一种凤丹籽油和凤丹籽总黄酮联合提取方法

摘要

一种凤丹籽油和凤丹籽总黄酮的联合提取方法，包括粉碎干燥凤丹籽、超声辅助提取凤丹籽原油、分离石油醚悬浊液中的凤丹籽粉末、减压干燥石油醚溶液、干燥脱脂凤丹籽粉末、超声提取凤丹籽总黄酮、分离乙醇悬浊液中的凤丹籽粉末、减压蒸发乙醇溶液得到凤丹籽总黄酮。其中，采用石油醚或石油醚和正己烷的混合溶剂超声辅助提取凤丹籽原油，采用乙醇溶液辅助超声提取凤丹籽总黄酮。该方法具有同时提取凤丹籽油和凤丹籽总黄酮的特点，工艺流程连贯紧凑。凤丹籽油和凤丹籽总黄酮的提取率较高，提取的凤丹籽油具有纯度高，色泽好，简单精炼即可达到国家标准。方法提取的凤丹籽总黄酮具有较高的活性，其抗氧化能力强、抑菌能力较好。

说明书

技术领域：本发明属于天然产物提取技术领域，特别涉及一种联合提 取方法，依次得到凤丹籽油和凤丹籽总黄酮。

背景技术：凤丹（Paeonia ostii T. Hong et J. X. Zhang） ，即铜陵牡丹，属于江南牡丹种群，属于药用牡丹品种。凤丹皮为安 徽四大中药材之一，具有很高的保健及药用价值。

凤丹主要产于铜陵顺安镇、钟鸣镇和芜湖市南陵县何湾镇，由于其独 特的土壤和气候条件，所产的丹皮被实践证明为药效最好，凤丹于20 06年被列为“国家地理标志保护产品”。经检测：药用牡丹品种凤丹 白的种子中脂肪含量为34.31%-38.06%，淀粉含量为19.42%-20.25%， 还原糖含量为12.29%-15.28%，蛋白质含量为12.03-13.75%，绝对含水 量为11.46%-17.17%，总黄酮含量为1.03%，且研究表明凤丹籽总黄酮 抗氧化和抑菌作用显著。

经检索，北京工商大学申请的发明专利，专利号： CN200810246716 .4，公告日：2009年06月03日，分类号：A23D9/02。该发明涉及本发 明公开了一种提取牡丹籽油的方法。该方法是将牡丹籽粉末放入超临 界CO₂萃取仪中进行超临界萃取，收集油脂，得到本发明提供的牡丹籽 油。该方法中，超临界萃取的温度为30-50℃，优选45℃，超临界萃取 的压力为20-35MPa，优选30MPa；超临界萃取的时间为0.5-2小时，优 选 1小时。牡丹籽粉末的粒径在20-60目。该发明提供的提取牡丹籽 油的超临界CO₂提取方法，不需要有机试剂，提取分离方法简便，提取 率高达27％，所得的油脂不饱和脂肪酸高达90％，与现有有机溶剂萃 取方法相比，牡丹油中的亚麻酸和亚油酸含量均有所升高，萃取较完 全。

通过检索国内外相关资料，至今尚未发现一种联合提取工艺，能够一 次性分别提取出凤丹籽油和凤丹籽总黄酮。因此，本发明提供一种联 合提取工艺方法，可以依次从新鲜凤丹籽中提取出凤丹籽油和凤丹籽 总黄酮，为凤丹籽的开发利用提供有力保障。

发明内容

本发明的目的在于提供一种凤丹籽油和凤丹籽总黄酮的联合提取方法 ，依次提取得到凤丹籽油和凤丹籽总黄酮。

本发明技术方案如下：一种凤丹籽油和凤丹籽总黄酮的联合提取方法 ，特别是该方法从新鲜凤丹籽中依次提取得到凤丹籽油和凤丹籽总黄 酮，其流程步骤为：

a．粉碎并干燥凤丹籽：用粉碎设备将洗净的凤丹籽粉碎，使其颗粒度 在40-100目之间， 采用真空干燥设备在温度为10℃-55℃，真空度20-80kPa的条件下减压 干燥凤丹籽粉末；

b．超声提取凤丹籽原油：采用超声辅助提取设备，选用石油醚为提取 溶剂，从减压干燥的凤丹籽粉末中超声辅助提取凤丹籽原油，超声辅 助提取设备设定的条件为：提取时间30min-60min，提取温度40℃-60 ℃，超声功率200w-800w，石油醚和凤丹籽粉末比例为8:1~10:1mL/g， 超声辅助提取凤丹籽原油完成后得到含有凤丹籽粉末的石油醚悬浊液 ；

