗有效量为足以调节负责发动有效免疫应答的细胞因子(例如IL-1β或 TNF-α)产生的量或在血-脑屏障受到损害的病症(例如多发性硬化症)中足以 引起外周或脑中单核细胞/巨噬细胞促炎症活性的量。
在本申请描述的用于治疗神经变性障碍的方法中，治疗有效量也可为当 给药至患者时足以可检测性地减慢神经变性疾病进展的量或预防被给药所 述化学实体的患者表现出所述神经变性疾病症状的量。在本申请描述的治疗 神经变性疾病的一些方法中，治疗有效量也可为足以产生神经元细胞死亡水 平可检测性减少的量。例如，在一些实施方案中，治疗有效量为本申请描述 的化学实体通过以下方式足以显著降低神经元死亡水平的量，所述方式为引 起QUIN量可检测减少和引起犬尿氨酸、KYNA或邻氨基苯甲酸量可检测增 加。
另外，若一种量的特征为上述标准或实验条件中的至少一个，则认为所 述量为治疗有效量，而不考虑在一套不同标准或实验条件下的结果是否不一 致或相互矛盾。
术语″抑制″表示生物活性或过程的基线活性显著降低。″抑制KMO活性 ″是指KMO活性的降低(相对于不存在至少一种化学实体时KMO的活性)， 其是对存在本申请描述的至少一种化学实体的直接或间接响应。活性的降低 可能是由于所述化合物与KMO的直接相互作用，或是由于本申请所述化学 实体(一种或多种)与一种或多种随之影响KMO活性的其它因子的相互作 用。例如，存在的所述化学实体(一种或多种)可通过以下途径降低KMO活 性：直接与KMO结合、导致(直接或间接)另一种因子降低KMO或(直接或 间接)减少细胞或有机体中存在的KMO的量。
″抑制KMO活性″是指KMO活性的降低(相对于不存在至少一种化学实 体时KMO的活性)，其是对存在本申请描述的至少一种化学实体的直接或间 接响应。活性的降低可能是由于所述化合物与KMO的直接相互作用，或是 由于所述化合物与一种或多种随之影响KMO活性的其它因子的相互作用。
抑制KMO活性也指在标准测定例如下述测定中，可观测性的抑制3-HK 和QUIN产生。抑制KMO活性也指KYNA产生的可观测性增加。在一些实 施方案中，本申请描述的化学实体具有小于或等于1微摩尔的IC50值。在一 些实施方案中，所述化学实体具有等于或小于100微摩尔的IC50值。在一些 实施方案中，所述化学实体具有小于或等于10纳摩尔的IC50值。
″KMO活性″也包括激活、重新分配、重组或加帽一种或多种不同KMO 膜相关蛋白(例如在线粒体中发现的那些受体)，或结合位点可能经历会引发 信号转导的重新分配和加帽。KMO活性也可调节犬尿氨酸的利用率，这可 引起QUIN、KYNA、邻氨基苯甲酸和/或3-HK的合成或产生。
″对抑制KMO活性有响应的疾病″是抑制KMO提供治疗益处的疾病， 所述治疗益处为例如改善症状、减慢疾病进展、预防或延迟疾病发作、预防 或改善炎性应答或抑制一些细胞-类型(例如神经元细胞)的异常活性和/或死 亡。
″治疗″是指对患者中的疾病进行的任何治疗，包括：
a)预防疾病，即使所述疾病的临床症状不发展；
b)抑制所述疾病进展；
c)减慢或阻止临床症状发展，和/或
d)缓解疾病，即使临床症状消退。
″受试者″或″患者’是指动物，例如哺乳动物，其已经是或将会是治疗、 观察或实验的目标。本申请描述的方法可用在人类疗法和兽医应用中。在一 些实施方案中，所述受试者为哺乳动物；在一些实施方案中，所述受试者为 人。
本发明提供至少一种化学实体，其选自式I化合物及其药用盐和前药：
其中：
R1选自任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；
R2选自氰基、任选取代的杂芳基和任选取代的杂环烷基；
R3选自氢和任选取代的低级烷基；和
R4选自氢、卤素和任选取代的低级烷基。
在一些实施方案中，R1选自芳基和杂芳基，所述基团各自任选取代有 一个、两个或三个独立选自以下的基团：-Ra、-ORb、-SRb、-NRbRc、卤素、 氰基、硝基、-CORb、-CO2Rb、-CONRbRc、-OCORb、-OCO2Ra、-OCONRbRc、 -NRcCORb、-NRcCO2Ra、-NRcCONRbRc、-CO2Rb、-CONRbRc、-NRcCORb、 -SORa、-SO2Ra、-SO2NRbRc和-NRcSO2Ra，
其中Ra选自任选取代的C1-C6烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳 基、任选取代的杂环烷基和任选取代的杂芳基；
Rb选自H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳 基、任选取代的杂环烷基和任选取代的杂芳基；和
Rc选自氢和任选取代的C1-C4烷基；或
Rb和Rc与它们所连接的氮形成任选取代的杂环烷基；和
其中每个任选取代的基团为未取代的或独立取代有一个或多个例如一 个、两个或三个独立选自以下的取代基：C1-C4烷基、环烷基、芳基、杂芳 基、杂环烷基、芳基-C1-C4烷基-、杂芳基-C1-C4烷基-、C1-C4卤代烷基-、-OC1-C4烷基、-OC1-C4烷基苯基、-C1-C4烷基-OH、-OC1-C4卤代烷基、卤素、-OH、 -NH2、-C1-C4烷基-NH2、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、-NH(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基苯基)、-NH(C1-C4烷基苯基)、氰基、硝基、氧代(作为杂芳 基上的取代基)、-CO2H、-C(O)OC1-C4烷基、-CON(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、 -CONH(C1-C4烷基)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-NHC(O)(苯基)、-N(C1-C4烷基)C(O)(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)C(O)(苯基)、-C(O)C1-C4烷基、 -C(O)C1-C4苯基、-C(O)C1-C4卤代烷基、-OC(O)C1-C4烷基、-SO2(C1-C4烷基)、 -SO2(苯基)、-SO2(C1-C4卤代烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4烷基)、-SO2NH(苯 基)、-NHSO2(C1-C4烷基)、-NHSO2(苯基)和-NHSO2(C1-C4卤代烷基)。
在一些实施方案中，R1选自任选取代的芳基和任选取代的杂芳基，所 述基团各自任选取代有一个、两个或三个独立选自以下的基团：卤素、任选 取代的低级烷基、低级烷氧基、任选取代的氨基、任选取代的杂环烷基、任 选取代的杂芳基和羟基。
在一些实施方案中，R1为苯基，其任选取代有一个、两个或三个选自 以下的基团：卤素、低级烷基、低级烷氧基、任选取代的氨基、任选取代的 杂环烷基、任选取代的杂芳基和羟基。在一些实施方案中，R1为苯基，其任 选取代有一个、两个或三个选自以下的基团：卤素、任选取代的低级烷基、 任选取代的低级烷氧基和羟基。在一些实施方案中，R1为苯基，其任选取代 有一个、两个或三个选自以下的基团：卤素、低级烷基、三氟甲基、三氟甲 氧基、低级烷氧基和羟基。在一些实施方案中，R1为苯基，其任选取代有一 个、两个或三个选自以下的基团：卤素、低级烷基、三氟甲基、低级烷氧基 和羟基。在一些实施方案中，R1为苯基，其任选取代有一个、两个或三个选 自以下的基团：卤素、低级烷基、三氟甲氧基和三氟甲基。在一些实施方案 中，R1为苯基，其任选取代有一个、两个或三个选自以下的基团：卤素、低 级烷基和三氟甲基。在一些实施方案中，R1选自苯基、2,4-二氟苯基、3-氯 -2-氟苯基、3-氯-4-三氟甲基苯基、2-氟-5-三氟甲基苯基、3-氟-5-三氟甲基苯 基、3-三氟甲基苯基、4-氟-3-三氟甲基苯基、2-三氟甲基苯基、3,4-二氯苯 基、3-氯苯基、4-氯苯基和3,5-二氯苯基。在一些实施方案中，R1选自3-氯 -4-三氟甲氧基苯基、3-氯-4-甲基苯基、3-氟-4-甲基苯基、3-氯-4-氟苯基、3- 氯-4-异丙氧基苯基、3,4-二氟苯基、2-三氟甲基苯基、3,4-二氯苯基、3-氯苯 基、4-氯苯基和3,5-二氯苯基。在一些实施方案中，R1选自2-三氟甲基苯基、 3,4-二氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基和3,5-二氯苯基。
在一些实施方案中，R1为吡啶-3-基，其任选取代有一个、两个或三个 选自以下的基团：卤素、低级烷基、低级烷氧基、任选取代的氨基、任选取 代的杂环烷基、任选取代的杂芳基和羟基。在一些实施方案中，R1为吡啶-3- 基，其任选取代有一个、两个或三个选自以下的基团：卤素、任选取代的低 级烷基、任选取代的低级烷氧基和羟基。在一些实施方案中，R1为吡啶-3- 基，其任选取代有一个、两个或三个选自以下的基团：卤素、低级烷基、三 氟甲基、低级烷氧基和羟基。在一些实施方案中，R1为吡啶-3-基，其任选 取代有一个、两个或三个选自以下的基团：卤素、低级烷基和三氟甲基。在 一些实施方案中，R1选自吡啶-3-基、5-氟吡啶-3-基和5-氯吡啶-3-基。
在一些实施方案中，R2选自噻唑-2-基、1H-吡唑-3-基、[1,2,4]噁二唑-5- 基、[1,2,4]噁二唑-3-基、4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮-3-基、4H-[1,2,4]噁二唑-5-硫 酮-3-基、[1,2,4]三唑-1-基、1H-苯并咪唑-2-基、1H-四唑-5-基、2H-四唑-5- 基、四唑-1-基、2,4-二氢-[1,2,4]三唑-3-酮-5-基、4H-[1,2,4]三唑-3-基、1H- 咪唑-2-基、1H-咪唑-4-基、噁唑-2-基、吡啶-2-基、苯并噁唑-2-基、咪唑-1- 基、哌嗪-2-酮-4-基、吡唑-1-基、1,6-二氢嘧啶-5-基、2,3-二氢-1H-吡唑-4- 基、2,3-二氢-1H-咪唑-1-基、4,5-二氢-1H-咪唑-2-基、2,5-二氢-1H-吡唑-1- 基和1H-咪唑-1-基，所述基团各自为任选取代的。在一些实施方案中，R2选自[1,2,4]噁二唑-5-基、[1,2,4]噁二唑-3-基、4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮-3-基、 4H-[1,2,4]噁二唑-5-硫酮-3-基、[1,2,4]三唑-1-基、1H-苯并咪唑-2-基、1H-四 唑-5-基、2H-四唑-5-基、四唑-1-基、2,4-二氢-[1,2,4]三唑-3-酮-5-基、4H-[1,2,4] 三唑-3-基、1H-咪唑-2-基、1H-咪唑-4-基、噁唑-2-基、吡啶-2-基、苯并噁唑 -2-基、咪唑-1-基、哌嗪-2-酮-4-基、吡唑-1-基、1,6-二氢嘧啶-5-基、2,3-二氢 -1H-吡唑-4-基、2,3-二氢-1H-咪唑-1-基、4,5-二氢-1H-咪唑-2-基、2,5-二氢-1H- 吡唑-1-基和1H-咪唑-1-基，所述基团各自为任选取代的。
在一些实施方案中，R2选自噻唑-2-基、1H-吡唑-3-基、[1,2,4]噁二唑-5- 基、[1,2,4]噁二唑-3-基、4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮-3-基、4H-[1,2,4]噁二唑-5-硫 酮-3-基、[1,2,4]三唑-1-基、1H-苯并咪唑-2-基、1H-四唑-5-基、2H-四唑-5- 基、四唑-1-基、2,4-二氢-[1,2,4]三唑-3-酮-5-基、4H-[1,2,4]三唑-3-基、1H- 咪唑-2-基、1H-咪唑-4-基、噁唑-2-基、吡啶-2-基、苯并噁唑-2-基、咪唑-1- 基、哌嗪-2-酮-4-基、吡唑-1-基、1,6-二氢嘧啶-5-基、2,3-二氢-1H-吡唑-4- 基、2,3-二氢-1H-咪唑-1-基、4,5-二氢-1H-咪唑-2-基、2,5-二氢-1H-吡唑-1- 基和1H-咪唑-1-基，所述基团各自任选取代有一个或两个选自以下的基团： 氨基羰基、任选取代的氨基、氧代、低级烷基、三氟甲基、卤素和杂环烷基。 在一些实施方案中，R2选自[1,2,4]噁二唑-5-基、[1,2,4]噁二唑-3-基、4H-[1,2,4] 噁二唑-5-酮-3-基、4H-[1,2,4]噁二唑-5-硫酮-3-基、[1,2,4]三唑-1-基、1H-苯 并咪唑-2-基、1H-四唑-5-基、2H-四唑-5-基、四唑-1-基、2,4-二氢-[1,2,4]三 唑-3-酮-5-基、4H-[1,2,4]三唑-3-基、1H-咪唑-2-基、1H-咪唑-4-基、噁唑-2- 基、吡啶-2-基、苯并噁唑-2-基、咪唑-1-基、哌嗪-2-酮-4-基、吡唑-1-基、1,6- 二氢嘧啶-5-基、2,3-二氢-1H-吡唑-4-基、2,3-二氢-1H-咪唑-1-基、4,5-二氢-1H- 咪唑-2-基、2,5-二氢-1H-吡唑-1-基和1H-咪唑-1-基，所述基团各自任选取代 有一个或两个选自以下的基团：氨基羰基、任选取代的氨基、氧代、低级烷 基、三氟甲基、卤素和杂环烷基。
