黄花乌头发根生物转化盐酸关附甲素生产工艺

摘要

本发明公开了一种黄花乌头发根生物转化盐酸关附甲素生产工艺，取黄花乌头干燥发根磨粉乙醇冷浸超声提取，收集乙醇液，至冷浸液无明显生物碱反应为止，减压浓缩至无醇味回收乙醇，得到浸膏；加水用盐酸调PH，滤除沉淀；酸水液用氨水调PH，用甲基叔丁基醚萃取，收集醚液减压回收甲基叔丁基醚至浓缩液，取甲基叔丁基醚浓缩液上清液挥干后，用丙酮溶解，加浓盐酸调PH，并用丙酮洗涤沉淀，滤液静置冷藏析晶，即得。本发明与大孔树脂法及离子交换树脂相比较，本发明工艺简单，周期短，成本低，酸碱性水溶液使用量较小，减少了对环境的污染，同时本工艺萃取过程中不产生乳化现象，提取率及纯度比目前相关文献报道都要高，盐酸关附甲素得率约2‰，纯度在95%以上，适合于工业化大规模生产。

说明书

技术领域

    本发明提供一种黄花乌头发根生物转化盐酸关附甲素生产工艺，涉及一种新的附甲素生产方法，属于生物制药技术领域。

背景技术

关附甲素是一种治疗心律不齐特效药品，用量极微就有很好的疗效，无毒副作用。目前，主要是从黄花乌头 (Aconitum Coreanum(Levl.)Rapaics)根（关白附）内提取关附甲素供药用。常规的盐酸关附甲素生产方法为大孔树脂提取，通过大孔树脂分离技术纯化中药提取液时，可以选择性吸附其中的有效成分，同时去除杂质，但对于生物碱的精制来说，有明显的不足之处：首先是吸附困难，上样药液必须是稀溶液，而且溶液碱度要适宜，碱度高，生物碱为游离型，生物碱水溶性差而析出；碱度低，生物碱为离子化状态，树脂吸附率低，上柱效果仍然很差。其次，大孔树脂是通过静电吸附原理对生物碱有效成分和脂溶性成分及杂质分离性差，而且在溶剂洗脱过程中由于没有特异性的洗脱剂，生物碱和大量的脂溶性杂质一同被洗脱下来，这样得到的生物碱纯度很低，对于进一步的分离纯化仍有较的困难。最后，大孔树脂的预处理和再生也比较繁琐，不利于企业的大规模生产。

溶剂萃取-酸碱沉淀法分离生物碱是比较常用的方法，先前工艺分离生物碱产生的杂质较多，而且萃取过程产生的乳化现象比较严重，破乳较为困难，结晶纯化得率低，仅为1‰，沉淀时间长达3~6个月，这些都不利于企业的大规模生产。

发明内容

本发明的目的是提供一种黄花乌头发根生物转化盐酸关附甲素生产工艺，为一种关附甲素生产的新方法，比传统的冷浸、渗漉、回流法等所用时间要短，耗能低，提取率高。

本发明提供的黄花乌头发根生物转化盐酸关附甲素生产工艺，其特征在于包括以下步骤：

取黄花乌头干燥发根研磨成180~140μm细粉，用3~5倍量的30~95%乙醇冷浸24~25小时，超声30min，收集乙醇液，至冷浸液无明显生物碱反应为止，重复上述操作3~5次，合并乙醇液，静置，减压浓缩至无醇味，回收乙醇，得到浸膏；加入5倍量的水（20～30℃），然后用0.2mol/L 盐酸调PH至 2～3，静置后滤除沉淀；酸水液用10%氨水调PH至9～10之间，不断搅拌，立即用甲基叔丁基醚萃取，收集醚液，萃取3~5次，合并醚液并减压回收甲基叔丁基醚至浓缩液体积为原浸膏的5~10倍；静置后取甲基叔丁基醚浓缩液上清液挥干后，用丙酮5~8倍量溶解，加浓盐酸调PH至2，产生白色沉淀，并用丙酮洗涤沉淀，滤液静置冷藏析晶，得到盐酸关附甲素粗品，用甲醇或丙酮进行重结晶，于30℃干燥，即得；

所述超声提取的频率为：20KHz，功率为150W~200W，超声提取时间为30~60分钟。

所述盐酸浓度为：0.01M—1M，氢氧化钠溶液及氨水浓度为：0.01M—1M。

本发明的积极效果在于：通过冷浸-超声联用法提取黄花乌头发根生物碱，比传统的冷浸、渗漉、回流法等所用时间要短，耗能低，提取率高；萃取过程中所用的萃取剂甲基叔丁基醚为首创，该物质沸点比乙醚稍高，为汽油抗爆剂，容易回收，萃取过程中不产生乳化现象，夹带杂质少，萃取率高，从而减少了生物碱在碱液中的滞留时间，防止物质变性；酸碱沉淀过程中所用酸量和碱量少，从而减少对环境的污染；纯化过程简单，丙酮直接加浓盐酸调PH得到目标物质，避免了大量水分的引入，从而减少得到纯品所用时间。