c．分离石油醚悬浊液中的凤丹籽粉末：超声辅助提取凤丹籽原油完成 后，采用过滤设备澄清并过滤含有凤丹籽粉末的石油醚悬浊液，得到 石油醚溶液和脱脂凤丹籽粉末；

d．减压蒸发石油醚溶液：采用真空干燥设备，减压蒸发步骤c得到的 石油醚溶液，减压蒸发的工艺参数为：真空度20-60kPa，温度15-40℃ ，并回收石油醚，直到石油醚成分被蒸发完全，得到凤丹籽原油，用 于精炼成品凤丹籽油；

e. 干燥脱脂凤丹籽粉末：采用真空干燥设备，在真空度为20-105kP a，温度-10-40℃的条件下，蒸干脱脂凤丹籽粉末上的残留的水和石油 醚，得到干燥的脱脂凤丹籽粉末；

f．超声提取凤丹籽总黄酮：采用超声辅助提取设备，选用乙醇溶液为 提取溶剂，从步骤e得到的干燥的脱脂凤丹籽粉末中超声提取凤丹籽总 黄酮，超声辅助提取设备的提取条件为：乙醇浓度50%-95%，提取时间 30min-60min，提取温度20℃-50℃，超声功率200w-300w，乙醇溶液和 脱脂凤丹籽粉末比例10:1~30:1mL/g，超声提取凤丹籽总黄酮完成后得 到含有凤丹籽粉末的乙醇悬浊液；

g．分离乙醇悬浊液中的凤丹籽粉末：超声提取凤丹籽总黄酮完成后， 采用过滤设备澄清并过滤含有凤丹籽粉末的乙醇悬浊液，得到乙醇溶 液和凤丹籽残渣；

h．减压蒸发乙醇溶液：采用真空干燥设备，减压蒸发步骤h得到的乙 醇溶液，减压蒸发的工艺参数为：真空度为0-40kPa，温度30-60℃， 并回收乙醇，直到乙醇溶液成分被完全蒸发，得到凤丹籽总黄酮粗提 物，用于精炼并生产凤丹籽总黄酮产品。

作为对现有技术的进一步改进：步骤a或用含有表面活性剂的水溶液洗 净凤丹籽；

步骤b中，超声辅助提取设备的最优提取条件为：提取时间45min，提 取温度50℃，超声功率250w，石油醚和凤丹籽粉末比例为8:1mL/g。

步骤f中，超声辅助提取设备的最优提取条件为：乙醇浓度75%，提取 时间49min，提取温度30℃，超声功率240w，乙醇溶液和脱脂凤丹籽粉 末比例21:1mL/g。

步骤a或采用冷冻干燥设备在温度-40℃-0℃的条件下冷冻干燥凤丹籽 粉末。

步骤d、步骤h中，真空干燥设备或为真空浓缩设备或为减压蒸发设备 。

步骤b中，提取溶剂或为石油醚和正己烷的混合溶剂，石油醚和正己烷 的体积比为8:1~20:1。

在步骤c、步骤g的过滤设备中，其过滤介质的孔径为0.01-10μm。

步骤c、步骤d、步骤e之间的操作间隔时间为0-2小时。

步骤d回收石油醚至步骤b中再次使用，步骤h回收乙醇至步骤f中再次 使用。

本发明相当于现有技术的有益效果是：

其一，本发明的方法能够依次从新鲜凤丹籽中提取得到凤丹籽油和凤 丹籽总黄酮，本发明的联合提取法与索氏提取法、超声波辅助提取法 、未采用超声辅助的提取方法相比有明显的优势。（见说明书附图2、 图3），其中图2中凤丹籽油的出油率为33.7%，凤丹籽油出油率较高； 图3中凤丹籽总黄酮的提取率为92.53%，凤丹籽总黄酮的提取率受到提 取凤丹籽油的工艺影响较小，提取率较高。