在一些实施方案中，R2选自噻唑-2-基、1H-吡唑-3-基、3-甲基-[1,2,4] 噁二唑-5-基、[1,2,4]噁二唑-3-基、[1,2,4]噁二唑-5-基、[1,2,4]三唑-1-基、1H- 苯并咪唑-2-基、1H-四唑-5-基、1-甲基-1H-四唑-5-基、2,4-二氢-[1,2,4]三唑-3- 酮-5-基、2-甲基-2H-四唑-5-基、3-三氟甲基-吡唑-1-基、4H-[1,2,4]噁二唑-5- 酮-3-基、4H-[1,2,4]噁二唑-5-硫酮-3-基、4H-[1,2,4]三唑-3-基、4-甲基-1H-咪 唑-2-基、4-甲基-噁唑-2-基、5-氟-吡啶-2-基、5-甲基-[1,2,4]噁二唑-3-基、四 唑-1-基、苯并噁唑-2-基、咪唑-1-基、哌嗪-2-酮-4-基、吡唑-1-基、2-氧代-2,3- 二氢-1H-咪唑-4-基、6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基、1-甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H- 吡唑-4-基、2-甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基、1,2-二甲基-3-氧代-2,3-二 氢-1H-吡唑-4-基、2-氨基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基、2-氧代-2,3-二氢-1H-咪 唑-1-基、3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑-1-基、5-(甲基氨甲酰基)吡啶-2-基、 5-(三氟甲基)-1,2,4-噁二唑-3-基、5-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基、4,5-二氢-1H- 咪唑-2-基、3-甲基-5-氧代-2,5-二氢-1H-吡唑-1-基、1H-咪唑-2-基和4-(三氟 甲基)-1H-咪唑-1-基。在一些实施方案中，R2选自3-甲基-[1,2,4]噁二唑-5-基、 [1,2,4]噁二唑-3-基、[1,2,4]噁二唑-5-基、[1,2,4]三唑-1-基、1H-苯并咪唑-2- 基、1H-四唑-5-基、1-甲基-1H-四唑-5-基、2,4-二氢-[1,2,4]三唑-3-酮-5-基、 2-甲基-2H-四唑-5-基、3-三氟甲基-吡唑-1-基、4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮-3-基、 4H-[1,2,4]噁二唑-5-硫酮-3-基、4H-[1,2,4]三唑-3-基、4-甲基-1H-咪唑-2-基、 4-甲基-噁唑-2-基、5-氟-吡啶-2-基、5-甲基-[1,2,4]噁二唑-3-基、四唑-1-基、 苯并噁唑-2-基、咪唑-1-基、哌嗪-2-酮-4-基、吡唑-1-基、2-氧代-2,3-二氢-1H- 咪唑-4-基、6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基、1-甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4- 基、2-甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基、1,2-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H- 吡唑-4-基、2-氨基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基、2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑-1- 基、3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑-1-基、5-(甲基氨甲酰基)吡啶-2-基、5-(三 氟甲基)-1,2,4-噁二唑-3-基、5-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基、4,5-二氢-1H-咪唑-2- 基、3-甲基-5-氧代-2,5-二氢-1H-吡唑-1-基、1H-咪唑-2-基和4-(三氟甲基)-1H- 咪唑-1-基。
在一些实施方案中，R2为氰基。
在一些实施方案中，R3为氢。在一些实施方案中，R3为低级烷基。在 一些实施方案中，R3为甲基或乙基。在一些实施方案中，R3为甲基。
在一些实施方案中，R4为氢。在一些实施方案中，R4为氟。在一些实 施方案中，R4为甲基。
本发明还提供至少一种选自以下的化学实体及其药用盐和前药：
4-(3-氯-苯基)-6-(1H-四唑-5-基)-嘧啶；
4-(3-氯-苯基)-6-(1-甲基-1H-四唑-5-基)-嘧啶；
4-(3-氯-苯基)-6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(1H-四唑-5-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(1-甲基-1H-四唑-5-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氟-苯基)-6-(1H-四唑-5-基)-嘧啶；
4-(3-氯-4-氟-苯基)-6-(1H-四唑-5-基)-嘧啶；
2-[6-(3-氯-苯基)-嘧啶-4-基]-1H-苯并咪唑；
2-[6-(3-氯-苯基)-嘧啶-4-基]-5,6-二氟-1H-苯并咪唑；
2-[6-(3-氯-苯基)-嘧啶-4-基]-5-氟-1H-苯并咪唑；
2-[6-(3-氯-苯基)-嘧啶-4-基]-1-甲基-1H-苯并咪唑；
6-氯-2-[6-(3-氯-苯基)-嘧啶-4-基]-1H-苯并咪唑；
2-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-1H-苯并咪唑；
2-[6-(3-氯-苯基)-嘧啶-4-基]-苯并噁唑；
4-(3-氯-苯基)-6-(4-甲基-噁唑-2-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(4-甲基-噁唑-2-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-2-甲基-6-(4-甲基-噁唑-2-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(4-甲基-1H-咪唑-2-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-([1,2,4]噁二唑-3-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(5-甲基-[1,2,4]噁二唑-3-基)-嘧啶；
3-[6-(3-氯-苯基)-嘧啶-4-基]-4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮；
3-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮；
3-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮；
3-[6-(5-氯-吡啶-3-基)-嘧啶-4-基]-4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮；
3-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-4H-[1,2,4]噁二唑-5-硫酮；
4-(3-氯-苯基)-6-(3-甲基-[1,2,4]噁二唑-5-基)-嘧啶；
4-(3-氯-苯基)-6-(4H-[1,2,4]三唑-3-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(4H-[1,2,4]三唑-3-基)-嘧啶；
5-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-2,4-二氢-[1,2,4]三唑-3-酮；
4-{3-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-[1,2,4]噁二唑-5-基}-吗啉；
{3-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-[1,2,4]噁二唑-5-基}-二甲基-胺；
(2-{3-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-[1,2,4]噁二唑-5-基}-乙基)-二甲基- 胺；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(5-氟-吡啶-2-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(4-三氟甲基-咪唑-1-基)-嘧啶；
1-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-1,3-二氢-咪唑-2-酮；
1-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-3-甲基-1,3-二氢-咪唑-2-酮；
6-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-N-甲基-吡啶-3-甲酰胺；
2-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-5-甲基-1,2-二氢-吡唑-3-酮；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(1H-咪唑-2-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(5-甲基-4H-[1,2,4]三唑-3-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(5-三氟甲基-[1,2,4]噁二唑-3-基)-嘧啶；
6-(3,4-二氯-苯基)-3’H-[4,5’]联嘧啶-4’-酮；
4-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-2-甲基-1,2-二氢-吡唑-3-酮；
2’-氨基-6-(3,4-二氯-苯基)-3’H-[4,5’]联嘧啶-4’-酮；
4-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-1,2-二甲基-1,2-二氢-吡唑-3-酮；
4-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-1,3-二氢-咪唑-2-酮；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-([1,2,4]三唑-1-基)-嘧啶；
4-(3-氯-苯基)-6-([1,2,4]三唑-1-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(咪唑-1-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(吡唑-1-基)-嘧啶；
4-(3-氯-苯基)-6-(咪唑-1-基)-嘧啶；
4-(3-氯-苯基)-6-(吡唑-1-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(3-三氟甲基-吡唑-1-基)-嘧啶；
4-(3-氯-苯基)-6-(四唑-1-基)-嘧啶；
4-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-2-酮；和
4-[6-(3,5-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-2-酮。
本发明还提供至少一种选自以下的化学实体及其药用盐和前药：
3-[6-(3,4-二氟-苯基)-嘧啶-4-基]-4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮；
3-[6-(3-氯-4-三氟甲氧基-苯基)-嘧啶-4-基]-4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮；
3-[6-(3-氯-4-甲基-苯基)-嘧啶-4-基]-4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮；
3-[6-(3-氟-4-甲基-苯基)-嘧啶-4-基]-4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮；