与大孔树脂法及离子交换树脂相比较，本发明工艺简单，周期短（用时7—10天），成本低，酸碱性水溶液使用量较小，减少了对环境的污染，同时本工艺萃取过程中不产生乳化现象，提取率及纯度比目前相关文献报道都要高，盐酸关附甲素得率约2‰，纯度在95%以上，适合于工业化大规模生产。

附图说明

图1为本发明实施例1的盐酸关附甲素HPLC检测图；

图2为本发明实施例2的盐酸关附甲素HPLC检测图；

图3为本发明实施例3的盐酸关附甲素HPLC检测图。

具体实施方式

实施例1、

取黄花乌头干燥发根500g研磨140μm细粉，用5倍量 95%乙醇冷浸约24h，超声提取：功率为200W，频率20KHz，超声30min，收集乙醇液，至冷浸液无明显生物碱反应为止，重复上述操作5次，合并乙醇液，静置一段时间后，减压浓缩至无醇味，回收乙醇，得到浸膏；加50 mL水（20～30℃），然后用0.2mol/L 盐酸调PH至 2～3，静置一段时间，滤除沉淀；酸水液用10%氨水调PH至9～10之间，此间不断搅拌，立即用甲基叔丁基醚萃取，收集醚液，萃取5次，合并醚液并减压回收甲基叔丁基醚至浓缩液体积50mL；静置一段时间，取甲基叔丁基醚浓缩液上清液挥干后，用丙酮5倍量溶解，加浓盐酸调PH至2，产生白色沉淀，并用丙酮洗涤沉淀，滤液静置冷藏析晶，得到盐酸关附甲素粗品，用甲醇或丙酮进行重结晶，于30℃干燥，产品得率为2‰，纯度达到95‰。所述盐酸浓度为：0.01M—1M，氢氧化钠溶液及氨水浓度为：0.01M—1M。本发明HPLC检测图见图1，上图为纯品HPLC检测图。

实施例2

取黄花乌头干燥发根500g研磨成180μm细粉，用3倍量的85%乙醇冷浸24小时，超声提取：功率为100W，频率20KHz，超声30min，收集乙醇液，至冷浸液无明显生物碱反应为止，重复上述操作3次，合并乙醇液，静置，减压浓缩至无醇味，回收乙醇，得到浸膏；加入5倍量的水（20～30℃），然后用0.2mol/L 盐酸调PH至 2～3，静置后滤除沉淀；酸水液用10%氨水调PH至9～10之间，不断搅拌，立即用甲基叔丁基醚萃取，收集醚液，萃取3~5次，合并醚液并减压回收甲基叔丁基醚至浓缩液体积为原浸膏的5~10倍；静置后取甲基叔丁基醚浓缩液上清液挥干后，用丙酮8倍量溶解，加浓盐酸调PH至2，产生白色沉淀，并用丙酮洗涤沉淀，滤液静置冷藏析晶，得到盐酸关附甲素粗品，用甲醇或丙酮进行重结晶，于30℃干燥，即得；产品得率为2.5‰，纯度达到95‰。所述盐酸浓度为：0.01M—1M，氢氧化钠溶液及氨水浓度为：0.01M—1M。本发明HPLC检测图见图2，上图为纯品HPLC检测图。

实施例3

取黄花乌头干燥发根500g研磨成160μm细粉，用4倍量的90%乙醇冷浸24小时，超声提取：功率为150W，频率20KHz，超声30min，收集乙醇液，至冷浸液无明显生物碱反应为止，重复上述操作4次，合并乙醇液，静置，减压浓缩至无醇味，回收乙醇，得到浸膏；加入5倍量的水（20～30℃），然后用0.2mol/L 盐酸调PH至 2～3，静置后滤除沉淀；酸水液用10%氨水调PH至9～10之间，不断搅拌，立即用甲基叔丁基醚萃取，收集醚液，萃取3~5次，合并醚液并减压回收甲基叔丁基醚至浓缩液体积为原浸膏的5~10倍；静置后取甲基叔丁基醚浓缩液上清液挥干后，用丙酮6倍量溶解，加浓盐酸调PH至2，产生白色沉淀，并用丙酮洗涤沉淀，滤液静置冷藏析晶，得到盐酸关附甲素粗品，用甲醇或丙酮进行重结晶，于30℃干燥，即得；产品得率约为2‰，纯度达到95‰。所述盐酸浓度为：0.01M—1M，氢氧化钠溶液及氨水浓度为：0.01M—1M。本发明HPLC检测图见图3，上图为纯品HPLC检测图。