本发明联合提取法得到的凤丹籽油纯度高，色泽透明，仅需添加简单 的精炼工艺即可达到油脂产品的国家标准。本发明提取得到的凤丹籽 黄酮与未采用超声辅助的提取方法和超声波辅助提取法相比，活性较 高，提取出来的凤丹籽总黄酮抗氧化能力和抑菌能力较好（见图4、图 5）。其中：图4是采用清除DPPH自由基能力测定不同提取方法得到的 凤丹籽总黄酮溶液的抗氧化能力，本发明方法得到的凤丹籽总黄酮溶 液的平均DPPH自由基清除率为84.47%，比未采用超声辅助的提取方法 和超声波辅助提取法的平均清除率高；图5是采用磷钼络合物法对凤丹 籽总黄酮的总抗氧化性进行测定，其凤丹籽总黄酮总抗氧化活性相比 未采用超声辅助的提取方法、超声波辅助提取法高。

其二，本发明采用石油醚或者石油醚和正己烷的混合溶剂作为提取溶 剂。采用石油醚或石油醚和正己烷的混合溶剂提取，凤丹籽油的出油 率较高，且联合提取后，对凤丹籽总黄酮含量的影响较小，实施例2的 实验结果表明，采用石油醚或石油醚与正己烷混合溶剂提取凤丹籽油 后，凤丹籽总黄铜的平均损失率为1.94%，远小于传统溶剂提取凤丹籽 油。可见采用此方法提取凤丹籽油后，凤丹籽总黄酮的损失较小；且 采用此溶剂提取的凤丹籽总黄酮溶液的平均DPPH自由基清除率为84.4 7%，说明凤丹籽总黄酮有很强的抗氧化性。

其三，本发明的提取工艺操作简单，采用的设备通用性好，能达到工 艺参数条件的设备均可使用，生产的投资少，整个工艺流程连贯紧凑 ，适用于各种规模的食品生物企业。本发明提取成本较低，提取溶剂 石油醚和乙醇均可循环使用，提高了提取效率，联合提取了凤丹籽油 和凤丹籽总黄酮，使得原本没有开发的凤丹籽资源得到充分的利用， 对凤丹产品的开发有指导意义。

附图说明

图1：实验室条件下联合提取凤丹籽油和凤丹籽总黄酮方法的总体流程 图；

图2：本发明和其他提取方法比较凤丹籽油出油率图；

图3：本发明和其他提取方法比较凤丹籽总黄酮提取率图；

图4：本发明和其他提取方法比较凤丹籽总黄酮DPPH自由基清除率图；

图5：本发明和其他提取方法比较凤丹籽总黄酮总抗氧化能力图。

具体实施方式    下面结合本发明的附图及实施例对本发明的实 施方式作进一步解释：

图1为实验室条件下联合提取凤丹籽油和凤丹籽总黄酮方法的总体流程 图；包括以下流程，并结合实施例1详细说明：

实施例1，实验室条件下联合提取凤丹籽油和凤丹籽总黄酮的方法

1．采摘凤丹籽：选取没有病虫害，颗粒饱满新鲜的凤丹籽，洗净凤丹 籽上的泥土，自然条件下干燥。

2. 粉碎干燥：将洗净的凤丹籽放入中药粉碎机内粉碎，过40目筛， 采用真空干燥机在25℃，真空度50kPa的条件下减压干燥得到凤丹籽粉 末。

3. 超声辅助提取凤丹籽原油：将锥形瓶放入超声波清洗仪中，选用 石油醚超声辅助提取凤丹籽原油，提取时间为45 min，提取温度为5 0 ℃，超声功率为250 w，石油醚和凤丹籽粉末比例为8:1 mL/g。

4. 分离过滤：提取完成后，用滤纸过滤凤丹籽粉末与石油醚的混合 液，滤纸下层得到石油醚滤液，滤纸上层得到脱脂的凤丹籽粉末。

5. 减压干燥：采用旋转蒸发仪在真空度为50kPa，温度40℃的条件下 ，旋转蒸发并回收石油醚，直到石油醚滤液中没有石油醚的味道，得 到凤丹籽原油。

6. 凤丹籽原油精炼：将凤丹籽原油加热到50℃，加入质量分数为5% 的KOH溶液至凤丹籽原油中，并搅拌凤丹籽原油，直到凤丹籽原油中出 现皂脚颗粒，停止搅拌。在70℃的条件下静置10h，此时皂脚颗粒都沉 淀于溶液底部，分离出沉淀于溶液底部的皂脚颗粒，留取溶液中的凤 丹籽油层，经蒸馏水洗涤1次，得到成品精炼的凤丹籽油。