4-(3-氟-4-甲基-苯基)-6-(1H-四唑-5-基)-嘧啶；
3-[6-(3-氯-4-氟-苯基)-嘧啶-4-基]-4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮；
4-(3-氯-4-异丙氧基-苯基)-6-(1H-四唑-5-基)-嘧啶；
3-[6-(3-氯-4-异丙氧基-苯基)-嘧啶-4-基]-4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮；
4-(3-氯-4-三氟甲氧基-苯基)-6-(1H-四唑-5-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(噁唑-2-基)-嘧啶；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(噻唑-2-基)-嘧啶；和
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(1H-吡唑-3-基)-嘧啶。
本发明还提供至少一种选自以下的化学实体：
4-(3,4-二氟苯基)-6-(1H-四唑-5-基)-嘧啶的钠盐；
4-(3-氯-4-氟-苯基)-6-(1H-四唑-5-基)-嘧啶的钠盐；
4-(3,4-二氯-苯基)-6-(1H-四唑-5-基)-嘧啶的钠盐；和
6’-(3-氯-苯基)-[1,4’]联嘧啶-2,4-二酮的钾盐。
本发明还提供在需要所述治疗的受试者中治疗由犬尿氨酸-3-单加氧酶 活性介导的病症或障碍的方法，所述方法包括向所述受试者给药治疗有效量 的至少一种本申请描述的化学实体。
得到本申请所述化学实体的方法对于本领域技术人员将是显而易见的， 其中适当的操作参见例如以下实施例和本申请引用的参考文献。
本发明提供抑制KMO催化活性的方法，所述方法包括使所述KMO与 有效量的至少一种本申请描述的化学实体接触。
本发明还提供在需要所述治疗的受试者中治疗由KMO活性介导的病 症或障碍的方法，所述方法包括向所述受试者给药治疗有效量的至少一种本 申请描述的化学实体。
本发明还提供在需要所述治疗的受试者中治疗由KMO活性介导的神 经变性病理的方法，所述方法包括向所述受试者给药治疗有效量的至少一种 本申请描述的化学实体。
本发明还提供对由(或至少部分由)所存在的3-OH-KYN、QUIN和/或 KYNA介导的障碍进行治疗的方法。本发明还提供治疗变性或炎性病症的方 法，在所述变性或炎性病症中涉及脑中QUIN、3-OH-KYN合成增加或GLU 释放增加且所述变性或炎性病症可导致神经元损伤。
所述疾病包括例如亨廷顿病和其它多谷氨酰胺障碍例如脊髓小脑性共 济失调(spinocerebellar ataxias)、阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)、帕金森 病(Parkinson’s disease)、高压神经综合征(high-pressure neurological syndrome)、张力障碍(dystonia)、橄榄体脑桥小脑萎缩(olivopontocerebellar atrophy)、肌萎缩性侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis)、多发性硬化症、 癫痫(epilepsy)、中风后遗症、脑缺血、缺血性障碍包括中风(局部缺血(focal ischemia))、缺氧(hypoxia)、多发梗塞性痴呆(multi-infarct dementia)、脑创伤 或损伤后遗症、脊髓损伤、痴呆例如老年痴呆和AIDS-痴呆综合症、病毒或 细菌性脑膜炎、由病毒、细菌和其它寄生虫引起的传染病例如一般性中枢神 经系统(CNS)感染例如病毒感染、细菌感染或寄生虫感染例如脊髓灰质炎 (poliomyelitis)、莱姆病(Lyme disease)(伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)感 染)、败血症性休克(septic shock)和疟疾、定位于大脑的癌症、图雷特综合征 (Tourette’s syndrome)、肝性脑病(hepatic encephalopathy)、全身性狼疮(systemic lupus)、痛觉缺失(analgesia)和鸦片戒断综合征(opiate withdrawal symptom)、 进食行为障碍(feeding behavior)、精神病(psychiatric disorder)例如失眠 (insomnia)、抑郁、精神分裂症(schizophrenia)和焦虑症、抑郁症(depressive disorder)、发育或脑老化障碍、糖尿病及其并发症。所述疾病还包括例如急 性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis)、AIDS(疾病)、痛觉缺失、无 菌性脑膜炎(aseptic meningitis)、脑疾病例如抽动秽语综合征(Gilles de la Tourette syndrome)、老化相关脑疾病和发育性脑疾病、耗损综合征(burnout syndrome)、一氧化碳中毒(carbon monoxide poisoning)、心脏停搏(cardiac arrest)或心功能不全(cardiac insufficiency)和失血性休克(hemorrhagic shock)(全脑缺血(global brain ischemia))、眼白内障形成和眼老化、中枢神经 系统疾病、脑血管疾病、长期疲劳综合征(chronic fatigue syndrome)、长期应 激(chronic stress)、认知障碍(cognitive disorder)、惊厥性障碍(convulsive disorder)例如癫痫大发作(grand mal)和癫痫小发作(petit mal)及部分性癫痫综 合症的变体、糖尿病(diabetes mellitus)、神经系统疾病(例如运动障碍 (dyskinesia)、由L-多巴诱导的运动失调、药物成瘾、疼痛和白内障)、药物 依赖、药物戒断、进食障碍、吉-巴综合征(Guillain Barr Syndrome)和其它神 经病、肝性脑病、免疫疾病、免疫障碍和以调节生物应答为目标的治疗性处 置(例如给药干扰素或白细胞介素)、炎症(全身性炎症应答综合征)、脑和/或 外周神经系统炎性障碍、损伤(创伤、多发性创伤)、精神障碍和行为失常、 代谢病、多器官衰竭、近乎溺死(near drowning)、坏死、脑赘生物、肿瘤性 障碍包括淋巴瘤和其它恶性血液病、神经系统疾病(高压神经综合征、感染)、 尼古丁成瘾和其它成瘾性障碍包括酗酒、大麻、苯并二氮杂巴比妥、吗 啡和可卡因依赖(作为神经保护剂)、疼痛、创伤后应激障碍、败血症、脊髓 疾病、脊髓小脑性共济失调、全身性红斑狼疮、创伤性脑和脊髓损伤及震颤 综合征和各种运动失调(diskynesia)。
本发明还提供治疗方法，其中将本申请描述的至少一种化学实体作为唯 一的活性剂给药受试者，本发明还提供治疗方法，其中将本申请描述的至少 一种化学实体与一种或多种其它活性剂联合给药受试者。
大体上，通过就具有类似用途的药物所使用的任意公认给药模式来给药 治疗有效量的本申请描述的化学实体。所述化合物即活性成分的实际量依赖 于多种因素例如待治疗疾病的严重程度、受试者的年龄和相对健康、所用化 合物的效力、给药途径和形式和本领域技术人员公知的其它因素。可将所述 药物每天给药至少一次，例如每天一次或两次。
在一些实施方案中，将本申请描述的化学实体以药物组合物形式给药。 因此，本发明提供药物组合物，其包含至少一种本申请描述的化学实体和至 少一种选自载体、助剂和赋形剂的药用媒介物。
药用媒介物必须为足够高纯度和足够低毒性的，从而使它们适于给药至 待治疗的动物。所述媒介物可为惰性的且其具有药学益处。为了给药每单位 剂量化学实体，与所述化学实体结合使用的媒介物的量足以提供实用量的物 质。
示例性药用载体或其组分为糖例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉 米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素 和甲基纤维素；西黄蓍胶粉；麦芽；明胶；滑石；固体润滑剂例如硬脂酸和 硬脂酸镁；硫酸钙；合成油；植物油例如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油 和玉米油；多元醇例如丙二醇、甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；海藻酸； 磷酸盐缓冲溶液；乳化剂，例如TWEENS；润湿剂如月桂基硫酸钠；着色 剂；矫味剂；压片剂；稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐水； 和磷酸盐缓冲溶液。
任选的活性剂也可包括在药物组合物中，所述任选的活性剂基本上不干 扰本申请描述的化学实体的活性。
有效浓度的本申请描述的至少一种化学实体与适当的药用媒介物混合。 在所述化学实体未表现出足够溶解性的情况下，可使用使化合物增溶的方 法。这样的方法是本领域技术人员已知的且包括但不限于使用共溶剂例如二 甲基亚砜(DMSO)、使用表面活性剂例如TWEEN或溶解在碳酸氢钠水溶液 中。
一旦与本申请描述的化学实体混合或一旦加入本申请描述的化学实体， 所得混合物可为溶液、混悬液、乳液等。所得混合物的形式依赖于多种因素， 包括预期的给药模式和所述化学实体在所选媒介物中的溶解度。可凭经验确 定足以改善待治疗的疾病的症状的所述有效浓度。
可通过以下方式以单位剂量制剂形式给药本申请描述的化学实体：口服 给药、局部给药、胃肠外给药、静脉内给药、肌内内注射、吸入或喷雾给药、 舌下给药、透皮给药、经含服给药、直肠给药、眼用溶液形式或其它方式。
可将药物组合物配制为用于口服使用，例如配制成片剂、糖锭剂 (troche)、锭剂(lozenge)、水性或油性混悬剂、可分散散剂或颗粒剂、乳剂、 硬或软胶囊或糖浆剂或酏剂。预期用于口服用途的药物组合物可根据本领域 已知的用于制备药物组合物的任意方法来制备且所述药物组合物可含有一 种或多种试剂例如增甜剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，目的是提供药学上美 观和适口的制剂。在一些实施方案中，口服药用组合物含有0.1至99%的本 申请描述的至少一种化学实体。在一些实施方案中，口服药用组合物含有至 少5%(重量%)的本申请描述的至少一种化学实体。一些实施方案含有25% 至50%，或5%至75%的本申请描述的至少一种化学实体。
口服给药的药物组合物也包括液体溶液剂、乳剂、混悬剂、散剂、颗粒 剂、酏剂、酊剂、糖浆剂等。适于制备所述组合物的药用载体是本领域公知 的。口服药用组合物可含有防腐剂、矫味剂、增甜剂例如蔗糖或糖精、掩味 剂和着色剂。
用于糖浆剂、酏剂、乳剂和混悬剂的常见载体组分包括乙醇、甘油、丙 二醇、聚乙二醇、液体蔗糖、山梨醇和水。糖浆剂和酏剂用增甜剂例如甘油、 丙二醇、山梨醇或蔗糖配制。这样的药物组合物也可含有缓和剂。
可将本申请描述的化学实体结合到口服液体制剂例如水性或油性混悬 剂、溶液剂、乳剂、糖浆剂或酏剂中。另外，含有这些化学实体的药物组合 物可按用于在使用前用水或其它适当媒介物构建的干燥产品形式提供。这样 的液体制剂可含有常规添加剂，例如助悬剂(例如山梨醇糖浆、甲基纤维素、 葡萄糖/糖、糖浆、明胶、羟基乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶 和氢化食用脂)、乳化剂(例如卵磷脂、脱水山梨醇单油酸酯或阿拉伯胶)、非 水性媒介物(其可包括食用油(例如杏仁油、分级椰子油、硅酯(silyl ester)、丙 二醇和乙醇)和防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯和和山梨 酸)。
对于混悬液，常见的助悬剂包括甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、AVICEL RC-591、西黄蓍胶和海藻酸钠；常见的润湿剂包括卵磷脂和聚山梨酯80； 和常见的防腐剂包括尼泊金甲酯和苯甲酸钠。
水性混悬剂含有活性物质(一种或多种)和适于制备水性混悬液的赋形 剂。这样的赋形剂为助悬剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲 基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或润 湿剂；所述赋形剂也可为天然存在的磷脂，例如卵磷脂或氧化烯与脂肪酸的 缩合产物例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物例如 十七乙烯氧基鲸蜡醇，或衍生自脂肪酸与己糖醇的部分酯与环氧乙烷的缩合 产物例如聚氧乙烯山梨醇替代物，或衍生自脂肪酸与己糖醇酐混合物的部分 酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚乙烯脱水山梨糖醇替代物。所述水性混悬 液也可含有一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙 酯。
可通过以下方式制备油性混悬液：将活性成分混悬在植物油例如花生 油、橄榄油、芝麻油或椰子油，或混悬在矿物油例如液体石蜡中。所述油性 混悬液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入增甜剂例如上述 的那些和矫味剂以提供适口的口服制剂。可通过加入抗氧化剂例如抗坏血酸 使这些药物组合物防腐。
药物组合物也可为水包油乳液形式。所述油相可为植物油例如橄榄油或 花生油，或为矿物油例如液体石蜡，或这些的混合物。适当的乳化剂可为天 然存在的胶质，例如阿拉伯胶或西黄蓍胶、天然存在的磷脂例如大豆、卵磷 脂和酯或衍生自脂肪酸和己糖醇、酸酐的部分酯(例如脱水山梨糖醇单油酸 酯)，和所述部分酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单 油酸酯。
可分散散剂和颗粒剂适于通过加入水来制备水性混悬剂，所述可分散散 剂和颗粒剂提供活性成分与分散剂或润湿剂、助悬剂和一种或多种防腐剂的 混合物。适当的分散剂或润湿剂和助悬剂的实例为上面已描述的那些。
片剂通常含有常规药用助剂例如惰性稀释剂如碳酸钙、碳酸钠、甘露醇、 乳糖和纤维素；粘合剂如淀粉、明胶和蔗糖；崩解剂如淀粉、海藻酸和交联 羧甲纤维素；润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石。助流剂如二氧化硅可用于 改善粉末混合物的流动特征。为了美观，可加入着色剂例如FD&C染料。增 甜剂和矫味剂如阿司帕坦、糖精、薄荷醇、薄荷和水果味香料可为用于可咀 嚼片剂的有用助剂。胶囊(包括定时释放和持续释放制剂)通常含有一种或多 种上面披露的固体稀释剂。载体组分的选择通常依赖于次级考虑因素如味 道、成本和贮存稳定性。
也可通过常规方法对所述药物组合物进行包衣，通常用pH或时间-依赖 性包衣，从而使所述化学实体在胃肠道中在期望局部应用的附近释放，或使 所述化学实体在不同时间释放以延长期望的作用。这样的剂型通常包含但不 限于一种或多种醋酸邻苯二甲酸纤维素、聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯、羟基丙 基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、乙基纤维素、丙烯酸树脂包衣(Eudragit coating)、蜡和虫胶。
口服用药物组合物也可按硬明胶胶囊形式存在(其中所述活性成分与惰 性固体稀释剂混合，所述固体稀释剂为例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)或软 明胶胶囊(其中所述活性成分与水或油性介质混合，所述油性介质为例如花 生油、液体石蜡或橄榄油)。
药物组合物也可为无菌可注射水性或油性混悬液形式。可根据已知技术 配置该混悬液，使用上面已描述的那些适当的分散剂或润湿剂和助悬剂。所 述无菌可注射制剂也可为于无毒胃肠外用媒介物中的无菌可注射溶液或混 悬液，例如其为于1,3-丁二醇中的溶液。可采用的众多可接受媒介物中包括 水、林格溶液(Ringer’s solution)和等渗氯化钠溶液。通常使用无菌不挥发性 油作为溶剂或混悬介质。出于该目的，可使用任何温和的不挥发性油包括合 成性甘油一酯或甘油二酯。另外，脂肪酸例如油酸可用于制备注射剂。
本申请描述的化学实体可在无菌介质中被胃肠外给药。胃肠外给药包括 皮下注射、静脉内注射、肌内注射、鞘内注射或灌注技术。可将本申请描述 的化学实体混悬或溶解在媒介物中(取决于所使用的媒介物和浓度)。有利地， 可将助剂例如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂溶解在媒介物中。在胃肠外给药 的多种药物组合物中，所述载体占组合物总重量的至少90%。在一些实施方 案中，用于胃肠外给药的载体选自丙二醇、油酸乙酯、吡咯烷酮、乙醇和芝 麻油。
本申请描述的化学实体也可按用于直肠给药药物的栓剂形式给药。这些 药物组合物可通过以下方式来制备：将所述药物与适当的非刺激性赋形剂混 合，所述非刺激性赋形剂在常温为固体，但在直肠温度为液体，因此会在直 肠中熔化以释放所述药物。这样的物质包括可可脂和聚乙二醇。
可将本申请描述的化学实体配制为用于局部应用，例如用于局部应用到 皮肤或粘膜，例如在眼中，采用凝胶、乳膏和洗剂形式并用于应用至眼部。 局部药物组合物可为任意形式，包括例如溶液剂、乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、 洗剂、乳剂、清洁剂、增湿剂、喷雾剂、皮肤贴剂等。
可用适当的盐将所述溶液剂配制成0.01%-10%等渗溶液(pH 5-7)。也可 将本申请描述的化学实体配制成以透皮贴剂形式透皮给药。
可将包含本申请描述的至少一种化学实体的局部药物组合物与本领域 公知的多种载体物质混合，所述载体物质为例如水、醇、芦荟凝胶、尿囊素、 甘油、维生素A和E油、矿物油、丙二醇、PPG-2丙酸肉豆蔻酯等。
适于用在局部载体中的其它物质包括例如润滑剂、溶剂、保湿剂、增稠 剂和散剂。这些类型物质可单独使用或作为一种或多种物质的混合物来使 用，所述物质中的每一种的实例为：
代表性润滑剂包括十八烷醇、单蓖麻油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、丙 烷-1,2-二醇、丁烷-1,3-二醇、貂油(mink oil)、鲸蜡醇、异硬脂酸异丙酯、硬 脂酸、棕榈酸异丁酯、硬脂酸异鲸蜡酯、油醇、月桂酸异丙酯、月桂酸己酯、 油酸癸酯、十八烷-2-醇、异鲸蜡醇、棕榈酸鲸蜡酯、二甲基聚硅氧烷、癸二 酸二正丁酯、肉豆蔻酸异丙基酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、硬脂酸丁 酯、聚乙二醇、三甘醇、羊毛脂、芝麻油、椰子油、花生油、蓖麻油、乙酰 化羊毛脂醇、石油、矿物油、肉豆蔻酸丁酯、异硬脂酸、棕榈酸、亚油酸异 丙酯、乳酸月桂酯、乳酸肉豆蔻酯、油酸癸酯和肉豆蔻酸肉豆蔻酯；推进剂， 例如丙烷、丁烷、异丁烷、甲醚、二氧化碳和一氧化二氮；溶剂，例如乙醇、 二氯甲烷、异丙醇、蓖麻油、乙二醇单乙醚、二甘醇单丁醚、二甘醇单乙醚、 二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、四氢呋喃；保湿剂，例如甘油、山梨醇、2-吡 咯烷酮-5-甲酸钠、可溶胶原、邻苯二甲酸二丁酯和明胶；和散剂，例如白垩、 滑石、富勒土(fullers earth)、高岭土、淀粉、胶质、胶体二氧化硅、聚丙烯 酸钠、蒙脱石四烷基铵(tetra alkyl ammonium smectite)、蒙脱石三烷基芳基铵、 化学改性的硅酸镁铝、有机改性的蒙脱石粘土(organically modified montmorillonite clay)、含水硅酸铝(hydrated aluminium silicate)、热解硅石 (fumed silica)、羧基乙烯基聚合物(carboxyvinyl polymer)、羧甲基纤维素钠和 乙二醇单硬脂酸酯。
本申请描述的化学实体也可按脂质体递送系统形式局部给药，所述脂质 体递送系统为例如小单层囊泡、大单层囊泡和多层囊泡。脂质体可由多种磷 脂形成，所述磷脂为例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱。
用于实现全身递送所述化学实体的其它药物组合物包括舌下剂型、含服 剂型和鼻腔剂型。这样的药物组合物通常包含一种或多种可溶填料物质例如 蔗糖、山梨醇和甘露醇和粘合剂例如阿拉伯胶、微晶纤维素、羧甲基纤维素 和羟基丙基甲基纤维素。也可包括上述助流剂、润滑剂、增甜剂、着色剂、 抗氧化剂和矫味剂。
用于吸入的药物组合物通常可按溶液剂、混悬剂或乳剂的形式提供，所 述形式可被按干粉形式或按气雾剂形式给药，使用常规的推进剂(例如 二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷)。
所述药物组合物也可任选含有活性增强剂。所述活性增强剂可选自种类 繁多的分子，所述分子以不同的方式发挥作用以提高本申请描述的化学实体 的治疗作用或独立于本申请描述的化学实体的治疗作用。具体类型的活性增 强剂包括透皮促进剂(skin penetration enhancer)和吸收促进剂(absorption enhancer)。
药物组合物也可含有其它活性剂，所述活性剂可选自种类繁多的分子， 所述分子以不同的方式发挥作用以提高本申请描述的化学实体的治疗作用 或独立于本申请描述的化学实体的治疗作用。当存在这些任选的其它活性剂 时，所述活性剂通常以0.01%至15%的水平范围用在药物组合物中。一些实 施方案含有所述组合物重量0.1%至10%的其它活性剂。其它实施方案含有 所述组合物重量0.5%至5%的其它活性剂。
本发明还提供包装药物组合物。这样的包装组合物包括药物组合物(包 含本申请描述的至少一种化学实体)和使用所述组合物治疗受试者(通常为人 类患者)的说明书。在一些实施方案中，所述说明书用于使用所述药物组合 物治疗患有由犬尿氨酸-3-单加氧酶活性介导的病症或障碍。所述包装药物组 合物可包括向例如患者或保健提供者提供处方信息(或其为于包装药物组合 物上的标签)。处方信息可包括例如与药物组合物有关的效力、剂量和给药、 禁忌症和副反应信息。
在所有前述内容中，可将所述化学实体单独给药或以混合物形式给药或 与其它活性剂联合给药。
本申请描述的方法包括治疗亨廷顿病的方法，所述方法包括治疗与亨廷 顿病有关的记忆和/或认知损伤，所述方法包括向受试者同时或顺序给药本 申请描述的至少一种化学实体和一种或多种用于治疗亨廷顿病中的其它药 物，所述其它药物包括但不限于阿米替林(Amitriptyline)、丙咪嗪 (Imipramine)、地昔帕明(Despiramine)、去甲替林(Nortriptyline)、帕罗西汀 (Paroxetine)、氟西汀(Fluoxetine)、舍曲林(Setraline)、丁苯那嗪(Terabenazine)、 氟哌啶醇(Haloperidol)、氯丙嗪(Chloropromazine)、硫利达嗪(Thioridazine)、 舒必利(Sulpride)、喹硫平(Quetiapine)、氯氮平(Clozapine)和利培酮 (Risperidone)。在采用同时给药的方法中，所述药物可存在于结合型组合物 中或可被分开给药。因此，本发明还提供药物组合物，其包含本申请描述的 至少一种化学实体和一种或多种用于治疗亨廷顿病的其它药物，所述其它药 物为例如但不限于阿米替林、丙咪嗪、地昔帕明、去甲替林、帕罗西汀、氟 西汀、舍曲林、丁苯那嗪、氟哌啶醇、氯丙嗪、硫利达嗪、舒必利、喹硫平、 氯氮平和利培酮。类似地，本发明还提供包装药物组合物，其含有本申请描 述的至少一种化学实体和另一种组合物，该组合物包含一种或多种用于治疗 亨廷顿病的其它药物，所述其它药物为例如但不限于阿米替林、丙咪嗪、地 昔帕明、去甲替林、帕罗西汀、氟西汀、舍曲林、丁苯那嗪、氟哌啶醇、氯 丙嗪、硫利达嗪、舒必利、喹硫平、氯氮平和利培酮。
本发明还提供治疗帕金森病的方法，所述方法包括治疗与帕金森病相关 的记忆和/或认知损伤，所述方法包括向受试者同时或顺序给药本申请描述 的至少一种化学实体和一种或多种用于治疗帕金森病的其它药物，所述其它 药物为例如但不包括左旋多巴(Levodopa)、溴隐亭(Parlodel)、培高利特 (Permax)、普拉克索(Mirapex)、托卡朋(Tasmar)、Contan、丙环定(Kemadin)、 苯海索(Artane)和苯扎托品(Cogentin)。在采用同时给药的方法中，所述药物 可存在于结合型组合物中或可被分开给药。本发明还提供药物组合物，其包 含本申请描述的至少一种化学实体和一种或多种用于治疗帕金森病的其它 药物，所述其它药物为例如但不限于左旋多巴、溴隐亭、培高利特、普拉克 索、托卡朋、Contan、丙环定、苯海索和苯扎托品。本发明还提供包装药物 组合物，其含有药物组合物(该组合物含有本申请描述的至少一种化学实体) 和另一种组合物(该组合物包含一种或多种用于治疗帕金森病的其它药物， 所述其它药物为例如但不限于左旋多巴、溴隐亭、培高利特、普拉克索、托 卡朋、Contan、丙环定、苯海索和苯扎托品)。
本发明还提供治疗与阿尔茨海默病相关的记忆和/或认知损伤的方法， 所述方法包括向受试者同时或顺序给药本申请描述的至少一种化学实体和 一种或多种用于治疗阿尔茨海默病的其它药物，所述其它药物为例如但不限 于Reminyl、他克林(Cognex)、安理申(Aricept)、艾斯能(Exelon)、美金刚 (Akatinol)、布他诺吡啶(Neotropin)、司来吉兰(Eldepryl)、雌激素(Estrogen) 和氯碘喹啉(Cliquinol)。在采用同时给药的方法中，所述药物可存在于结合 型组合物中或可被分开给药。本发明还提供药物组合物，其包含本申请描述 的至少一种化学实体和一种或多种用于治疗阿尔茨海默病的其它药物，所述 其它药物为例如但不限于Reminyl、他克林、安理申、艾斯能、美金刚、布 他诺吡啶、司来吉兰、雌激素和氯碘喹啉。类似地，本发明还提供包装药物 组合物，其含有药物组合物(该组合物包含本申请描述的至少一种化学实体) 和另一种组合物(该组合物包含一种或多种用于治疗阿尔茨海默病的其它药 物，所述其它药物为例如但不限于Reminyl、他克林、安理申、艾斯能、美 金刚、布他诺吡啶、司来吉兰、雌激素和氯碘喹啉。