7.干燥脱脂凤丹籽粉末：采用旋转蒸发仪在真空度为50kPa，温度40℃ 的条件下，蒸干脱脂凤丹籽粉末上的石油醚，得到干燥的脱脂凤丹籽 粉末。

8. 超声提取凤丹籽总黄酮：选用乙醇辅助超声提取凤丹籽总黄酮， 乙醇溶液浓度为：75%，提取时间为49min，提取温度为30℃，超声功 率为240w，乙醇溶液和脱脂凤丹籽粉末比例为21:1mL/g。

9. 过滤：提取完成后，用滤纸过滤脱脂凤丹籽粉末与乙醇溶液的混 合液，滤纸下层得到乙醇滤液和滤纸上层得到凤丹籽残渣。

10. 减压干燥：采用旋转蒸发仪在真空度为20kPa，温度40℃的条件 下，旋转蒸发乙醇溶液，并回收乙醇，直到乙醇滤液中没有乙醇的味 道，得到凤丹籽总黄酮的粗提物。

11. 乙酸乙酯萃取：采用乙酸乙酯萃取凤丹籽总黄酮的粗提物，得到 乙酸乙酯相。

12. 减压干燥：在真空度为40kPa，温度30℃的条件下，旋转蒸发并 回收乙酸乙酯，直到乙酸乙酯相中没有乙酸乙酯的味道，得到凤丹籽 总黄酮的提取物。

图2是本发明和其他提取方法比较凤丹籽油出油率图；图3是本发明和 其他提取方法比较凤丹籽总黄酮提取率图；经图2检测，用此法凤丹籽 油的出油率为33.7%，相对其他方法出油率较高；经图3检测，凤丹籽 总黄酮的提取率为92.53%，与未采用超声辅助的提取方法和超声波辅 助提取法相比有明显的优势。

图4是本发明和其他提取方法比较凤丹籽总黄酮DPPH自由基清除率图；

图4采用DPPH自由基清除率评定凤丹籽总黄酮粗提物抗氧化性，DPPH自 由基清除率的测定方法为：取2.0 mL凤丹籽总黄酮提取液同4.0 mL  0.1mmol/L DPPH溶液（95%乙醇现用现配）振荡摇匀，对照样为2. 0 mL 95%乙醇和 4.0 mL 0.1mM DPPH混合，于常温避光反应相 同时间后于517 nm比色，以95%乙醇做参比调零。经测定，100mg/L的 采用本发明的提取方法得到的凤丹籽总黄酮溶液的DPPH自由基平均清 除率为84.47%，比未采用超声辅助的提取方法和超声波辅助提取法的 平均清除率高。

图5是本发明和其他提取方法比较凤丹籽总黄酮总抗氧化能力图；采用 磷钼络合物法对凤丹籽总黄酮的总抗氧化性进行测定，其具体步骤为 ：首先配制终浓度为0.6M H₂SO₄,  28mM Na₃PO₄, 4mM Na₂Mo₄的硫酸、磷酸钠和钼酸钠混合试剂溶液，取0.4 mL，100mg/L凤丹籽 总黄酮溶液于10 mL具塞刻度比色管中，再加入4.0 mL混合试剂，振 荡均匀，95℃条件下保温90min，取出水冷15min，在695nm的波长下测 吸光度。并将吸光度值带入抗坏血酸的标准曲线回归方程A=0.0206+0 .02803C，其中，A为吸光度，C为抗坏血酸浓度，计算出总抗氧化性， 其总抗氧化活性较未采用超声辅助的提取方法和超声波辅助提取法提 取的总黄酮较高。

此外，用本发明方法得到的总黄酮溶液对沙门氏菌有一定的抑制作用 ，采用半浓度最小抑菌圈法测定，得到凤丹籽总黄酮对沙门氏菌的最 低抑制浓度为5%。

实施例2，实验室联合提取凤丹籽油和凤丹籽总黄酮的方法

1．采摘凤丹籽：选取颗粒饱满的凤丹籽，洗净凤丹籽上的泥土，自然 条件下干燥。

2. 粉碎干燥：将洗净的凤丹籽放入中草药微粉碎机内粉碎，过100目 筛，采用冷冻干燥机在-20℃条件下冷冻干燥得到凤丹籽粉末。

3. 超声辅助提取凤丹籽原油：将锥形瓶放入超声波清洗仪中，选用 石油醚：正己烷=10：1的混合溶剂超声辅助提取凤丹籽原油，提取时 间为60 min，提取温度为40 ℃，超声功率为800 w，石油醚和凤丹 籽粉末比例为10:1 mL/g。