本发明还提供治疗与痴呆或认知损伤相关的记忆和/或认知损伤的方 法，所述方法包括向受试者同时或顺序给药本申请描述的至少一种化学实体 和一种或多种用于治疗痴呆的其它药物，所述其它药物为例如但不限于硫利 达嗪、氟哌啶醇、利培酮、他克林、安理申和艾斯能。在采用同时给药的方 法中，所述药物可存在于结合型组合物中或可被分开给药。本发明还提供药 物组合物，其包含本申请描述的至少一种化学实体和一种或多种用于治疗痴 呆的其它药物，所述其它药物为例如但不限于硫利达嗪、氟哌啶醇、利培酮、 他克林、安理申和艾斯能。本发明还提供包装药物组合物，其含有药物组合 物(该组合物包含本申请描述的至少一种化学实体)和另一种药物组合物(该 组合物包含一种或多种治疗痴呆的其它药物，所述其它药物为例如但不限于 硫利达嗪、氟哌啶醇、利培酮、他克林、安理申和艾斯能)。
本发明还提供治疗与癫痫相关的记忆和/或认知损伤的方法，所述方法 包括向受试者同时或顺序给药本申请描述的至少一种化学实体和一种或多 种用于治疗癫痫的其它药物，所述其它药物为例如但不限于苯妥英 (Dilantin)、鲁米诺(Luminol)、得理多(Tegretol)、双丙戊酸钠(Depakote)、丙 戊酸制剂(Depakene)、乙琥胺制剂(Zarontin)、加巴喷丁(Neurontin)、巴比妥 (Barbita)、苯巴比妥(Solfeton)和非尔氨酯制剂(Felbatol)。在采用同时给药的 方法中，所述药物可存在于结合型组合物中或可被分开给药。本发明还提供 药物组合物，其包含本申请描述的至少一种化学实体和一种或多种用于治疗 癫痫的其它药物，所述其它药物为例如但不限于苯妥英、鲁米诺、得理多、 双丙戊酸钠、丙戊酸制剂、乙琥胺制剂、加巴喷丁、巴比妥、苯巴比妥和非 尔氨酯制剂。本发明还提供包装药物组合物，其含有药物组合物(该组合物 包含本申请描述的至少一种化学实体)和另一种药物组合物(该组合物包含一 种或多种治疗痴呆的其它药物，所述其它药物为例如但不限于苯妥英、鲁米 诺、得理多、双丙戊酸钠、丙戊酸制剂、乙琥胺制剂、加巴喷丁、巴比妥、 苯巴比妥和非尔氨酯制剂)。
本发明还提供治疗与多发性硬化症有关的记忆和/或认知损伤的方法， 所述方法包括向受试者同时或顺序给药本申请描述的至少一种化学实体和 一种或多种用于治疗多发性硬化症的其它药物，所述其它药物为例如但不限 于托特罗定(Detrol)、氯化奥昔布宁制剂(Ditropan XL)、盐酸羟考酮控释片剂 (OxyContin)、重组干扰素β-1b(Betaseron)、干扰素β-1a粉针剂(Avonex)、依 木兰(Azothioprine)、甲氨蝶呤(Methotrexate)和Copaxone。在采用同时给药的 方法中，所述药物可存在于结合型组合物中或可被分开给药。本发明还提供 药物组合物，其包含本申请描述的至少一种化学实体和一种或多种用于治疗 多发性硬化症的其它药物，所述其它药物为例如但不限于托特罗定、氯化奥 昔布宁制剂、盐酸羟考酮控释片剂、重组干扰素β-1b、干扰素β-1a粉针剂、 依木兰、甲氨蝶呤和Copaxone。本发明还提供包装药物组合物，其含有药 物组合物(该组合物包含本申请描述的至少一种化学实体)和另一种药物组合 物(该组合物包含一种或多种治疗多发性硬化症的其它药物，所述其它药物 为例如但不限于托特罗定、氯化奥昔布宁制剂、盐酸羟考酮控释片剂、重组 干扰素β-1b、干扰素β-1a粉针剂、依木兰、甲氨蝶呤和Copaxone)。
当与一种或多种其它药物联用时，可将本申请描述的化合物在给药所述 一种或多种其它药物之前、之后给药或与所述一种或多种其它药物同时给 药。
本申请描述的化合物的剂量取决于多种因素，众多考虑因素中包括待治 疗的具体症状、症状的严重程度、给药途径、剂量间隔频率、所使用的具体 化合物、化合物的毒理学分布、化合物的药代动力学分布和是否存在任何有 害的副作用。
通常将本申请描述的化学实体以KMO抑制剂常用的剂量水平和方式 来给药。例如，可通过口服给药将所述化学实体分一次或多次剂量给药，剂 量水平通常为0.001-100mg/kg/日，例如0.01-100mg/kg/日如0.1-70mg/kg/日， 例如0.5-10mg/kg/日。单位剂量形式通常可含有0.01-1000mg本申请描述的 至少一种化学实体，例如含有0.1-50mg本申请描述的至少一种化学实体。 对于静脉内给药，可将所述化合物分一次或多次剂量给药，剂量水平为例如 0.001-50mg/kg/日如0.001-10mg/kg/日，例如0.01-1mg/kg/日。单位剂量形式 可含有例如，0.1-10mg本申请描述的至少一种化学实体。
可将标记形式的本申请所述化学实体用作诊断剂用于识别和/或得到具 有如本申请所述调节KMO活性功能的化合物。另外，本申请描述的化学实 体可用于验证、优化生物测定或使生物测定标准化。
本申请中的″标记的″是指用提供可检测信号的标记直接或间接标记的 化合物，所述标记为例如放射性同位素、荧光标志、酶、抗体、颗粒例如磁 性颗粒、化学发光标志或特异性结合分子等。特异性结合分子包括配对体如 生物素和链霉抗生物素、地高辛和抗地高辛等。对于特异性结合成员，通常 按照已知方法将互补成员用上述提供检测的分子标记。所述标记可直接或间 接提供可检测信号。
在实施本申请所述方法的过程中，应当理解的是，当提及具体缓冲剂、 介质、试剂、细胞、培养条件等时并不是预期进行限制，而是使其能被阅读 并由此包括所有相关的物质，本领域技术人员会意识到所述物质在进行上述 讨论的具体背景下是重要或有价值的。例如，通常可能的是用一种缓冲剂系 统或培养基代替另一种缓冲剂系统或培养基，并仍实现非相同即类似的结 果。本领域技术人员掌握关于所述系统和方法学的充足知识，从而在不进行 过度实验的情况下就能够进行这样的替代，在使用本申请披露的方法和操作 中，这样的替代会最佳地用于它们的目的。
具体实施方式
实施例
本申请描述的化学实体、组合物和方法进一步通过以下非限制性实施例 来说明。
本申请使用的以下缩写具有以下含义。若缩写未定义，则其具有其公认 的含义。
CDI=羰基二咪唑
DCM=二氯甲烷
DME=甲醚
DMEM=达尔伯克改良伊格尔培养基
DMF=N,N-二甲基甲酰胺
DMSO=二甲基亚砜
EDC·HCl=1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐
EtOH=乙醇
Et2O=乙醚
EtOAc=乙酸乙酯
g=克
hr=小时
hrs=小时
HOBt=1-羟基苯并三唑
LiHMDS=二(三甲基甲硅烷基)氨基锂
LC/MS=液相色谱/质谱
mg=毫克
min=分钟
mL=毫升
mmol=毫摩尔
mM=毫摩尔浓度
ng=纳克
nm=纳米
nM=纳摩尔浓度
PBS=磷酸盐缓冲盐水
rt=室温
TBME=叔丁基甲基醚
THF=四氢呋喃
TMOF=原甲酸三甲酯
μL=微升
μM=微摩尔浓度
实验
商购试剂和溶剂(HPLC级)不经进一步纯化即使用。
薄层色谱法(TLC)用Kieselgel 60 F254(Merck)板进行并使用UV光来显 影。微波反应使用CEM聚焦微波来进行。
分析性HPLC-MS用Agilent HP1100和Shimadzu 2010系统进行，其中 使用反相Atlantis dC18柱(5μm,2.1×50mm)，梯度为历时3分钟5-100%B(A= 水/0.1%甲酸且B=乙腈/0.1%甲酸)，注射体积为3μ1，流速=1.0ml/min。UV 光谱以215nm记录，其中使用Waters 2487双波长UV检测器或Shimadzu 2010系统。通过Shimadzu 2010 LC-MS系统使用Waters ZMD在m/z为150 至850的范围内以2次扫描/秒的采样速率和使用电喷雾离子化在m/z为100 至1000的范围内以2Hz的采样速率得到质谱，或分析性HPLC-MS用Agilent HP1100和Shimadzu 2010系统进行，其中使用反相Water Atlantis dC18柱 (3μm,2.1×100mm)，梯度为历时7分钟5-100%B(A=水/0.1%甲酸且B=乙腈 /0.1%甲酸)，注射体积为3μ1，流速=0.6ml/min。UV光谱用Waters 2996光 敏二极管阵列或Shimadzu 2010系统以215nm记录。通过Shimadzu 2010 LC-MS系统使用Waters ZQ在m/z为150至850的范围内以2次扫描/秒的 采样速率和使用电喷雾离子化在m/z为100至1000的范围内以2Hz的采样 速率得到质谱。使用OpenLynx和OpenLynx Browser软件或Shimadzu PsiPort 软件对数据进行积分和报告。
lg/1ml=1体积
实施例1
反应方案1
对于反应方案1阶段1，向4-氯-6-(取代的苯基)-嘧啶(1当量)于脱气 DMF(20体积)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(四(三苯基膦)钯)(0.05当量)，然后 加入氰化锌(1当量)。将反应混合物在100℃加热直到反应完成，然后将其冷 却至室温。向反应混合物中加入水(37.5体积)，其用EtOAc(150体积)萃取。 有机层用水(1000体积)洗涤，然后用饱和NaCl水溶液(200体积)洗涤，用 MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法(洗脱剂为[0:1至1:1]EtOAc: 庚烷)来纯化，得到目标化合物。
对于反应方案1阶段2，在搅拌下将6-(取代的苯基)-嘧啶-4-甲腈(1当 量)、叠氮化钠(12当量)和氯化铵(12当量)于DMF(46体积)中的溶液在微波 中在200℃(20瓦)加热15分钟。将反应混合物加到饱和NaHCO3溶液中并用 EtOAc(4×)洗涤。然后水相使用浓HCl来酸化至pH 1，这使所需产物析出， 滤出所述产物并用水洗涤。
对于反应方案1阶段3，将4-取代的苯基-6-(1H-四唑-5-基)-嘧啶在2M NaOH溶液(7.3当量)中研磨，过滤，用水(2×)和丙酮(2×)洗涤，得到所需钠 盐。
对于反应方案1阶段4，在0℃向搅拌的4-取代的苯基-6-(1H-四唑-5- 基)-嘧啶(1当量)于DMF(15体积)中的溶液中加入氢化钠(1当量)。将所得混 合物在0℃搅拌20分钟，然后加入碘甲烷(2当量)。然后将反应混合物在室 温搅拌2小时，然后在40℃搅拌1小时。将反应混合物倒入水中并用EtOAc 萃取，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法(洗脱剂为[0:1 至1∶1]EtOAc:庚烷)来纯化，得到目标化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例2
反应方案2
对于反应方案2阶段1，向搅拌的6-(取代的苯基)-嘧啶-4-羧酸(1当量) 于DMF(6体积)中的溶液中加入EDC·HCl(2当量)、HOBt(1.1当量)和适当的 苯胺(1.1当量)。将反应混合物在环境温度搅拌16小时且真空除去溶剂。残 余物用乙腈/水(1/1)研磨，得到中间体，将其在耐压管中在范围为120℃至 170℃的温度(取决于使用哪种苯胺)加热16小时。将反应混合物冷却至室温 并用NaHCO3粹灭。过滤所得析出物并用水和甲醇洗涤。其按需通过制备性 HPLC来进一步纯化，得到所需目标化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例3
反应方案3
对于反应方案3阶段1，向搅拌的2-甲基-6-(取代的苯基)-嘧啶-4-羧酸(1 当量)或6-(取代的苯基)-嘧啶-4-羧酸(1当量)于DMF(15体积)中的溶液中加 入三乙胺(1.05当量)和氯代丙酮(1.05当量)且将反应混合物在环境温度搅拌 16小时。向反应混合物中加入水(35体积)，过滤所述反应混合物，得到酯中 间体，其为浅棕色固体。酯中间体用水洗涤，在真空烘箱中干燥16小时且 不经进一步纯化即用于下一阶段。
对于反应方案3阶段2，向搅拌的上述酯中间体(1当量)于乙酸(23体积) 中的溶液中加入乙酸铵(4当量)且在搅拌下将反应混合物在115℃加热2小 时。将其冷却至室温并真空除去溶剂。将所得黑色固体溶解在EtOAc中并 用水和饱和NaCl水溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空除去溶剂。通过 柱色谱法(洗脱剂为[0:1至1:4]EtOAc:庚烷)来纯化，得到所需目标化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例4
反应方案4