4. 分离过滤：提取完成后，用滤纸过滤凤丹籽粉末与石油醚的混合 液，滤纸下层得到石油醚滤液，滤纸上层得到脱脂的凤丹籽粉末。

5. 减压干燥：采用旋转蒸发仪在真空度为50kPa，温度40℃的条件下 ，旋转蒸发并回收石油醚，直到石油醚完全被蒸出，得到凤丹籽原油 。

6. 干燥脱脂凤丹籽粉末：采用旋转蒸发仪在真空度为50kPa，温度4 0℃的条件下，蒸干脱脂凤丹籽粉末上的石油醚，得到干燥的脱脂凤丹 籽粉末。

7. 超声提取凤丹籽总黄酮：选用乙醇辅助超声提取凤丹籽总黄酮， 乙醇浓度为：95 %，提取时间为40min，提取温度为30 ℃，超声功 率为300 w，乙醇溶液和脱脂凤丹籽粉末比例为10:1mL/g。

8. 过滤：提取完成后，用滤纸过滤脱脂凤丹籽粉末与乙醇溶液的混 合液，滤纸下层得 到乙醇溶液和滤纸上层得到凤丹籽残渣。

9. 减压干燥：在真空度为40kPa，温度60℃的条件下，采用旋转蒸发 仪减压蒸发乙醇溶液，并回收乙醇，直到乙醇溶液完全被蒸出，得到 凤丹籽总黄酮的粗提物。

采用实施例2的方法， 凤丹籽总黄酮平均提取率为91.25%，而采用新 鲜凤丹籽直接通过步骤7提取凤丹籽总黄铜，凤丹籽总黄酮平均提取率 为93.19%，采用石油醚或石油醚与正己烷混合溶剂提取凤丹籽油后， 凤丹籽总黄铜的平均损失率为1.94%。

实施例3，工业生产中联合提取凤丹籽油和凤丹籽总黄酮的方法

1. 粉碎干燥：螺旋输送锤磨机粉碎洗净的凤丹籽，使粉碎得到的凤 丹籽粉末能通过40目筛，并采用冷冻干燥机在25℃、真空度50kPa的条 件下，真空干燥凤丹籽粉末，干燥后得到干燥的凤丹籽粉末。

2. 超声辅助提取凤丹籽原油，分离石油醚悬浊液中的凤丹籽粉末： 选用连续逆流超声提取机，提取溶剂为石油醚，连续逆流超声提取凤 丹籽原油，其中，连续逆流超声提取机设定的工艺参数为：提取时间 为30 min，提取温度为50℃，超声功率为200 w，石油醚和凤丹籽粉 末比例为8:1 mL/g；提取完成后，连续逆流超声提取机将自动完成提 取后悬浊液的澄清和过滤，出液口得到澄清的石油醚和凤丹籽油的混 合溶液，出料口得到脱脂的凤丹籽粉末。

3. 减压干燥石油醚，干燥脱脂凤丹籽粉末：采用连续渣料溶剂蒸脱 回收及烘干机，在真空度为50kPa，温度20℃的条件下，蒸干并回收脱 脂凤丹籽粉末上的石油醚，得到干燥的脱脂凤丹籽粉末。

4. 超声提取凤丹籽总黄酮，分离乙醇悬浊液中的凤丹籽粉末：以干 燥的脱脂凤丹籽粉末为原料，采用连续逆流超声提取机，选用乙醇为 提取溶剂，超声辅助提取凤丹籽总黄酮，其中，连续逆流超声提取机 设定的工艺参数为：乙醇浓度75 %，提取时间49 min，提取温度20 ℃，超声功率240 w，乙醇溶液和脱脂凤丹籽粉末比例为21:1mL/g； 提取完成后，连续逆流超声提取机将自动完成提取后悬浊液的澄清和 过滤，出液口得到澄清的含有凤丹籽总黄酮的乙醇溶液，出料口得到 脱脂的凤丹籽粉末。

5. 蒸脱乙醇溶液：采用连续渣料溶剂蒸脱回收及烘干机蒸脱乙醇溶 液，工艺条件为：真空度20kPa，温度40℃的条件下，蒸干并回收凤丹 籽残渣粉末上的乙醇溶液。

6. 凤丹籽总黄酮的纯化：采用萃取机和乙酸乙酯萃取凤丹籽总黄酮 的粗提物，重复3 次，采用连续渣料溶剂蒸脱回收及烘干机回收乙酸乙酯，回收的工艺 条件是真空度为40kPa，温度30℃，蒸干溶液并回收乙醇，得到凤丹籽 总黄酮提取物。