对于反应方案4阶段1，在0℃向搅拌的6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-甲腈 (1当量)于无水甲苯(20体积)中的溶液中加入二(三甲基甲硅烷基)氨基锂(2当 量)且将反应混合物在氮气气氛下在环境温度搅拌2小时。将反应混合物冷 却至0℃并用HC1(3M)粹灭。搅拌30分钟后，加入水(40体积)，然后加入 甲苯(20体积)。对混合物进行分配且滤出存在于水相中的析出物。将固体混 悬在3M氢氧化钠溶液中，在室温搅拌30分钟，得到6-(3,4-二氯-苯基)-嘧 啶-4-甲脒，其不经进一步纯化即用于下一阶段。
对于反应方案4阶段2，向搅拌的6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-甲脒(1当量) 于1,4-二噁烷(10体积)中的溶液中加入氯代丙酮(0.33当量)且将反应混合物 在密封耐压管中在100℃搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温。向反应混 合物中加入二异丙基乙基胺(1当量)和氯代丙酮(0.33当量)，将所述反应混合 物在110℃搅拌16小时。真空除去溶剂且所得固体用水研磨，过滤并用甲醇 洗涤。通过制备性HPLC来纯化，得到所需目标化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例5
反应方案5
对于反应方案5阶段1，向搅拌的6-(取代的苯基)-嘧啶-4-甲腈(1当量) 于乙醇(25体积)中的溶液中加入盐酸羟胺(1.05当量)，然后加入二异丙基乙 基胺(1.05当量)。将反应混合物在70℃加热1小时。将其冷却至室温并用 EtOAc(750体积)稀释。有机层用水(2500体积)和饱和NaCl水溶液(2500体 积)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空除去溶剂，得到所需中间体，其为黄 色粉末，所述粉末不经任何进一步纯化即用于下一阶段。
对于反应方案5阶段2，向搅拌的N-羟基-6-(取代的苯基)-嘧啶-4-甲脒 (1当量)于原甲酸三甲酯(25体积)中的溶液中加入浓HCl(催化剂)。在搅拌下 将反应混合物在100℃加热1小时。然后将其冷却至室温且滤出所得析出物 并用庚烷洗涤，得到所需目标化合物。
对于反应方案5阶段3，向搅拌的N-羟基-6-(取代的苯基)-嘧啶-4-甲脒 (1当量)于吡啶(25体积)中的溶液中加入乙酰氯(2当量)。将反应混合物在 105℃加热2小时，然后向反应混合物中加入乙酰氯(1当量)，将所述反应混 合物再加热2.5小时。然后将其冷却至室温并用水(800体积)稀释。过滤分离 所需化合物并通过快速柱色谱法(洗脱剂为EtOAc:庚烷)来纯化。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例6
反应方案6
对于反应方案6阶段1，向搅拌N-羟基-6-(取代的苯基)-嘧啶-4-甲脒(1 当量)于1,4-二噁烷(16体积)中的溶液中加入1,1’-羰基二咪唑(1.24当量)和 1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(1.07当量)且将反应混合物在110℃搅拌3 小时。将反应混合物冷却至室温并真空除去溶剂。将所得残余物溶解在水和 EtOAc中。分离水层并用EtOAc(3×)洗涤。然后用2M HCl溶液将其酸化至 pH 1并用EtOAc(3×)萃取。合并有机相并用饱和NaC1水溶液(50体积)洗涤， 用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。
对于反应方案6阶段2，在0℃向搅拌3-(6-(取代的苯基)-嘧啶-4- 基)-4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮于DMF(20体积)中的溶液中加入氢化钠(1当量)且 将反应混合物在该温度搅拌15分钟。加入碘甲烷(2当量)并将反应混合物在 环境温度搅拌1.5小时，然后在30℃搅拌45分钟。加入水，这使所需目标 化合物析出，过滤分离所述目标化合物并用水(500体积)和庚烷(1000体积) 洗涤。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例7
反应方案7
对于反应方案7阶段1，向4-氯-6-(5-氯-吡啶-3-基)-嘧啶(1当量)于脱气 DMF(20体积)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(0.05当量)，然后加入氰化锌(1当 量)。将反应混合物在100℃加热直到LCMS表明反应完成，然后将其冷却 至室温。向反应混合物中加入水(37.5体积)，所述反应混合物用EtOAc(150 体积)萃取。有机层用水(1000体积)洗涤，然后用饱和NaC1水溶液(200体积) 洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法(洗脱剂为EtOAc: 庚烷)来纯化，得到目标化合物。
对于反应方案7阶段2，向搅拌的6-(5-氯-吡啶-3-基)-嘧啶-4-甲腈(1当 量)于乙醇(25体积)中的溶液中加入盐酸羟胺(1.05当量)，然后加入二异丙基 乙基胺(1.05当量)。在搅拌下将反应混合物在70℃加热1小时。将其冷却至 室温并用EtOAc(750体积)稀释。有机层用水(2500体积)和饱和NaCl水溶液 (2500体积)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空除去溶剂，得到所需中间体， 其为黄色粉末，所述粉末不经任何进一步纯化即用于下一阶段。
对于反应方案7阶段3，向搅拌的6-(5-氯-吡啶-3-基)-N-羟基-嘧啶-4-甲 脒(1当量)于1,4-二噁烷(16体积)中的溶液中加入1,1’-羰基二咪唑(1.24当量) 和1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(1.07当量)且将反应混合物在110℃搅拌 5小时。向烧瓶中再加入1,1’-羰基二咪唑(0.24当量)和1,8-二氮杂二环[5.4.0] 十一碳-7-烯(0.07当量)，如此进行三次且反应通过LCMS来监测直到其完成。 将反应混合物冷却至室温并真空除去溶剂。将所得残余物溶解在水和EtOAc 中。分离水层并用EtOAc(3×)洗涤。然后用2M HC1溶液将其酸化至pH 1 且用EtOAc(3×)萃取。合并有机相并用饱和NaCl水溶液(50体积)洗涤，用 MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到所需目标化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例8
反应方案8
对于反应方案8阶段1，向搅拌的N-羟基-6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-甲 脒(1当量)于乙腈(25体积)中的溶液中加入1,1’-硫羰基二咪唑(1.5当量)和 1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(4当量)且将反应混合物在环境温度搅拌2 小时。真空除去溶剂且所得残余物用2M HCl溶液研磨。过滤收集中间体， 在空气抽吸条件下干燥并混悬在THF(18体积)中。向上述混悬液中加入三氟 化硼乙醚合物(5当量)，将所述混悬液在环境温度搅拌16小时。真空除去溶 剂且所得残余物用水研磨并过滤。所需目标化合物通过使其通过短树脂 MP-TsOH(65)(3.37mmol/g)垫(用甲醇洗脱)来进一步纯化。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例9
反应方案9
对于反应方案9阶段1，向搅拌的6-(3-氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸(1当量)于 DMF(6体积)中的溶液中加入EDC(1.5当量)和HOBt(1.1)且将反应混合物在 环境温度搅拌1小时。向反应混合物中加入乙酰胺肟(1.2当量)，将其在环境 温度搅拌16小时。将反应混合物倒入水中，这使析出物形成，过滤收集所 述析出物。通过快速柱色谱法(洗脱剂为EtOAc)来纯化，得到所需中间体。
对于反应方案9阶段1，向搅拌的6-(3-氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸[1-(羟基亚 氨基)-乙基]-酰胺(1当量)于DCM(130体积)中的溶液中加入叔丁醇钾(6当量) 且将反应混合物在环境温度搅拌1.5小时。向反应混合物中加入水(170体积) 且分离水相并用DCM(2×)萃取。合并有机层，用Na2SO4干燥，过滤并真空 除去溶剂，得到所需目标化合物，其通过制备性HPLC来纯化。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例10
反应方案10
对于反应方案10阶段1，向搅拌的6-(取代的苯基)-嘧啶-4-甲腈(1当量) 于乙醇(10体积)中的溶液中加入一水合肼(2当量)且在搅拌下将反应混合物 在100℃加热2小时。将反应混合物冷却至室温并过滤由此形成的析出物且 用甲醇洗涤，得到灰白色固体，其不经进一步纯化即用于下一阶段。
对于反应方案10阶段2，向搅拌的阶段1中得到的中间体(1当量)于1,4- 二噁烷(16体积)中的溶液中加入1,1’-羰基二咪唑(1.24当量)，然后加入1,8- 二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(1.07当量)且将反应混合物在100℃搅拌2小 时。向反应混合物中加入1,1’-羰基二咪唑(0.5当量)和1,8-二氮杂二环[5.4.0] 十一碳-7-烯(0.2当量)，将所述反应混合物在100℃再搅拌2小时。真空除去 溶剂。所得固体用EtOAc和水研磨。将其过滤并先后用DCM、EtOAc、DCM/ 甲醇和DCM洗涤，得到所需化合物，将其在真空烘箱中干燥。
对于反应方案10阶段3，向阶段1中得到的中间体中加入甲酸(10体积) 且在搅拌下将反应混合物在100℃加热48小时。向反应混合物中加入分子 筛和甲酸(10体积)，将所述反应混合物在120℃加热16小时。将反应混合物 冷却至室温，过滤并真空除去溶剂。所得固体用饱和NaHCO3水溶液、水和 甲醇洗涤，得到所需目标分子。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例11
反应方案11
对于反应方案11阶段1，向搅拌的3-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4- 基]-4H-[1,2,4]噁二唑-5-酮(1当量)于磷酰氯(8体积)中的溶液中加入吡啶(1当 量)且将反应混合物在80℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至0℃并倒在冰 上。水相用EtOAc萃取。然后有机相用水和饱和NaCl水溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空除去溶剂，得到所需中间体，其不经进一步纯化即用于下 一阶段。
对于反应方案11阶段2，向搅拌的上述中间体(1当量)于DMF(14体积) 中的溶液中加入三乙胺(2.5当量)，然后加入适当的胺(1当量至5当量)且将 反应混合物在环境温度搅拌并通过LCMS来监测直到完成。过滤收集所得析 出物并用水洗涤。通过快速柱色谱法(洗脱剂为[1:9至1:1]EtOAc:庚烷)来纯 化，得到所需目标化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例12
反应方案12
对于反应方案12阶段1，向搅拌的3-二甲基氨基丙酸盐酸盐(1当量) 于DCM(58体积)中的溶液中加入二异丙基乙基胺、催化量的DMF和草酰氯 (3.6当量)。将反应混合物在环境温度搅拌1小时并真空除去溶剂。将所得残 余物溶解在DCM(25体积)中并加到搅拌的6-(3,4-二氯-苯基)-N-羟基-嘧啶-4- 甲脒和二异丙基乙基胺(1.2当量)于DCM(33体积)中的溶液中。向反应混合 物中加入氢化钠(1.2当量)，将其在环境温度搅拌4小时。真空除去溶剂并将 所得残余物溶解在EtOAc中，用水(2×)洗涤并真空除去EtOAc。通过快速柱 色谱法(洗脱剂为[0:1至5:95]甲醇:EtOAc)来纯化，得到所需目标化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例13
反应方案13
对于反应方案13阶段1，向搅拌的2-溴-5-氟-吡啶(1当量)和六甲基二 锡烷(1当量)于脱气1,2-二甲氧基乙烷(125体积)中的溶液中加入 Pd(PPh3)4(0.05当量)。将反应混合物在80℃搅拌16小时并将其冷却至室温。 所得溶液未经进一步纯化即用于下一阶段。
对于反应方案13阶段2，将4-氯-6-(3,4-二氯苯基)-嘧啶(1当量)和 Pd(PPh3)4(0.05当量)加到上述含有5-氟-2-三甲基甲锡烷基-吡啶(1.5当量)的 溶液中且将反应混合物加热回流16小时。将其冷却至室温并用EtOAc稀释。 有机层用水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。所得残余物用EtOAc 和DCM研磨，得到所需化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例14
反应方案14
对于反应方案14阶段1，将4-氯-6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶(1当量)、4-(三 氟甲基)-1H-咪唑(2当量)和碳酸钾(1.1当量)于叔丁醇(10体积)中的溶液在微 波中在150℃加热25分钟。将碳酸钾(1.1当量)加到反应混合物中，将所述 反应混合物在微波中在160℃加热35分钟。加入水且所需物质用EtOAc萃 取。有机相用MgSO4干燥，过滤并蒸干。通过快速柱色谱法(洗脱剂为 [99.5:0.5]DCM:MeOH)来纯化，得到目标化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例15
反应方案15
对于反应方案15阶段1，向4-氯-6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶(1当量)于 DMF(20体积)中的溶液中加入氢化钠(1.5当量)和咪唑酮(1.5当量)。将反应 混合物在微波中在90℃加热5分钟。向冷的混合物中加入二氯甲烷和饱和 NaHCO3溶液。分离有机层且水层再用二氯甲烷萃取。合并有机层，用Na2SO4干燥，过滤并蒸干。通过快速柱色谱法来纯化并使用适当的溶剂来研磨，得 到目标化合物。
对于反应方案15阶段2，在5℃向1-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-1,3- 二氢-咪唑-2-酮于DMF(30体积)中的溶液中加入氢化钠(1当量)且将反应混 合物搅拌15分钟。向反应混合物中加入碘甲烷(2当量)，将其在室温搅拌3 小时且在40℃搅拌30分钟。将反应混合物倒入水中并用EtOAc萃取，用 Na2SO4干燥，过滤并蒸干。通过快速柱色谱法(洗脱剂为[1:2]EtOAc:庚烷)来 纯化，得到目标化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例16
反应方案16
对于反应方案16阶段1，将6-溴-吡啶-3-甲酸(1当量)、HOBt(1.4当量) 和HATU(1.3当量)溶解在DMF(25体积)中且将反应混合物在环境温度搅拌1 小时。加入甲胺盐酸盐(1.5当量)和三乙胺(1.1当量)且将反应混合物在环境 温度搅拌16小时。真空除去DMF且向残余物中加入水和EtOAc。分离有机 相且用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空除去溶剂。 残余物用EtOAc/庚烷(1/1)研磨，得到所需中间体。
对于反应方案16阶段2，向搅拌的6-溴-N-甲基-吡啶-3-甲酰胺(1当量) 和六甲基二锡烷(1当量)于脱气1,2-二甲氧基乙烷(125体积)中的溶液中加入 Pd(PPh3)4(0.05当量)。将反应混合物在80℃搅拌16小时并将其冷却至室温。 所得溶液不经进一步纯化即用于下一阶段。
对于反应方案16阶段3，将4-氯-6-(3,4-二氯苯基)-嘧啶(1当量)和 Pd(PPh3)4(0.05当量)加到上述含有N-甲基-6-三甲基甲锡烷基-吡啶-3-甲酰胺 (1.5当量)的溶液中且将反应混合物加热回流16小时。将其冷却至室温并用 EtOAc稀释。有机层用水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。通 过快速柱色谱法(洗脱剂为[2:1]EtOAc:庚烷)来纯化，得到目标化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例17
反应方案17
对于反应方案17阶段1，将4-氯-6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶(1当量)和肼基 甲酸叔丁酯(2.1当量)溶解在1,4-二噁烷(10体积)中。对反应混合物进行搅拌 并在氮气气氛下加热回流6小时。真空蒸发反应混合物，用饱和NaHCO3水溶液处理且过滤，得到所需中间体，将其真空干燥。
对于反应方案17阶段2，将N’-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-肼基甲酸 叔丁酯(1当量)溶解在MeOH(120体积)中且用4M HC1/1,4-二噁烷(100体积) 处理并在室温保持4小时同时搅拌。过滤反应混合物并将析出物溶解在热水 中。向水溶液中加入饱和NaHCO3水溶液且将反应混合物搅拌1小时同时冷 却至室温。滤出析出物并真空干燥，得到所需中间体。
对于反应方案17阶段3，将[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-肼(1当量)、 乙酰乙酸乙酯(1.2当量)和乙醇(100体积)的混合物加热回流2小时。真空蒸 发反应混合物且残余物用己烷研磨，得到所需中间体，其不经进一步纯化即 用于下一步。
对于反应方案17阶段4，在环境温度将3-{[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4- 基]-肼叉基}-丁酸乙酯(1当量)在氢氧化钠溶液(2M,1.1当量)中搅拌45分钟， 然后在搅拌下回流45分钟。向冷却的反应混合物中先后加入乙酸和乙醇 (1mL)且将反应混合物在环境温度剧烈搅拌。过滤析出物并用乙醇和水洗涤， 得到所需化合物，将其真空干燥。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例18
反应方案18
对于反应方案18阶段1，向6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-甲腈(1当量)和乙 烷-1,2-二胺(1当量)于甲苯(12体积)中的溶液中加入五硫化二磷。搅拌反应 混合物并加热回流3.5小时。将反应混合物倒入水中并用DCM(×3)萃取。合 并有机层并用饱和NaCl水溶液洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。 通过快速柱色谱法(洗脱剂为[1∶1]至[1:0]EtOAc:庚烷)来纯化，得到目标化合 物。
对于反应方案18阶段2，向4-(3,4-二氯-苯基)-6-(4,5-二氢-1H-咪唑-2- 基)-嘧啶(1当量)于乙腈(40体积)中的混悬液中加入高锰酸钾(2.5当量)和硅 胶(8.5当量)。将反应混合物在室温搅拌3小时。将反应混合物倒入水中并用 DCM(2×)萃取。合并有机层并真空蒸干。通过快速柱色谱法(洗脱剂为 [99:1]DCM:MeOH)来纯化，然后通过SCX柱(洗脱剂为[100:0]至 [80:20]MeOH:0.880氨)来纯化，得到目标化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例19
反应方案19
对于反应方案19阶段1，在0℃向搅拌的乙酰肼(1.2当量)于无水甲苯(30 体积)中的混悬液中加入三乙基铝(1M于己烷中,2.5当量)。将反应混合物在 氮气气氛下在环境温度搅拌40分钟。向上述反应混合物中加入6-(3,4-二氯- 苯基)-嘧啶-4-甲腈(1当量)，将其在85℃搅拌6小时，然后在170℃搅拌2 小时。然后将反应混合物在微波中在180℃照射30分钟。真空除去溶剂且 残余物通过快速柱色谱法(洗脱剂为[5:95](氨/MeOH):DCM)来进一步纯化并 用乙腈/水(1/1)研磨，得到所需分子。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例20
反应方案20
对于反应方案20阶段1，向搅拌的6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-甲腈(1当 量)于乙醇(25体积)中的溶液中加入盐酸羟胺(1.05当量)，然后加入二异丙基 乙基胺(1.05当量)。将反应混合物在70℃加热1小时。将其冷却至室温并用 水(60体积)稀释。滤出析出物并用水洗涤，得到所需中间体，其不经任何进 一步纯化即用于下一阶段。
对于反应方案20阶段2，向搅拌的N-羟基-6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4- 甲脒(1当量)于DCM(25体积)中的溶液中加入三氟乙酸酐(8当量)且将反应 混合物在室温搅拌2小时，然后加入二异丙基乙基胺(2当量)。将反应混合 物在DCM和1M Na2CO3水溶液之间分配且收集有机层，用Na2SO4干燥， 过滤并真空除去溶剂。通过快速柱色谱法(洗脱剂为[1:9]EtOAc:庚烷)来纯化， 然后用乙醇重结晶，得到目标化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例21
反应方案21
对于反应方案21阶段1，将[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-乙酸乙酯(1 当量)和二甲基甲酰胺缩二甲醇(20体积)在氮气气氛下回流搅拌8小时。冷 却后，蒸发溶液且残余物通过硅胶快速柱色谱法来纯化。用乙酸乙酯洗脱， 先后得到杂质和产物(89%收率)，所述产物为米色固体。
对于反应方案21阶段2，将2-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-3-二甲基氨 基-丙烯酸乙酯(1当量)、DMF(20体积)和乙酸甲脒(4当量)的混合物在用氮 气吹洗的密封管中在100℃搅拌16小时。真空蒸发混合物，用饱和碳酸氢 钠水溶液(100体积)处理并用乙酸乙酯(先后为4000体积和1000体积)萃取。 将合并的干燥(Na2SO4)的有机萃取物真空蒸发。将残余物溶解在热甲醇中并 吸附到硅胶(20体积)上。将其加载到Isolute硅胶柱上并用二氯甲烷-乙醇(先 后为100:0、98:2、95:5和93:7)洗脱，先后得到杂质和产物，所述产物为灰 白色固体(41%收率)。
在使用碳酸胍(代替乙酸甲脒)的类似反应中，后处理操作如下所述：
加入水(140体积)，收集析出物并先后用水(280体积)、庚烷和乙醚洗涤 且真空干燥。产物用乙腈/水洗涤以除去DMF。将所得固体在甲醇中搅拌， 弃去上清液并将该操作重复五次。将所得固体在乙腈中搅拌，弃去上清液并 将该操作重复三次。将固体混悬在乙腈中，在Genevac中在40℃蒸发，然 后在40℃真空干燥过夜，得到产物。
对于反应方案21阶段3，2-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-3-二甲基氨基 -丙烯酸乙酯(1当量)于二噁烷(10体积)中的混合物用甲基肼(1当量)处理且在 密封管中在氮气下在搅拌下在80℃加热14小时。冷却后，滤出析出物，用 二噁烷(40体积)洗涤并真空干燥。析出物用甲醇(200体积)处理并回流搅拌 20分钟。冷却后，滤出析出物并真空干燥，得到产物，其为橙色粉末(47% 收率)。
对于反应方案21阶段4，将2-[6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-基]-3-二甲基氨 基-丙烯酸乙酯(1当量)、Ν,Ν’-二甲基肼二盐酸盐(1当量)和二噁烷(25体积) 的混合物在氮气下在室温搅拌同时滴加Ν,Ν-二异丙基乙胺(2.5当量)。将搅 拌的混合物在80℃加热16小时。冷却后，真空蒸发混合物，然后用热甲醇 吸附到硅胶(20体积)上。所得硅胶用Isolute柱(硅胶)(用乙酸乙酯-甲醇(88:12 至84:16)洗脱)纯化，得到产物，其为浅米色固体(45%收率)。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例22
反应方案22
对于反应方案22阶段1，6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸(1当量)于二氯 甲烷(20体积)中的溶液用DMF(催化量)处理，然后滴加草酰氯(3当量)。搅 拌2小时后，真空蒸发混合物，用甲苯(9体积)处理并冷却至0℃。滴加三甲 基甲硅烷基偶氮甲烷(5当量)并继续搅拌16小时。在0℃先后加入1,4-二噁 烷(10体积)和48%氢溴酸(10当量)/1,4-二噁烷(5体积)。1小时后，用饱和碳 酸氢钠水溶液将pH调节至8-9且混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的干 燥(Na2SO4)的有机萃取物蒸发且残余物用Isolute柱(硅胶)纯化。用乙酸乙酯- 庚烷(1:10)洗脱，得到粗产物，其用乙酸乙酯-庚烷结晶。所得晶体通过重复 进行色谱法来进一步纯化，然后产物从洗脱剂中结晶出来(NMR表明纯度为 80%)。
对于反应方案22阶段2，将乙酸(3当量)加到2-溴-1-[6-(3,4-二氯-苯基)- 嘧啶-4-基]-乙酮(1当量)、脲(1当量)和乙酸铵(3当量)的混合物中且将其加热 回流36小时。加入乙酸乙酯和水，分离有机层且水层再用乙酸乙酯萃取。 蒸发合并的有机萃取物且残余物通过硅胶色谱法(先后用乙酸乙酯和二氯甲 烷-甲醇(先后为98:2、95:5和9:1)洗脱)来纯化，得到产物(5%)。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例23
反应方案23
对于反应方案23阶段1，将4-氯-6-(取代的苯基)-嘧啶(1当量)和适当的 胺(4当量)于乙醇(10体积)或叔丁醇(10体积)中的溶液在微波中在130℃至 160℃加热40至60分钟。在3-(三氟甲基)吡唑的情况下，向反应混合物中 加入碳酸钾(1.1当量)，然后加热。向反应混合物中加入乙腈/水(1/1)，这使 所需产物析出，过滤所述产物并用乙腈/水(1/1)(3×)洗涤。在空气抽吸条件下 干燥产物且当需要时，其通过快速柱色谱法(洗脱剂为[1:3至0:1]庚烷:DCM) 来进一步纯化。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例24
反应方案24
对于反应方案24阶段1，向搅拌的4-氯-6-(3-氯-苯基)-嘧啶(1当量)于 乙醇/1,4-二噁烷(1/4)(5体积)中的混悬液中加入氢氧化铵溶液(1体积)。将反 应混合物在密封管中在搅拌下在100℃加热24小时。一旦冷却即发生析出 且滤出所得固体，用乙腈/水(1/1)(10体积)洗涤，得到所需胺。
对于反应方案24阶段2，向搅拌的6-(3-氯-苯基)-嘧啶-4-基胺(1当量) 于乙酸(4体积)中的混悬液中先后加入原甲酸三乙酯(4.6当量)和叠氮化钠 (1.2当量)。将反应混合物在搅拌下加热回流2.5小时并冷却至室温。真空除 去溶剂且所得残余物用乙腈/水(3/1)研磨，过滤并在空气抽吸条件下干燥， 得到所需目标化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例25
反应方案25
对于反应方案25阶段1，向搅拌的4-氯-6-(3-氯苯基)-嘧啶(1当量)于 DMSO(20体积)中的溶液中加入1H-嘧啶-2,4-二酮(1当量)和碳酸钾(2当量) 且在搅拌下将反应混合物在100℃加热16小时。然后将反应混合物冷却至 室温，用水(200体积)稀释并在环境温度搅拌1小时。过滤固体残余物并用 水(200体积)和叔丁基甲基醚(200体积)洗涤，得到所需化合物，将其在真空 烘箱中在40℃进一步干燥16小时。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例26
反应方案26
对于反应方案26阶段1，将4-氯-6-(取代的苯基)-嘧啶(1当量)和哌嗪-2- 酮(4当量)于叔丁醇(10体积)中的溶液在微波中在搅拌下在150℃加热40分 钟。真空除去溶剂且残余物用乙腈/水(1/1)研磨，得到所需化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例27
反应方案27
对于反应方案27阶段1，在-78℃向搅拌的1,3-噁唑(1.3当量)于THF(10 体积)中的溶液中滴加正丁基锂(1.4当量)，将反应混合物在该温度搅拌30分 钟，然后加入氯化锌(3当量)且将反应混合物在搅拌下历时1小时温热至室 温。向混合物中加入四(三苯基膦)钯(0.05当量)和4-氯-6-(取代的苯基)-嘧啶 (1当量)且将混合物在搅拌下加热回流2小时。将反应混合物冷却至室温， 倒在HCl(1M,20体积)上并用乙醚(3×)萃取。合并有机层，用MgSO4干燥， 过滤并真空蒸干。通过制备性HPLC来纯化，得到所需化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例28
反应方案28
对于反应方案28阶段1，向搅拌的4-氯-6-(3,4-二氯-苯基)-嘧啶(1当量) 和5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-(2-三甲基甲硅烷基-乙 氧基甲基)-1H-吡唑(1.1当量)于二噁烷(10体积)中的溶液中加入碳酸钾(4当 量)，反应混合物用氮气脱气，加入四(三苯基膦)钯(0.05当量)且将混合物在 搅拌下加热回流16小时。将反应混合物冷却至室温，倒在水(20体积)上并 用乙酸乙酯(3×)萃取。合并有机层，用盐水(10体积)洗涤，用MgSO4干燥， 过滤并真空蒸干。通过快速柱色谱法(洗脱剂为[80:20]EtOAc:庚烷)来纯化， 得到所需化合物。
对于反应方案28阶段2，将HC1/二噁烷(4M,10当量)一次性加到搅拌 的4-(3,4-二氯-苯基)-6-[2-(2-三甲基甲硅烷基-乙氧基甲基)-2H-吡唑-3-基]-嘧 啶(1当量)于二噁烷(2体积)中的溶液中且将混合物在室温搅拌20小时。真 空除去溶剂，残余物用乙醚研磨且过滤收集所得析出物并真空干燥，得到所 需化合物。
以下化合物基本如上所述来制备。
实施例29
通过LC/MS来监测L-犬尿氨酸(KYN)被羟化以形成产物3-羟基-犬尿氨 酸(3-OH-KYN)的一般操作如下所述。产物通过多反应监测(使用MS)来量化。
重要试剂：
化合物：原液浓度为10mM于100%DMSO中
细胞系：CHO GST HIS KMO细胞系，1E4个细胞/孔/100μl于96孔细 胞板中
底物：L-犬尿氨酸(Sigma：目录号K3750，原液浓度：10mM于100mM 磷酸钾缓冲液(pH 7.4)中)
测定条件：
培养基：OptiMem(血清减少的培养基1×，+L-谷氨酰胺+HEPES-酚磺酞； GIBCO：目录号11058)
测定体积：200μl
板式：透明96孔板(Corning)
读取：使用产物特异性MRM对产物(3-OH-KYN)进行量化
读数器：LC/MS/MS
测定方案：
○制备化合物于100%DMSO中的系列稀释液(因子3)(最大浓度 =6.67mM，100%DMSO)
[8个点：6.67mM；2.22mM；0.74mM；0.247mM；0.082mM；0.027mM； 0.009mM；0.003mM]
○在OptiMem培养基中制备每种化合物浓度的300倍浓溶液(最大浓度 为22.22μΜ，0.3%DMSO)
[22.2μΜ；7.41μΜ；2.47μΜ；0.82μΜ；0.27μΜ；0.09μΜ；0.03μΜ；0.01μΜ]
○在培养基中制备浓度为1.1mM的底物(10mM)
○抽出细胞板中的培养基
○细胞用OptiMem(100μl/孔)洗涤并再次抽出
○测定混合物：90μ1OptiMem/孔+90μ1每种浓度的化合物/孔
[最终化合物最大浓度：10μΜ；0.15%DMSO]
[最终化合物最小浓度：0.004μΜ；0.15%DMSO]
○预孵育：在37℃孵育30分钟
○加入20μ1/孔浓度为1.1mM的底物溶液(最终测定浓度：100μΜ)
○阳性对照：200μl OptiMem
○阴性对照：180μl OptiMem+20μl 1.1mM底物
○在37℃孵育～24小时
○将每个孔中的100μl转移到透明96孔板(Corning)中
○以100μl/孔加入10%三氯乙酸(TCA)/水
○以4000rpm将板离心3分钟
○产物通过LC/MS来检测(注射50μl/孔；对20μl样品环进行2.5倍过 充)
数据分析：IC50使用自动拟合算法(A+分析)来计算。
实施例30
通过LC/MS来监测L-犬尿氨酸(KYN)被羟化以形成产物3-羟基-犬尿氨 酸(3-OH-KYN)的方法如下所述。产物通过多反应监测来量化。
重要试剂：
化合物：原液浓度为10mM于100%DMSO中
酶：在Evotec通过从CHO-GST HIS KMO细胞中分离线粒体而制备的 KMO酶
底物：L-犬尿氨酸(Sigma：目录号K3750)
[原液浓度：10mM于100mM磷酸钾缓冲液(pH 7.4)中]
测定条件：
缓冲液：100mM磷酸钾(pH 7.4)，200μΜ NADPH，0.4U/ml G6P-DH(葡 萄糖-6-磷酸脱氢酶)，3mM G6P(D-葡萄糖-6-磷酸)
测定体积：40μl
板式：透明384孔板(Matrix)
读取：使用产物特异性MRM对产物(3-OH-KYN)进行量化
读数器：LC/MS/MS
测定方案：
○制备化合物于100%DMSO中的系列稀释液(因子3)(最大浓度=10mM， 100%DMSO)
[8个点：10mM；3.33mM；1.11mM；0.37mM；0.12mM；0.04mM； 0.0137mM；0.0045mM；0.0015mM]
○在测定缓冲液中制备每种化合物浓度的3.33倍浓溶液(最大浓度为 300μΜ，3%DMSO)
[浓度：300μΜ；100μΜ；33.3μΜ；11.1μΜ；3.70μΜ；1.23μΜ；0.41μΜ； 0.137μΜ]
○在测定缓冲液中制备浓度为1mM的底物(10mM)
○测定混合物：4μl每种浓度的化合物/孔+24μ1测定缓冲液/孔+8μ1人 KMO酶+4μ1浓度为1mM的底物(最终浓度=100μΜ)
[最终化合物最大浓度：30μΜ；0.3%DMSO]
[最终化合物最小浓度：0.0137μΜ；0.3%DMSO]
○阳性对照：4μl浓度为50μΜ的FCE28833于测定缓冲液[0.5%DMSO] 中(最终测定浓度=5μΜ)+24μ1测定缓冲液/孔+8μ1人KMO酶+4μ1浓度为 1mM的底物(最终浓度=100μΜ)
○阴性对照：28μ1测定缓冲液/孔+8μ1人KMO酶+4μl浓度为1mM的 底物(最终浓度=100μΜ)
○在室温孵育400min
○以40μl/孔加入10%三氯乙酸/水以终止测定且使蛋白质析出
○以4000rpm将板离心3分钟
○产物通过LC/MS来检测(注射50μl/孔；对20μl样品环进行2.5倍过 充)
数据分析：IC50使用自动拟合算法(A+分析)来计算。
实施例31
通过LC/MS来监测L-犬尿氨酸(KYN)被羟化以形成产物3-羟基-犬尿氨 酸(3-OH-KYN)的方法如下所述。产物通过多反应监测(MRM方法)来量化。
重要试剂：
化合物：原液浓度为10mM于100%DMSO中
酶：在Evotec如文献中所述那样通过分离线粒体由小鼠(4-6周龄)肝脏 制备的KMO酶
底物：L-犬尿氨酸(Sigma：目录号K3750，原液浓度：10mM于100mM 磷酸钾缓冲液(pH 7.4)中)
测定条件：
缓冲液：100mM磷酸钾(pH 7.4)，200μΜ NADPH，0.4U/ml G6P-DH(葡 萄糖-6-磷酸脱氢酶)，3mM G6P(D-葡萄糖-6-磷酸)
测定体积：40μl
板式：透明384孔板(Matrix)
读取：使用产物特异性MRM对产物(3-OH-KYN)进行量化
读数器：LC/MS/MS
测定方案：
○制备化合物于100%DMSO中的系列稀释液(因子3)(最大浓度=10mM， 100%DMSO)
[8个点：10mM；3.33mM；1.11mM；0.37mM；0.12mM；0.04mM； 0.0137mM；0.0045mM；0.0015mM]
○在测定缓冲液中制备每种化合物浓度的3.33倍浓溶液(最大浓度为 300μΜ，3%DMSO)
[浓度：300μΜ；100μΜ；33.3μΜ；11.1μΜ；3.70μΜ；1.23μΜ；0.41μΜ； 0.137μΜ]
○在测定缓冲液中制备浓度为1mM的底物(10mM)
○测定混合物：4μ1每种浓度的化合物/孔+24μ1测定缓冲液/孔+8μ1小 鼠KMO酶+4μ1浓度为1mM的底物(最终浓度=100μΜ)
[最终化合物最大浓度：30μΜ；0.3%DMSO]
[最终化合物最小浓度：0.0137μΜ；0.3%DMSO]
○阳性对照：4μ1浓度为50μΜ的FCE28833于测定缓冲液[0.5%DMSO] 中[最终测定浓度=5μΜ]+24μ1测定缓冲液/孔+8μ1小鼠KMO酶+4μ1浓度为 1mM的底物[最终浓度=100μΜ]
○阴性对照：28μ1测定缓冲液/孔+8μ1小鼠KMO酶+4μ1浓度为1mM 的底物[最终浓度=100μΜ]
○在室温孵育40分钟
○以40μ1/孔加入10%三氯乙酸/水以终止测定且使蛋白质析出
○以4000rpm将板离心3分钟
○产物通过LC/MS来检测(注射20μ1/孔；对10μ1样品环进行2倍过充) 数据分析：IC50使用自动拟合算法(A+分析)来计算。
实施例32
使用与本申请上述那些操作类似的操作来测定以下化合物的活性。
尽管已展示和描述了一些实施方案，但可对这些实施方案进行修饰和替 代而不背离本发明的主旨和范围。例如，对于构建权利要求的目的，绝不是 预期将本申请前述权利要求理解为比其字面语言的范围窄，因此并不预期将 说明书的示例性实施方案强加到权利要求中。因此，应当理解的是，已通过 举例的方式描述本发明，但绝不是限制权利要求的范围。
机译： 某些犬尿氨酸-3-单加氧酶抑制剂，药物组合物及其使用方法
机译： 某些犬尿氨酸-3-单加氧酶抑制剂，药物组合物及其使用方法
机译： 某些犬尿氨酸-3-单加氧酶抑制剂，药物组合物及其使用方法
